裸花紫珠的化學(xué)成分研究

陳倩倩，鄒獻(xiàn)亮，侴桂新, 2*

? 化學(xué)成分 ?

裸花紫珠的化學(xué)成分研究

陳倩倩1，鄒獻(xiàn)亮3，侴桂新1, 2*

1. 上海中醫(yī)藥大學(xué)中藥研究所，上海 201203 2. 上海中藥標(biāo)準(zhǔn)化研究中心，上海 201203 3. 萍鄉(xiāng)衛(wèi)生職業(yè)學(xué)院，江西萍鄉(xiāng) 337000

研究裸花紫珠葉的化學(xué)成分。采用多種現(xiàn)代分離色譜技術(shù)進(jìn)行分離純化，通過波譜數(shù)據(jù)和理化性質(zhì)進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定，以及ECD確定新化合物的絕對構(gòu)型；采用CCK-8法對新化合物的細(xì)胞毒活性進(jìn)行篩選。從裸花紫珠葉70%乙醇提取物中分離鑒定出34個(gè)化合物，其中化合物1～5為裸花紫珠烷A1（1）、(4,6)-4,6-二羥基-α-松油醇（2）、(1)-2,2-二甲基-3-羥甲基-3-環(huán)己烯-1-甲酸（3）、(1,4)-2,2-二甲基-3-亞甲基-4-羥基環(huán)己烷-1-甲酸（4）、(1)-2,2-二甲基-4-羥甲基-3-環(huán)己烯-1-甲酸（5）；化合物6～34為2,6-二甲氧基-對-苯醌（6）、對薄荷-8-烯-1,2-二醇（7）、天目地黃素B（8）、北玄參素G（9）、黃牡丹醇B（10）、香桂酮（11）、8-羥基-2,6-二甲基-(2,6)-辛二烯酸（12）、8-羥基-2,6-二甲基-(2)-辛烯酸（13）、裸花紫珠烷A（14）、丁子香烷-2β,9α-二醇（15）、丁香烷-1,9β-二醇（16）、(8,9)-異丁香烷-8,9-二醇（17）、()-(＋)-去氫催吐蘿芙葉醇（18）、(3,5,6,7)-5,6-環(huán)氧-3-羥基-7-大柱香波龍烯-9-酮（19）、脫落酸（20）、紫珠醌B（21）、12-羥基茉莉酸（22）、(?)-12-羥基茉莉酸甲酯（23）、齊墩果酸（24）、熊果酸（25）、薔薇酸（26）、5,4-二羥基-3,7,3-三甲氧基黃酮（27）、氈毛美洲茶素（28）、5,7,4′-三羥基-3′-甲氧基黃酮（29）、柳葉柴胡酚（30）、九里香亭（31）、芥子醛（32）、香草醛（33）和丁香酸（34）?；衔?～5為新化合物，分別命名為裸花紫珠烷A1～E1，化合物6～13、17～18和31均為首次從馬鞭草科中分離鑒定，化合物30、32～33均為首次在紫珠屬植物中發(fā)現(xiàn)，化合物15、21和28均為首次從裸花紫珠中分離得到。體外細(xì)胞毒活性篩選結(jié)果表明，化合物4對人肝癌HepG2細(xì)胞具有細(xì)胞毒活性，其半數(shù)抑制濃度（half inhibition concentration，IC50）值為24.0 μmol/L。

馬鞭草科；裸花紫珠；裸花紫珠烷A1；(1,4)-2,2-二甲基-3-亞甲基-4-羥基環(huán)己烷-1-甲酸；丁子香烷-2β,9α-二醇；紫珠醌B；氈毛美洲茶素；柳葉柴胡酚

裸花紫珠為馬鞭草科植物裸花紫珠Hook. et Arn的干燥葉，在我國主產(chǎn)于海南、廣東、廣西等地，具有消炎、解腫毒、化濕濁、止血等功效，已作為新增藥材收錄于《中國藥典》2020年版[1]。裸花紫珠作為傳統(tǒng)的黎藥而被廣泛應(yīng)用于臨床[2]，目前上市的裸花紫珠制劑主要為單味藥制劑，包括片劑、顆粒劑和膠囊劑等[3]。有關(guān)裸花紫珠化學(xué)成分研究逐年增加，包括揮發(fā)油、黃酮類、三萜類、二萜類、倍半萜類、環(huán)烯醚萜類、苯丙酸、木脂素和苯乙醇苷等，其中二萜類、倍半萜類和環(huán)烯醚萜等成分是研究的熱點(diǎn)[4]。為進(jìn)一步豐富裸花紫珠的化學(xué)信息，為闡明裸花紫珠的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)提供資料。本研究對裸花紫珠70%乙醇提取物的二氯甲烷部位化學(xué)成分進(jìn)行系統(tǒng)的分離得到34個(gè)化合物，其中化合物1～5為新化合物，命名為裸花紫珠烷A1（1）、裸花紫珠烷B1（2）、裸花紫珠烷C1（3）、裸花紫珠烷D1（4）、裸花紫珠烷E1（5）；其他29個(gè)已知化合物分別鑒定為2,6-二甲氧基-對-苯醌（2,6- dimethoxy--benzoquinone，6）、對薄荷-8-烯-1,2-二醇（-menth-8-ene-1,2-diol，7）、天目地黃素B（rehmachinin B，8）、北玄參素G（buergerinin G，9）、黃牡丹醇B（paeoveitol B，10）、香桂酮（subamone，11）、8-羥基-2,6-二甲基-(2,6)-辛二烯酸 [8-hydroxy-2,6-dimethyl-(2,6)-octadienoic acid，12]、8-羥基-2,6-二甲基-(2)-辛烯酸[8-hydroxy- 2,6-dimethyl-(2)-octenoic acid，13]、裸花紫珠烷A（callnudoid A，14）、丁子香烷-2β,9α-二醇（clovane-2β,9α-diol，15）、丁香烷-1,9β-二醇（caryolane-1,9β-diol，16）、(8,9)-異丁香烷-8,9-二醇 [(8,9)-isocaryolane-8,9-diol，17]、()-(＋)-去氫催吐蘿芙葉醇 [()-(＋)-dehydrovomifoliol，18]、(3,5,6,7)-5,6-環(huán)氧-3-羥基-7-大柱香波龍烯-9-酮 [(3,5,6,7)-5,6-epoxy-3-hydroxy-7-megastigmen- 9-one，19]、脫落酸（abscisic acid，20）、紫珠醌B（callicarpaquinone B，21）、12-羥基茉莉酸（12-hydroxyjasmonic acid，22）、(?)-12-羥基茉莉酸甲酯 [(?)-methyl 12-hydroxyjasmonate，23]、齊墩果酸（oleanolic acid，24）、熊果酸（ursolic acid，25）、薔薇酸（euscaphic acid，26）、5,4′-二羥基-3,7,3′-三甲氧基黃酮（5,4′-dihydroxy-3,7,3′-trimethoxy- flavone，27）、氈毛美洲茶素（velutin，28）、5,7,4′-三羥基-3′-甲氧基黃酮（5,7,4′-trihydroxy-3′- methoxyflavone，29）、柳葉柴胡酚（salicifoliol，30）、九里香亭（murrangatin，31）、芥子醛（sinapaldehyde，32）、香草醛（4-hydroxy-3-methoxybenzaldehyde，33）、丁香酸（syringic acid，34）。化合物1和14為降半日花烷型二萜，化合物15～23為倍半萜，化合物2～5、7～13為單萜，化合物6為醌類，化合物24～26為三萜，化合物27～29為黃酮，化合物30為木脂素，化合物31為香豆素，化合物32～34為酚酸。并對分離得到的5個(gè)新化合物進(jìn)行體外抗人肝癌HepG2細(xì)胞增殖活性篩選，結(jié)果表明，化合物4有明顯的抑制HepG2細(xì)胞增殖活性，其半數(shù)抑制濃度（median inhibition concentration，IC50）值為24.0 μmol/L。

1 儀器與材料

Bruker AVANCE-III型核磁共振波譜儀（400 MHz，內(nèi)標(biāo)為TMS，德國Bruker公司）；Waters UPLC Premior Q-TOF質(zhì)譜儀、e2695型高效液相色譜儀、制備型1260高效液相色譜儀（美國安捷倫公司）；FT-IR紅外光譜儀（PerkinlEmer公司）；制備色譜柱（Shiseido Capcellpak C18，250 mm×20 mm，5 μm，日本資生堂）；Reveleris X2 Flash中壓液相色譜儀（MPLC，美國Grace公司）；Synergy H4酶聯(lián)免疫檢測儀（美國BioTek公司）；Sephadex LH-20凝膠（瑞典烏普薩拉阿默森生物科學(xué)公司）；MCI GEL CHP20P（75～150 μm，日本東京三菱化學(xué)工業(yè)公司）；柱色譜硅膠（100～200、200～300、300～400目，中國青島灣精細(xì)化工有限公司）；薄層色譜及制備型薄層色譜HSGF254硅膠板（煙臺(tái)江友硅膠開發(fā)有限公司）；高效液相色譜用乙腈（色譜級，美國Dikma公司）；薄層色譜用試劑均為分析純（中國醫(yī)藥集團(tuán)有限公司）；柱色譜用試劑均為工業(yè)級（上海潤捷化學(xué)試劑有限公司），CCK-8試劑盒（日本，同仁500T，批號C8216990），96微孔板（Corning 3599，批號02222601），DMEM培養(yǎng)基（美國Gibco公司，批號MA0212-Jun-08H），胰酶-EDTA（美倫生物，批號MA0233-Jul-01H），PBS磷酸鹽緩沖液（美倫生物，批號MA0015-Jun-29H），無水乙醇（分析純，上海國藥化學(xué)試劑公司）；紫杉醇（taxol，PTX，質(zhì)量分?jǐn)?shù)＞98%，批號H15F10X80839，上海源葉生物科技有限公司）

裸花紫珠藥材于2019年6月在海南省五指山采收，由上海中醫(yī)藥大學(xué)吳立宏教授鑒定為裸花紫珠Hook. et Arn的干燥葉，標(biāo)本（LHZZ- 20190806）保存于上海中醫(yī)藥大學(xué)中醫(yī)藥研究所標(biāo)準(zhǔn)化研究中心標(biāo)本室。

2 提取與分離

干燥裸花紫珠葉50 kg，粉碎，用70%乙醇回流提取2次，減壓濃縮得到8.3 kg的干浸膏。干浸膏溶于甲醇后與等量硅膠拌樣，干燥后依次用石油醚、二氯甲烷、醋酸乙酯、甲醇抽提，回收溶劑分別得到石油醚部位（25.8 g）、二氯甲烷部位（129.1 g）、醋酸乙酯部位（657.2 g）和甲醇部位。

二氯甲烷部位經(jīng)硅膠柱色譜分離（石油醚-醋酸乙酯100∶1～0∶1、醋酸乙酯-甲醇1∶1～0∶1），結(jié)合制備薄層色譜（PTLC）分析，合并得到11個(gè)組分（Fr. C1～C11）。

Fr. C7經(jīng)PTLC色譜以石油醚-醋酸乙酯（2∶1）洗脫得到化合物27（20 mg）、28（4.6 mg）。

Fr. C4經(jīng)MPLC色譜（甲醇-水3∶7～1∶0）分離純化，得到28個(gè)亞組分（Fr. C4-1～C4-28）。Fr. C4-5（0.195 g）經(jīng)Sephadex LH-20柱色譜（石油醚-二氯甲烷-甲醇5∶5∶1）等度洗脫得到9個(gè)次組分（Fr. C4-5-1～C4-5-9）。Fr. C4-5-2（23.7 mg）經(jīng)PTLC色譜以石油醚-醋酸乙酯（2∶1）洗脫得到化合物11（13.4 mg）。Fr. C4-14（0.152 g）經(jīng)過Sephadex LH-20柱色譜（石油醚-二氯甲烷-甲醇5∶5∶1）等度洗脫得到8個(gè)次組分（Fr. C4-14-1～C4-14-9）。Fr. C4-14-6（34.7 mg）為粗結(jié)晶，經(jīng)二氯甲烷洗脫得到化合物21（6.3 mg）。Fr. C4-27（0.248 g）經(jīng)硅膠柱色譜（石油醚-醋酸乙酯100∶1～1∶1）洗脫得到12個(gè)次組分（Fr. C4-27-1～C4-27-12）。Fr. C4-27-9（140 mg）和Fr. C4-27-11（109 mg）分別經(jīng)制備液相色譜（乙腈-水65∶35）得到化合物24（40 mg，R＝28.5 min）和25（19 mg，R＝3.5 min）。

Fr. C8（27.0g）經(jīng)硅膠柱色譜梯度洗脫（石油醚-二氯甲烷5∶1～0∶1、二氯甲烷-甲醇150∶1～0∶1）系統(tǒng)洗脫得到7個(gè)不同亞組分（Fr. C8-1～C8-7）。Fr. C8-2（1.479 g）經(jīng)Sephadex LH-20柱色譜（石油醚-二氯甲烷-甲醇5∶5∶1）等度洗脫得到8個(gè)次組分（Fr. C8-2-1～C8-2-8）。Fr. C8-2-7（29 mg）經(jīng)制備HPLC色譜（乙腈-水60∶40）分離純化得到化合物33（6.9 mg，R＝0.7 min）。Fr. C8-3（2.2 g）經(jīng)Sephadex LH-20柱色譜（石油醚-二氯甲烷-甲醇5∶5∶1）洗脫得到9個(gè)次組分（Fr. C8-3-1～C8-3-9）。Fr. C8-3-2（2.16 g）經(jīng)MCI柱色譜（甲醇-水3∶7～1∶0）梯度洗脫得到11個(gè)流分（Fr. C8-3-2-1～C8-3-2-11）。Fr. C8-3-2-2（60 mg）經(jīng)PTLC色譜（二氯甲烷-甲醇100∶1）分離以及制備HPLC（乙腈-水70∶30）純化得到化合物9（6.7 mg，R＝17.4 min）。Fr. C8-3-2-8（53.6 mg）經(jīng)制備HPLC（乙腈-水60∶40）得到化合物1（9.8 mg，R＝12.4 min）。Fr. C8-3-2-3（60.8 mg）以30%甲醇洗滌晶體得到化合物6（4 mg）。Fr. C8-3-3（243 mg）經(jīng)Sephadex LH-20柱色譜（甲醇）洗脫得7個(gè)流分（Fr. C8-3-3-1～C8-3-3-7）。Fr. C8-3-3-5（51.3 mg）經(jīng)制備HPLC色譜（乙腈-水15∶85）分離純化得到化合物32（18 mg，R＝5.7 min）。Fr. C8-3-4（59 mg）經(jīng)制備HPLC（乙腈-水15∶85）分離純化得到化合物30（25 mg，R＝8.1 min）。Fr. C8-4（9.2 g）經(jīng)MPLC色譜（甲醇-水3∶7～1∶0）梯度洗脫得到28個(gè)次組分（Fr. C8-4-1～C8-4-28）。Fr. C8-4-7（1.2 g）經(jīng)Sephadex LH-20柱色譜（石油醚-二氯甲烷-甲醇5∶5∶1）得到5個(gè)流分（Fr. C8-4-7-1～C8-4-7-5）。Fr. C8-4-7-2（72 mg）經(jīng)PTLC色譜（二氯甲烷-甲醇10∶1）分離得化合物8（20 mg）。Fr. C8-4-7-5（50 mg）經(jīng)PTLC色譜（二氯甲烷-甲醇10∶1）分離得到化合物34（30 mg）。Fr. C8-4-8（412 mg）經(jīng)Sephadex LH-20柱色譜（石油醚-二氯甲烷-甲醇5∶5∶1）梯度洗脫得到5個(gè)流分（Fr. C8-4-8-1～C8-4-8-5）。Fr. C8-4-8-2（12 mg）經(jīng)PTLC色譜（二氯甲烷-甲醇10∶1）分離得到化合物22（2 mg）。Fr. C8-4-9（215 mg）經(jīng)Sephadex LH-20柱色譜（石油醚-二氯甲烷-甲醇5∶5∶1）分離得到2個(gè)流分（Fr. C8-4-9-1～C8-4-9-2）。Fr. C8-4-9-2（105 mg）經(jīng)PTLC色譜（二氯甲烷-甲醇20∶1）分離得到化合物18（18 mg）。Fr. C8-4-11（249 mg）經(jīng)Sephadex LH-20柱色譜（石油醚-二氯甲烷-甲醇5∶5∶1）洗脫得到5個(gè)流分（Fr. C8-4-11-1～C8-4-11-5）。Fr. C8-4-11-1（72 mg）經(jīng)PTLC色譜（二氯甲烷-甲醇20∶1）分離得到化合物19（26 mg）。Fr. C8-4-11-4（19 mg）經(jīng)PTLC色譜（二氯甲烷-甲醇10∶1）分離得到化合物7（3 mg）。Fr. C8-4-12（140 mg）經(jīng)Sephadex LH-20柱色譜（石油醚-二氯甲烷-甲醇5∶5∶1）洗脫得到3個(gè)流分（Fr. C8-4-12-1～C8-4-12-3）。Fr. C8-4-12-2（25 mg）經(jīng)PTLC色譜（二氯甲烷-甲醇20∶1）分離得到化合物23（20 mg）。Fr. C8-4-23（511 mg）經(jīng)Sephadex LH-20柱色譜（石油醚-二氯甲烷-甲醇5∶5∶1）分離得到6個(gè)流分（Fr. C8-4-23-1～C8-4-23-6）。Fr. C8-4-23-6（107 mg）經(jīng)PTLC色譜（二氯甲烷-甲醇10∶1）以及制備HPLC（乙腈-水60∶40）分離純化得到化合物17（25 mg，R＝2.7 min）。Fr. C8-6（9.3 g）經(jīng)MPLC色譜（甲醇-水3∶7～1∶0）梯度洗脫得到22個(gè)次組分（Fr. C8-6-1～C8-6-22）。Fr. C8-6-4（141 mg）經(jīng)Sephadex LH-20柱色譜（石油醚-二氯甲烷-甲醇5∶5∶1）洗脫得到5個(gè)流分（Fr. C8-6-4-1～C8-6-4-5）。Fr. C8-6-4-1（76 mg）經(jīng)PTLC色譜（二氯甲烷-甲醇10∶1）分離得到化合物2（18.4 mg）。Fr. C8-6-4-4（16 mg）經(jīng)PTLC色譜（二氯甲烷-甲醇10∶1）分離得到化合物3（6 mg）。Fr. C8-6-6（103 mg）經(jīng)Sephadex LH-20柱色譜（石油醚-二氯甲烷-甲醇5∶5∶1）分離得到3個(gè)流分（Fr. C8-6-6-1～C8-6-6-3）。Fr. C8-6-6-2（31 mg）經(jīng)PTLC色譜（二氯甲烷-甲醇10∶1）分離得到化合物10（19 mg）。Fr. C8-6-6-3（20 mg）經(jīng)PTLC色譜（二氯甲烷-甲醇10∶1）分離得到化合物31（8 mg）。Fr. C8-6-7（97 mg）經(jīng)Sephadex LH-20柱色譜（石油醚-二氯甲烷-甲醇5∶5∶1）分離得到5個(gè)流分（Fr. C8-6-7-1～C8-6-7-5）。Fr. C8-6-7-4（35 mg）和Fr. C8-6-7-5（20 mg）分別經(jīng)PTLC色譜（二氯甲烷-甲醇10∶1）分離得到化合物4（18 mg）和5（4.8 mg）。Fr. C8-6-9（277 mg）經(jīng)Sephadex LH-20柱色譜（石油醚-二氯甲烷-甲醇5∶5∶1）得到6個(gè)流分（Fr. C8-6-9-1～C8-6-9-6）。Fr. C8-6-9-3（95 mg）經(jīng)PTLC色譜（二氯甲烷-甲醇10∶1）分離得到化合物20（26 mg）。Fr. C8-6-9-5（44 mg）經(jīng)PTLC色譜（二氯甲烷-甲醇10∶1）分離得到化合物12（22 mg）。Fr. C8-6-10（456 mg）經(jīng)Sephadex LH-20柱色譜（石油醚-二氯甲烷-甲醇5∶5∶1）分離得到6個(gè)流分（Fr. C8-6-10-1～C8-6-10-6）。Fr. C8-6-10-5（238 mg）經(jīng)PTLC色譜（二氯甲烷-甲醇10∶1）分離得到化合物13（21 mg）。Fr. C8-6-13含有大量黃色晶體，用二氯甲烷洗脫后，得到化合物29（20 mg）。Fr. C8-6-14（760 mg）經(jīng)Sephadex LH-20柱色譜（石油醚-二氯甲烷-甲醇5∶5∶1）分離得到8個(gè)流分（Fr. C8-6-14-1～C8-6-14-8）。Fr. C8-6-14-2（202 mg）經(jīng)PTLC色譜（二氯甲烷-甲醇10∶1）分離得到化合物16（14 mg）。Fr. C8-6-14-5（196 mg）經(jīng)制備HPLC（乙腈-水45∶55）得到化合物14（25 mg，R＝11.7 min）。Fr. C8-6-16（1.03 g）經(jīng)Sephadex LH-20柱色譜（石油醚-二氯甲烷-甲醇5∶5∶1系統(tǒng)）分離得到8個(gè)流分（Fr. C8-6-16-1～C8-6-16-8）。Fr. C8-6-16-2（491 mg）經(jīng)PTLC色譜（二氯甲烷-甲醇10∶1）分離得到化合物15（15 mg）。Fr. C8-6-19經(jīng)Sephadex LH-20柱色譜（石油醚-二氯甲烷-甲醇5∶5∶1）分離得到7個(gè)流分（Fr. C8-6-19-1～C8-6-19-7）。Fr. C8-6-19-6經(jīng)PTLC色譜（二氯甲烷-甲醇10∶1）分離得到化合物26（15 mg）。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1：黃色油狀物；通過高分辨質(zhì)譜（HR-ESI-MS）/289.177 7 [M＋Na]+（計(jì)算值289.177 4，C16H26O3Na），確定其分子式為C16H26O3，不飽和度為4。IR光譜顯示具有羥基3416 cm?1、羰基1732 cm?1、雙鍵1644 cm?1等特征吸收峰；1H-NMR（表1）顯示有3個(gè)甲基信號，2個(gè)為單峰H1.15 (3H, s, 19-Me), 0.67 (3H, s, 20-Me)，1個(gè)雙峰H0.94 (3H, d,= 6.9 Hz, H-11)；2個(gè)末端烯質(zhì)子信號H4.77 (1H, d,= 1.7 Hz, H-17b), 4.56 (1H, d,= 1.7 Hz, H-17a)；1個(gè)甲氧基質(zhì)子信號H3.68 (3H, s, 3-OMe)。13C-NMR（表1）結(jié)合DEPT顯示共有16個(gè)碳信號，包括1個(gè)羰基碳C176.0 (C-3)、2個(gè)烯碳C150.4 (C-8), 107.3 (C-17)、3個(gè)甲基碳C23.6 (C-19), 13.3 (C-20), 10.7 (C-11)、1個(gè)甲氧基碳C51.9 (3-OMe)、4個(gè)亞甲基碳C41.3 (C-1), 44.9 (C-18), 22.7 (C-6), 36.8 (C-7)、3個(gè)次甲基碳C38.3 (C-2), 56.3 (C-5), 49.9 (C-9)，另有2個(gè)季碳C72.2 (連氧季碳，C-4), 39.4 (C-10)。以上數(shù)據(jù)結(jié)合不飽和度分析，表明化合物1含有2個(gè)環(huán)。化合物1的波譜數(shù)據(jù)與本研究分離得到的已知化合物14[5]波譜數(shù)據(jù)非常相似。不同之處在于化合物1中多出1個(gè)甲氧基[H3.68 (s),C51.9] 信號，HMBC譜中，甲氧基與C-3的相關(guān)，表明化合物1為裸花紫珠烷A的甲酯化物。綜上分析，確定了化合物1的平面結(jié)構(gòu)。

在NOESY譜（圖1）中，Me-20與Me-19和Me-11相關(guān)，H-2與Me-19和Me-20相關(guān)表明，H-2、Me-11、Me-19和Me-20在同一平面，定為β取向。H-9與H-5相關(guān)，表明H-9與H-5在同一平面，定為α取向。通過實(shí)驗(yàn)和計(jì)算的ECD光譜（圖2）分析，推斷出化合物1的絕對構(gòu)型為2、4、5、9、10。最后，確定了化合物1的結(jié)構(gòu)（圖1），命名為裸花紫珠烷A1。

化合物2：無色針狀晶體（二氯甲烷-甲醇）；通過HR-ESI-MS/209.114 2 [M＋Na]+（計(jì)算值209.114 8，C10H18O3Na）確定其分子式為C10H18O3，不飽和度為2。IR光譜示有羥基3334 cm?1；1H-NMR（表1）顯示有3個(gè)甲基單峰信號分別為H1.21 (3H, s, 9-Me), 1.18 (3H, s, 10-Me), 1.81 (3H, brs, 7-Me)，1個(gè)烯質(zhì)子信號H5.46 (1H, m, H-2)，1個(gè)連氧次甲基質(zhì)子信號H4.00 (1H, brs, H-6)。13C-NMR（表1）結(jié)合DEPT顯示有10個(gè)碳信號，2個(gè)烯碳C135.4 (C-1), 122.6 (C-2)、3個(gè)甲基碳C24.5 (C-9), 24.4 (C-10), 21.0 (C-7)、2個(gè)亞甲基碳C34.1 (C-3), 35.3 (C-5)、1個(gè)連氧次甲基碳C69.7 (C-6)、2個(gè)連氧季碳C76.3 (C-4), 75.2 (C-8)。結(jié)合1H-1H COSY、HMQC和HMBC相關(guān)信號，推測化合物2的結(jié)構(gòu)為對薄荷烷型單萜類化合物，其結(jié)構(gòu)與α-松油醇[6]相似，區(qū)別在于化合物2的C-4為連氧季碳C76.3 (C-4)，C-6為連氧次甲基H4.00 (1H, H-6),C69.7 (C-6)；而α-松油醇中C-4為次甲基，C-6為亞甲基。結(jié)合相對分子質(zhì)量可知化合物2比α-松油醇多了2個(gè)羥基，分別連接于C-4和C-6位上，其結(jié)構(gòu)見圖3。

表1 化合物1和2的1H-NMR和13C-NMR數(shù)據(jù)(400/100 MHz)

-CDCl3-CD3OD，下表同

-CDCl3-CD3OD, same as below tables

圖1 化合物1關(guān)鍵的1H-1H COSY、HMBC和NOESY相關(guān)

圖2 化合物1～5的實(shí)驗(yàn)和計(jì)算ECD

圖3 化合物2的關(guān)鍵1H-1H COSY、HMBC和NOESY相關(guān)

根據(jù)MM2力場計(jì)算，得化合物2的優(yōu)勢構(gòu)象為半椅式，H-6和異丙醇片段處于直立鍵，4-OH和6-OH處于平伏鍵。在NOESY譜中，可觀察到H-6與Me-9相關(guān)，故確定H-6和異丙醇片段為β取向，而4-OH和6-OH為α取向。NOESY相關(guān)信號見圖3。將化合物2實(shí)驗(yàn)獲得的ECD譜與2種構(gòu)型的計(jì)算ECD譜(4, 6-2a；4, 6-2b) 進(jìn)行比較，化合物2的實(shí)驗(yàn)ECD譜與2a的計(jì)算ECD譜Cotton效應(yīng)基本一致，由此推斷化合物2的絕對構(gòu)型為4,6，鑒定結(jié)構(gòu)為(4,6)-二羥基-α-松油醇，命名為裸花紫珠烷B1。

化合物3：無色油狀物；通過HR-ESI-MS/207.099 3 [M＋Na]+（計(jì)算值207.099 2，C10H16O3Na）確定分子式為C10H16O3，不飽和度為3。1H-NMR（表2）顯示有2個(gè)甲基單峰信號H0.88 (3H, s, 8-Me), 1.08 (3H, s, 9-Me)，1個(gè)烯質(zhì)子信號H5.58 (1H, m, H-4)。13C-NMR（表2）結(jié)合DEPT135顯示共有10個(gè)碳信號，包括1個(gè)羰基碳C179.3 (C-7)，2個(gè)烯碳C151.6 (C-4), 123.3 (C-3)，2個(gè)甲基碳C20.9 (C-8), 25.9 (C-9)，3個(gè)亞甲基碳（其中1個(gè)為連氧亞甲基碳）35.7 (C-5), 34.7 (C-6), 60.0 (C-10)，1個(gè)次甲基碳C46.9 (C-1)，1個(gè)季碳C46.4 (C-2)。以上數(shù)據(jù)表明化合物3是單環(huán)單萜類化合物，其1H-和13C-NMR譜與2,2,3-三甲基-3-環(huán)己烯-1-羧酸[7]相似，唯一不同的是2,2,3-三甲基-3-環(huán)己烯-1-羧酸中C-10處的甲基信號，在化合物3中被羥甲基[H4.18 (2H, brs, H-10),C60.0 (C-10)] 所取代，進(jìn)一步由HMBC譜中H-10與C-2 (C46.4), C-3 (C151.6), C-4 (C123.3) 的相關(guān)信號所證實(shí)。確定了化合物3的平面結(jié)構(gòu)為2,2-二甲基-3-羥甲基-3-環(huán)己烯-1-羧酸，比較化合物3的實(shí)驗(yàn)ECD譜和計(jì)算的ECD譜，表明化合物3的ECD譜與計(jì)算的1構(gòu)型的譜具有相同的趨勢，因此確定其C-1的絕對構(gòu)型為，結(jié)構(gòu)鑒定為(1)-2,2-二甲基-3-羥甲基-3-環(huán)己烯-1-甲酸，如圖4所示，命名為裸花紫珠烷C1。

表2 化合物3～5的1H-NMR 和13C-NMR數(shù)據(jù)(400/100 MHz)

圖4 化合物3的關(guān)鍵1H-1H COSY和HMBC相關(guān)

化合物4：無色油狀物，HR-ESI-MS/202.143 5 [M＋NH4]+（計(jì)算值202.143 8，C10H20NO3）推斷其分子式為C10H16O3，不飽和度為3。1H-NMR（表2）顯示有2個(gè)甲基單峰信號H0.83 (3H, s, H-8), 1.16 (3H, s, H-9)，1個(gè)環(huán)外亞甲基，2個(gè)質(zhì)子的特征信號H5.03 (1H, d,= 1.5 Hz, H-10a), 5.20 (1H, d,= 1.5 Hz, H-10b)，2個(gè)次甲基，其中1個(gè)為連氧次甲基信號H4.57 (1H, d,= 8.1 Hz, H-4)，以及2個(gè)亞甲基信號。13C-NMR（表2）結(jié)合DEPT示有10個(gè)碳信號，包括1個(gè)羰基碳C178.6 (C-7)，環(huán)外雙鍵碳C164.3 (C-3), 108.6 (C-10)，2個(gè)甲基碳C27.3 (C-9), 24.0 (C-8)，2個(gè)亞甲基碳C38.4 (C-5), 34.9 (C-6)，2個(gè)次甲基碳（其中1個(gè)為連氧次甲基碳）43.5 (C-1), 73.3 (C-4)，1個(gè)季碳C43.6 (C-2)。上述數(shù)據(jù)結(jié)合不飽和度表明化合物4為具有羧基和環(huán)外雙鍵的單環(huán)單萜類化合物?；衔?的1H-1H COSY波譜顯示-CH(C-4)-CH2(C-5)-CH2(C-6)-CH(C-1)-片段。在化合物4的HMBC譜中，Me-8和Me-9與C-1、C-2和C-3相關(guān)，H-10與C-2、C-3、C-4相關(guān)，綜合上述信息，推斷出化合物4為2,2-二甲基-3-亞甲基-4-羥基環(huán)己烷-1-甲酸。在NOESY譜中，H-1與Me-9相關(guān)，H-4與Me-8相關(guān)，表明H-1和H-4不在同一平面，將H-1定為α取向，則H-4為β取向?；衔?的絕對構(gòu)型由實(shí)驗(yàn)與計(jì)算的ECD（圖2）確定為(1,4)，最終鑒定化合物4為(1,4)-2,2-二甲基-3-亞甲基-4-羥基環(huán)己烷-1-甲酸，結(jié)構(gòu)如圖5所示，命名為裸花紫珠烷D1。

圖5 化合物4的關(guān)鍵1H-1H COSY、HMBC和NOESY相關(guān)

化合物5：黃色油狀物；通過HR-ESI-MS/207.098 8 [M＋Na]+（計(jì)算值207.099 2，C10H16O3Na）確定其分子式為C10H16O3，不飽和度為3。它的1H-和13C-NMR（表2）數(shù)據(jù)與化合物3的基本一致，均可見1個(gè)羧基、2個(gè)甲基、1個(gè)羥甲基及1個(gè)環(huán)己烯基團(tuán)。比較二者1H-1H COSY，化合物3給出的是-C4-C5-C6-C1-連接片段，而化合物5給出的是-C5-C6-C1-連接片段，表明C-4位的烯碳在化合物3中為次甲基，而在化合物5中為季碳，說明化合物5的C-4有取代基團(tuán)?；衔?的HMBC中，H-10與C-3、C-4、C-5相關(guān)，進(jìn)一步證實(shí)羥甲基連接在C-4位。與化合物3一樣，化合物5的絕對構(gòu)型（1）也由ECD光譜確定（圖2），最終確定化合物5的結(jié)構(gòu)為(1)-2,2-二甲基,4-羥甲基-3-環(huán)己烯-1-甲酸，結(jié)構(gòu)如圖6所示，鑒定為裸花紫珠烷E1。

圖6 化合物5的關(guān)鍵1H-1H COSY和HMBC相關(guān)

化合物6：黃色針狀晶體（甲醇）；1H-NMR (400 MHz, CDCl3): 5.85 (2H, s, H-3, 5), 3.82 (6H, s, 2, 6-OCH3)；13C-NMR (100 MHz, CDCl3):187.0 (C-4), 176.8 (C-1), 157.4 (C-2, 6), 107.6 (C-3, 5), 56.6 (2, 6-OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)進(jìn)行對比[8]，確定化合物6為2,6-二甲氧基-對-苯醌。

化合物7：黃色油狀物；1H-NMR (400 MHz, CDCl3): 4.73 (2H, s, H-9), 3.64 (1H, t,= 3.6 Hz, H-2), 2.27 (1H, m, H-4), 1.93 (1H, m, H-3a), 1.78 (1H, overlapped, H-5a), 1.73 (3H, s, H-10), 1.67 (1H, t,= 4.0 Hz, H-3b), 1.57 (3H, overlapped, H-5b, 6a, 6b), 1.27 (3H, s, 7-Me)；13C-NMR (100 MHz, CDCl3): 149.5 (C-8), 109.1 (C-9), 74.1 (C-2), 71.5 (C-1), 37.6 (C-4), 34.2 (C-3), 33.8 (C-6), 26.8 (C-7), 26.3 (C-5), 21.2 (C-10)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道一致[9]，鑒定化合物7為對薄荷-8-烯-1,2-二醇。

化合物8：黃色油狀物；1H-NMR (400 MHz, CDCl3): 5.61 (1H, q,= 2.0 Hz, H-7), 3.97 (1H, d,= 12.0 Hz, H-1a), 3.53 (1H, d,= 12.1 Hz, H-1b), 3.07 (1H, m, H-5), 2.93 (1H, m, H-4a), 2.67 (1H, m, H-6a), 2.33 (1H, d,= 5.7 Hz, H-4b), 2.12 (1H, dq,= 17.2, 2.3 Hz, H-6b), 1.72 (3H, q,= 2.1 Hz, 10-Me)；13C-NMR (100 MHz, CDCl3): 177.7 (C-3), 137.6 (C-8), 130.5 (C-7), 101.2 (C-9), 64.1 (C-1), 38.0 (C-5), 37.7 (C-4), 37.7 (C-6), 12.5 (C-10)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道一致[10]，鑒定化合物8為天目地黃素B。

化合物9：黃色油狀物；1H-NMR (400 MHz, CDCl3): 4.87 (1H, dd,= 6.8, 2.0 Hz, H-1), 4.03 (1H, dd,= 12.2, 6.4 Hz, H-7a), 3.71 (1H, td,= 12.4, 3.9 Hz, H-7b), 2.78 (1H, d,= 18.0 Hz, H-4a), 2.55 (1H, overlapped, H-4b), 2.51(1H, overlapped, H-9a), 2.30 (1H, dt,= 12.8, 6.4 Hz, H-6a), 2.23 (1H, dd,= 14.9, 2.1 Hz, H-9b), 1.52 (3H, s, 10-Me), 1.49 (1H, overlapped, H-6b)；13C-NMR (100 MHz, CDCl3): 174.7 (C-3), 107.9 (C-8), 86.1 (C-5), 84.4 (C-1), 60.1 (C-7), 42.9 (C-9), 39.4 (C-4), 29.9 (C-6), 24.1 (C-10)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道一致[11]，鑒定化合物9為北玄參素G。

化合物10：白色無定形粉末；1H-NMR (400 MHz, CD3OD): 7.00 (1H, m, H-2), 2.47 (1H, dt,= 17.4, 4.7, 2.3 Hz, H-7a), 2.33 (1H, m, H-3a), 2.11 (1H, m, H-7b), 2.01 (1H, overlapped, H-6a), 1.98 (1H, overlapped, H-3b), 1.53 (1H, m, H-4), 1.21 (1H, dd,= 12.4, 5.1 Hz, H-6b), 1.17 (6H, s, 8, 9-Me)；13C-NMR (100 MHz, CD3OD): 170.8 (C-10), 140.9 (C-2), 131.2 (C-1), 72.7 (C-5), 45.2 (C-4), 28.3 (C-3), 26.9 (C-8), 26.4 (C-7), 26.1 (C-9), 24.3 (C-6)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)對照[12]，鑒定化合物10為黃牡丹醇B。

化合物11：無色油狀物；1H-NMR (400 MHz, CD3OD): 6.74 (1H, t,= 1.8 Hz, H-2), 4.31 (1H, dt,= 9.8, 2.1 Hz, H-7), 2.39 (1H, dd,= 16.0, 3.8 Hz, H-5a), 2.28～2.11 (2H, overlapped, H-4, 5b), 1.93 (1H, m, H-6), 1.76 (1H, t,= 1.6 Hz, H-8), 0.98 (1H, d,= 7.1 Hz, H-10), 0.92 (1H, d,= 6.9 Hz, H-9)；13C-NMR (100 MHz, CD3OD): 202.5 (C-1), 152.1 (C-2), 135.6 (C-3), 69.6 (C-7), 51.4 (C-6), 37.4 (C-5), 27.4 (C-4), 21.0 (C-10), 16.9 (C-9), 15.5 (C-8)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)對照[13]，鑒定化合物11為香桂酮。

化合物12：黃色油狀物；1H-NMR (400 MHz, CDCl3): 6.87 (1H, t-like,= 7.4 Hz, H-3), 5.44 (1H, t-like,= 6.9 Hz, H-7), 4.18 (2H, d,= 6.8 Hz, H-8), 2.34 (2H, q,= 7.6 Hz, H-4), 2.17 (2H, t,= 7.6 Hz, H-5), 1.84 (3H, brs, 9-Me), 1.70 (3H, brs, 10-Me)；13C-NMR (400 MHz, CDCl3): 173.2 (C-1), 144.1 (C-3), 138.4 (C-6), 127.6 (C-2), 124.2 (C-7), 59.3 (C-8), 38.0 (C-5), 27.2 (C-4), 16.3 (C-10), 12.2 (C-9)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)對比[14]，鑒定化合物12為8-羥基- 2,6-二甲基-(2,6)-辛二烯酸。

化合物13：黃色油狀物；1H-NMR (400 MHz, CDCl3): 6.88 (1H, t-like,= 7.5 Hz, H-3), 3.69 (2H, m, H-8), 2.19 (2H, qt,= 14.2, 7.8 Hz, H-4), 1.82 (3H, s, H-9), 1.62 (2H, overlapped, H-6, 7a), 1.45 (2H, overlapped, H-5a, 7b), 1.30 (1H, m, H-5b), 0.92 (3H, d,= 6.3 Hz, H-10)；13C-NMR (100 MHz, CDCl3): 173.3 (C-1), 145.1 (C-3), 127.2 (C-2), 61.0 (C-8), 39.6 (C-7), 35.7 (C-5), 29.4 (C-6), 26.5 (C-4)，19.5 (C-10), 12.1 (C-9)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)對比[15]，鑒定化合物13為8-羥基-2,6-二甲基-(2)-辛烯酸。

化合物14：無色油狀物；1H-NMR (400 MHz, CD3OD): 4.77 (1H, q,= 1.7 Hz, H-17a), 4.57 (1H, q,= 1.7 Hz, H-17b), 2.49 (1H, overlapped, H-2), 2.43 (1H, overlapped, H-7a), 2.08 (1H, td,= 13.0, 5.2 Hz, H-7b), 1.99 (1H, overlapped, H-18a), 1.96 (1H, overlapped, H-6a), 1.95 (1H, overlapped, H-9), 1.90 (1H, overlapped, H-1a), 1.53 (1H, t,= 12.9 Hz, H-18b ), 1.46 (1H, dd,= 12.6, 2.6 Hz, H-5), 1.34 (1H, td,= 12.7, 4.2 Hz, H-6b), 1.25 (1H, t,= 12.9 Hz, H-1b), 1.13 (3H, s, 19-Me), 0.96 (3H, d,= 6.8 Hz, 11-Me), 0.70 (3H, s, 20-Me)；13C-NMR (100 MHz, CD3OD): 179.8 (C-3), 151.8 (C-8), 107.4 (C-17), 72.9 (C-4), 57.1 (C-5), 51.2 (C-9), 45.9 (C-18), 42.7 (C-1), 40.3 (C-10), 39.3 (C-2), 38.0 (C-7), 23.8 (C-6), 23.3 (C-19), 13.6 (C-20), 11.0 (C-11)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道一致[5]，鑒定化合物14為裸花紫珠烷。

化合物15：無色針狀晶體（二氯甲烷-甲醇）；1H-NMR (400 MHz, CDCl3): 3.79 (1H, dd,= 10.2, 5.7 Hz, H-2), 3.32 (1H, s, H-9), 1.98 (1H, m, H-10a), 1.70 (2H, overlapped, H-3a, 11a), 1.64 (1H, overlapped, H-10b), 1.53 (2H, overlapped, H-3b, 12a), 1.44 (1H, overlapped, H-7a), 1.40 (1H, overlapped, H-5), 1.37 (1H, overlapped, H-6a), 1.29 (1H, m, H-6b), 1.11 (1H, overlapped, H-7b), 1.06 (1H, overlapped, H-11b), 1.03 (3H, s, 14-Me), 0.95 (3H, s, 15-Me), 0.90 (1H, d,= 13.7 Hz, H-12b) 0.85 (3H, s, H-13)；13C-NMR (100 MHz, CDCl3): 81.0 (C-2), 75.3 (C-9), 50.7 (C-5), 47.6 (C-3), 44.3 (C-1), 37.2 (C-4), 35.6 (C-12), 34.8 (C-8), 33.2 (C-7), 31.5 (C-14), 28.5 (C-15), 26.5 (C-11), 26.1 (C-10), 25.5 (C-13), 20.8 (C-6)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道一致[16]，鑒定化合物15為丁子香烷-2β,9α-二醇。

化合物16：無色針狀晶體（二氯甲烷-甲醇）；1H-NMR (400 MHz, CDCl3): 3.45 (1H, t,= 3.3 Hz, H-9), 2.23 (1H, m, H-2), 2.05 (1H, m, H-10a), 1.90 (1H, m, H-5), 1.79 (1H, m, H-10b), 1.66 (1H, td,= 12.4, 5.3 Hz, H-11a), 1.17 (1H, m, H-7b), 1.60～1.47 (5H, overlapped, H-3a, 3b, 6a, 6b, 11b), 1.46～1.36 (3H, overlapped, H-7a, 12a, 12b), 1.17 (1H, m, H-7b), 1.03 (3H, s, 14-Me), 1.01 (3H, s, 13-Me), 0.94 (3H, s, 15-Me)；13C-NMR (100 MHz, CDCl3): 72.4 (C-9), 70.9 (C-1), 44.1 (C-5), 42.6 (C-12), 39.5 (C-8), 38.3 (C-2), 35.6 (C-7), 35.2 (C-4), 34.2 (C-3), 33.6 (C-11), 30.7 (C-14), 28.3 (C-10), 26.8 (C-15), 21.0 (C-13), 20.6 (C-6)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)對照[17]，鑒定化合物16為丁香烷-1,9β-二醇。

化合物17：無色針狀晶體（甲醇）；1H-NMR (400 MHz, CD3OD): 3.45 (1H, dd,= 9.4, 7.8 Hz, H-9), 2.13 (1H, m, H-2), 2.00 (1H, m, H-10a), 1.84～1.72 (4H, overlapped, H-5, 6a, 6b, 10b), 1.65(1H, m, H-11a), 1.51 (1H, dd,= 9.6, 7.9 Hz, H-3a), 1.47～1.37 (3H, overlapped, H-7a, 12a, 12b), 1.36 (1H, overlapped, H-3b), 1.28 (1H, m, H-11b), 1.05 (1H, overlapped, H-7b), 1.03 (3H, s, 14-Me), 1.02 (3H, s, 13-Me), 0.83 (3H, s, 15-Me)；13C-NMR (100 MHz, CD3OD): 79.6 (C-9), 77.4 (C-8), 49.1 (C-12), 46.6 (C-5), 39.2 (C-2), 38.7 (C-11), 36.8 (C-3), 35.8 (C-4), 34.0 (C-1), 33.3 (C-7), 31.0 (C-15), 29.9 (C-10), 26.6 (C-13), 21.8 (C-14), 21.1 (C-6)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)對照[18]，鑒定化合物17為(8,9)-異丁香烷-8,9-二醇。

化合物18：黃色油狀物；1H-NMR (400 MHz, CDCl3): 6.83 (1H, d,= 15.7 Hz, H-7), 6.45 (1H, d,= 15.7 Hz, H-8), 5.93 (1H, s, H-4), 2.47(1H, m, H-2a), 2.34 (1H, d,= 1.1 Hz, H-2b), 2.29 (3H, s, 10-Me), 1.87 (3H, d,= 1.4 Hz, 11-Me), 1.08 (3H, s, 13-Me), 1.00 (3H, s, 12-Me)；13C-NMR (100 MHz, CDCl3): 197.8 (C-9), 197.4 (C-3), 161.1 (C-5), 145.4 (C-7), 130.5 (C-8), 127.7 (C-4), 79.3 (C-6), 49.7 (C-2), 41.6 (C-1), 28.4 (C-10), 24.5 (C-13), 23.1 (C-12), 18.9 (C-11)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)數(shù)據(jù)[19]對比，鑒定化合物18為()-(＋)-去氫催吐蘿芙葉醇。

化合物19：無色油狀物；1H-NMR (400 MHz, CDCl3): 7.00 (1H, d,= 15.6 Hz, H-7), 6.25 (1H, d,= 15.6 Hz, H-8), 3.86 (1H, m, H-3), 2.35 (1H, ddd,= 14.4, 5.1, 1.7 Hz, H-4a), 2.25 (3H, s, H-10), 1.64 (1H, m, H-4b), 1.59 (1H, m, H-2a), 1.23 (1H, m, H-2b), 1.16 (6H, s, 11, 13-Me), 0.94 (3H, s, 12-Me)；13C-NMR (100 MHz, CDCl3): 197.7 (C-9), 142.7 (C-7), 132.6 (C-8), 69.6 (C-6), 67.4 (C-5), 63.9 (C-3), 46.7 (C-4), 40.6 (C-2), 35.2 (C-1), 29.4 (C-11), 28.3 (C-10), 25.0 (C-12), 19.9 (C-13)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)對照[20]，鑒定化合物19為(3,5,6,7)-5,6-環(huán)氧-3-羥基-7-大柱香波龍烯-9-酮。

化合物20：黃色油狀物；1H-NMR (400 MHz, CDCl3): 7.80 (1H, d,= 16.0 Hz, H-4), 6.16 (1H, d,= 16.1 Hz, H-5), 5.97 (1H, brs, H-8), 5.74 (1H, brs, H-2), 2.48 (1H, d,= 17.2 Hz, H-10a), 2.28(1H, d,= 17.2 Hz, H-10b), 2.03 (3H, d,= 1.3 Hz, 15-Me), 1.92 (3H, d,= 1.4 Hz, 14-Me), 1.10 (3H, s, Me-12), 1.02 (3H, s, 13-Me)；13C-NMR (100 MHz, CDCl3): 198.5 (C-9), 171.0 (C-1), 163.2 (C-3), 151.7 (C-7), 137.0 (C-5), 128.4 (C-4), 127.1 (C-8), 118.1 (C-2), 80.0 (C-6), 49.8 (C-10), 41.8 (C-11), 24.4 (C-14), 23.2 (C-13), 21.5 (C-15), 19.2 (C-12)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)對照[21]，鑒定化合物20為脫落酸。

化合物21：黃色針狀晶體（甲醇）；1H-NMR (400 MHz, CDCl3): 12.17(1H, s, 5-OH), 7.75 (1H, dd,= 7.4, 1.2 Hz, H-8), 7.61( 1H, dd,= 8.5, 7.5 Hz, H-7), 7.26 (1H, dd,= 8.4, 1.2 Hz, H-6), 6.81 (1H, s, H-11), 1.69 (6H, s, 14, 15-Me)；13C-NMR (100 MHz, CDCl3): 186.8 (C-4), 172.8 (C-1), 168.4 (C-12), 162.4 (C-5), 152.0 (C-2), 136.4 (C-7), 132.9 (C-9), 131.2 (C-3), 125.4 (C-6), 120.1 (C-8), 115.3 (C-10), 102.4 (C-11), 69.6 (C-13), 28.9 (C-14, 15)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道一致[22]，鑒定化合物21為紫珠醌B。

化合物22：黃色油狀物；1H-NMR (400 MHz, CDCl3): 5.46 (2H, overlapped, H-9, 10), 3.70 (2H, t,= 6.1 Hz, H-12), 2.65 (1H, m, H-2a), 2.50～2.22 (8H, overlapped, H-2b, 3, 4a, 5a, 8a, 8b, 11a, 11b), 2.12 (1H, m, H-5b), 1.94 (1H, m, H-7), 1.53 (1H, m, H-4b)；13C-NMR (100 MHz, CDCl3): 219.2 (C-6), 176.0 (C-1), 129.0 (C-9), 128.5 (C-10), 62.4 (C-12), 54.5 (C-7), 39.0 (C-2), 38.0 (C-5), 37.9 (C-3), 30.9 (C-11), 27.6 (C-4), 25.6 (C-8)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道一致[23]，鑒定化合物22為12-羥基茉莉酸。

化合物23：黃色油狀物；1H-NMR (00 MHz, CDCl3)5.45 (2H, m, H-9, 10), 3.68 (3H, s, 13-Me), 3.64 (2H, t,= 6.3 Hz, H-12), 2.68 (1H, m, H-2a), 2.47～2.17 (8H, overlapped, H-2b, 3, 4a, 5a, 8a, 8b, 11a, 11b), 2.10 (1H, m, H-5b), 1.91 (1H, m, H-7), 1.48 (1H, m, H-4b)；13C-NMR (100 MHz, CDCl3): 219.3 (C-6), 172.8 (C-1), 128.6 (C-9), 128.4 (C-10), 62.2 (C-12), 54.1 (C-7), 51.9 (C-13), 38.9 (C-2), 37.9 (C-5), 37.9 (C-3), 31.0 (C-11), 27.4 (C-4), 25.5 (C-8)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)對比[24]，鑒定化合物23為(?)-12-羥基茉莉酸甲酯。

化合物24：白色無定形粉末；1H-NMR (400MHz, CDCl3):5.27 (1H, brs, H-12), 3.22 (1H, dd,= 11.0, 4.7 Hz, H-3α), 2.81 (1H, dd,= 13.9, 4.6 Hz, H-18β), 1.13 (3H, s, 27-Me), 0.98 (3H, s, 23-Me), 0.92 (3H, s, 29-Me), 0.91 (3H, s, 24-Me), 0.90 (3H, s, 30-Me), 0.77 (3H, s, 25-Me), 0.74 (3H, s, 26-Me)；13C-NMR (100 MHz, CDCl3):183.7 (C-28), 143.7 (C-13), 122.8 (C-12), 79.2 (C-3), 55.3 (C-5), 47.8 (C-9), 46.7 (C-19), 46.0 (C-17), 41.7 (C-14), 41.1 (C-18), 39.4 (C-8), 38.9 (C-4), 38.5 (C-1), 37.2 (C-10), 33.9 (C-21), 33.2 (C-30), 32.7 (C-22), 32.6 (C-7), 30.8 (C-20), 28.2 (C-23), 27.8 (C-15), 27.3 (C-2), 26.1 (C-27), 23.7 (C-29), 23.5 (C-16), 23.0 (C-11), 18.4 (C-6), 17.3 (C-26), 15.7 (C-25), 15.5 (C-24)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)對比[25]，鑒定化合物24為齊墩果酸。

化合物25：白色無定形粉末；1H-NMR (400 MHz, CD3OD): 5.25 (1H, t,= 3.7 Hz, H-12), 3.17 (1H, dd,= 11.1, 4.9 Hz, H-3), 2.23 (1H, d,= 11.3Hz, H-18), 1.14 (3H, s, 23-Me), 1.00 (3H, s, 29-Me), 0.99 (3H, s, 27-Me), 0.98 (3H, s, 26-Me), 0.90 (3H, d,= 6.4 Hz, 30-Me), 0.87 (3H, s, 24-Me), 0.79 (3H, s, 25-Me)；13C-NMR (100 MHz, CD3OD):139.7 (C-13), 126.8 (C-12), 79.7 (C-3), 56.7 (C-5), 54.4 (C-18), 49.8 (C-17), 43.3 (C-14), 40.8 (C-4), 40.5 (C-19), 40.4 (C-20), 40.0 (C-1), 39.8 (C-8), 38.2 (10), 38.1 (C-22), 34.3 (C-7), 31.8 (C-21), 29.2 (C-2), 28.8 (C-23), 27.9 (C-15), 25.4 (C-16), 24.4 (C-27), 24.1 (C-11), 21.6 (C-30), 19.5 (C-6), 17.8 (C-29), 17.7 (C-24), 16.4 (C-26), 16.0 (C-25)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)中熊果酸比對[26]，發(fā)現(xiàn)氫譜一致，化合物25的碳譜比熊果酸少了1個(gè)羰基信號，經(jīng)TLC多個(gè)體系展開與對照品的f值均一致，故鑒定化合物25為熊果酸。

化合物26：白色無定形粉末；1H-NMR (400 MHz, CD3OD): 5.30 (1H, s, H-12), 3.93 (1H, ddd,= 12.0, 4.4, 2.8 Hz, H-2), 3.33 (1H, d,= 2.9 Hz, H-3), 2.59 (1H, td,= 14.4, 13.2, 5.8 Hz, H-16a), 2.50 (1H, s, H-18), 1.35 (3H, s, 29-Me), 1.20 (3H, s, 27-Me), 0.99 (6H, s, 26-Me), 0.93 (3H, d,= 6.6 Hz, 25-Me), 0.87 (3H, s, 24-Me), 0.79 (3H, s, 23-Me)；13C-NMR (100 MHz, CD3OD): 182.3 (C-28), 140.0 (C-13), 129.3 (C-12), 80.1 (C-3), 73.6 (C-19), 67.2 (C-2), 55.1 (C-18), 49.3 (C-5), 49.3 (C-17), 48.2 (C-9), 43.1 (C-20), 42.7 (C-14), 42.5 (C-1), 41.2 (C-4), 39.5 (C-10), 39.4 (C-8), 39.0 (C-22), 34.1 (C-7), 29.6 (C-15), 29.2 (C-23), 27.3 (C-11), 27.1 (C-27), 26.6 (C-16), 24.9 (C-29), 24.7 (C-6), 22.5 (C-24), 19.3 (C-21), 17.5 (C-25), 16.9 (C-30), 16.6 (C-26)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)對比[27]，鑒定化合物26為薔薇酸。

化合物27：黃色針狀晶體（石油醚-醋酸乙酯）；1H-NMR (400 MHz, CDCl3): 12.63 (1H, s, 5-OH), 7.67 (1H, overlapped, H-2′), 7.64 (1H, overlapped, H-6′), 7.02 (1H, d,= 8.4 Hz, H-5′), 6.41 (1H, d,= 2.0 Hz, H-8), 6.32(1H, d,= 2.0 Hz, H-6), 5.27 (1H, s, 4′-OH), 3.96 (3H, s, 3′-OCH3), 3.85 (3H, s, 7-OCH3), 3.83 (3H, s, 3-OCH3)；13C-NMR (100 MHz, CDCl3): 178.9 (C-4), 165.6 (C-7), 162.2 (C-9), 156.9(C-5), 156.1 (C-2), 148.6 (C-4′), 146.6 (C-3′), 139.0 (C-3), 122.9 (C-6′), 122.6 (C-1′), 114.8 (C-5′), 111.1 (C-2′), 106.2 (C-10), 98.1 (C-6), 92.4 (C-8), 60.4 (3-OCH3), 56.3 (7-OCH3), 56.0 (3′-OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)對比[28]，鑒定化合物27為5,4-二羥基-3,7,3-三甲氧基黃酮。

化合物28：黃色針狀晶體（石油醚-醋酸乙酯）；1H-NMR (400 MHz, CD3OD): 7.53 (1H, s, H-4′), 7.45 (1H, d,=? 8.3 Hz, H-6′), 7.38 (1H, s, H-3), 6.94 (1H, d,=? 8.4 Hz, H-5′), 6.56 (2H, overlapped, H-2′, 8), 6.33 (1H, d,=? 2.0 Hz, H-6), 3.96 (3H, s, 7-OMe), 3.88 (3H, s, 3′-OMe)；13C-NMR (100 MHz, CD3OD): 183.2 (C-4), 166.4 (C-7), 165.7 (C-2), 162.1 (C-5), 158.5 (C-9), 151.3 (C-4′), 148.7 (C-3′), 123.0 (C-1′), 121.3 (C-6′), 116.3 (C-5′), 109.9 (C-2′), 105.8 (C-10), 104.1 (C-3), 98.9 (C-6), 93.2 (C-8), 56.4 (7-OCH3), 56.2 (3′-OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道一致[29]，鑒定化合物28為氈毛美洲茶素。

化合物29：黃色針狀晶體（二氯甲烷）；1H-NMR (400 MHz, Pyr-5): 13.83 (1H, s, OH-5), 7.67 (1H, dd,= 8.3, 2.1 Hz, H-6′), 7.62 (1H, d,= 2.1 Hz, H-2′), 7.29 (1H, d,= 8.3 Hz, H-5′), 6.99 (1H, s, H-3), 6.88 (1H, d,= 2.0 Hz, H-6), 6.78 (1H, d,= 2.0 Hz, H-8), 3.83 (3H, s, 3′-OMe)；13C-NMR (100 MHz, Pyr-5): 183.1 (C-4), 166.3 (C-7), 164.9 (C-2), 163.5 (C-9), 158.9 (C-5), 152.8 (C-4′), 149.3 (C-3′), 122.9 (C-1′), 121.7 (C-6′), 117.3 (C-5), 110.7 (C-2′), 105.4 (C-10), 104.6 (C-3), 100.4 (C-6), 95.3 (C-8), 56.4 (3′-OMe)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道一致[30]，鑒定化合物29為5,7,4′-三羥基-3′-甲氧基黃酮。

化合物30：黃色油狀物；1H-NMR (400 MHz, CDCl3): 6.97～6.83 (2H, overlapped, H-2, 5), 6.80 (1H, dd,= 8.1, 2.0 Hz, H-6), 5.74 (1H, s, 4-OH), 4.61 (1H, d,= 6.9 Hz, H-2), 4.49 (1H, dd,= 9.8, 6.8 Hz, H-8a), 4.35 (1H, overlapped, H-4a), 4.31 (1H, overlapped, H-8b), 4.17 (1H, dd,= 9.3, 3.8 Hz, H-4b), 3.90 (3H, s, 3-OCH3), 3.44 (1H, m, H-5), 3.12 (1H, m, H-1)；13C-NMR (100 MHz, CDCl3):178.3 (C-6), 147.1 (C-3), 146.0 (C-4), 130.7 (C-1), 119.2 (C-6), 114.6 (C-5), 108.6 (C-2), 86.2 (C-2), 70.1 (C-4), 70.0 (C-8), 56.1 (3-OMe), 48.3 (C-5), 46.1 (C-1)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)對比[31]，鑒定化合物30為柳葉柴胡酚。

化合物31：黃色油狀物；1H-NMR (400 MHz, CDCl3): 7.62 (1H, d,= 9.4 Hz, H-4), 7.39 (1H, d,= 8.6 Hz, H-5), 6.87 (1H, d,= 8.6 Hz, H-6), 6.25 (1H, d,= 9.5 Hz, H-3), 5.30 (1H, d,= 8.4 Hz, H-1′), 4.64 (1H, s, H-4′a), 4.58 (1H, s, H-4′b), 4.52 (1H, d,= 8.3 Hz, H-2′), 3.96 (3H, s, 7-OCH3), 1.77 (3H, s, H-5′)；13C-NMR (100 MHz, CDCl3): 160.3 (C-2), 160.2 (C-7), 153.0 (C-9), 143.9 (C-4), 143.9 (C-3′), 128.7 (C-5), 116.1 (C-8), 113.9 (C-10), 113.6 (C-4′), 113.2 (C-3), 107.9 (C-6), 78.5 (C-2′), 69.7 (C-1′), 56.4 (7-OCH3), 17.5 (C-5′)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)對比[32]，鑒定化合物31為九里香亭。

化合物32：黃色油狀物；1H-NMR (400 MHz, CDCl3): 9.64 (1H, d,= 7.7 Hz, H-9), 7.37 (1H, d,= 15.8 Hz, H-7), 6.80 (2H, s, H-2, 6), 6.60 (1H, dd,= 15.8, 7.7 Hz, H-8), 5.99 (1H, s, 4-OH), 3.92 (6H, s, 3, 5-OCH3)；13C-NMR (100 MHz, CDCl3): 193.6 (C-9), 153.4 (C-7), 147.5 (C-3, 5), 138.2 (C-4), 126.8 (C-8), 125.6 (C-1), 105.7 (C-2, 6), 56.5 (3,5-OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)對比[33]，鑒定化合物32為芥子醛。

化合物33：黃色油狀物；1H-NMR (400 MHz, CDCl3): 9.83 (1H, s, 1-CHO), 7.43 (1H, overlapped, H-6), 7.42 (1H, overlapped, H-2), 7.04 (1H, d,= 8.5 Hz, H-5), 3.97 (3H, s, 3-OCH3)；13C-NMR (100 MHz, CDCl3): 191.3 (1-CHO), 152.0 (C-4), 147.5 (C-3), 130.2 (C-1), 127.9 (C-6), 114.7 (C-5), 109.1 (C-2), 56.5 (3-OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道一致[34]，鑒定化合物33為香草醛。

化合物34：無色針狀晶體（二氯甲烷-甲醇）；1H-NMR (400 MHz, CD3OD): 7.32 (2H, s, H-2, 6), 3.88 (6H, s, 3, 5-OCH3)；13C-NMR (100 MHz, CD3OD): 169.9 (C-7), 148.8 (C-3, 5), 141.7 (C-4), 121.8 (C-1), 108.2 (C-2, 6), 56.7 (3, 5-OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道一致[35]，鑒定化合物34為丁香酸。

4 體外抗HepG2細(xì)胞增殖活性篩選

HepG2細(xì)胞培養(yǎng)于含10%胎牛血清、100 U/mL青霉素和100 U/mL鏈霉素的DMEM培養(yǎng)基中，置于37 ℃、5% CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)至細(xì)胞達(dá)到90%融合狀態(tài)，消化接種于96微孔板，每孔8000個(gè)細(xì)胞，置培養(yǎng)箱中孵育12 h后，設(shè)置對照組、PTX組及實(shí)驗(yàn)組，分別加入100 μL DMEM培養(yǎng)基、PTX及待測化合物，每組5個(gè)復(fù)孔，給藥后繼續(xù)放入培養(yǎng)箱中孵育24 h后取出，用吸液泵吸去孔內(nèi)上清液后，向每孔中加入100 μL 10% CCK-8試劑的DMEM培養(yǎng)基，在細(xì)胞培養(yǎng)箱中共同孵育30 min。重復(fù)3次實(shí)驗(yàn)。使用酶標(biāo)儀在450 nm處檢測吸光度（）值，并計(jì)算細(xì)胞存活率。結(jié)果（圖7）顯示，化合物4在25 μmol/L時(shí)細(xì)胞存活率約為50%。采用SPSS 20.0軟件計(jì)算IC50值，得化合物4的IC50為24.0 μmol/L。

圖7 化合物4對HepG2細(xì)胞活性的影響

5 討論

本研究報(bào)道了裸花紫珠中的34個(gè)化合物，包括5個(gè)新化合物和22個(gè)首次從裸花紫珠中報(bào)道的化合物?；衔镱愋鸵暂祁惓煞譃橹鳎?5個(gè)，表明裸花紫珠中的萜類成分值得進(jìn)一步關(guān)注。本研究結(jié)果不僅豐富了裸花紫珠的化學(xué)成分和信息，也可為裸花紫珠的進(jìn)一步開發(fā)利用提供一定的依據(jù)。

利益沖突 所有作者均聲明不存在利益沖突

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Chemical constituents from

CHEN Qian-qian1, ZOU Xian-liang3, CHOU Gui-xin1, 2

1. Institute of Chinese Materia Medica, Shanghai University of Traditional Chinese Medicine, Shanghai 201203, China 2. Shanghai R&D Centre for Standardization of Chinese Medicines, Shanghai 201203, China 3. Pingxiang Health Vocational College, Pingxiang 337000, China

To study the chemical constituents from.A variety of modern separation chromatography techniques were used for separation and purification, structural identification through spectroscopic data and physicochemical properties, and ECD was used to determine the absolute configuration of new compounds. The cytotoxic activity of new compounds was screened by CCK-8 method.A total of 34 compounds were isolated and identified from, of which compounds 1—5 were named as callnudoid A1 (1), (4,6)-4,6-dihydroxy-α-terpineol (2), (1)-2,2-dimethyl-3-methylol-3-cyclohexene-1-carboxylic acid (3), (1,4)-2,2-dimethyl-3-methylene-4-hydroxy-cyclohexane- 1-carboxylic acid (4), (1)-2,2-dimethyl-4-methylol-3-cyclohexene-1-carboxylic acid (5); Compounds 6—34 were identified as 2,6- dimethoxy--benzoquinone (6),-menth-8-ene-1,2-diol (7), rehmachinin B (8), buergerinin G (9), paeoveitol B (10), subamone (11), 8-hydroxy-2,6-dimethyl-(2,6)-octadienoic acid (12), 8-hydroxy-2,6-dimethyl-(2)-octenoic acid (13), callnudoid A (14), clovane-2β,9α-diol (15), caryolane-1,9β-diol (16), (8,9)-isocaryolane-8,9-diol (17), ()-(＋)-dehydrovomifoliol (18), (3,5,6,7)-5,6-epoxy-3-hydroxy-7-megastigmen-9-one (19), abscisic acid (20), callicarpaquinone B (21), 12-hydroxyjasmonic acid (22), (?)-methyl 12-hydroxyjasmonate (23), oleanolic acid (24), ursolic acid (25), euscaphic acid (26), 5,4-dihydroxy- 3,7,3-trimethoxyflavone (27), velutin (28), 5,7,4-trihydroxy-3-methoxyflavone (29), salicifoliol (30), murrangatin (31), sinapaldehyde (32), 4-hydroxyl-3-methoxybenzaldehyde (33) and syringic acid (34).Compounds 1—5 were new compounds, named as callnudoid A1 (1), (4,6)-4,6-dihydroxy-α-terpineol (2), (1)-2,2-dimethyl-3-methylol-3-cyclohexene-1- carboxylic acid (3), (1,4)-2,2-dimethyl-3-methylene-4-hydroxy-cyclohexane-1-carboxylic acid (4), (1)-2,2-dimethyl-4- methylol- 3-cyclohexene-1-carboxylic acid (5). Compounds 6, 7—13, 17—18 and 31 were all isolated and identified from Verbenaceae for the first time, compounds 30 and 32—33 were found for the first time in the genus, and compounds 15, 21 and 28 isolated for the first time from. Cytotoxicity screening results showed that compound 4 possessed the cytotoxicity on HepG2 cell line with the IC50values of 24.0 μmol/L.

Verbenacase;Hook. et Arn; callnudoids A1; (1,4)-2,2-dimethyl-3-methylene-4-hydroxy-cyclohexane-1-carboxylic acid; clovane-2β,9α-diol; callicarpaquinone B; velutin; salicifoliol

R284.1

A

0253 - 2670(2023)01 - 0015 - 14

10.7501/j.issn.0253-2670.2023.01.003

2022-09-02

重大新藥創(chuàng)制專項(xiàng)基金資助項(xiàng)目（2019ZX09735002-004）

陳倩倩，女，碩士研究生，研究方向?yàn)橹兴幓瘜W(xué)成分及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。Tel: 19821267292 E-mail: 598029330@qq.com

通信作者：侴桂新，男，研究員，從事中藥化學(xué)成分與質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究。E-mail: chouguixinzyb@126.com

[責(zé)任編輯 王文倩]