魚鰾膠原肽的制備工藝及功能活性研究進(jìn)展

董 旭，趙 峽,2, ，劉楚怡,2,

（1.中國(guó)海洋大學(xué)醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院海洋藥物教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，山東青島 266003；2.青島海洋生物醫(yī)藥研究院，山東青島 266000）

中國(guó)水產(chǎn)資源豐富，同時(shí)也是水產(chǎn)品消費(fèi)大國(guó)，隨著生活水平的提高，人們對(duì)于水產(chǎn)品的需求也不斷增加，同時(shí)水產(chǎn)品的加工副產(chǎn)物也在增多。魚頭、魚骨、魚皮、魚鱗、魚鰾、魚內(nèi)臟等占比總質(zhì)量的40%以上，大部分副產(chǎn)物都會(huì)廢棄，不僅浪費(fèi)了資源，還污染了環(huán)境，因此高值化利用水產(chǎn)品加工副產(chǎn)物就成為了學(xué)者們研究的目標(biāo)。其中魚鰾是魚用于平衡和比重調(diào)節(jié)的重要器官，用于感壓、輔助呼吸等，自古以來(lái)就被應(yīng)用于藥物和食品中。通常，魚鰾膠原蛋白含量與魚皮中膠原蛋白含量大致接近，卻又明顯高于魚骨、魚鱗、魚鰭、魚肉及內(nèi)臟[1-5]。在水凝膠制備過(guò)程中，由于牛皮和魚皮等膠原纖維形成速度慢且穩(wěn)定性不佳[6]，而魚鰾膠原蛋白具有快速的纖維形成能力[7]和較高的變性溫度[8]。因此，魚鰾膠原蛋白較適合作為哺乳動(dòng)物膠原蛋白替代來(lái)源。

新鮮魚鰾中蛋白質(zhì)含量很高，如新鮮鯽鰾組織中蛋白質(zhì)含量高達(dá)84.2%，膠原蛋白含量為115.05 mg/g，鱈魚魚鰾中蛋白質(zhì)可達(dá)到20%，脂肪卻很少。魚鰾膠原蛋白具有卓越的生物相容性、低免疫原性、可降解性等，易于人體的吸收和利用，并具有明顯功效，可有效提高免疫力、抑制癌細(xì)胞、活化細(xì)胞、防止皮膚老化去除皺紋[9]。但當(dāng)前國(guó)內(nèi)研究并不完善，其制備分離、功效因子、應(yīng)用等方面研究關(guān)注不足，為此，本研究中系統(tǒng)地綜述了魚鰾膠原蛋白的研究現(xiàn)狀并探討了其應(yīng)用發(fā)展。

1 魚鰾膠原肽的制備工藝

目前，魚鰾膠原蛋白研究的原料主要來(lái)自于草魚、鱈魚、黃姑魚、鯉魚、鱸魚、鮭魚等[10-11]魚的加工副產(chǎn)物。此類原料中富含膠原蛋白，對(duì)這些原料進(jìn)行預(yù)處理、蛋白提取、分離純化等操作來(lái)得到具有生物活性的膠原蛋白。

1.1 預(yù)處理

在魚鰾膠原制備過(guò)程中，前處理非常重要，脂肪、雜蛋白以及鈣質(zhì)的脫除效果會(huì)影響之后膠原的提取質(zhì)量[12]，通常用醇（異丙醇、丁醇等）或堿來(lái)脫除脂肪[4]，用酸（鹽酸、乙酸、乙二胺四乙酸等）脫鈣[13]，除雜蛋白工序主要采用氯化鈉或氫氧化鈉處理，在處理時(shí)可用磁力攪拌器、超聲波等提高除雜效果[14]。

1.2 膠原蛋白提取

天然肽主要存在生物體內(nèi)，所以在制備過(guò)程中，提取過(guò)程尤為重要，預(yù)處理保證了雜質(zhì)的消除，正式提取則要最大化膠原蛋白的提取量和生物活性。常用的提取方法有酸法、酶法、熱水法、鹽法、堿法和發(fā)酵法[15]。在實(shí)驗(yàn)時(shí)也可以多種方法結(jié)合使用以提高提取率。

1.2.1 酸法 酸法提取膠原蛋白主要在酸性條件下浸漬處理原料，從而破壞分子間的鹽鍵和希夫堿，而引起纖維膨脹、溶解[16]。作為溶劑使用的酸，主要有鹽酸或亞硫酸、磷酸、硫酸、醋酸、檸檬酸和甲酸等[15]。酸法是提取膠原蛋白比較常用和有效的方法，用酸法提取的膠原最大程度地保持了其三股螺旋結(jié)構(gòu)。此法處理快速，所得產(chǎn)物的分子是連續(xù)的。

因不同魚類魚鰾中膠原蛋白結(jié)構(gòu)組成不同，為得到生物活性更高的膠原蛋白肽，故所用方法和操作流程有所不同。李娜等[17]在研究鱈魚魚鰾時(shí)用5倍體積的0.5 mol/L的醋酸溶液溶解鹽析后的沉淀樣品，注入透析袋，用0.1 mol/L醋酸溶液透析1 d，再用去離子水透析2 d得到酸溶膠原蛋白，提取率約為10.23%。Chen等[18]以 0.5 mol/L醋酸，料液比為1:50（m/V），提取時(shí)間24 h的條件下提取黃姑魚鰾的膠原蛋白，最終得率約為11.33%。Pal等[7]用0.5 mol/L水醋酸提取鯉魚鰾中的膠原蛋白，連續(xù)溫和攪拌72 h，得率約為22.2%。Sinthusamran等[19]從鱸魚（Lates calcarifer）的魚囊中分離出酸溶性膠原蛋白（Acid soluble collagen，ASC），先用 0.5 mol/L乙酸溶解前處理過(guò)的樣品，隨后用0.1 mol/L乙酸透析12 h，魚鰾ASC的得率約為28.5%。Kaewdang等[20]將黃鰭金槍魚魚鰾脫脂后的樣品置于攪拌器連續(xù)攪拌，浸泡在0.5 mol/L醋酸中，在4 ℃下連續(xù)攪拌48 h，經(jīng)過(guò)沉淀離心后，將沉淀溶解在0.5 mol/L的醋酸中，用10倍體積的0.1 mol/L醋酸透析12 h來(lái)提取膠原蛋白，但是最終得率僅為1.07%，這一結(jié)果與Singh等[21]的觀點(diǎn)一致，他們?cè)?011年發(fā)現(xiàn)了條紋鯰魚皮膠原蛋白在0.5 mol/L醋酸中不能被完全水解。酸法提取膠原蛋白得率較少的原因，可能是由于魚鰾中的膠原蛋白通過(guò)端肽區(qū)醛基的縮合以及分子間的交聯(lián)而形成共價(jià)鍵交聯(lián)，導(dǎo)致膠原在酸性條件下的溶解度下降[21]。

1.2.2 酶法 酶法提取膠原蛋白是利用蛋白酶使膠原溶解，水解條件溫和，反應(yīng)速率快，蛋白純度高，理化性質(zhì)穩(wěn)定，且無(wú)環(huán)境污染[15]。工藝可選擇一步法，即利用酶液直接提??；二步法，即先用酸或者堿進(jìn)行初步提取，然后再用酶提取。Zhao等[22]選擇了豬胃蛋白酶來(lái)制備鮸的魚鰾膠原蛋白，經(jīng)過(guò)單因素實(shí)驗(yàn)篩選結(jié)果表明豬胃蛋白酶水解最佳條件為水解時(shí)間3.5 h，溫度 55 ℃，pH9.5，料液比為 1:5（m/V），酶劑量2.5%，將魚鰾提取物進(jìn)一步懸浮在10倍體積的0.5 mol/L乙酸中，并加入豬胃蛋白酶（20 U / g）。將混合物在4 ℃連續(xù)攪拌2 d，得到了約為魚鰾重量8.37%的膠原蛋白。Kaewdang等[20]在提取黃鰭金槍魚魚鰾膠原蛋白的實(shí)驗(yàn)中，用0.5 mol/L含粗胃蛋白酶的乙酸（20單位/g魚鰾），以1:10的固液比在4 ℃條件下提取48 h，膠原蛋白得率高于12.10%。Hong等[23]用中性酶對(duì)鰱魚魚鰾蛋白進(jìn)行水解，酶用量為 1%（w/w，蛋白基），溫度為 45 ℃，pH 為 7.0，最終膠原蛋白得率為18.4%±0.4%。Pal等[7]將鯉魚魚鰾的脫蛋白和脫脂樣品殘留物懸浮在0.5 mol/L乙酸中，含有0.2%胃蛋白酶的乙酸，固液比為1:40（w/v），溫度為4 ℃的條件下水解72 h，產(chǎn)率為61.3%±2.6%。酶法提取魚鰾膠原蛋白的得率普遍較高，可能是因?yàn)殡S著胃蛋白酶的進(jìn)一步消化，胃蛋白酶能夠特異性地切割膠原的端肽區(qū)，端肽區(qū)的交聯(lián)分子被切割，從而在進(jìn)一步提取后提高了產(chǎn)量[21]。此外研究觀察到不同品種的魚鰾膠原蛋白提取率差異很大，這種情況可能是由于原料中膠原纖維的不同交聯(lián)所致。

1.2.3 熱水提取法 在一些研究中對(duì)于魚鰾膠原蛋白的提取采用了過(guò)程簡(jiǎn)單、便于操作的熱水提取法，熱水提取法就是原料經(jīng)過(guò)各種前處理后，設(shè)置一定的條件用熱水提取其中水溶性膠原蛋白的方法。相較于酸提取法，此方法可獲得具有更高亞氨酸含量的膠原蛋白。周沫希等[24]使用飲用水提取膠原蛋白，在黃唇魚魚鰾和飲用水比例為1:5的條件下，80 ℃煮沸2 h后離心、冷凍干燥得到魚鰾膠原蛋白。涂宗財(cái)?shù)萚25]按料液比1:3加入草魚魚鰾和0.15%的NaOH浸提1 h，水洗后再按1:3的料液比加0.15%的硫酸溶液，靜置1 h后水洗至中性，最后用80 ℃熱水浸提2 h來(lái)提取魚鰾膠原蛋白。此法在提取過(guò)程中溫度較高，經(jīng)過(guò)熱處理能夠斷裂膠原蛋白中的氫鍵和一部分共價(jià)鍵[26]，使膠原蛋白內(nèi)部三螺旋結(jié)構(gòu)破壞，便于提取。

1.2.4 其他方法 此外還有鹽提取法、堿提取法、發(fā)酵法提取魚鰾膠原蛋白，前兩者在在實(shí)際應(yīng)用中較少，容易引入雜質(zhì)[27]、提取率和提取純度都不盡人意[28]。微生物發(fā)酵法的原理是利用微生物產(chǎn)生的蛋白酶水解魚鰾蛋白，此法可以通過(guò)控制發(fā)酵時(shí)間來(lái)獲得不同目的蛋白[29]，其優(yōu)點(diǎn)是提取成本低、效率高，并且比較其他方法提取得率高[30]，得到的膠原蛋白抗氧化力更強(qiáng), 使魚鰾產(chǎn)品的營(yíng)養(yǎng)和功效更加顯著[31]。

1.3 膠原蛋白肽的制備

目前，魚鰾膠原蛋白寡肽的研究相對(duì)較少，制備寡肽的原料也是魚的加工副產(chǎn)物，不過(guò)為了制備膠原蛋白寡肽，需要采用一系列方法破壞蛋白質(zhì)的多級(jí)結(jié)構(gòu)。當(dāng)前，魚鰾膠原蛋白寡肽主要采用酶解法制備，因?yàn)槊糠N酶都有其固定的酶切位點(diǎn)，針對(duì)不同的研究方向可以選擇不同的酶和酶解條件，單一酶解法提取膠原蛋白寡肽可以更好的保留寡肽的活性位點(diǎn)，但其得到的肽段通常比較大。復(fù)合酶解法可以得到更小的肽段，從而研究具體發(fā)揮作用的小肽段或氨基酸[32]。

研究中常用的蛋白質(zhì)水解酶包括堿性蛋白酶、中性蛋白酶、木瓜蛋白酶、胰蛋白酶、胃蛋白酶等。為了達(dá)到酶的最高活性，制備過(guò)程中會(huì)提供給酶制劑最適的條件。鄭婷婷[14]設(shè)置了底物濃度為3.09%、溫度為50 ℃和pH6.0的條件，加胰蛋白酶酶解草魚魚鰾混合液79.34 min制備魚鰾膠原寡肽粉。李娜等[17]將預(yù)處理后的鱈魚魚鰾加入蒸餾水進(jìn)行勻漿，在pH7.0的條件下按照100 U/mL的酶添加量加入復(fù)合蛋白酶，于55 ℃水浴條件下酶解4 h，將酶滅活后，真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮后冷凍干燥得到鱈魚魚鰾膠原蛋白寡肽。Zheng等[33]考察了3種不同的蛋白酶在最適條件下水解黃姑魚魚鰾膠原的效果，酶的用量為1000 U/g，料液比為1:4的混合，酶解4 h。其中中性蛋白酶酶解產(chǎn)物小于1 kDa的膠原蛋白肽具有最好的抗氧化活性。此外，在制備過(guò)程中借助超聲波、微波輔助水解可以提高水解效果，分離出更高活性的小肽段[15]。

1.4 膠原蛋白肽的分離純化

膠原蛋白經(jīng)蛋白酶水解后得到具有不同分子質(zhì)量的肽段混合物，可通過(guò)分離純化技術(shù)制備具有特定分子質(zhì)量區(qū)間以及功能活性的寡肽組分。文獻(xiàn)報(bào)道常用的分離純化方法有利用透析、鹽析、層析、離心、色譜等方法除去相關(guān)雜質(zhì)，如超濾膜過(guò)濾[34]、葡聚糖凝膠色譜柱分離[35]、高效液相色譜分離[36]等。

Ramasamy等[37]將所得的羅虎魚鰾組織進(jìn)一步用胃蛋白酶處理后，胃蛋白酶溶解的魚膠原蛋白通過(guò)鹽析（氯化鈉含量為2.5 mol/L）沉淀法進(jìn)一步純化。Wu等[38]為比較酸提膠原蛋白和酶提膠原蛋白產(chǎn)物特性，將初產(chǎn)物用0.1 mol/L乙酸透析48 h得到提純產(chǎn)物。Chen等[18]為研究黃姑魚魚鰾中膠原蛋白理化特性，采用了酸提取和酶提取兩種方法，并將初產(chǎn)物用0.57～0.68 mol/L NaCl浸泡后離心，緊接用0.08～0.12 mol/L乙酸和蒸餾水透析1.5～2.3 h得到提純產(chǎn)物。Zheng等[33]以10、5和1 kDa截留膜純化中性蛋白酶水解后的黃姑魚鰾多肽，并進(jìn)行抗氧化活性評(píng)價(jià)，結(jié)果顯示，小于1 kDa的肽組分具有最高的DPPH自由基清除率。由于魚鰾膠原蛋白肽的研究相對(duì)較少，我們可借鑒其他原料提取的膠原肽分離純化方法。Cai等[39]用堿性蛋白酶對(duì)草魚皮進(jìn)行酶解，并通過(guò)G-25葡聚糖凝膠色譜柱和反相高效液相色譜對(duì)酶解物進(jìn)行分離純化，得到3種抗氧化活性較高的組分，通過(guò)Tof-MS分析確定其氨基酸序列分別為 Val-Gly-Gly-Arg-Pro、Gly-Phe-Gly-Pro-Glu-Leu和 Pro-Tyr-Ser-Phe-Lys，分子質(zhì)量在 480～640 Da之間。Gu等[40]采用超濾膜過(guò)濾（截留分子量為10和1 kDa）和反相高效液相色譜來(lái)純化從大西洋鮭魚皮酶解產(chǎn)物中分離出的兩種二肽，分別為Ala-Pro和Val-Arg。

文獻(xiàn)報(bào)道表明，現(xiàn)有各種分離純化方法可以實(shí)現(xiàn)高活性目標(biāo)組分的富集，但也存在過(guò)程時(shí)間較長(zhǎng)、效率較低且不易得到單組分產(chǎn)物等問題。從開發(fā)高附加值產(chǎn)品的角度出發(fā)，如何利用新興技術(shù)提高分離純化環(huán)節(jié)的效率、建立具有經(jīng)濟(jì)技術(shù)可行性的規(guī)模化生產(chǎn)工藝，還應(yīng)作為今后研究的重點(diǎn)內(nèi)容。

2 魚鰾膠原肽的功能特性

來(lái)源于水產(chǎn)品的膠原蛋白的基本結(jié)構(gòu)為三股螺旋結(jié)構(gòu)，在魚類副產(chǎn)品中發(fā)現(xiàn)的主要膠原蛋白是I型膠原蛋白，通常由3條左手螺旋構(gòu)型α多肽鏈互相纏繞或者兩條α多肽鏈和一條β鏈形成右手螺旋結(jié)構(gòu)，即超螺旋結(jié)構(gòu)，性質(zhì)比較穩(wěn)定[41]。當(dāng)膠原蛋白被降解為分子質(zhì)量較低的寡肽以后，更易透過(guò)腸道被人體吸收，發(fā)揮生理功能[42]。

2.1 抗氧化特性

含有不成對(duì)電子的自由基在生命活動(dòng)中發(fā)揮著重要的作用。由于自由基非?；钴S，其可通過(guò)奪取電子（氧化過(guò)程）引發(fā)一系列有害健康的反應(yīng)。研究表明，過(guò)量的自由基會(huì)對(duì)生物體造成破壞，如細(xì)胞破壞[43]、臟器損傷[44]、皮膚老化[45]等，并導(dǎo)致多種疾病的發(fā)生。因此，開發(fā)和利用高效無(wú)毒的天然抗氧化劑——自由基清除劑對(duì)維護(hù)人體健康、預(yù)防疾病意義重大。

根據(jù)以上的研究，驗(yàn)證了魚鰾膠原肽具有抗氧化活性，并且抗氧化膠原肽的相對(duì)分子質(zhì)量為0.2～1.0 kDa，大多數(shù)抗氧化肽都具有低分子量分布，但抗氧化活性有待進(jìn)一步提高，構(gòu)效關(guān)系有待進(jìn)一步明確研究。

2.2 抗衰老活性

衰老是生命體必然發(fā)生的現(xiàn)象。隨著年齡的增長(zhǎng)，生命體的器官或組織的形態(tài)結(jié)構(gòu)和生理功能會(huì)出現(xiàn)生理性衰退。以皮膚為例，皮膚衰老作為機(jī)體整體衰老的一部分具有特殊意義。由于皮膚中纖維蛋白陽(yáng)性結(jié)構(gòu)的缺失，同時(shí)皮膚Ⅰ型膠原蛋白和VII型膠原蛋白含量下降，導(dǎo)致皮膚表皮和真皮之間連接松散，使皮膚變得不規(guī)則且無(wú)組織[47]。在機(jī)體進(jìn)行正常的生命活動(dòng)時(shí)，自由基和活性氧（ROS）會(huì)在新陳代謝過(guò)程中通過(guò)一些相互關(guān)聯(lián)的反應(yīng)生成[48]。在眾多的關(guān)于衰老的學(xué)說(shuō)或理論中，自由基和活性氧（ROS）的過(guò)量產(chǎn)生被認(rèn)為是衰老的主要原因，因?yàn)樗鼈兛梢詫?dǎo)致DNA、蛋白質(zhì)和脂質(zhì)的累積損傷，致使大量的細(xì)胞凋亡和細(xì)胞壞死。

通過(guò)研究發(fā)現(xiàn)，從魚鰾中提取的膠原蛋白寡肽具有一定的抗衰老活性。李娜等[17]研究了鱈魚魚鰾提取的生物活性肽的抗衰老活性，通過(guò)建立氧化誘導(dǎo)的細(xì)胞衰老模型，通過(guò)細(xì)胞存活率、ROS含量、SA-β-GAL染色和細(xì)胞凋亡率的分析，評(píng)價(jià)其對(duì)細(xì)胞衰老的影響[49]。實(shí)驗(yàn)水解產(chǎn)物利用G-15葡聚糖凝膠色譜柱純化得到了膠原蛋白寡肽，并且主要由天冬氨酸、谷氨酸、甘氨酸、丙氨酸和脯氨酸組成，同時(shí)有較高含量的酪氨酸和苯丙氨酸等芳香族氨基酸。作者用不同濃度（100和400 μg/mL）的寡肽培養(yǎng)細(xì)胞，隨后用0.2 mmol/L H2O2誘導(dǎo)（過(guò)氧化氫誘導(dǎo)的細(xì)胞會(huì)過(guò)早衰老）[50]。結(jié)果顯示與正常細(xì)胞相比模型組活性有所下降，但實(shí)驗(yàn)組分的細(xì)胞活性均高于70%，細(xì)胞內(nèi)ROS含量下降30%以上，高濃度的寡肽可使細(xì)胞衰老率和凋亡率降低50%以上。Zheng等[33]研究了日本黃姑魚魚鰾制備的膠原蛋白肽SNNH-1對(duì)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞ROS水平的影響；H2O2處理后，人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞的熒光強(qiáng)度明顯高于對(duì)照組；而SNNH-1處理可有效降低人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞的ROS水平；另外，ROS水平隨著SNNH-1濃度的增加而降低；此研究顯示出天然的生物活性肽對(duì)過(guò)氧化氫誘導(dǎo)的氧化應(yīng)激的細(xì)胞具有保護(hù)作用。

2.3 抗疲勞活性

魚鰾膠原蛋白具有較好的抗疲勞活性。疲勞是身體劇烈運(yùn)動(dòng)時(shí)產(chǎn)生的一種綜合性生理過(guò)程，持續(xù)的運(yùn)動(dòng)過(guò)程使肌肉的耗氧量增加、血糖下降及蛋白質(zhì)消耗，疲勞最主要的表現(xiàn)是運(yùn)動(dòng)耐力的下降，這是反映機(jī)體疲勞程度最直接和最客觀的指標(biāo)。王豐雷等[51]將提取梅魚魚鰾膠原蛋白進(jìn)行小鼠體內(nèi)抗疲勞活性實(shí)驗(yàn)，將小鼠按高劑量（200 mg·kg-1.d-1）灌胃魚鰾膠原蛋白4周后，對(duì)小鼠負(fù)重游泳時(shí)間、血清尿素氮、肝糖原和肌糖原的含量進(jìn)行測(cè)定；結(jié)果表明，灌胃魚鰾膠原蛋白后的小鼠負(fù)重游泳時(shí)間延長(zhǎng)了91.69%，血清尿素氮含量減少了24.07%，肝糖原和肌糖原的含量分別增加了114.38%和123.81%，均有顯著性提高。周沫希等[24]采用小鼠負(fù)重游泳實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià)墨西哥黃唇魚魚鰾膠的抗疲勞效果，測(cè)定其負(fù)重游泳時(shí)間、血乳酸、肝糖原和肌糖原的含量。結(jié)果顯示，相比空白對(duì)照組，采用高劑量（2.66 g/kg）的墨西哥黃唇魚魚鰾膠連續(xù)灌胃40 d的小白鼠負(fù)重游泳時(shí)間延長(zhǎng)了70.68%，血乳酸含量降低了34.58%，肝糖原和肌糖原的含量分別增加了50.29%和50.63%。

從以上研究結(jié)果來(lái)看，魚鰾膠原蛋白具有顯著的抗疲勞效果，在抗疲勞食品、保健品或藥品方面具有研究?jī)r(jià)值，但還需要通過(guò)后續(xù)大量實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證其具體作用方式和副作用，以達(dá)到安全有效的抗疲勞目的。

2.4 其他功能

2.4.1 促進(jìn)創(chuàng)傷愈合 膠原蛋白具有重要的生物醫(yī)學(xué)應(yīng)用，參與骨修復(fù)、關(guān)節(jié)軟骨再生、傷口愈合和止血。特別是促進(jìn)傷口愈合方面，Chen等[18]通過(guò)用NIH-3T3成纖維細(xì)胞進(jìn)行劃痕試驗(yàn)評(píng)估體外傷口愈合率，評(píng)價(jià)從日本黃姑魚膀胱膠原蛋白中提取的膠原對(duì)創(chuàng)面愈合率的影響；與對(duì)照組相比，在PSC存在下，傷口劃痕面積顯著減少，并呈劑量依賴性；在PSC 12.5、25和50 μg/mL濃度下的劃痕閉合率明顯高于對(duì)照組，而在50 μg/mL的PSC濃度下的劃痕閉合率與50 μg/mL的牛Ⅰ型膠原相似，24 h愈合率達(dá)到90%，劃痕幾乎完全閉合；體外傷口閉合實(shí)驗(yàn)結(jié)果支持了魚鰾PSC誘導(dǎo)NIH-3T3細(xì)胞遷移的結(jié)論；在傷口愈合過(guò)程中，成纖維細(xì)胞的增殖和遷移加速了再上皮化過(guò)程，促進(jìn)了傷口閉合。

2.4.2 預(yù)防潰瘍性結(jié)腸炎（UC） Lu等[52]采用過(guò)氧化氫誘導(dǎo)的腸上皮細(xì)胞（IEC-6）氧化應(yīng)激模型和脂多糖（LPS）誘導(dǎo)的IEC-6細(xì)胞炎癥模型評(píng)估鯽魚魚鰾胃蛋白酶和胰蛋白酶先后水解的水解液（HCSB）的抗氧化和抗炎活性。經(jīng)50、100和150 μg/mL HCSB孵育后，細(xì)胞存活率分別恢復(fù)到61.3%、72%和83.8%。經(jīng)H2O2刺激后，超氧化物歧化酶（SOD）、過(guò)氧化氫酶（CAT）和谷胱甘肽過(guò)氧化物酶（GSH-Px）活性分別下降了31%、45.5%和39.8%。經(jīng)50、100、150 μg/mL HCSB預(yù)處理后，超氧化物歧化酶活性恢復(fù)到正常細(xì)胞的77.5%、86.3%和92.6%，過(guò)氧化氫酶活性恢復(fù)到61.1%、72.4%和89.4%，谷胱甘肽過(guò)氧化物酶活性恢復(fù)到71%、78.7%和86.3%。這些結(jié)果表明，HCSB預(yù)處理可顯著提高細(xì)胞存活率。HCSB不僅可以濃度依賴的方式抑制H2O2誘導(dǎo)的IEC-6細(xì)胞活力下降，還能有效緩解氧化應(yīng)激引起的細(xì)胞內(nèi)抗氧化酶活性下降，且這種作用也具有劑量依賴性。

2.4.3 糖尿病的治療 二肽基肽酶IV（DPP-IV）在血糖代謝中起重要作用， Hong[23]在實(shí)驗(yàn)中采用中性酶對(duì)鰱魚鰾蛋白進(jìn)行水解，肽段WGDEHIPGSPYH及其水解產(chǎn)物IPGSPY被完整地轉(zhuǎn)運(yùn)到Caco-2細(xì)胞單層。這兩個(gè)肽對(duì)Caco-2和INS-1細(xì)胞的作用均表現(xiàn)出良好的抑制可溶性DPP-IV和促進(jìn)胰島素分泌的作用。

3 結(jié)語(yǔ)

水產(chǎn)養(yǎng)殖及加工業(yè)在我國(guó)有著巨大的規(guī)模和市場(chǎng)，在產(chǎn)業(yè)轉(zhuǎn)型，提倡綠色環(huán)保的背景下，水產(chǎn)品的加工副產(chǎn)物如何有效利用是一個(gè)關(guān)鍵問題。目前，對(duì)魚鰾來(lái)源的膠原蛋白、生物活性肽的研究尚有不足，雖然取得一定的研究成果，但是在功能性寡肽的構(gòu)效關(guān)系與定向制備、目標(biāo)產(chǎn)物的高效分離純化、潛在生理功能的挖掘以及應(yīng)用新興技術(shù)提高生產(chǎn)效率等方面還存在廣闊的研究開發(fā)空間。