牛結(jié)節(jié)性皮膚病的流行新動(dòng)態(tài)及我國(guó)的應(yīng)對(duì)策略

何小兵 景偉 房永祥 陳國(guó)華 李維克 賈懷杰 婁忠子 李小明 蘇洋 譚金龍 高真貞 景志忠,2

1.中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院/蘭州獸醫(yī)研究所/家畜疫病病原生物學(xué)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室/農(nóng)業(yè)部獸醫(yī)公共衛(wèi)生重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 730046

2.揚(yáng)州大學(xué)/江蘇高校動(dòng)物重要疫病與人獸共患病防控協(xié)同創(chuàng)新中心 225009

牛結(jié)節(jié)性皮膚?。↙umpy skin disease，LSD）簡(jiǎn)稱牛結(jié)節(jié)病，是由痘病毒科（Poxviridae）山羊痘病毒屬（Capripoxvirus，CaPV）的牛結(jié)節(jié)性皮膚病病毒（Lumpy skin disease virus，LSDV）引起的，以患牛發(fā)熱、皮膚（黏膜或器官）表面廣泛性結(jié)節(jié)、淋巴結(jié)腫大、皮膚水腫為特征的，可由蟲(chóng)媒傳播的一種傳染病。世界動(dòng)物衛(wèi)生組織（OIE）將其列為必須通報(bào)的動(dòng)物疫病，我國(guó)一直將其列為進(jìn)境動(dòng)物檢疫疫病的一類傳染病，2019 年之前LSD 在我國(guó)屬于外來(lái)病。

2019 年8 月12 日確診LSD 跨境傳入我國(guó)新疆伊犁地區(qū)。2020 年7 月13 日我國(guó)農(nóng)業(yè)農(nóng)村部宣布，中國(guó)東南部的福建、江西、廣東、安徽、浙江5 省發(fā)生了7 起LSD 疫情。2020 年7 月7 日中國(guó)臺(tái)灣宣布暴發(fā)了LSD，后續(xù)報(bào)告了34 起疫情。中國(guó)大陸7 個(gè)省區(qū)共報(bào)告9 起LSD 疫情，總發(fā)病率和死亡率分別為19.5%（156/801）和0.9%（7/801），每次暴發(fā)的發(fā)病率和死亡率分別為6.6%～100%和0%～16.7%，不到一年，LSDV 從我國(guó)最西北部傳到最東南部諸省區(qū)，之后LSD 疫情迅速傳播和擴(kuò)散，2021 年已波及我國(guó)其他多個(gè)省市區(qū)，呈大流行態(tài)勢(shì)，對(duì)我國(guó)養(yǎng)牛業(yè)特別是奶牛業(yè)造成巨大危害和威脅。本文擬通過(guò)近年來(lái)LSD 疫情流行現(xiàn)狀與趨勢(shì)、發(fā)現(xiàn)的新流行毒株與問(wèn)題，探討我國(guó)LSD 防控的應(yīng)對(duì)策略。

1 LSD 的流行現(xiàn)狀與趨勢(shì)

1929 年在贊比亞首次發(fā)現(xiàn)LSD，之后主要在撒哈拉和馬達(dá)加斯加等非洲地區(qū)和國(guó)家呈地方性流行，1988～1989 年在撒哈拉以南非洲地區(qū)以外的埃及和以色列首次出現(xiàn)LSD，隨后在巴林、科威特、阿曼、也門(mén)等國(guó)家暴發(fā)了LSD。2012 年以色列、黎巴嫩和土耳其報(bào)告了LSD 的疫情，2013 年約旦、伊拉克和土耳其報(bào)告了疫情，2014 年伊朗、塞浦路斯、阿塞拜疆和土耳其報(bào)告了疫情。2015 年LSD 傳播到希臘和俄羅斯，2016 年不僅在歐洲東南部的希臘、保加利亞、北馬其頓、塞爾維亞、科索沃、阿爾巴尼亞和黑山等7 個(gè)國(guó)家報(bào)告了疫情，而且沙特阿拉伯、俄羅斯、亞美尼亞、格魯吉亞和哈薩克斯坦也報(bào)告發(fā)生了LSD 疫情。2018 年俄羅斯不斷發(fā)生LSD 疫情，并沿著哈薩克斯坦的邊界向北和向東擴(kuò)展。其中，2017 年OIE 通報(bào)LSD發(fā)病2464 次，可疑牛約45 萬(wàn)多頭，確診發(fā)病25711 頭，死亡2385 頭，撲殺處理16316 頭牛，對(duì)世界養(yǎng)牛業(yè)造成了巨大危害。2019 年隨著俄羅斯、土耳其和以色列疫情的持續(xù)發(fā)生，LSD 傳播進(jìn)一步擴(kuò)大到亞洲，首先在印度、孟加拉國(guó)和中國(guó)暴發(fā)了疫情。2020 年，先后在尼泊爾、中國(guó)臺(tái)灣、不丹、越南、中國(guó)香港和緬甸暴發(fā)LSD。2021 年，OIE 通報(bào)LSD 疫情主要發(fā)生在亞洲國(guó)家。2021 年3 月5 日越南廣南省11 個(gè)縣市，266 頭牛發(fā)病，11 頭死亡；4 月17 日?qǐng)?bào)告越南何靜省、高平省共計(jì)12242 頭牛被感染，1042 頭被撲殺。2021 年4月9 日?qǐng)?bào)告泰國(guó)黎逸府1888 頭牛被感染，6 月9 日?qǐng)?bào)道擴(kuò)散到35 府154 縣6763 頭牛被感染，48 頭死亡。最近報(bào)告柬埔寨和蒙古等國(guó)家也發(fā)生了LSD 疫情，目前我國(guó)已完全處于LSD 疫情包圍之中，外防輸入、內(nèi)防擴(kuò)散防控形勢(shì)十分嚴(yán)峻。

2 LSD 暴發(fā)國(guó)家的新流行毒株與新發(fā)現(xiàn)

2.1 俄羅斯流行毒株的分型與新發(fā)現(xiàn)自2015 年以來(lái)，OIE 報(bào)告俄羅斯發(fā)生了400 多起LSD 疫情，在2 次獨(dú)立的流行波中，至少發(fā)現(xiàn)存在唯一田間分離毒株（2015～2016）以及所謂的“疫苗樣”變異毒株（2017～2019）兩類主要的LSDV 分離株，其中后者在遺傳上與俄羅斯第一波流行毒株以及其他已知的田間流行毒株不同。如2016 年俄羅斯的16 個(gè)地區(qū)暴發(fā)了313 次LSD 疫情，2017 年采用綿羊痘活疫苗控制了疫情，但在伏爾加聯(lián)邦區(qū)的一些地方發(fā)生了數(shù)起LSDV 疫苗株樣病，其中鑒定3 株LSDV 與疫苗株高度一致。另外在俄羅斯分離到的Kurgan/2018 病毒株是1 株接種疫苗株與自然流行毒株的重組LSDV，這提示后一變異種代表著一類新的毒株，而不是由田間流行毒株引起的最初疫病流行的延續(xù)，后證實(shí)2015～2016 年在俄羅斯暴發(fā)的LSD 主要是自然流行毒，而2017—2018 年發(fā)生的主要是輸入性的LSDV疫苗樣重組毒株，且與2015—2016年的田間毒株完全不一樣。盡管如此，目前仍不清楚這些新的“疫苗樣”變異毒株是否彼此相同，是一個(gè)LSDV 毒株的遺傳演化群，還是由不同亞型的異源變異毒株聚在同一遺傳演化簇內(nèi)。而且，這些“新”毒株是否與之前確認(rèn)的LSDV 分離株有關(guān)，還是2017 年之前未分離到的一個(gè)獨(dú)立譜系。后調(diào)查證實(shí)，無(wú)論是田間LSDV 毒株還是疫苗毒株都是在用活病毒株疫苗緊急接種牛預(yù)防LSD 后，從其樣品中分離到的，該情況暗示與疫苗接種直接相關(guān)。

自2017 年以來(lái)，在俄羅斯受影響地區(qū)的牛群，使用綿羊痘疫苗株的異源LSD 活疫苗（SPPV 疫苗）進(jìn)行主動(dòng)免疫接種，接種地區(qū)覆蓋率達(dá)80%～100%。在LSD 發(fā)病率顯著的俄羅斯地區(qū)，特別是在曾報(bào)告發(fā)生LSD 疫情病例或發(fā)現(xiàn)LSDV 感染的國(guó)家接壤的地區(qū)，每年對(duì)所有牛進(jìn)行疫苗接種，其中一個(gè)地區(qū)就是與哈薩克斯坦接壤的薩拉托夫（Saratov）地區(qū)（2016 年哈薩克斯坦證實(shí)發(fā)生了LSDV 田間毒株的感染）。2017—2019 年期間，在薩拉托夫地區(qū)記載至少有30 起LSD 疫情。重要的是，在俄羅斯聯(lián)邦其他地區(qū)多次發(fā)現(xiàn)重組的“新型”LSDV 毒株后，在薩拉托夫2017 年采集的樣品中也分離出首個(gè)重組的“新型”LSDV 毒株即LSDV/Russia/Saratov/2017。另外，2019 年9 月至10 月在薩拉托夫地區(qū)Nesterovo 村LSD 暴發(fā)期間，對(duì)接種過(guò)綿羊痘病毒（SPPV）疫苗的具有臨床癥狀的所有血清學(xué)陽(yáng)性樣品進(jìn)行病原學(xué)檢測(cè)調(diào)查?；贕PCR 基因?qū)拿庖呓臃N牛中分離到的LSDV 毒株進(jìn)行分子分型和遺傳演化分析，發(fā)現(xiàn)Nesterovo的LSDV 毒株（即Nesterovo-2019 毒株）與南非haden 型譜系（是1954 年在南非記載的毒株）一致，但該地區(qū)引起LSD 暴發(fā)的毒株是否具有生物多樣性，是否與疫病暴發(fā)相關(guān)毒株的其他已知LSDV 譜系有關(guān)，還需要更多的證據(jù)來(lái)證明。

對(duì)在LSDV 首次傳入俄羅斯薩拉托夫地區(qū)和其他地區(qū)以來(lái)傳播的LSDV 毒株，基于GPCR 基因進(jìn)行分子分型研究發(fā)現(xiàn)，所有與疫情相關(guān)的LSDV 毒株可區(qū)分為Ⅰ型和Ⅱ型兩大類：其中Ⅰ型為田間流行毒株，分為Ⅰ a—d 4 個(gè)亞型；Ⅱ型為疫苗毒株及其流行相關(guān)毒株，分為Ⅱ a—g 7 個(gè)亞型。遺傳演化研究表明，在俄羅斯發(fā)現(xiàn)了11 個(gè)LSDV 譜系，其中5 個(gè)位于薩拉托夫地區(qū)，主要有：（1）Neethling 野生型Ⅰ a/2017；（2）重組Saratov Ⅱ c/2017/2019；（3）特殊的DergachevskyiⅡ d/2017；（4）Khvalynsky Ⅱ g/2018；（5）Haden 型Ⅱ a 譜 系，即2019 年在薩拉托夫地區(qū)Nesterovo 村分離到的6 種LSDV Nesterovo-2019 毒株。這些毒株的系統(tǒng)地理分析顯示，俄羅斯領(lǐng)土的LSDV 類型有3 個(gè)，分別為俄羅斯的歐洲中部地區(qū)毒株、俄羅斯的歐洲東南地區(qū)毒株和俄羅斯的亞洲北部地區(qū)毒株。通過(guò)GPCR 基因的分型和亞型分析發(fā)現(xiàn)，在2017—2019 年間LSDV 多次傳入薩拉托夫地區(qū)，現(xiàn)研究認(rèn)為L(zhǎng)SDV/Russia/Saratov/2017 為重組病毒株，在LSDV 活減毒疫苗株與野生型田間毒株之間共發(fā)生27 次重組事件，這充分說(shuō)明LSDV 毒株重組的復(fù)雜性以及毒株的多樣性?？傊?，監(jiān)測(cè)和確定LSDV 毒株的多樣性和復(fù)雜性對(duì)揭示病毒遺傳演化和疫病暴發(fā)起源、評(píng)價(jià)疫苗質(zhì)量，以及闡明使用不同類型LSD疫苗對(duì)動(dòng)物健康影響的風(fēng)險(xiǎn)評(píng)價(jià)至關(guān)重要。

2.2 LSD 在亞洲國(guó)家的流行毒株與現(xiàn)狀

2.2.1 LSD 在中國(guó)的流行情況與毒株鑒定OIE 宣布，中國(guó)2019 年8 月3 日發(fā)生了LSD 疫情，該疫情發(fā)生在我國(guó)西北部新疆伊犁哈薩克自治州察布查爾錫伯自治縣，距離哈薩克斯坦邊境約20km，距離俄羅斯邊境約780km。分離發(fā)病病例樣本的病毒，關(guān)鍵基因的系統(tǒng)進(jìn)化分析表明，中國(guó)LSDV毒株（LSDV/China/Xinjiang/2019）與俄羅斯2017 年分離的LSDV 毒株（LSDV/Russia/Saratov/2017）具有密切的遺傳關(guān)系，但LSDV/China/Xinjiang/2019 被單獨(dú)聚在一個(gè)分支，位于LSDV/Russia/Saratov/2017 類群之外，但也被推測(cè)為疫苗樣毒株。

LSD 在新疆伊犁地區(qū)首次被確認(rèn)發(fā)生后，節(jié)肢動(dòng)物被認(rèn)為是可能的傳播媒介，后在靠近哈薩克斯坦邊境的4 個(gè)不同地方采集22 種飛行的昆蟲(chóng)，在2 種非叮咬的蠅類即家蠅（Muscadomestica）和廄腐蠅（Muscinastabulans）的體表沖洗物中檢測(cè)到LSDV，對(duì)其編碼RPO30、GPCR和LW126 的3 個(gè)分子基因組區(qū)進(jìn)行測(cè)序和遺傳演化分析，顯示這些序列與此前在俄羅斯發(fā)現(xiàn)的重組疫苗樣毒株LSDV/Russia/Saratov/2017 的同源性高，并與RPO30 和LW126 基因系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)中的LSDV 疫苗株聚在一起，這是中國(guó)首次在非叮咬性蠅類中檢測(cè)到疫苗樣LSDVDNA。

此外，筆者所在實(shí)驗(yàn)室對(duì)新疆、福建等地疫情病例進(jìn)行了病原核酸檢測(cè)、流行毒株分離、全基因組測(cè)序以及病原學(xué)特性鑒定分析，經(jīng)LSDV 關(guān)鍵基因以及全基因組功能基因遺傳演化關(guān)系分析證實(shí)，新疆流行毒株與福建流行毒株在基因組序列和結(jié)構(gòu)上高度一致，在遺傳演化關(guān)系上均與南非Neethling 疫苗株、疫苗樣疾病流行毒株以及哈薩克斯坦Kostanay-2018、俄羅斯Saratov-2017 和Udmurtiya-2019 流行毒株十分相近，斷定其均是一種疫苗毒株與自然流行毒株的重組病毒，通過(guò)LD50 測(cè)定證實(shí)這是在中國(guó)田間流行的一種強(qiáng)毒力的LSDV 毒株，這也與之前報(bào)道推測(cè)的結(jié)果一致（未公開(kāi)資料）。目前，雖然我國(guó)對(duì)LSD 的流行狀況和受影響省份/地區(qū)的調(diào)查還不充分，流行于中國(guó)的LSDV 全基因組序列尚未公開(kāi)，是否為疫苗樣重組毒株，其流行的范圍與程度還不清楚，但這已提示中國(guó)LSD 疫情的復(fù)雜性和嚴(yán)重性以及防控的艱難性。

2.2.2 LSD 在印度的流行情況與毒株鑒定2019 年8 月印度首次報(bào)告在奧里薩邦的5 個(gè)地區(qū)牛中發(fā)生了LSD 疫情，其中2539 頭牛中有182 頭被感染，對(duì)60 頭LSD 疑似牛和17頭無(wú)癥狀接觸牛的102 份樣本進(jìn)行檢測(cè)，LSDV 實(shí)時(shí)PCR 陽(yáng)性率為37.66%。在病牛中，結(jié)痂（79.16%）中LSDV 基因組的檢出率高于血液（31.81%）和冷凍精液（20.45%）。基于部分P32（LSDV074）和F（LSDV117）基因序列以及完整的RPO30（LSDV036）基因序列的遺傳演化分析表明，5株印度LSDV 毒株均與全球流行的其他田間毒株相同并聚在一起。然而，F(xiàn) 和RPO30 基因序列分析顯示，印度LSDV 毒株在遺傳上比歐洲毒株更接近南非NI2490/KSGP 樣毒株，現(xiàn)研究確定LSDV 田間毒株與印度疫情的暴發(fā)有關(guān)，但它是由何處傳播而來(lái)，仍不清楚。

雖然現(xiàn)在無(wú)法確定LSDV 在印度的起源和來(lái)源，但LSD 最有可能的方式是感染動(dòng)物未被控制或非法流動(dòng)而傳入。LSDV感染牛的流動(dòng)被認(rèn)為是引入該病的主要來(lái)源，特別是能更快、更遠(yuǎn)地傳播到的其他地區(qū)。盡管這一推測(cè)沒(méi)有官方的數(shù)據(jù)佐證，但不能完全排除活牛通過(guò)印度-孟加拉國(guó)邊境的非法貿(mào)易。第二種可能性是，LSD 發(fā)生在中國(guó)、孟加拉國(guó)和印度的鄰近地區(qū)，但仍未被發(fā)現(xiàn)和證實(shí)。第三種可能性是，LSD 通過(guò)風(fēng)或車(chē)輛運(yùn)輸在鄰國(guó)之間傳播，如通過(guò)成群的吸血昆蟲(chóng)媒介傳播。

2.2.3 LSD 在孟加拉國(guó)的流行情況與毒株鑒定2019 年9月15日孟加拉國(guó)向OIE 通報(bào)了首次暴發(fā)的LSD 疫情。該病于2019年7月在該國(guó)東南部的吉大港市（Chattogram）開(kāi)始，然后逐漸蔓延到全國(guó)各地，是影響該國(guó)經(jīng)濟(jì)的最重要的新發(fā)病。孟加拉國(guó)不同地區(qū)（Chottogram、Dhaka、Gazipur、Narayanganj、Pabna 和Satkhira）的所有受感染牛均表現(xiàn)出典型的LSD 臨床癥狀。對(duì)分離的孟加拉國(guó)LSDV 毒株，基于全長(zhǎng)RPO30 和GPCR 基因以及部分EEV 糖蛋白基因序列的分子特性分析發(fā)現(xiàn)，孟加拉國(guó)分離株不同于在非洲、歐洲和中東地區(qū)暴發(fā)的常見(jiàn)的LSDV 田間分離株，以及在俄羅斯和中國(guó)新出現(xiàn)的LSDV 變異株，相反它與LSDV KSGP-0240、LSDV NI2490和LSDV Kenya 密切相關(guān)，似乎這與另一類疫苗株關(guān)系密切，這表明在孟加拉國(guó)持續(xù)監(jiān)測(cè)和鑒定流行毒株的重要性，以及進(jìn)一步區(qū)分疫苗毒株與田間病毒的必要性和復(fù)雜性。

2.3 LSD 在非洲的流行情況牛結(jié)節(jié)病最早發(fā)生在非洲，現(xiàn)已幾乎流行到整個(gè)非洲大陸，對(duì)養(yǎng)牛產(chǎn)業(yè)產(chǎn)生了巨大經(jīng)濟(jì)影響。自2012 年以來(lái)，LSDV 迅速傳播到非洲以外的包括中東、東歐和亞洲的新的地理區(qū)域，已成為一種重要的復(fù)雜的流行性傳染病。基于在俄羅斯、孟加拉國(guó)和中國(guó)的新的流行情況，對(duì)起源于非洲大陸的病毒株的追溯研究中，也獲得了一些新發(fā)現(xiàn)，這對(duì)認(rèn)識(shí)LSDV 的重組和遺傳演化提供了新的線索。

2.3.1 LSD 在東非地區(qū)國(guó)家的流行情況與毒株鑒定為了解東非地區(qū)國(guó)家LSDV 的遺傳多樣性，對(duì)傳入中東地區(qū)和歐洲之前的收集于埃塞俄比亞、肯尼亞和蘇丹的22 份LSDV存檔樣本進(jìn)行追溯性研究，基于RPO30 和GPCR 基因測(cè)序分析發(fā)現(xiàn)，1950 年至2012 年期間的東非田間分離株間以及與之前的LSDV 田間分離株間非常相似，也與包括中東地區(qū)和歐洲其他地方的LSDV 田間分離株高度相似。只有在肯尼亞收集的一種田間毒株LSDV Embu/B338/2011，具有與LSDV Neethling 疫苗毒株和田間分離株之間的混合特征。而且LSDV Embu/B338/2011 毒株與LSDV Neethling 和KS-1 疫苗毒株都具有相同的12 個(gè)核苷酸插入序列。這與之前的多個(gè)歷史分離株如LSDV Neethling 疫苗LW-1959（AF409138）、LSDV RSA/54 Haden（FJ869376）、LSDV NI-2490（AF325528）、LSDV Kenya（MN072619）、孟加拉國(guó)的LSDV 分離株以及俄羅斯的LSDV 田間重組毒株的特征一致，但這與在烏干達(dá)2017—2018 年流行的LSDV 田間毒株的分子特征不一致。進(jìn)一步分析其部分EEV 糖蛋白、B22R、RNA 解螺旋酶、病毒體核心蛋白、NTPase 和N1R/p28 樣蛋白基因，發(fā)現(xiàn)LSDVEmbu/B338/2011 毒株不同于之前描述的在GPCR 基因中插入12 個(gè)核苷酸的LSDV 突變體毒株，這些發(fā)現(xiàn)揭示了持續(xù)監(jiān)測(cè)所有LSDV 分離株的遺傳變異的重要性和必要性。

與在GPCR 基因上的發(fā)現(xiàn)相反，LSDV Embu/B338/2011與LSDV 田間分離株和LSDV KSGP O240（KX683219）毒株在RP30 全基因、EEV 糖蛋白部分基因和B22R 部分基因上均相同。這表明，LSDV Embu/B338/2011 與東非地區(qū)國(guó)家常用的LSDV KSGP O240 來(lái)源的疫苗毒株和LSDV Neethling 疫苗毒株不同，可能是LSDV 田間分離毒株和LSDV Neethling 疫苗毒株的混合物。這與之前的基于4 種山羊痘病毒屬分離毒株基因組物理圖的比較結(jié)果一致，認(rèn)為也門(mén)山羊-1 分離株（Yemen goat-1）是一種具有肯尼亞牛-1（Kenya cattle-1）山羊痘病毒屬病毒田間株和伊拉克山羊-1（Iraq goat-1）疫苗毒株混合特征的重組病毒。但有趣的是，將LSDV Embu/B338/2011 與俄羅斯重組樣毒株LSDV Russia/Saratov/2017 的EEV 糖蛋白和B22R 基因比較，發(fā)現(xiàn)二者存在一定差異。雖然LSDV RUSSIA/Saratov/2017 與LSDV Neethling 疫苗毒株在EEV 糖蛋白和B22R 基因上相似，但LSDV Embu/B338/2011 與田間分離毒株更相關(guān)。基于基因組的RNA 解旋酶（RNA helicase）和核苷水解酶（NTPase）基因序列分析，證實(shí)還存在一些額外的變異位點(diǎn)，說(shuō)明LSDV Embu/B338/2011 毒株與最近測(cè)序的南非疫苗相關(guān)的田間病毒間也存在一些差異，流行病學(xué)數(shù)據(jù)也支持LSDVEmbu/B338/2011 毒株是通過(guò)重組產(chǎn)生的假設(shè)。然而，由于該分離毒株來(lái)自先前接種過(guò)疫苗的畜群，也有可能這種分離毒株在接種疫苗之前就已傳播。例如，1950 年和1958年在肯尼亞采集的2 個(gè)歷史田間分離株LSDV NI-2490 和LSDV Kenya 也在GPCR 基因中插入了12 個(gè)核苷酸。

一些研究認(rèn)為，在接種過(guò)疫苗的畜群中發(fā)生LSDV 感染，可能是由于LSDV KS1 等疫苗的免疫接種失敗或潛在殘留毒力所致，然而，LSDV Embu/B338/2011 與LSDV KSGP O240 毒株間在遺傳上也存在差異。LSDV 分離株在其GPCR 基因中攜帶12 個(gè)核苷酸插入，這在之前的毒株很罕見(jiàn)。例如，發(fā)生在1950 年的LSDV Kenya，發(fā)生在1954年的LSDV RSA/54,發(fā)生在1958 年的LSDV NI-2490，1958年和1959 年的LSDV Neethling 疫苗毒株LW-1959，1976年的LSDV KS-1 等。然而，在2017 年檢測(cè)到重組的LSDV RUSSIA/Saratov/ 2017 和LSDV RUSSIA/ Udmurtiya/2019 之后，在亞洲出現(xiàn)的所有新疫情的LSDV 田間分離毒株都在其GPCR 基因中存在12 個(gè)核苷酸的插入，這充分說(shuō)明了LSDV流行的多樣性和復(fù)雜性。

2.3.2 LSD 在南非的流行情況與毒株鑒定在對(duì)東非地區(qū)國(guó)家的田間分離毒株分析比較中發(fā)現(xiàn)，來(lái)自南非的大多數(shù)存檔樣本的LSDV 田間毒株與疫苗相關(guān)的田間病毒都攜帶有12 個(gè)核苷酸的插入。由于南非普遍流行LSD，主要依靠各種活減毒疫苗來(lái)預(yù)防和控制該病，近年來(lái)國(guó)際上報(bào)道的LSDV疫苗樣毒株的廣泛暴發(fā)，迫使從LSDV 田間分離毒株的全基因組測(cè)序入手，解讀其遺傳演化關(guān)系。

活減毒疫苗病毒是1963 年在南非疫苗株（Onderstepoort）獸醫(yī)研究所通過(guò)LSDV Neethling 型田間毒株在細(xì)胞和雞胚絨毛膜尿囊膜中的連續(xù)傳代形成的，并在牛體內(nèi)試驗(yàn)證明其作為疫苗使用是安全和有效的，現(xiàn)能夠獲得LSDV 的Neethling型LAV 毒株的全基因組序列。這種疫苗毒株后來(lái)被廣泛使用，有效地減少了隨后幾年LSD 的暴發(fā)次數(shù)，并在流行地區(qū)控制了該病。然而，最近這種疫苗和與LSD 疫苗有關(guān)的某些缺陷被不斷報(bào)道。通過(guò)限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性比較以及對(duì)LSDVKSGP 0240 的全基因組測(cè)序分析發(fā)現(xiàn)，該毒株最初來(lái)源于一種Neethling 型LSDV 毒株。已有多個(gè)研究在調(diào)查有毒力的流行毒株和疫苗毒株間的基因組差異，以闡明導(dǎo)致其致弱表型的遺傳變化。除LSDV ORF LW134 編碼的超氧化物歧化酶（SOD）基因同系物發(fā)生單一變化外，所有其他研究都發(fā)現(xiàn)了多個(gè)開(kāi)放閱讀框（ORF），其中既有可替代性的閱讀框，也有大量的單核苷酸差異，顯然涉及多個(gè)基因參與其中，并協(xié)同工作以實(shí)現(xiàn)宿主特異性的致弱，這可能有助于病毒減毒表型的形成。

在預(yù)防和控制LSD 方面，盡管使用LAV 毒株取得了巨大的成功和有效性，但其仍有一些固有的局限性。越來(lái)越多的證據(jù)表明，LSD LAV 毒株正在通過(guò)與田間強(qiáng)毒株的重組或不穩(wěn)定基因組區(qū)域的突變，導(dǎo)致全長(zhǎng)基因恢復(fù)來(lái)實(shí)現(xiàn)毒力反轉(zhuǎn)，這也是一些國(guó)家禁止使用基于LAV 毒株的商業(yè)疫苗，而是鼓勵(lì)使用滅活的、死的或異種疫苗進(jìn)行疫病控制計(jì)劃的原因。2017 年，俄羅斯暴發(fā)了嚴(yán)重的LSD，經(jīng)鑒定病原體與商品化的LAV 毒株在基因上相似，也被鑒定是LSDV 的Neethling 減毒疫苗毒株與LSDV KSGP 0240 疫苗毒株間的多基因內(nèi)重組病毒。

根據(jù)在歐洲特別是俄羅斯對(duì)LAV 疫苗株的毒力反轉(zhuǎn)或重組的觀察，采用全基因組測(cè)序分析調(diào)查南非提交的田間分離毒株發(fā)現(xiàn)，南非3 個(gè)省的1991—1997 年間暴發(fā)的6 個(gè)LSDV 毒株均與LSDV 疫苗毒株在遺傳上聚類在一起，其中疫苗相關(guān)病毒之一的LSD-248/93 毒株在動(dòng)物上經(jīng)常引起LSD臨床癥狀，被認(rèn)為是一種有毒力的LSDV 毒株，說(shuō)明LSD-248/93 毒株確實(shí)存在毒力反轉(zhuǎn)或重組的類似事件，這提示在疫苗接種計(jì)劃中LAV 恢復(fù)毒力是一個(gè)主要的安全性問(wèn)題。

3 我國(guó)LSD 防控形勢(shì)、應(yīng)對(duì)策略與建議

2019 年8 月之前LSD 在我國(guó)屬于外來(lái)新發(fā)病，在進(jìn)境動(dòng)物檢疫疫病中按一類病檢疫，現(xiàn)暫按二類動(dòng)物傳染病進(jìn)行防控管理。2020 年我國(guó)發(fā)布了《牛結(jié)節(jié)性皮膚病防治技術(shù)規(guī)范》（農(nóng)牧發(fā)〔2020〕30 號(hào)）和《牛結(jié)節(jié)性皮膚病診斷技術(shù)規(guī)范》（GB/T39602—2020），除一方面要求把好國(guó)門(mén)，嚴(yán)禁從疫區(qū)國(guó)家引進(jìn)活牛及其肉制品、皮毛、精液和胚胎等動(dòng)物產(chǎn)品，做好外防輸入外；還要求對(duì)確診的疫情病例立即撲殺，對(duì)撲殺的和病死的牛進(jìn)行無(wú)害化處理，做好同群牛的臨床監(jiān)視；對(duì)養(yǎng)殖場(chǎng)環(huán)境進(jìn)行徹底清洗、消毒，殺滅蚊蠅、硬蜱等節(jié)肢動(dòng)物媒介；限制同群牛移動(dòng)，禁止疫情地區(qū)的活牛調(diào)出，以防止在國(guó)內(nèi)大范圍擴(kuò)散。同時(shí)，要做好疫情監(jiān)測(cè)和預(yù)警以及緊急免疫接種預(yù)防工作，保護(hù)非疫區(qū)健康牛群以防被感染。

目前，國(guó)際上只有預(yù)防LSD 的活減毒疫苗，尚未有滅活疫苗，中國(guó)推薦使用商品化的山羊痘活減毒疫苗緊急免疫接種。綿羊痘、山羊痘和牛結(jié)節(jié)病病毒間具有抗原同源性和交叉保護(hù)性，均可作為L(zhǎng)SD 的疫苗毒株，然而，活減毒疫苗一方面不能對(duì)免疫的動(dòng)物提供足夠的完全保護(hù)，而且還會(huì)出現(xiàn)不良反應(yīng)；另一方面，活減毒疫苗毒株還能在接種過(guò)的動(dòng)物體內(nèi)復(fù)制，增加病毒在非流行地區(qū)/省份傳播的風(fēng)險(xiǎn)。此外，用活毒株疫苗接種發(fā)病或潛在感染的動(dòng)物危險(xiǎn)更大。無(wú)論南非Neethling 疫苗株，還是山羊痘、綿羊痘弱毒疫苗株，一旦與田間的野毒在體內(nèi)發(fā)生重組，可恢復(fù)毒力或產(chǎn)生毒力更強(qiáng)的新病毒株?，F(xiàn)證實(shí)，分離自俄羅斯的LSDV/Russia/Saratov/2017 毒株、分離自肯尼亞的LSDV Embu/B338/2011 毒株都可能是LSDV 田間毒株和LSDVNeethling 疫苗毒株的重組產(chǎn)物。孟加拉國(guó)LSDV 毒株雖然不同于在非洲、歐洲和中東地區(qū)暴發(fā)的常見(jiàn)的LSDV 田間分離毒株，以及在俄羅斯和中國(guó)新出現(xiàn)的LSDV 變異株，但也與LSDV KSGP 0240、LSDV NI2490 和LSDV Kenya 株密切相關(guān)。在南非毒株的回顧性基因組測(cè)序研究中，南非1991～1997 年間暴發(fā)的6 個(gè)LSDV 毒株均與LSDV 疫苗毒株更密切，其中LSD-248/93 毒株還能在田間廣泛流行。另外，中國(guó)LSDV/China/Xinjiang/2019 毒株也被初步確定為疫苗樣毒株，從生物安全的角度考慮，不建議在全國(guó)范圍內(nèi)對(duì)易感牛強(qiáng)制大規(guī)模接種減毒活病毒株疫苗。

目前，牛結(jié)節(jié)性皮膚病已在或曾在中國(guó)大部分省區(qū)市暴發(fā)流行，也在我國(guó)接壤的俄羅斯、哈薩克斯、印度、尼泊爾、不丹、越南、緬甸、泰國(guó)、柬埔寨和蒙古等國(guó)家暴發(fā)流行，而且流行毒株也不完全一樣，外防輸入、內(nèi)防擴(kuò)散的形勢(shì)非常嚴(yán)峻，疫病危害和生物安全風(fēng)險(xiǎn)極大。當(dāng)前無(wú)論中國(guó)北方還是南方，牛結(jié)節(jié)性皮膚病病毒的媒介生物蚊、蠅和硬蜱種類多、活動(dòng)頻繁，也存在不同的適合其生活史的生態(tài)區(qū)，隨著每年夏季的到來(lái)均能形成新一波LSD 輸入和散播大流行。此外，除新疆和福建外的中國(guó)其他省區(qū)LSD 疫情的流行病學(xué)和溯源情況仍不清楚，同時(shí)也缺乏中國(guó)南方、西南、東北邊境國(guó)家疫情流行毒株的準(zhǔn)確信息，目前在中國(guó)究竟存在何種或多少種LSDV 流行毒株，是自然流行毒株、疫苗毒株還是重組毒株仍不完全清楚，這為中國(guó)采用異源性活病毒疫苗（山羊痘弱毒疫苗）緊急防控LSD 的策略提出了新的挑戰(zhàn)。

基于俄羅斯、肯尼亞和南非等國(guó)家發(fā)生的多次或多株重組疫苗毒株的流行報(bào)道以及中國(guó)的初步研究結(jié)論，建議：第一，盡快查明中國(guó)其他省區(qū)及其周邊國(guó)家LSDV 流行毒株特別是重組毒株的相關(guān)情況；第二，開(kāi)展其不同流行毒株的病原學(xué)特性研究，闡明其與綿羊痘、山羊痘病毒疫苗株和自然毒株重組的特征和規(guī)律以及感染其他動(dòng)物和人類的可能性；第三，研發(fā)和應(yīng)用包括病原學(xué)和血清學(xué)在內(nèi)的能區(qū)別自然感染與疫苗免疫動(dòng)物（DIVA）以及田間毒株與疫苗毒株或重組毒株的診斷檢測(cè)方法，做到早識(shí)別、早發(fā)現(xiàn)和早處置；第四，開(kāi)展安全、高效山羊痘、綿羊痘和牛結(jié)節(jié)性皮膚病病毒的滅活疫苗和基因工程分子疫苗研制，防止疫苗毒株與田間毒株的重組或發(fā)生疫苗樣疾病流行；第五，調(diào)整用活減毒疫苗防控LSD 的策略，禁止給發(fā)病或潛在感染牛接種活毒株疫苗，進(jìn)一步加強(qiáng)、完善和規(guī)范LSD 防控措施，有效控制、凈化和根除LSD，盡快獲得無(wú)LSD 國(guó)家或地區(qū)地位。