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    (1,3)-β-D-葡聚糖和半乳甘露聚糖檢測(cè)聯(lián)合痰真菌培養(yǎng)在侵襲性真菌病診斷中的價(jià)值分析

    2023-01-06 09:47:46田卓英彭敏顏
    醫(yī)藥前沿 2022年27期
    關(guān)鍵詞:真菌病真菌陽(yáng)性率

    田卓英,郭 欽,彭敏顏

    (廣東省中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院檢驗(yàn)科 廣東 佛山 528000)

    侵襲性真菌?。╥nvasive fungal disease, IFD)是真菌侵襲人體血液、組織并在其中生長(zhǎng)繁殖,進(jìn)而引起組織、器官的損害或炎癥反應(yīng)等病理生理改變[1],主要感染人群為存在基礎(chǔ)疾病、免疫力較低的患者,病情進(jìn)展快,病死率高。近年來(lái),隨著廣譜抗生素、抗腫瘤藥物、免疫抑制劑、器官移植、激素治療、插管等侵入性檢查和治療等應(yīng)用增多,IFD 發(fā)病率呈持續(xù)上升趨勢(shì)[2],從而影響患者的生命安全和身體健康。由于IFD 臨床表現(xiàn)不典型,易被基礎(chǔ)疾病覆蓋,炎癥指標(biāo)變化不明顯,確診常需侵入性取材,而常因病情難以實(shí)施,容易因誤診、漏診而使患者延誤治療[3]。對(duì)IFD 進(jìn)行早期診斷能給臨床治療工作提供重要條件,有利于及時(shí)控制病情,改善患者預(yù)后。在檢測(cè)真菌特異性抗原中,使用的真菌檢測(cè)手段如:(1,3)-β-D-葡聚糖檢測(cè)(G 試驗(yàn))、半乳甘露聚糖(GM 試驗(yàn))已經(jīng)成為侵襲性真菌感染的診斷指標(biāo)之一,被廣泛應(yīng)用于臨床,用于IFD 的早期快速診斷[4]。本研究旨在探討G 試驗(yàn)、GM 實(shí)驗(yàn)、痰真菌培養(yǎng)聯(lián)合檢測(cè)在侵襲性真菌感染中的臨床應(yīng)用價(jià)值,現(xiàn)報(bào)道如下。

    1.資料與方法

    1.1 一般資料

    選取2019年1 月—2020年5 月廣東省中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院202 例疑似侵襲性真菌感染的住院患者,根據(jù)中國(guó)侵襲性真菌感染工作組制定的臨床診斷侵襲性真菌病的診斷標(biāo)準(zhǔn)[5]和歐洲癌癥研究治療組織及真菌研究組(EORTC/MSG)的診斷標(biāo)準(zhǔn)[6]臨床確診后,將其分為IFD組(n= 56)和非IFD 組(n= 146)。患者的年齡28 ~91 歲,平均年齡(72.4±15.08)歲;其中男145 例,女57 例。

    納入標(biāo)準(zhǔn):①具有IFD 的高危因素、相關(guān)臨床表現(xiàn)及影像學(xué)特征的住院患者;②所有患者均符合G 試驗(yàn)、GM 試驗(yàn)和真菌培養(yǎng)檢測(cè)要求。排除標(biāo)準(zhǔn):①患者的侵襲性真菌病呈現(xiàn)高危癥,且患者標(biāo)本采集前已進(jìn)行過(guò)抗真菌治療;②已明確的細(xì)菌感染。

    1.2 方法

    (1)儀器與試劑。①G 試驗(yàn):本次使用的真菌(1-3)-β-D 葡聚糖定量檢測(cè)試劑盒為丹娜(天津)生物科技有限公司生產(chǎn),所需儀器名稱:TECAN SunRise酶標(biāo)儀(帶溫控功能),高速離心機(jī)、振蕩器。②GM 試驗(yàn):本次應(yīng)用的曲霉菌半乳甘露聚糖定量檢測(cè)試劑盒為丹娜(天津)生物科技有限公司生產(chǎn)。③真菌培養(yǎng):利用法國(guó)梅里埃VITEK 2 COMPACT 全自動(dòng)微生物分析儀進(jìn)行鑒定,YST 鑒定卡,顯色平板,沙保羅平板。(2)檢測(cè)方法。①G 試驗(yàn):血清標(biāo)本和肺泡灌洗液按要求采集,所有操作均按照試劑說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。在實(shí)際檢測(cè)中,如果G 值為70 pg/mL 以下,判斷結(jié)果為陰性,如果G 值為95 pg/mL以上,則獲取的檢測(cè)結(jié)果為陽(yáng)性,如果檢測(cè)數(shù)值處于70 ~95 pg/mL,則為臨床觀察期。②GM 試驗(yàn):血清標(biāo)本和肺泡灌洗液按要求采集,所有操作均按照試劑說(shuō)明書(shū)進(jìn)行,試驗(yàn)中,利用酶聯(lián)免疫一步夾心法,并按照提供的公示與數(shù)值進(jìn)行對(duì)比。半乳甘露聚糖檢測(cè)期間,其中主要分為探討Ⅰ值(GM 值)。一般陰性是數(shù)值為0.65以下,陽(yáng)性數(shù)值為0.85 以上。③真菌培養(yǎng):標(biāo)本的留取、接種和真菌分離培養(yǎng)均按照《全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》嚴(yán)格操作。采用真菌形態(tài)學(xué)、VITEK 2 Compact 全自動(dòng)微生物鑒定系統(tǒng)進(jìn)行真菌培養(yǎng)以及結(jié)果的檢測(cè)。

    1.3 觀察指標(biāo)

    比較IFD 組和非IFD 組兩組患者的G試驗(yàn)、GM試驗(yàn)與痰真菌培養(yǎng)單項(xiàng)檢測(cè)及聯(lián)合檢測(cè)結(jié)果,分別進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,完成單一試驗(yàn)、聯(lián)合試驗(yàn)以及三項(xiàng)目檢測(cè)后,對(duì)比檢測(cè)的靈敏度、特異度較3 個(gè)檢測(cè)項(xiàng)目的單項(xiàng)試驗(yàn)和聯(lián)合試驗(yàn)的靈敏度、特異性以及陰性和陽(yáng)性檢測(cè)數(shù)值。其中,在結(jié)合試驗(yàn)中,如果有一種方法檢測(cè)為陽(yáng)性,則認(rèn)為結(jié)果為陽(yáng)性。

    1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

    使用SPSS 22.0 統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理。計(jì)數(shù)資料用頻數(shù)(n)和百分率(%)表示,組間比較采用χ2檢驗(yàn)。P<0.05 表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

    2.結(jié)果

    2.1 G 試驗(yàn)、GM 試驗(yàn)、痰真菌培養(yǎng)及聯(lián)合檢測(cè)結(jié)果

    202 例患者以臨床診斷IFD56 例,非IFD 146 例,為金標(biāo)準(zhǔn),GM 試驗(yàn)真陽(yáng)性34 例,G 試驗(yàn)真陽(yáng)性46 例,痰真菌培養(yǎng)真陽(yáng)性39 例,三者聯(lián)合檢測(cè)真陽(yáng)性54 例,假陰性2 例。IFD 組患者G 試驗(yàn)、GM 試驗(yàn)、痰真菌培養(yǎng)檢測(cè)陽(yáng)性率均高于非IFD 組,有顯著差異(P<0.05),見(jiàn)表1。

    表1 兩組G 試驗(yàn)、GM 試驗(yàn)和痰真菌培養(yǎng)結(jié)果(例)

    2.2 G試驗(yàn)、GM試驗(yàn)、痰真菌培養(yǎng)及三者聯(lián)合檢測(cè)的靈敏度及特異度

    G試驗(yàn)、GM試驗(yàn)、痰真菌培養(yǎng)和三者聯(lián)合檢測(cè)的靈 敏 度 分 別 為82.14%(46/56)、60.71%(34/56)、69.64%(39/56)、96.43%(54/56),特 異 度 分 別 為91.78%(134/146)、89.04%(130/146)、89.73%(131/146)、90.41%(132/146)。G 試驗(yàn)的靈敏度明顯高于GM 試驗(yàn),低于三者聯(lián)合檢測(cè),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);三者聯(lián)合檢測(cè)的靈敏度、Youdon 指數(shù)均高于單一試驗(yàn)檢測(cè),差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。聯(lián)合檢測(cè)方法與單一檢測(cè)方法的特異度、陰性預(yù)測(cè)值、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值比較,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),見(jiàn)表2。

    表2 不同方法的診斷IFD 效能比較

    3.討論

    侵襲性真菌病主要好發(fā)于廣譜抗菌治療、AIDS、遺傳性免疫缺陷、器官/骨髓移植、重癥監(jiān)護(hù)室治療、血液惡性腫瘤、導(dǎo)管插入術(shù)、化療等免疫力低下患者[7-8]。侵襲性真菌病臨床表現(xiàn)不典型,病死率較高,患者預(yù)后差。在對(duì)侵襲性真菌感染進(jìn)行診斷的時(shí)候,其標(biāo)準(zhǔn)為無(wú)菌體液培養(yǎng)和深部組織病理鑒定,但其陽(yáng)性率和可及性均不理想,存在一定的局限性[9]。因此提高IFD 的診斷效能,尤其是早期診斷顯得尤為重要,及時(shí)診斷盡早治療對(duì)于改善疾病的預(yù)后轉(zhuǎn)歸以及治療效果提升有關(guān),以能使疾病發(fā)病率降低。

    隨著侵襲性真菌發(fā)病率的提升,侵襲性肺曲霉病特別突出,會(huì)影響到患者的全身器官,醫(yī)院內(nèi)的肺部真菌感染主要為曲霉感染或者耐氟康唑念珠菌。早期診斷侵襲性真菌感染一般難度較大,盡管醫(yī)生已經(jīng)加大力度,增加了抗真菌治療,但實(shí)際作用較差。在對(duì)侵襲性真菌感染診斷的時(shí)候,利用傳統(tǒng)方法不具有一定敏感性,真菌培養(yǎng)法雖然是診斷中的標(biāo)準(zhǔn),但陽(yáng)性率較低,需要較長(zhǎng)的培養(yǎng)時(shí)間,盡管培養(yǎng)真菌為陰性,但也無(wú)法將其排除,臨床上還需要實(shí)施多次真菌培養(yǎng)。這種情況下,不僅會(huì)導(dǎo)致浪費(fèi)大量時(shí)間,也無(wú)法有效區(qū)分。

    IFD 的影響因素包括免疫抑制劑、廣譜抗生素的應(yīng)用,糖尿病、艾滋病,重要?jiǎng)?chuàng)傷、燒傷等疾病,患者住院時(shí)間較長(zhǎng)也為主要的危險(xiǎn)因素。G 試驗(yàn)具有良好特異性,經(jīng)檢測(cè),能夠發(fā)現(xiàn)血漿中水平提升。GM 試驗(yàn)在分析侵襲性曲霉菌中獲得良好靈敏度,通過(guò)與G 試驗(yàn)的結(jié)合,能夠盡早診斷IFD,能夠有效提升真菌感染診斷能力,促使臨床診斷效率的提升。IFD 檢測(cè)中,出現(xiàn)的最常見(jiàn)病原菌主要是基于病原菌、念珠菌為基礎(chǔ)的酵母樣真菌、絲狀真菌[10]。本研究中,培養(yǎng)獲取陽(yáng)性的痰真菌為白色念珠菌,其次為光滑念珠菌、曲霉菌屬。雖然傳統(tǒng)的培養(yǎng)方法存在陽(yáng)性率低、需要較長(zhǎng)培養(yǎng)時(shí)間,容易受到外部污染等[11]。培養(yǎng)能根據(jù)菌落形態(tài),鏡下形態(tài)和生化反應(yīng)確定致病菌的種類,提高真菌感染檢測(cè)的陽(yáng)性率,能為臨床提供念珠菌屬的藥敏結(jié)果,指導(dǎo)臨床用藥。以G 試驗(yàn)和GM 試驗(yàn)檢測(cè)為主的血清學(xué)檢測(cè)方法因其非侵襲性、高效、快速且陽(yáng)性率高等特點(diǎn),已被廣泛應(yīng)用于IFD 的早期診斷[12]。但是,G 試驗(yàn)、GM 試驗(yàn)在實(shí)際檢測(cè)中,也存在一定假性特征[13-15]。

    本文結(jié)果顯示,IFD 組患者G 試驗(yàn)、GM 試驗(yàn)、痰真菌培養(yǎng)陽(yáng)性率均高于非IFD 組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);G 試驗(yàn)、GM 試驗(yàn)、痰真菌培養(yǎng)三種方法聯(lián)合檢測(cè)診斷,能獲取較高敏感度及Youdon 指數(shù),組間比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。與黃永杰[3]研究結(jié)果基本一致。提示利用三種結(jié)合方法進(jìn)行檢測(cè)更準(zhǔn)確,可彌補(bǔ)單獨(dú)檢測(cè)存在的各自不足,降低漏診率和誤診率,從而提高診斷效能。

    綜上所述,G試驗(yàn)、GM試驗(yàn)聯(lián)合痰真菌培養(yǎng)檢測(cè)診斷效能較高,可提高IFD 的檢出率,對(duì)于IFD 的早期診斷、及時(shí)治療、高危人群的監(jiān)測(cè)具有積極意義,患者預(yù)后效果好。

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