蓮不同藥用部位質(zhì)量控制的研究進(jìn)展*

吳梅青，唐海飛，陳 思

(湘潭醫(yī)衛(wèi)職業(yè)技術(shù)學(xué)院，湖南 湘潭 411102)

蓮的六個(gè)藥用部位為蓮子、蓮子心、蓮房、蓮須、荷葉和藕節(jié)，分別來自于為睡蓮科植物蓮(NelumbonuciferaGaertn.)的干燥成熟種子、成熟種子中的干燥幼葉及胚根、干燥花托、干燥雄蕊、干燥葉和干燥根莖節(jié)部[1]。蓮子具有補(bǔ)脾止瀉、止帶、益腎澀精、養(yǎng)心安神的功效；蓮子心具有清心安神、交通心腎、澀精止血的功效；蓮房具有化瘀止血的功效；蓮須具有固腎澀精的功效；荷葉具有清暑化濕、升發(fā)清陽、涼血止血的功效；藕節(jié)具有收斂止血和化瘀的功效。這六味中藥均收載于《中華人民共和國(guó)藥典》(以下簡(jiǎn)稱《中國(guó)藥典》)，除蓮子心和荷葉具有明確的指標(biāo)成分外，其它四種藥材均沒有明確指標(biāo)成分的質(zhì)量評(píng)價(jià)，不能滿足現(xiàn)代化中藥質(zhì)量評(píng)價(jià)體系的要求。近年來中藥在物質(zhì)基礎(chǔ)、藥材質(zhì)量可追溯性及農(nóng)藥殘留、黃曲霉毒素、重金屬元素檢測(cè)、二氧化硫殘存等安全性方面。本文就近年來國(guó)內(nèi)外關(guān)于對(duì)蓮六個(gè)藥用部位外源性污染物含量測(cè)定和活性成分含量測(cè)定的研究成果進(jìn)行綜述，為后續(xù)蓮的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)完善和提升研究奠定理論基礎(chǔ)。

1 蓮六個(gè)藥用部位質(zhì)量安全性的研究

中藥材中重金屬及有害元素、農(nóng)藥殘留、易霉變中藥材真菌毒素等的限量標(biāo)準(zhǔn)與檢測(cè)方法研究，引起了研究者的關(guān)注。有關(guān)蓮的六個(gè)藥用部位的質(zhì)量安全性研究報(bào)道綜述如下。

1.1 農(nóng)殘測(cè)定研究

農(nóng)藥殘留會(huì)造成中草藥污染，危害人的健康。當(dāng)服用了農(nóng)藥殘留超量的中藥后，農(nóng)藥的毒性有害成分便會(huì)在體內(nèi)積蓄，導(dǎo)致急性或慢性中毒，誘發(fā)癌癥等危險(xiǎn)。蓮屬于多年生水生草木，在種植過程中有可能受到農(nóng)藥殘留污染而影響其安全性。唐志康等[2]采用乙腈提取樣品，以聯(lián)苯菊酯為對(duì)照品，采用GC-MS/MS測(cè)定，建立了一測(cè)多評(píng)方法并測(cè)定蓮子中聯(lián)苯菊酯、甲氰菊酯、溴氰菊酯3種農(nóng)藥殘留量，3批蓮子樣品中均無聯(lián)苯菊酯、甲氰菊酯、溴氰菊酯3種農(nóng)藥殘留。張新忠等[3]采用超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法，以有效成分劑量630 gai/ha和945 gai/ha施用1次后，測(cè)定蓮藕、蓮葉、蓮子、田泥與田水中12種農(nóng)藥殘留，結(jié)果發(fā)現(xiàn)異草松和異丙甲草胺在蓮藕、蓮子和蓮葉中均無殘留，撲草凈在蓮藕、蓮子殼、蓮子肉和蓮葉樣品中的殘留量分別不超過0.022、0.166、0.012、0.181 mg/kg。

1.2 重金屬離子含量測(cè)定研究

蓮不同部位重金屬含量測(cè)定也受到研究者的關(guān)注。姜濤等[4]采用ICP-MS法，測(cè)定并比較了55份不同產(chǎn)地蓮子及蓮子不同部位中鉛(Pb)、鎘(Cd)、汞(Hg)、銅(Cu)、砷(As)等 5種重金屬元素含量，結(jié)果表明，無論是蓮子的不同部位還是不同產(chǎn)地，鉛元素的含量是共同的區(qū)別點(diǎn)，而去心蓮子和蓮子心除鉛元素外，其余4種重金屬元素的含量差異很大，特別是銅元素的含量。魏華東[5]采用原子吸收光譜法測(cè)定白洋淀8個(gè)采樣點(diǎn)荷葉中錳(Mn)、鎳(Ni)、鉛(Pb)、鎘(Cd)、銅(Cu)、砷(As)等11種重金屬元素的含量，其中8個(gè)采樣點(diǎn)荷葉檢測(cè)出的重金屬元素Mn、Cu、Pb、As，但含量符合國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)范圍，另有采樣點(diǎn)的荷葉中檢測(cè)出Cd超出國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)。

1.3 黃曲霉毒素測(cè)定研究

黃曲霉毒素是一種毒性極強(qiáng)的劇毒物質(zhì)，對(duì)人及動(dòng)物肝臟組織有破壞作用，嚴(yán)重時(shí)，可導(dǎo)致肝癌甚至死亡。2020版《中華人民共和國(guó)藥典》(以下簡(jiǎn)稱《中國(guó)藥典》)在蓮子項(xiàng)下就有黃曲霉毒素含量檢查項(xiàng)目。黃曲霉毒素超標(biāo)是近年來我國(guó)蓮子產(chǎn)品被出口地通報(bào)的主要原因之一[6]。羅定強(qiáng)等[7]收集5批蓮子，采用高效液相色譜-串聯(lián)四極桿質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)，多反應(yīng)監(jiān)測(cè)(MRM)模式進(jìn)行定量檢測(cè)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)有1批發(fā)霉的蓮子中檢出黃曲霉毒素B1、B2、G1、G2。趙穎等[8]將蓮子樣品經(jīng)適配體親和柱凈化富集后，用高效液相色譜-光化學(xué)衍生熒光法檢測(cè)，檢出限達(dá)到0.05 ng/mL，回收率為91.8%～108.6%，所建立的方法具有較好的準(zhǔn)確性、穩(wěn)定性、精密度和重復(fù)性。吳梅青等[9]采用高效液相色譜-光化學(xué)衍生法測(cè)定了湖南產(chǎn)蓮子中黃曲霉毒素G1、G2、B1、B2的含量，自于農(nóng)貿(mào)市場(chǎng)農(nóng)戶自存的2批次和霉變的中檢出黃曲霉毒素B1，但低于《中國(guó)藥典》2020年版規(guī)定限量，而且所建立的測(cè)定方法結(jié)果準(zhǔn)確、重復(fù)性良好，可為完善蓮子安全性控制和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提升提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1.4 二氧化硫含量測(cè)定

硫磺熏制中藥材是常見的貯存方式，但殘留在中藥材中的二氧化硫?qū)θ梭w的消化道、呼吸系統(tǒng)、肝臟和腎臟等器官有損害。有些不法廠商和個(gè)體戶在蓮子加工過程中采用硫磺熏蒸蓮子，使蓮子的品質(zhì)下降。吳少紅等[10]按照GB/T5009.34-2003《食品中亞硫酸鹽的測(cè)定》第一法鹽酸苯胺法測(cè)定了武漢市硚口區(qū)主要的大型超市和農(nóng)貿(mào)市場(chǎng)蓮子等樣品中二氧化硫的含量，結(jié)果發(fā)現(xiàn)蓮子中存在二氧化硫污染情況。張?jiān)频萚11]采用半自動(dòng)凱氏定氮儀建立了蓮子中二氧化硫殘留量的檢測(cè)方法，并用此方法測(cè)定建寧及其周邊地區(qū)出產(chǎn)的52批蓮子進(jìn)行二氧化硫污染情況，結(jié)果顯示有7批樣品不同程度檢出二氧化硫，最高的83 mg/kg，最低的19 mg/kg，含量最高的1批超過了GB 5009.34-2016中規(guī)定的50 mg/kg的標(biāo)準(zhǔn)限量，并且二氧化硫含量偏高的蓮子其成色比未檢出的更鮮白一些。

通過綜述蓮不同藥用部位的蓮六個(gè)藥用部位質(zhì)量安全性的研究發(fā)現(xiàn)：蓮不同藥用部位外源性污染物的研究主要集中在蓮子，其次是蓮子心和荷葉。其中蓮子中檢出二氧化硫含量超出標(biāo)準(zhǔn)限量，在霉變的蓮子中檢測(cè)出黃曲霉毒素殘留，由于蓮子屬于藥食同源物質(zhì)，因此蓮子在采收、加工和儲(chǔ)存過程要嚴(yán)格按照相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)操作，確保藥材的安全性。

2 蓮的六個(gè)藥用部位有效組分含量測(cè)定研究

蓮子、蓮子心、蓮房、蓮須、荷葉和藕節(jié)的有效成分或有效部位如多糖、生物堿類、黃酮類、萜類、鞣質(zhì)和揮發(fā)油等均有文獻(xiàn)報(bào)道，但由于藥用部位不同，其所含的有效組分有差異，藥理活性也有差別。下面綜述各有效組分提取和含量測(cè)定的研究進(jìn)展。

2.1 生物堿類

關(guān)于蓮中生物堿的研究報(bào)道主要集中于蓮房、蓮子心、荷葉，其它部位鮮見文獻(xiàn)報(bào)道。生物堿類型主要包括蓮心堿、異蓮心堿、甲基蓮心堿、荷葉堿、N-去甲基荷葉堿、O-去甲基荷葉堿和蓮堿等。其中蓮心堿和荷葉堿是蓮子心和荷葉生物堿的主要特征性成分之一，為《中國(guó)藥典(一部)》(2020年版)蓮子心和荷葉質(zhì)量評(píng)價(jià)的成分，且含量不低于0.2%。楊鵬[12]采用高效液相色譜法測(cè)定3批蓮房中荷葉堿含量分別為0.03748%、0.03891%、0.03865%。雷德卿等[13]采用高效液相色譜法測(cè)定湘蓮蓮房中蓮心堿、異蓮心堿、甲基蓮心堿含量，結(jié)果發(fā)現(xiàn)不同產(chǎn)地的湘蓮蓮房中生物堿含量差異較大，湘潭的含量最高。石炳娟等[14]對(duì)《中國(guó)藥典》2015年版一部蓮子心含量測(cè)定方法進(jìn)行了改進(jìn)，通過調(diào)整流動(dòng)相的比例，在供試品的制備中改用80%乙醇先浸泡30 min，超聲處理(400 W，50 Hz)30 min，蓮心堿的提取率明顯比原方法平均高192%，但同時(shí)發(fā)現(xiàn)市售蓮子心蓮心堿含量低，達(dá)到藥典含量要求的(0.20%))幾乎沒有。王協(xié)和等[15]建立了蓮子心的指紋圖譜以及其中蓮心堿、異蓮心堿、甲基蓮心堿3種成分含量測(cè)定方法，所建立的方法準(zhǔn)確、快速、可行，可用于蓮子心的質(zhì)量評(píng)價(jià)。陳強(qiáng)等[16]采用高效液相色譜法，以荷葉堿為內(nèi)標(biāo)，分別建立荷葉堿與N-去甲基荷葉堿、O-去甲基荷葉堿、蓮堿的相對(duì)校正因子，采用外標(biāo)法測(cè)定荷葉中4種生物堿類成分的量，并將計(jì)算結(jié)果與一測(cè)多評(píng)法進(jìn)行比較，荷葉生物堿含量無顯著性差異，說明一測(cè)多評(píng)法在荷葉4種生物堿類成分含量測(cè)定研究中是可行的。

2.2 黃酮類

蓮中黃酮類研究的文獻(xiàn)報(bào)道較多。肖建平等[17]采用高效液相色譜法測(cè)定經(jīng)酸水解后蓮房中槲皮素的含量，發(fā)現(xiàn)不同收集地的蓮房樣品中槲皮素的含量存在較大的差異，福建產(chǎn)最高，達(dá)0.21%。李彥博等[18]首次采用HPLC法測(cè)定蓮須中木犀草素的含量，結(jié)果表明不同產(chǎn)地蓮須中的木犀草素含量有一定差異，其中浙江杭州產(chǎn)含量最高，達(dá)0.0844%，河北保定產(chǎn)含量最低，僅0.0404%。陳建忠等[19]將蓮須樣品用25%的鹽酸-甲醇溶液(1∶4)水解提取后，采用高效液相色譜法測(cè)定15批不同來源的蓮須樣品中槲皮素和山柰酚含量差異較大，分別為0.07～0.76 mg/g和0.24～2.40 mg/g。凌智輝等[20]采用質(zhì)譜和核磁共振鑒定荷葉中金絲桃苷、異槲皮苷和槲皮素-3-O-葡萄糖醛酸苷等3中黃酮類成分，再高效液相色譜法對(duì)不同干燥方法及不同采收時(shí)期荷葉樣品中3個(gè)黃酮類懲罰你含量進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果表明烘干著優(yōu)于陰干和曬干，陰干和曬干無差異，隨著烘干溫度的升高，各組分含量有上升趨勢(shì)，100 ℃烘干時(shí)含量最高，8月和 9月為荷葉較佳采收時(shí)間。李會(huì)端[21]優(yōu)選藕節(jié)中總黃酮的提取工藝條件，并通過高效液相色譜法建立了蓮子心黃酮的指紋圖譜，確認(rèn)了蓮子心黃酮中的主要成分為夏佛托苷和異夏佛托苷，并且測(cè)定二者含量分別為1.43%和2.04%。

2.3 多糖類

現(xiàn)代研究表明，中藥多糖具有抗氧化、抗炎、促進(jìn)免疫調(diào)節(jié)、抗衰老、抗腫瘤、改善腸道微環(huán)境、抑菌等作用。目前蓮子和藕節(jié)中多糖含量測(cè)定主要是以葡萄糖為對(duì)照品，采用苯酚-硫酸法，再通過紫外分光光度計(jì)測(cè)定吸光度來計(jì)算多糖的含量。周婷婷等[22]采用苯酚-硫酸法，通過紫外分光光度法測(cè)定了蓮子多糖的含量，結(jié)果顯示，湘、浙、閩、贛、鄂5大蓮子產(chǎn)區(qū)的多糖含量均值分別為21.37%、18.00%、19.16%、18.73%、21.29%，其中湖南省蓮子的多糖含量最高，其次是湖北省蓮子多糖含量。李婧等[23]采用苯酚-硫酸法測(cè)得15 批炒蓮子多糖含量為 8.71%～21.04%，平均值為 13.06%，并首次提出蓮子的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中要求多糖含量不少于15%。

2.4 萜類和揮發(fā)油

蓮中萜類和揮發(fā)油得研究也常見文獻(xiàn)報(bào)道。黃旭東等[24]利用水蒸氣蒸餾法提取荷葉中的揮發(fā)油，采用GC-MS測(cè)定揮發(fā)油的含量及成分，荷葉揮發(fā)油含量最高的是洪湖蓮，達(dá)0.75%，荷葉揮發(fā)油中植醇、葉綠醇、烯類較多。王文通等[25]采用頂空固相微萃取結(jié)合氣質(zhì)聯(lián)用技術(shù)對(duì)蓮須、蓮子心揮發(fā)性成分進(jìn)行了分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)蓮須中檢測(cè)出24種揮發(fā)性成分，含量最高的是右旋萜二烯(14.12%)，蓮子心中檢測(cè)出26種成分，含量最高的是右旋萜二烯(52.63%)，蓮須、蓮子心中含有己醛、壬醛、右旋萜二烯、樟腦、癸醛、1-石竹烯、十五烷、萜品烯、苯乙醇9種共有揮發(fā)性成分。馮峰等[26]采用水蒸氣蒸餾法提取蓮須揮發(fā)油，利用GC-MS分離鑒定鑒定出44種化學(xué)成分，占總成分的89.98%，主要為脂肪酸、萜烯、烷烴類。

2.5 鞣 質(zhì)

鞣質(zhì)廣泛存在于中草藥中，具有收斂性和蛋白質(zhì)凝固作用，由于具有抗氧化、抗腫瘤、抗病毒、抑菌、降血糖血脂等藥理活性，蓮的六個(gè)藥用部位關(guān)于鞣質(zhì)研究主要在藕節(jié)中，如李永強(qiáng)等[27]利用響應(yīng)面法優(yōu)化藕節(jié)鞣質(zhì)提取工藝，采用紫外分光度法測(cè)定提取液中總酚和不被吸附的多酚的含量，得到最佳提取條件是提取時(shí)間6.03 h，液料比11.2∶1(mL/g)，乙醇體積分?jǐn)?shù)50%，pH值6.6，得到的鞣質(zhì)提取率為0.0133%，與理論值0.0135% 基本相符。

通過綜述蓮不同藥用部位的化學(xué)成分含量測(cè)定研究發(fā)現(xiàn)：不同的活性成分采用的測(cè)定方法各異，如生物堿類的測(cè)定主要采用的是高效液相色譜法，總黃酮、多糖、鞣質(zhì)的含量測(cè)定主要是紫外-可見分光光度法，萜類和揮發(fā)油的含量測(cè)定主要是氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用(GC-MS)。蓮子心中蓮心堿、甲基蓮心堿和異蓮心堿的藥理作用明確，如果能以蓮心堿、異蓮心堿、甲基蓮心堿含量共同評(píng)價(jià)蓮子心的質(zhì)量，將能更全面的評(píng)價(jià)蓮子心。蓮子、蓮須、蓮房和藕節(jié)含量測(cè)定主要是總生物堿、多糖、和鞣質(zhì)等有效部位，因此，應(yīng)繼續(xù)深入開展蓮六個(gè)藥用部位有效成分的研究，為藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的完善提供技術(shù)支撐。

3 結(jié) 語

蓮的六個(gè)藥用部位在生長(zhǎng)、采集、加工、貯存、流通各環(huán)節(jié)可能涉及到重金屬殘留、農(nóng)藥殘留、二氧化硫殘留、黃曲霉毒素污染等，有檢測(cè)發(fā)霉了的蓮子和農(nóng)貿(mào)市場(chǎng)購買的蓮子有黃曲霉毒素殘留的文獻(xiàn)報(bào)道。因此要進(jìn)一步加強(qiáng)對(duì)有毒有害物質(zhì)的監(jiān)測(cè)，還應(yīng)嚴(yán)格制定其標(biāo)準(zhǔn)限量，以保證藥材的安全性。

蓮的六個(gè)藥用部位的化學(xué)成分主要有生物堿類、黃酮類、多糖類、鞣質(zhì)類、萜類和揮發(fā)油類，不同的活性成分采用的測(cè)定方法各異，化學(xué)成分含量也不同。針對(duì)蓮的六個(gè)藥用部位的活性成分含量測(cè)定研究，應(yīng)進(jìn)一步開展的工作有：研究蓮房、蓮須、蓮子和藕節(jié)中療效確切、結(jié)構(gòu)確定的化學(xué)成分指標(biāo)來控制其內(nèi)在質(zhì)量；蓮子心和荷葉的指紋圖譜有待于進(jìn)一步研究；蓮須、荷葉和蓮子心中黃酮類化合物有待深入研究；將各有效組分化學(xué)成分的含量測(cè)定和與藥理作用有機(jī)結(jié)合。