HPLC-MS/MS 測定大豆中吡蟲啉的殘留量

羅長琴， 朱顯平，鄒 璇，吳秋杰，黃小蘭，譚春蓉

（1.重慶市萬州食品藥品檢驗所，重慶 404100；2.重慶安全技術(shù)職業(yè)學(xué)院，重慶 404100；3.重慶市南岸區(qū)茶園新城初級中學(xué)校，重慶 401336）

大豆作為我國主要的糧油兼用型作物，在國民生活中占有重要地位。近年來，國外大豆進(jìn)口總量的減少與國內(nèi)需求量的增加，大豆產(chǎn)量不足、需求增加的矛盾日益突出[1]，因此減少大豆種植中的蟲害，提高大豆產(chǎn)量和質(zhì)量至關(guān)重要。大豆蚜（Aphis glycines Matsu-mura）是一種通過刺吸危害栽培大豆的主要害蟲之一[2]，研究表明，大豆蚜可使大豆減產(chǎn)20%～30%，嚴(yán)重年份可達(dá)50%以上[3]，吡蟲啉是防治大豆蚜的主要化學(xué)藥劑，因其對刺吸口器類害蟲選擇性好、擊倒性高等特點深受農(nóng)戶的青睞[4]。

吡蟲啉（imidacloprid）屬新煙堿類內(nèi)吸性殺蟲劑，其作用機(jī)理是選擇性抑制昆蟲煙堿型乙酰膽堿受體，從而阻斷神經(jīng)系統(tǒng)信號正常傳導(dǎo)，起到殺蟲作用[5]，因其價廉、高效、低毒等優(yōu)點[6]，被廣泛用于農(nóng)產(chǎn)品的生長過程中[7]，在保證農(nóng)產(chǎn)品的品質(zhì)和提高產(chǎn)量方面有著重要的作用，但頻繁使用或者超標(biāo)使用，不僅會造成環(huán)境污染，且會造成大豆中吡蟲啉的殘留[8]，通過食用在人體內(nèi)蓄積，會引起慢性中毒，導(dǎo)致疾病的發(fā)生[9-10]。因此，為了保障吡蟲啉使用的安全性和有效性，我國對農(nóng)產(chǎn)品中吡蟲啉的殘留量做出限值規(guī)定，其中大豆中為0.05 mg/kg[11]。

目前，吡蟲啉殘留量的分析方法主要包括高效液相色譜法（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）[12]、超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法(High Performance Liquid Chromatography-tandem Mass Spectrometry，HPLC-MS/MS）[13]、氣相色譜法（Gas Chromatography，GC）[14-15]、氣相色譜質(zhì)譜法（Gas Chromatography Mass Spectrometry，GC/MS）[16]等。其中，HPLC-MS/MS 法具有靈敏度高、選擇性強(qiáng)、分析時間短等優(yōu)點，為常用的農(nóng)殘類藥物的分析方法。

研究采用乙腈提取、QuECHERS 凈化包除雜、氮吹后復(fù)溶，結(jié)合HPLC-MS/MS 法建立了大豆中吡蟲啉的分析方法，為大豆中吡蟲啉殘留檢測提供技術(shù)參考。

1 材料與方法

1.1 主要試劑

乙腈、甲醇均為色譜純，德國默克股份公司提供；甲酸（色譜純），上海安譜實驗科技股份有限公司提供；QuECHERS 凈化包（N -丙基乙二胺150 mg、石墨炭黑15 mg、硫酸鎂885 mg），迪馬科技公司提供；氯化鈉（分析純），重慶川東化工集團(tuán)有限公司提供；吡蟲啉標(biāo)準(zhǔn)品（98.1%），北京墨壇提供。

1.2 主要儀器

QUINTIX224-CN 型電子天平，德國賽多利斯科學(xué)儀器（北京）有限公司產(chǎn)品；MILLI Q Advantage A10 型超純水機(jī)，美國MILLIPORE 公司產(chǎn)品；IKA MS3 Digital 型渦旋儀，德國艾卡產(chǎn)品；KQ-800DBDZ 型數(shù)控超聲波清洗器，昆山市超聲儀器有限公司產(chǎn)品；3-30ks 型離心機(jī)，德國Sigma 產(chǎn)品；Turbovaplv 型氮吹儀，瑞典Biotage 公司產(chǎn)品；TSQ Series 型液相質(zhì)譜儀，賽默飛世爾科技（中國）有限公司產(chǎn)品。

1.3 試驗方法

1.3.1 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

精密稱取吡蟲啉標(biāo)準(zhǔn)品0.010 84 g 于10 mL容量瓶中，用甲醇稀釋并定容至刻度，既得標(biāo)準(zhǔn)儲備液，再逐級稀釋，用甲醇配制成質(zhì)量濃度為5.317，10.634，21.268，42.536，85.072，106.340，127.608，170.144 ng/mL 的標(biāo)準(zhǔn)工作系列，備用。

1.3.2 樣品前處理

在我眼中，音樂是神圣的。神圣的來源是我對它的熱愛。難過的時候，我就會聽一首《女孩，別哭》，臉上就掛起了微笑；生氣的時候，我就會聽一首《快樂寶貝》，心中的氣就云消霧散了；考試成績不好時，就會聽一首《童年》，提醒自己：珍惜時光，好好學(xué)習(xí)。

取大豆樣品經(jīng)粉碎機(jī)粉碎，過20 目篩，混勻，準(zhǔn)確稱取5.00 g 置于50 mL 離心管中，加入5 mL 超純水，渦旋1 min，放置5 min，待樣品復(fù)溶完全，再加入乙腈10 mL，渦旋1 min，超聲（100 W）提取5 min，取出，加入氯化鈉3 g，再渦旋30 s，以轉(zhuǎn)速8 000 r/min 離心3 min。將上層有機(jī)層轉(zhuǎn)入15 mL凈化管中，渦旋1 min，以轉(zhuǎn)速8 000 r/min 離心3 min，取全部上清液于氮吹管中，于40 ℃水浴氮吹至近干，用甲醇復(fù)溶至1.00 mL，過0.22 μm 有機(jī)濾膜，即得上機(jī)待測液。

1.3.3 分析條件

（1）液相條件。InfinityLab Poroshell 120 EC-C18型色譜柱（2.1 mm×100 mm×1.9 μm），柱溫40 ℃，進(jìn)樣量3 μL，流速0.2 mL/min，流動相：0.1%甲酸水（A）和乙腈（B），詳見表1。

流動相梯度洗脫見表1。

表1 流動相梯度洗脫

（2）質(zhì)譜條件。電噴霧離子（ESI）源，多反應(yīng)監(jiān)測（MRM）模式檢測，正離子掃描模式，電噴霧電壓4 000 V，毛細(xì)管溫度350 ℃，輔助氣壓力10 Arb，反吹氣0 Arb，吡蟲啉定量離子對為256.2/209.0，定性離子對為256.2/175.0，碰撞能力為21/5 V，去簇電壓為72 V。

1.4 數(shù)據(jù)處理

用賽默飛液質(zhì)自帶數(shù)據(jù)處理軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，采用Excel 對數(shù)據(jù)進(jìn)行分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 響應(yīng)值和選擇性

在設(shè)定的條件下對標(biāo)準(zhǔn)樣品進(jìn)行分析。

由圖1 可知，吡蟲啉定量離子和定性離子的響應(yīng)值能達(dá)到105和104數(shù)量級，且峰型尖銳，無雜質(zhì)峰干擾，出峰速度快（保留時間為5.42 min）；而空白樣品的基線波動僅為103和101數(shù)量級，也無雜質(zhì)干擾，表明該儀器方法可用于吡蟲啉的定量測定。

圖1 吡蟲啉標(biāo)準(zhǔn)品（106.340 ng/mL）和空白樣品MRM 色譜圖

2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線及線性范圍

以峰面積（Y）和對應(yīng)的質(zhì)量濃度（X，ng/mL）作線性方程，在5.317～170.144 ng/mL 內(nèi)，吡蟲啉質(zhì)量濃度與對應(yīng)的峰面積呈良好線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)R2為0.999 5，具有良好的線性關(guān)系。

2.3 方法學(xué)驗證

2.3.1 檢出限和定量限

以空白樣品進(jìn)行加標(biāo)試驗，以3 倍信噪比計算檢出限（LOD），10 倍信噪比計算定量限（LOQ），利用上述試驗方法測定，計算得檢出限為3.0 μg/kg，定量限為10.0 μg/kg。

2.3.2 保留時間重復(fù)性以21.268 ng/mL 的標(biāo)準(zhǔn)溶液在上述儀器條件下進(jìn)行重復(fù)測定6 次，吡蟲啉的保留時間分別為5.42，5.43，5.42，5.44，5.43，5.45 min，精密度RSD 為0.16%，表明出峰時間穩(wěn)定，可作為目標(biāo)物定性分析。

2.3.3 回收率及精密度

取空白基質(zhì)加入低、中、高（10，50，100 μg/kg）3 個質(zhì)量濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液，按上述方法進(jìn)行含量測定。

大豆中的吡蟲啉回收率和相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（n=3）見表2。

表2 大豆中的吡蟲啉回收率和相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（n=3）

由表2 可知，回收率為88.6%～102.3%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）為1.1%～2.3%。結(jié)果表明，回收率和精密度結(jié)果均能達(dá)到國標(biāo)的要求，可用于定量分析。

2.4 實際樣品的測定

2021 年從重慶市超市、農(nóng)貿(mào)市場抽取大豆樣品100 批次，檢測結(jié)果均為未檢出，表明目前大豆中吡蟲啉的殘留量控制較好。

3 結(jié)論

采用乙腈提取，QuECHERS 法凈化，以超高效液相色譜-四極桿質(zhì)譜聯(lián)用法分子，建立了大豆中吡蟲啉的檢測方法。通過方法學(xué)評價，吡蟲啉保留時間相對穩(wěn)定；在線性范圍5.317～170.144 ng/mL內(nèi)具有良好的線性關(guān)系；檢出限為3.0 μg/kg，定量限為10.0 μg/kg。該方法操作簡單、快速、靈敏度高，適用于大豆中吡蟲啉的快速檢測。實際樣品的檢測均為未檢出，表明近年來大豆中吡蟲啉殘留的監(jiān)管起到了一定的效果。