磷脂酰絲氨酸銀杏葉復(fù)合物輔助改善記憶功能的作用

黃遠(yuǎn)英，殷光玲

湯臣倍健股份有限公司（廣州 510663）

記憶力是指識(shí)記、保持、再認(rèn)識(shí)和重現(xiàn)客觀事物所反映的內(nèi)容和經(jīng)驗(yàn)的能力。輔助改善記憶功能是我國保健食品27個(gè)功能之一，適宜人群為“需要改善記憶者”，需要改善記憶者常指3類人群，即記憶力減退的中老年人、長期應(yīng)用大腦的腦力勞動(dòng)者及因考試升學(xué)等壓力需要高效理解記憶的廣大青少年[1]。

神經(jīng)細(xì)胞膜中含有大量的磷脂酰絲氨酸，其對(duì)神經(jīng)細(xì)胞的維持、修復(fù)及功能具有重要作用。研究表明，補(bǔ)充磷脂酰絲氨酸能減緩甚至逆轉(zhuǎn)癡呆或者與衰老相關(guān)的學(xué)習(xí)、情緒、記憶、注意力等的下降[2]。

銀杏葉制劑具有提高記憶功能的作用，其主要是通過促進(jìn)大腦海馬膽堿的再攝取，減少M(fèi)型膽堿受體和α2腎上腺素受體及遞質(zhì)的丟失，從而發(fā)揮改善學(xué)習(xí)和記憶能力的功能[4]。

B族維生素缺乏會(huì)導(dǎo)致許多酶系統(tǒng)功能障礙，進(jìn)而產(chǎn)生一系列神經(jīng)化學(xué)和形態(tài)學(xué)變化，最終影響腦發(fā)育和腦功能[5]。B族維生素對(duì)于認(rèn)知行為的影響，在很大程度上歸因于其調(diào)節(jié)了神經(jīng)遞質(zhì)的代謝，從而改變了神經(jīng)系統(tǒng)的化學(xué)傳導(dǎo)過程。

試驗(yàn)將磷脂酰絲氨酸、銀杏葉提取物、B族維生素、亞麻籽油等按一定比例進(jìn)行復(fù)配，制得磷脂酰絲氨酸銀杏葉復(fù)合物，對(duì)小鼠進(jìn)行輔助改善記憶功能試驗(yàn)，為開發(fā)輔助改善記憶的功能食品提供理論參考。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)動(dòng)物

健康SPF級(jí)昆明種小鼠[長沙市天勤生物技術(shù)有限公司，生產(chǎn)許可證SCXK（湘）2009-0012]。

1.2 樣品

磷脂酰絲氨酸銀杏葉軟膠囊內(nèi)容物，為黃褐色粘稠物，由湯臣倍健股份有限公司提供，日服用建議劑量1.2 g。

1.3 劑量選擇和受試物給予方式

試驗(yàn)小鼠按隨機(jī)分組原則分為低劑量組[0.10 g/（kg·bw）]、中劑量組[0.20 g/（kg·bw）]、高劑量組[0.60 g/（kg·bw）]及對(duì)照組（低、中、高劑量分別相當(dāng)于日服用建議劑量的5，10和30倍）。低、中、高劑量受試液配制時(shí)分別取2.00，4.00和12.00 g磷脂酰絲氨酸銀杏葉復(fù)合物，加植物油至200 mL，對(duì)照組予以等體積的植物油，每天灌胃1次，灌胃體積0.1 mL/（10 g·bw），連續(xù)30 d。

1.4 主要儀器與設(shè)備

MP150十六道生理記錄儀（美國BIOPAC公司）；DSI遙測系統(tǒng)（美國DSI公司）；ZB-200小鼠疲勞轉(zhuǎn)棒儀（成都泰盟儀器有限公司）；MORRIS水迷宮（中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥物研究所）；ZZ-6小鼠自主活動(dòng)測試儀（成都泰盟儀器有限公司）。

1.5 試驗(yàn)方法

1.5.1 跳臺(tái)試驗(yàn)

體重18～22 g的雄性小鼠，隨機(jī)分為3個(gè)劑量組和1個(gè)對(duì)照組，每組10只。連續(xù)灌胃 30 d 后進(jìn)行跳臺(tái)試驗(yàn)。將動(dòng)物放入反應(yīng)箱內(nèi)適應(yīng)3 min，立即通以36 V交流電刺激小鼠。將小鼠放在絕緣平臺(tái)上，記錄各小鼠第1次跳下平臺(tái)的潛伏期、5 min內(nèi)每只小鼠受到電擊的次數(shù)（跳下平臺(tái)的錯(cuò)誤次數(shù)）和各組跳下平臺(tái)的動(dòng)物數(shù)，以此作為學(xué)習(xí)成績。24 h后重復(fù)測試，記錄第1次跳下平臺(tái)的潛伏期、3 min內(nèi)跳下平臺(tái)的錯(cuò)誤次數(shù)和各組跳下平臺(tái)的動(dòng)物數(shù)。停止訓(xùn)練5 d后進(jìn)行消退試驗(yàn)。

1.5.2 避暗試驗(yàn)

動(dòng)物選擇，試驗(yàn)分組，給受試物的劑量、途徑、時(shí)間均同跳臺(tái)試驗(yàn)。連續(xù)灌胃30 d后開始進(jìn)行避暗試驗(yàn)。記錄每只鼠從放入明室至進(jìn)入暗室遭電擊所需的時(shí)間（潛伏期）、5 min內(nèi)進(jìn)入暗室的錯(cuò)誤次數(shù)和各組進(jìn)入暗室的動(dòng)物數(shù)。24 h后同一時(shí)間，再進(jìn)行測驗(yàn)，記錄每鼠進(jìn)入暗室的潛伏期、5 min內(nèi)進(jìn)入暗室的錯(cuò)誤次數(shù)和各組進(jìn)入暗室的動(dòng)物數(shù)。停止訓(xùn)練5 d后進(jìn)行消退試驗(yàn)。

1.5.3 水迷宮試驗(yàn)

體重18～22 g的雄性小鼠，隨機(jī)分為3個(gè)劑量組和1個(gè)對(duì)照組，每組10只。連續(xù)灌胃30 d后進(jìn)行跳臺(tái)試驗(yàn)。訓(xùn)練期間繼續(xù)給予受試物。每天訓(xùn)練1次，連續(xù)5 d。第1 d訓(xùn)練前將小鼠放在梯子附近，使其自動(dòng)爬上3次，以后每次訓(xùn)練前將小鼠放在梯子附近，使其自動(dòng)爬上1次。第1天訓(xùn)練時(shí)，用擋板在A處擋死，從A點(diǎn)開始訓(xùn)練；第2天從B處開始，此路程訓(xùn)練3 d，至80%的動(dòng)物在2 min內(nèi)到達(dá)終點(diǎn)；第5天從氣墊開始訓(xùn)練；以5 d的總學(xué)習(xí)成績進(jìn)行評(píng)價(jià)（即各組5 d到達(dá)終點(diǎn)的總時(shí)間、總錯(cuò)誤次數(shù)和各組2 min內(nèi)到達(dá)終點(diǎn)的動(dòng)物數(shù)）。停止訓(xùn)練5 d后進(jìn)行消退試驗(yàn)。

1.6 試驗(yàn)數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)

試驗(yàn)數(shù)據(jù)用SPSS軟件對(duì)各試驗(yàn)原始數(shù)據(jù)進(jìn)行方差齊性檢驗(yàn)，滿足“方差齊”要求的數(shù)據(jù)資料用多個(gè)試驗(yàn)組和1個(gè)對(duì)照組間均數(shù)的兩兩比較方法進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理；對(duì)方差不齊的數(shù)據(jù)資料進(jìn)行適當(dāng)?shù)淖兞哭D(zhuǎn)換，待滿足“方差齊”要求后，用轉(zhuǎn)換所得的數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理。

水迷宮試驗(yàn)中到達(dá)終點(diǎn)的時(shí)間、總錯(cuò)誤次數(shù)、跳臺(tái)試驗(yàn)和避暗試驗(yàn)中的潛伏期、錯(cuò)誤次數(shù)屬計(jì)量資料，可用方差分析，但需先進(jìn)行方差齊性檢驗(yàn)，若方差齊，采用單因素方差分析進(jìn)行總體比較，發(fā)現(xiàn)差異再用Dunnett法進(jìn)行多個(gè)劑量組與1個(gè)對(duì)照組均數(shù)間的兩兩比較。若方差不齊則對(duì)原始數(shù)據(jù)進(jìn)行適當(dāng)?shù)淖兞哭D(zhuǎn)換，滿足方差齊性檢驗(yàn)后，用轉(zhuǎn)換后的數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)；若變量轉(zhuǎn)換后仍未達(dá)到方差齊性的目的，改用秩和檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，發(fā)現(xiàn)總體比較有差異，則采用不要求方差齊性的Tamhane’s T2檢驗(yàn)進(jìn)行兩兩比較。水迷宮試驗(yàn)中2 min內(nèi)到達(dá)終點(diǎn)的動(dòng)物數(shù)（百分率）、跳臺(tái)試驗(yàn)中跳下平臺(tái)的動(dòng)物數(shù)（百分率）、避暗試驗(yàn)中進(jìn)入暗室的動(dòng)物數(shù)（百分率）為計(jì)數(shù)資料，用χ2檢驗(yàn)，四格表總例數(shù)小于40，或總例數(shù)等于或大于40但出現(xiàn)理論數(shù)等于或小于1時(shí)，改用確切概率法。

1.7 結(jié)果判定

1.7.1 跳臺(tái)試驗(yàn)

若受試樣品組與對(duì)照組比較，潛伏期明顯延長，錯(cuò)誤次數(shù)或跳下平臺(tái)的動(dòng)物數(shù)明顯少于對(duì)照組，差異有顯著性，以上三項(xiàng)指標(biāo)中，任一項(xiàng)指標(biāo)陽性，均可判定該項(xiàng)試驗(yàn)陽性。

1.7.2 避暗試驗(yàn)

若受試樣品組小鼠進(jìn)入暗室的潛伏期明顯長于對(duì)照組，5 min內(nèi)進(jìn)入暗室的錯(cuò)誤次數(shù)或5 min內(nèi)進(jìn)入暗室的動(dòng)物數(shù)少于對(duì)照組，且差異有顯著性，以上三項(xiàng)指標(biāo)中任一項(xiàng)指標(biāo)陽性，均可判定該項(xiàng)試驗(yàn)陽性。

1.7.3 水迷宮試驗(yàn)

試驗(yàn)組與對(duì)照組比，試驗(yàn)組到達(dá)終點(diǎn)所用的時(shí)間或到達(dá)終點(diǎn)前的錯(cuò)誤次數(shù)明顯少于對(duì)照組，或2 min內(nèi)到達(dá)終點(diǎn)的動(dòng)物數(shù)明顯多于對(duì)照組，且經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)檢驗(yàn)差異有顯著性。其中，任一項(xiàng)指標(biāo)陽性，均可判定該項(xiàng)試驗(yàn)陽性。

1.7.4 結(jié)果判定

跳臺(tái)試驗(yàn)、避暗試驗(yàn)、水迷宮試驗(yàn)3項(xiàng)試驗(yàn)中任2項(xiàng)試驗(yàn)結(jié)果陽性。且重復(fù)試驗(yàn)結(jié)果一致（所重復(fù)的同一項(xiàng)試驗(yàn)2次結(jié)果均為陽性），可以判定磷脂酰絲氨酸銀杏葉復(fù)合物輔助改善記憶功能試驗(yàn)結(jié)果陽性。

2 結(jié)果與分析

2.1 磷脂酰絲氨酸銀杏復(fù)合物對(duì)小鼠體重的影響

由表1～表3可見，經(jīng)口連續(xù)灌胃給予小鼠不同劑量的磷脂酰絲氨酸銀杏葉復(fù)合物30 d，重復(fù)2次試驗(yàn)，各劑量組小鼠體重與對(duì)照組比較，差異均無顯著性（P＞0.05）。

表1 磷脂酰絲氨酸銀杏復(fù)合物對(duì)小鼠體重的影響（水迷宮試驗(yàn)）

表2 磷脂酰絲氨酸銀杏復(fù)合物對(duì)小鼠體重的影響（避暗試驗(yàn)）

表3 磷脂酰絲氨酸銀杏復(fù)合物對(duì)小鼠體重的影響（跳臺(tái)試驗(yàn)）

2.2 磷脂酰絲氨酸銀杏復(fù)合物對(duì)小鼠水迷宮試驗(yàn)的影響

2.2.1 水迷宮試驗(yàn)

由表4可見，經(jīng)口連續(xù)灌胃給予小鼠不同劑量的磷脂酰絲氨酸銀杏葉復(fù)合物30 d，重復(fù)2次試驗(yàn)，第1次試驗(yàn)結(jié)果表明，高劑量小鼠到達(dá)終點(diǎn)的時(shí)間、到達(dá)終點(diǎn)前的錯(cuò)誤次數(shù)與對(duì)照組比較，差異有顯著性（P＜0.05）；各劑量組小鼠2 min內(nèi)到達(dá)終點(diǎn)的動(dòng)物數(shù)與對(duì)照組比較，差異均無顯著性（P＞0.05）。第2次試驗(yàn)結(jié)果表明，高劑量小鼠到達(dá)終點(diǎn)的時(shí)間、到達(dá)終點(diǎn)前的錯(cuò)誤次數(shù)與對(duì)照組比較，差異有顯著性（P＜0.05）；各劑量組小鼠2 min內(nèi)到達(dá)終點(diǎn)的動(dòng)物數(shù)與對(duì)照組比較，差異均無顯著性（P＞0.05）。

表4 磷脂酰絲氨酸銀杏復(fù)合物對(duì)小鼠水迷宮試驗(yàn)

2.2.2 水迷宮消退試驗(yàn)

由表5可見，重復(fù)2次水迷宮消退試驗(yàn)，第1次試驗(yàn)結(jié)果表明，高劑量組小鼠到達(dá)終點(diǎn)的時(shí)間與對(duì)照組比較，差異有顯著性（P＜0.05）。第2次試驗(yàn)結(jié)果表明，各劑量組小鼠到達(dá)終點(diǎn)的時(shí)間、到達(dá)終點(diǎn)前的錯(cuò)誤次數(shù)、2 min內(nèi)到達(dá)終點(diǎn)的動(dòng)物數(shù)與對(duì)照組比較，差異均無顯著性（P＞0.05）。

表5 磷脂酰絲氨酸銀杏復(fù)合物對(duì)小鼠水迷宮消退試驗(yàn)

綜合評(píng)定，水迷宮試驗(yàn)結(jié)果為陽性。

2.3 磷脂酰絲氨酸銀杏復(fù)合物對(duì)小鼠避暗試驗(yàn)的影響

2.3.1 小鼠避暗試驗(yàn)

由表6可見，經(jīng)口連續(xù)灌胃給予小鼠不同劑量的磷脂酰絲氨酸銀杏葉復(fù)合物30 d，重復(fù)2次試驗(yàn)，第1次試驗(yàn)結(jié)果表明，高劑量小鼠測驗(yàn)時(shí)進(jìn)入暗室潛伏期、測驗(yàn)錯(cuò)誤次數(shù)與對(duì)照組比較，差異有顯著性（P＜0.05）；第2次試驗(yàn)結(jié)果表明，高劑量小鼠測驗(yàn)時(shí)進(jìn)入暗室潛伏期與對(duì)照組比較，差異有顯著性（P＜0.05）。

表6 磷脂酰絲氨酸銀杏復(fù)合物對(duì)小鼠避暗試驗(yàn)

2.3.2 小鼠避暗消退試驗(yàn)

由表7可見，重復(fù)2次小鼠避暗消退試驗(yàn)，第1次試驗(yàn)結(jié)果表明，高劑量小鼠進(jìn)入暗室潛伏期與對(duì)照組比較，差異有顯著性（P＜0.05）；第2次試驗(yàn)結(jié)果表明，各劑量組小鼠進(jìn)入暗室潛伏期、錯(cuò)誤次數(shù)、進(jìn)入暗室動(dòng)物數(shù)與對(duì)照組比較，差異均無顯著性（P＞0.05）。

表7 磷脂酰絲氨酸銀杏復(fù)合物對(duì)小鼠避暗消退試驗(yàn)

綜合評(píng)定，避暗試驗(yàn)結(jié)果為陽性。

2.4 磷脂酰絲氨酸銀杏復(fù)合物對(duì)小鼠跳臺(tái)試驗(yàn)的影響

2.4.1 小鼠跳臺(tái)試驗(yàn)

由表8可見，經(jīng)口連續(xù)灌胃給予小鼠不同劑量的磷脂酰絲氨酸銀杏葉復(fù)合物30 d，重復(fù)2次試驗(yàn)，2次試驗(yàn)結(jié)果表明，各劑量組小鼠訓(xùn)練時(shí)與測驗(yàn)時(shí)跳下平臺(tái)的潛伏期、訓(xùn)練時(shí)與測驗(yàn)時(shí)小鼠跳下平臺(tái)的錯(cuò)誤次數(shù)、小鼠跳下平臺(tái)的動(dòng)物只數(shù)和錯(cuò)誤反應(yīng)率與對(duì)照組比較，差異均無顯著性（P＞0.05）。

表8 磷脂酰絲氨酸銀杏復(fù)合物對(duì)小鼠跳臺(tái)試驗(yàn)

2.4.2 小鼠跳臺(tái)消退試驗(yàn)

由表9可見，重復(fù)2次小鼠跳臺(tái)消退試驗(yàn)，2次試驗(yàn)結(jié)果表明，各劑量組小鼠跳下平臺(tái)的潛伏期、小鼠跳下平臺(tái)的錯(cuò)誤次數(shù)、跳下平臺(tái)的動(dòng)物只數(shù)與對(duì)照組比較，差異均無顯著性（P＞0.05）。

表9 磷脂酰絲氨酸銀杏復(fù)合物對(duì)小鼠跳臺(tái)暗消退試驗(yàn)

綜合評(píng)定，跳臺(tái)試驗(yàn)結(jié)果為陰性。

3 小結(jié)

跳臺(tái)、避暗和水迷宮試驗(yàn)都是通過觀察對(duì)記憶獲得、鞏固、再現(xiàn)的影響來觀察受試物對(duì)記憶各過程的影響效果[6]。分別經(jīng)口給予小鼠0.10，0.20和0.60 g/（kg·bw）劑量的磷脂酰絲氨酸銀杏葉復(fù)合物30 d，對(duì)小鼠體重增長無不良影響。水迷宮試驗(yàn)、避暗試驗(yàn)前后2次試驗(yàn)，結(jié)果均為陽性，表明能有效改善小鼠的學(xué)習(xí)記憶能力。按照《保健食品檢驗(yàn)與評(píng)價(jià)技術(shù)規(guī)范》對(duì)輔助改善記憶功能保健食品的判定標(biāo)準(zhǔn)可知，磷脂酰絲氨酸銀杏葉復(fù)合物具有輔助改善記憶的作用。

4 結(jié)論與探討

老齡化是不可回避的社會(huì)問題，在我國一些省市，65歲以上的老齡人超過20%。預(yù)計(jì)到2025年，中國老年人口將突破3億人[7]。研究顯示高齡老年人認(rèn)知能力隨年齡增長出現(xiàn)不同程度的減退[8]。2020年發(fā)表在《柳葉刀·公共衛(wèi)生》上的一項(xiàng)全國性橫斷面研究顯示，我國60歲及以上人員輕度認(rèn)知障礙（MCI）患病率達(dá)15.5%。據(jù)此推算，我國老年人群中MCI患者約3 877萬。因此，應(yīng)大力研發(fā)社會(huì)需求量較高、改善老年人記憶減退的產(chǎn)品，以滿足時(shí)代和民眾對(duì)改善記憶的需求。

磷脂酰絲氨酸是細(xì)胞膜組分之一，它能影響細(xì)胞膜的流動(dòng)性、通透性，并且能激活多種酶類的代謝和合成，具有改善神經(jīng)細(xì)胞功能、調(diào)節(jié)神經(jīng)脈沖傳導(dǎo)和增進(jìn)大腦記憶功能。不僅對(duì)生理性認(rèn)知能力、損傷人群的認(rèn)知能力恢復(fù)具有顯著、積極的效應(yīng)，并且在非損傷性認(rèn)知能力下降的人群研究中被證明也具有提高認(rèn)知力的作用[9]。陳頔等選取49～65歲退休人員作為研究對(duì)象，服用磷脂酰絲氨酸復(fù)合物30 d后，試食組試食前后各量表得分、總量表分和記憶商均明顯升高（P＜0.01）；試食后試食組與對(duì)照組比較，除指向記憶無明顯變化外，其他各項(xiàng)得分均明顯升高，總量表分和記憶商也顯著提高（P＜0.01）。陳紅輝等[3]在銀杏葉提取物改善學(xué)習(xí)記憶障礙的試驗(yàn)研究中發(fā)現(xiàn)，銀杏葉提取物可改善癡呆鼠學(xué)習(xí)記憶功能障礙。MCI是指介于正常老化的記憶力減退和癡呆之間的認(rèn)知障礙狀態(tài)。記憶功能損害（不同的記憶損害類型和損害程度）是MCI最主要或最突出的臨床表現(xiàn)，其余受損的認(rèn)知領(lǐng)域還包括語言功能、注意力、執(zhí)行功能、視空間功能等方面[10]。余忠海等[4]在為期1年的銀杏葉治療MCI患者試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，銀杏葉片具有提高M(jìn)CI患者記憶商，改善MCI患者總體記憶功能的作用，尤其是在提高短時(shí)記憶和瞬時(shí)記憶方面表現(xiàn)更加顯著。

通過對(duì)老年人群維生素營養(yǎng)狀況測試分析發(fā)現(xiàn)，一些B族維生素的缺乏與老年人認(rèn)知功能低下有關(guān)[5]。一研究觀察137位66～90歲老人的維生素營養(yǎng)狀況與認(rèn)知功能之間的關(guān)系，結(jié)果發(fā)現(xiàn)攝入較多VB1、VB2、尼克酸和葉酸的老人具有較高的抽象思維能力。

磷脂酰絲氨酸銀杏葉復(fù)合物對(duì)改善老年人記憶減退方向具有理論基礎(chǔ)，通過動(dòng)物試驗(yàn)初步證明其具有輔助改善記憶的功能。磷脂酰絲氨酸銀杏葉復(fù)合物對(duì)老年人記憶減退的實(shí)際改善功效需要進(jìn)一步的人體試驗(yàn)研究驗(yàn)證。