全自動(dòng)頂空氣相色譜-氮磷檢測(cè)器法 測(cè)定禽畜肉中三甲胺

何 漪，王 韜，劉月月，朱 莎，彭 程，王 勤*

（1.淄博市疾病預(yù)防控制中心衛(wèi)生檢驗(yàn)科，山東淄博 255026； 2.淄博市環(huán)境有機(jī)污染與人群健康監(jiān)測(cè)分析重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，山東淄博 255026）

三甲胺，溶于水，有魚腥的氨臭味。氧化三甲胺沒有氣味，廣泛分布于畜禽肉等動(dòng)物體內(nèi)，動(dòng)物死亡后，在厭氧菌和體內(nèi)酶的作用下，降解為三甲胺的衍生物，濃度升高，會(huì)散發(fā)出臭雞蛋的氣味。目前，對(duì)于畜禽肉中三甲胺的測(cè)定，常見的方法為感官分析方法、酸堿滴定法、凱氏定氮蒸餾法、分光光度法和離子色譜法，全自動(dòng)頂空氣相色譜-氮磷檢測(cè)器法測(cè)定禽畜肉中三甲胺尚鮮見報(bào)道[1-4]。本文研究了全自動(dòng)頂空氣相色譜-氮磷檢測(cè)器法測(cè)定禽畜肉中的三甲胺，取得了較好的結(jié)果。

1 材料與方法

1.1 儀器與設(shè)備

氣相色譜儀6890N，配有氮磷檢測(cè)器（安捷倫），7697A頂空自動(dòng)進(jìn)樣器（安捷倫）；AB204-N電子分析天平（梅特勒）：感量為0.1 mg；22 mL頂空瓶（聚四氟乙烯硅密封帽和橡膠墊，使用前120 ℃烘烤 2 h）；5 mL醫(yī)用塑料注射器；均質(zhì)器JJ-2組織搗碎勻漿儀；GM200絞肉機(jī)（萊馳）；ST16R離心機(jī)（賽默飛）。

1.2 試劑

三甲胺鹽酸鹽，上海安譜，純度≥98.0%；稱取0.1650 g三甲胺鹽酸鹽，用50 g·L-1三氯乙酸溶液溶解，定容至100 mL，得到濃度為1000 μg·mL-1的三甲胺儲(chǔ)備液，4 ℃條件下放置保存。氫氧化鈉（GR），天津科密歐化學(xué)試劑有限公司；三氯乙酸（AR），茂名市雄大化工有限公司。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 樣品前處理

取畜禽肉樣品100 g，用絞肉機(jī)絞碎，混勻。制備好的試樣，密封于聚乙烯塑料袋中，-18 ℃冰箱保存，測(cè)定前微波爐或室溫解凍。

稱取10.000 g（精確至0.001 g）制備好的樣品于50 mL的塑料離心管中，加入20 mL 50 g·L-1三氯乙酸溶液，用勻漿儀打碎2 min，靜止過夜，沉淀蛋白質(zhì)。以4500 r·min-1離心5 min除去膠狀沉淀，過濾上清液至50 mL容量瓶中，50 g·L-1三氯乙酸 25 mL分兩次提取剩余殘?jiān)?，合并濾液至容量瓶中，三氯乙酸溶液定容至刻度[5-8]。

準(zhǔn)確吸取提取液2.0 mL于盛有5.0 mL 500 g·L-1氫氧化鈉溶液的頂空瓶中，壓緊瓶蓋，備用。

1.3.2 自動(dòng)頂空進(jìn)樣器的條件

加熱箱溫度：40 ℃；定量環(huán)溫度：45 ℃；傳輸線溫度：55 ℃；樣品瓶平衡時(shí)間：40 min；進(jìn)樣時(shí)間：0.50 min；GC循環(huán)：15 min；樣品瓶體積：20 mL；填充壓力：15 psi；定量環(huán)體積：1000 μL[9]。

1.3.3 色譜條件

進(jìn)樣口溫度：200 ℃；分流比：10∶1；色譜柱：HP-innowax（30 m×0.32 mm，0.25 μm）。柱流：1.0 mL·min-1；柱溫：初始40 ℃，保持3 min，以 30 ℃·min-1升至220 ℃，保持1 min。檢測(cè)器溫度320 ℃；氫氣3.0 mL·min-1；空氣60 mL·min-1；尾吹12.5 mL·min-1[10-13]。

2 結(jié)果與分析

2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性范圍和檢出限

分別準(zhǔn)確吸取三甲胺標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液0 mL、0.005 mL、 0.025 mL、0.050 mL、0.125 mL、0.250 mL和0.500 mL 于50 mL容量瓶中，三氯乙酸定容至刻度，配制 0 μg·mL-1、0.10 μg·mL-1、0.50 μg·mL-1、1.00 μg·mL-1、 2.50 μg·mL-1、5.00 μg·mL-1和10.00 μg·mL-1三 甲胺標(biāo)準(zhǔn)系列。各取2.0 mL標(biāo)準(zhǔn)系列于頂空瓶中，按照實(shí)驗(yàn)方法1.3測(cè)定，以濃度為橫坐標(biāo)，峰面積的平均值為縱坐標(biāo)，制定標(biāo)準(zhǔn)曲線，回歸方程為Y=0.69+57.5X。按儀器基線3倍噪音為儀器檢出限0.016 μg·mL-1，按樣品前處理計(jì)算方法的檢出限為 0.08 mg·kg-1，方法的定量限為0.24 mg·kg-1。

2.2 方法的準(zhǔn)確度和精密度

精確稱取粉碎機(jī)絞碎的畜禽肉肌肉10.000 g于50 mL離心管中，分別加入100 μg·mL-1三甲胺標(biāo)準(zhǔn)溶液0.25 mL、0.50 mL、1.00 mL，用50 g·L-1三氯乙酸定容至刻度，配成本底樣品和低、中、高加method for 0.08 mg·kg-1, a linear range of 0.10～10.0 μg·mL-1. The recovery rate can reach 90.2%～93.2%. The intra batch precision (RSD) was 4.67%～5.64%, and the inter batch precision was 4.77%～6.65%. Conclution: This method has a high degree of automation. The method is simple, rapid, sensitive, accurate and reproducible. It is suitable for the determination of trimethylamine in domestic animal meat.

Keywords:automatic; headspaces; gas chromatography; trimethylamine (TMA); nitrogen phosphorus detector; domestic animal meat標(biāo)樣品。按照本方法1.3，測(cè)定回收率、準(zhǔn)確度和精密度實(shí)驗(yàn)。結(jié)果見表1所示，三甲胺加標(biāo)回收率為90.2%～93.2%，批內(nèi)精密度4.67%～5.64%，批間精密度4.77%～6.65%。

表1 準(zhǔn)確度和精密度實(shí)驗(yàn)結(jié)果表

2.3 色譜分離

在確定的氣相色譜條件下，全自動(dòng)頂空進(jìn)樣-氮磷檢測(cè)器檢測(cè)，三甲胺的保留時(shí)間為1.673 min，三甲胺標(biāo)準(zhǔn)和樣品色譜圖分別見圖1和圖2。

圖1 三甲胺標(biāo)準(zhǔn)色譜圖

圖2 三甲胺樣品色譜圖

2.4 實(shí)驗(yàn)條件的選擇

2.4.1 頂空條件的選擇

（1）不同平衡溫度對(duì)檢測(cè)結(jié)果的影響。分別準(zhǔn)確吸取用50 g·L-1三氯乙酸配制的10.0 μg·mL-1三甲胺標(biāo)準(zhǔn)溶液2.0 mL，于7個(gè)20 mL頂空瓶中，按照實(shí)驗(yàn)方法1.3測(cè)定，分別測(cè)定平衡溫度30 ℃、35 ℃、40 ℃、45 ℃和50 ℃對(duì)測(cè)定結(jié)果的影響。當(dāng)溫度為0～40 ℃時(shí)，隨著溫度的不斷升高，三甲胺的信號(hào)值響應(yīng)提高，三甲胺的飽和蒸汽壓隨溫度的升高而增大。平衡溫度過高，導(dǎo)致頂空瓶內(nèi)部壓力升高，易引起頂空瓶漏液，因此選定平衡溫度為40 ℃（圖3）。

圖3 不同平衡溫度下的響應(yīng)值趨勢(shì)圖

（2）不同平衡時(shí)間對(duì)檢測(cè)結(jié)果的影響。本試驗(yàn)選定在40 ℃的平衡溫度下，分別選定平衡時(shí)間30 min、 35 min、40 min、50 min和60 min對(duì)同一濃度樣品進(jìn)行檢測(cè)，探究平衡時(shí)間對(duì)檢測(cè)結(jié)果的影響。0～ 50 min，隨著平衡時(shí)間增加響應(yīng)值升高，當(dāng)平衡時(shí)間在50 min以上時(shí)，響應(yīng)值恒定。結(jié)合檢測(cè)靈敏度和工作時(shí)間，50 min為試驗(yàn)最佳平衡時(shí)間（圖4）。

圖4 不同平衡時(shí)間下的響應(yīng)值趨勢(shì)圖

2.4.2 堿液用量

堿液用量直接影響三甲胺的響應(yīng)值，為確定適宜的堿液用量，向樣品中分別加入1.0 mL、2.0 mL、 5.0 mL和6.0 mL接近于飽和濃度的氫氧化鈉溶液（500 g·L-1），固定樣品的加熱溫度和分解時(shí)間，其他條件按樣品前處理實(shí)驗(yàn)方法1.3，不同堿液用量樣品重復(fù)測(cè)定3次。試驗(yàn)表明，堿液用量為1～5 mL時(shí)，隨著其用量的增加增大峰面積響應(yīng)值升高，繼續(xù)增加堿液用量，峰面積響應(yīng)值開始降低，最終選擇氫氧化鈉（500 g·L-1）用量為5.0 mL（圖5）。

圖5 不同堿液用量下響應(yīng)值趨勢(shì)圖

3 結(jié)論

通過建立全自動(dòng)頂空氣相色譜-氮磷檢測(cè)器法測(cè)定禽畜肉中三甲胺，并對(duì)試驗(yàn)條件進(jìn)行了優(yōu)化[14-15]。 本方法自動(dòng)化程度高，簡便、快速、靈敏度高，準(zhǔn)確度好，可滿足禽畜肉中三甲胺的測(cè)定。