一例蘆花雞大腸桿菌病的病原分離鑒定與治療

嚴(yán)熬生，陳亞強(qiáng)

(1.重慶市黔江區(qū)鵝池鎮(zhèn)農(nóng)業(yè)服務(wù)中心，重慶 400000；2.重慶三峽職業(yè)學(xué)院，重慶 400000)

0 引言

禽大腸桿菌是禽大腸桿菌病的主要病原，是危害養(yǎng)禽業(yè)的重要細(xì)菌性病原，主要通過呼吸道和消化道感染家禽，并導(dǎo)致家禽多系統(tǒng)混合感染，甚至引起急性死亡[1-2]。2021年6月，重慶市萬州區(qū)某蘆花雞場的130羽30日齡雛雞發(fā)生了雞大腸桿菌病感染，發(fā)病初期，病雞主要出現(xiàn)萎靡不振而后逐漸變成食欲廢絕，所有發(fā)病雞均羽毛松亂，部分病雞閉目嗜睡、出現(xiàn)呼吸困難、排白色稀糞等癥狀，同時(shí)，病雞還出現(xiàn)扎堆現(xiàn)象。隨著病情加深，病雞逐漸出現(xiàn)死亡，5 d內(nèi)死亡了12羽雛雞，剩余病雞體重下降，出現(xiàn)脫水癥狀(皮膚干燥、干癟)。該雞場出現(xiàn)病情后，經(jīng)阿莫西林拌料、氟苯尼考飲水治療無效，后就診于重慶三峽職業(yè)學(xué)院動(dòng)物疫病檢測診斷中心。筆者通過對病死雞的臨床癥狀分析、病理剖檢、實(shí)驗(yàn)室診斷等，確診為雞大腸桿菌病后，提出了相應(yīng)的治療方案，現(xiàn)將該病例報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 病料采集

剖檢12羽病死雞，臨床觀察各組織、器官病變，無菌采集病死雞脾臟﹑肝臟、心臟作為檢測病料。

1.2 主要試劑

麥康凱瓊脂培養(yǎng)基、伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基、LB培養(yǎng)基、微量生化鑒定管、藥敏紙片(慶大霉素、阿米卡星、頭孢噻肟、泰妙菌素、恩諾沙星、環(huán)丙沙星、硫酸粘菌素、氟苯尼考、氨芐西林、紅霉素、卡那霉素)均購自杭州微生物試劑有限公司；10日齡20羽健康蘆花雞雛雞采購自重慶市銘森昇祥農(nóng)牧科技有限公司。

1.3 細(xì)菌分離

將采集的肝臟、脾臟、心臟病料無菌切開，選取潔凈面劃線接種于麥康凱瓊脂培養(yǎng)基和伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基，置于生化培養(yǎng)箱37℃培養(yǎng)18 h，取出并觀察菌落形態(tài)，然后挑取單菌落純化接種于麥康凱瓊脂培養(yǎng)基，37℃培養(yǎng)18 h，取出并挑取單菌落進(jìn)行革蘭氏染色后鏡檢。同時(shí)將純化后的單菌落挑取置于LB液體培養(yǎng)基，置于搖床，37℃培養(yǎng)18 h，然后用甘油保存至-20℃，備用。

1.4 生化鑒定

將純化后的菌落挑取置于五糖(葡萄糖﹑蔗糖﹑乳糖、麥芽糖、甘露醇)發(fā)酵試驗(yàn)、IMViC、尿素酶鑒定管，按照說明書進(jìn)行生化鑒定[3]。

1.5 致病性試驗(yàn)

將20羽健康蘆花雛隨機(jī)分為試驗(yàn)組和對照組，每組10羽雛雞。試驗(yàn)組用分離純化細(xì)菌的LB液體培養(yǎng)物(大腸桿菌濃度為2.0×109CFU/mL)，0.2 mL/羽皮下注射；對照組用生理鹽水，0.2 mL/羽皮下注射。2組雛雞分開飼養(yǎng)，定時(shí)觀察發(fā)病及死亡情況。出現(xiàn)死亡的雛雞，進(jìn)行剖檢，觀察組織器官病變，并無菌采集脾臟、肝臟、心臟作為病料，重復(fù)以上方法進(jìn)行細(xì)菌分離鑒定。

1.6 藥敏試驗(yàn)

采用K-B紙片擴(kuò)散法[4]，將純化菌接種于LB培養(yǎng)基，將藥敏紙片貼于培養(yǎng)基表面，37℃培養(yǎng)18 h，測量抑菌圈直徑(低敏：小于10 mm；中敏：11～15 mm；高敏：大于15 mm)。

2 結(jié)果

2.1 病理變化

剖檢見心包炎、心水腫、心包囊充滿淡黃色的纖維素性滲出物，腹膜水腫，肝臟表面有纖維素性滲出物，膈肌下有炎性積液。

2.2 細(xì)菌分離

在麥康凱瓊脂培養(yǎng)基上培養(yǎng)出圓形光滑、邊緣整齊的紅色菌落，在伊紅美藍(lán)瓊脂培養(yǎng)基上培養(yǎng)出圓形光滑、帶金屬光澤的紫黑色菌落。通過顯微鏡鏡檢為紅色短桿菌，判定為革蘭氏陰性短桿菌。分離菌鏡檢如圖1所示。

圖1 分離菌鏡檢結(jié)果

2.3 生化鑒定

分離菌能夠分解葡萄糖、乳糖、麥芽糖和甘露醇，并能夠產(chǎn)酸產(chǎn)氣，蔗糖發(fā)酵試驗(yàn)只產(chǎn)酸不產(chǎn)氣；分離菌不能利用枸櫞酸鹽，M-R試驗(yàn)為陽性，吲哚試驗(yàn)為陽性，V-P、尿素酶試驗(yàn)為陰性(見表1)。結(jié)合病雞臨床癥狀、病理變化、鏡檢結(jié)果、生化特性及致病性試驗(yàn)結(jié)果，確定分離菌為大腸桿菌。

表1 生化鑒定結(jié)果

2.4 致病性試驗(yàn)

對照組的10羽雛雞未出現(xiàn)任何臨床癥狀，正常存活。試驗(yàn)組的10羽雛雞注射菌液12～24 h開始不同程度出現(xiàn)癥狀，主要表現(xiàn)為精神萎靡、腹瀉、食欲下降或廢絕，24～48 h陸續(xù)出現(xiàn)死亡，發(fā)病率和死亡率為100%，病理剖檢發(fā)現(xiàn)有心臟水腫、心包積液，腹腔有積液，且肝臟表面呈灰白，有部分纖維素性滲出，病死雞氣囊有渾濁的滲出物。采集心臟、肝臟、脾臟進(jìn)行細(xì)菌分離，并進(jìn)行生化鑒定，結(jié)果同接種菌一致，表明分離菌為致病性大腸桿菌，本次疫情是致病性大腸桿菌引起的禽大腸桿菌病。

2.5 藥敏試驗(yàn)

分離的大腸桿菌對阿米卡星、頭孢噻肟、恩諾沙星高度敏感，對環(huán)丙沙星、硫酸粘菌素中度敏感，對慶大霉素、泰妙菌素、氟苯尼考、卡那霉素、氨芐西林和紅霉素低度敏感，其中氟苯尼考、氨芐西林和紅霉素抑菌圈為0 mm，如表2所示。

表2 藥敏試驗(yàn)結(jié)果

3 防治措施

3.1 藥物治療

全群用頭孢噻肟鈉按照200 g/kg進(jìn)行拌料，用10%恩諾沙星按照l00 mg/kg進(jìn)行飲水，隔天交叉輪換用藥，連用5 d；對于個(gè)別臨床癥狀嚴(yán)重病雞，按照20 mg/(kg體重)肌注阿米卡星；飲水中添加2.5%的口服補(bǔ)液鹽以及2%葡萄糖，以維持病雞電解質(zhì)平衡，給予病雞能量。

3.2 消毒措施

對病雞舍用1:200過硫酸氫鉀進(jìn)行緊急消毒[5]，對雞飲用水進(jìn)行消毒，每50 L水加入1 g漂白粉，看其大腸桿菌是否超標(biāo)或是否存在致病性大腸桿菌，檢測結(jié)果表示飲水大腸桿菌菌落數(shù)處于正常范圍。

3.3 飼養(yǎng)管理

對出現(xiàn)臨床癥狀的病雞進(jìn)行緊急隔離，對病情嚴(yán)重的雛雞及病死雞作深埋或高溫高壓化制無害化處理；安排專人定時(shí)巡查，觀察病雞及整個(gè)雞群情況，嚴(yán)禁人員從病雞舍到健康雞舍，嚴(yán)控生物安全。

用藥6 d后再無發(fā)病死亡，疫情得到控制，連續(xù)采取措施后，發(fā)病雛雞均恢復(fù)正常采食和飲水。

4 討論與分析

大腸桿菌是環(huán)境常在菌，常常由于環(huán)境改變而致病，禽大腸桿菌病是家禽較為常見的疾病，不僅可以引起卵黃炎、輸卵管炎、腹膜炎、肉芽腫、蜂窩織炎、皮膚感染、骨髓炎、關(guān)節(jié)炎、腫頭綜合癥、氣囊炎、多漿膜炎、肝周炎、心包炎、眼球炎等諸多感染，也可引起家禽腹瀉，同時(shí)禽大腸桿菌還被認(rèn)為是人源致病性大腸桿菌的重要來源，對公共衛(wèi)生安全構(gòu)成威脅[6]。蘆花雞由于其耐粗飼等特點(diǎn)，除了在山東養(yǎng)殖較多以外，川、渝兩地丘陵山區(qū)引進(jìn)飼養(yǎng)較多，而且多為林下養(yǎng)殖，包括飲水在內(nèi)的飼養(yǎng)環(huán)境普遍復(fù)雜，容易受到大腸桿菌侵害，所以在生產(chǎn)上不僅要防止外源性侵入，做好蘆花雞的引種管理工作，還需要加強(qiáng)飼養(yǎng)管理，嚴(yán)格控制環(huán)境衛(wèi)生，尤其是飲水消毒[7]。

大腸桿菌病多發(fā)生在冬夏季，王娟等[8]研究發(fā)現(xiàn)在每年4—8月份高溫潮濕多雨季節(jié)，以及12月份—次年1月的濕冷季節(jié)，禽大腸桿菌病的發(fā)病率最高。川、渝兩地夏季濕熱，冬季濕冷，易發(fā)生大腸桿菌病，所以應(yīng)在夏季注重消毒頻次的合理安排，盡可能降低環(huán)境濕度，散養(yǎng)蘆花雞舍應(yīng)為半開放式，注重通風(fēng)和遮光；在冬季應(yīng)注意保暖，蘆花雞舍采用塑料薄膜進(jìn)行覆蓋，氣溫較高時(shí)開放通風(fēng)不超過3 h/d[9]。

張榮民[10]對肉雞產(chǎn)業(yè)鏈大腸桿菌進(jìn)行親緣關(guān)系分析，發(fā)現(xiàn)種雞場—商品雞場—屠宰場—超市來源的部分大腸桿菌親緣關(guān)系相近，同時(shí)雞群、家燕、飼養(yǎng)員、犬、蒼蠅和污水來源的部分大腸桿菌親緣關(guān)系也相近，表明大腸桿菌可在養(yǎng)殖單元?jiǎng)游铩⒗ハx、水等媒介上進(jìn)行傳播。經(jīng)前期調(diào)研發(fā)現(xiàn)，川、渝兩地多數(shù)蘆花雞養(yǎng)殖場飲水主要采用山泉水，養(yǎng)殖場內(nèi)飼養(yǎng)犬、貓等動(dòng)物，這些都給大腸桿菌的傳播提供了媒介，所以，從根源上減少大腸桿菌病的發(fā)生，主要還是要做好硬件條件的建設(shè)，修建飲用水池、糞污處理系統(tǒng)以及防蚊、防蟲設(shè)施。

藥敏試驗(yàn)為定向準(zhǔn)確用藥提供了科學(xué)參考[11]，本次藥敏試驗(yàn)結(jié)果表明，目前傳統(tǒng)的慶大霉素、環(huán)丙沙星、硫酸粘菌素等抗大腸桿菌藥物對防控大腸桿菌效果甚微，大腸桿菌已產(chǎn)生了諸多耐藥性，防控形勢逐漸嚴(yán)峻。因此，在臨床上切忌在沒有確診和藥敏試驗(yàn)前直接用藥，否則不僅會(huì)增加用藥成本，同時(shí)會(huì)耽誤病情時(shí)間，造成更大的傳播。治療時(shí)應(yīng)根據(jù)藥敏試驗(yàn)結(jié)果有針對性用藥。