臨床基因擴增實驗室進修生帶教探討

宋麗影，李雨艷，周婷婷，路放

吉林金域醫(yī)學檢驗所有限公司，吉林長春 130000

該公司PCR實驗室于2009年成立并通過臨檢中心首次驗收，2019年6月17日吉林金域正式被授予為吉林省內(nèi)首家也是唯一一家“基因擴增檢驗實驗室崗前培訓實驗操作基地”。

該檢測方法可用于檢測艾滋病、乙型肝炎、人禽流感等病毒感染，檢測方法為通過病毒內(nèi)所含基因進行擴增的方法，判斷出一些病毒含量不高感染者體內(nèi)是否含有特定病毒。2020年后，該公司在省內(nèi)開展多家PCR實驗室，而作為省內(nèi)培訓基地承接了來自多家單位的PCR進修人員的帶教工作。PCR技術(shù)具備特異性高、靈敏度強、對樣品要求低等特點，但同時整個檢測操作步驟較為繁瑣，自動化程度低，整個實驗過程中任何一個環(huán)節(jié)的疏忽都可能對結(jié)果造成嚴重影響[1-2]。故此帶教老師需根據(jù)進修生進修目的，定制培訓計劃，幫助其明晰重點，做到有的放矢。兩年來，該科室一直從事臨床基因擴增實驗室進修生帶教工作，總結(jié)出幾點帶教體會，現(xiàn)報道如下。

1 科室設(shè)備及項目介紹

該科室擁有一支專業(yè)的技術(shù)團隊，具有完整的實驗室質(zhì)量安全管理體系及規(guī)范化的室內(nèi)質(zhì)控管理?？剖宜弥饕獧z測設(shè)備包括ABI7500熒光定量PCR儀、MA-6000熒光定量PCR儀、Luminex200流式熒光點陣儀、DML2000雜交信號擴大儀、德同化學發(fā)光免疫分析儀及LifeECO基因擴增儀等。檢測項目近20項，包括HPV類宮頸癌篩查相關(guān)項目檢測系列、肝炎類檢測系列、葉酸代謝能力基因檢測系列、性病感染系列、septin9腸癌基因檢測等。

2 根據(jù)進修目的，制訂培訓計劃，明確重點

進修生學習時間為期1個月，由于時間較短所以必須有針對性地制訂培訓計劃，便于進修人員充分利用時間掌握要學習的知識。在制訂培訓計劃前，應(yīng)了解學習需求，制訂更合理、更實用的教學內(nèi)容。由于其所在原單位的情況不同，進修的目的也有所區(qū)別，有的進修生所在醫(yī)院PCR實驗室剛剛成立；有的醫(yī)院已開展幾項常規(guī)類項目，預計打算開展更多類型病毒感染檢驗項目。因此在培訓計劃中將學習內(nèi)容分為3個類別，即了解、掌握和熟練掌握。有側(cè)重點帶教更有助于進修人員在有限的時間內(nèi)掌握自己要學習的知識。

3 實施培訓過程

雖然大部分進修生均是具備一定工作能力和經(jīng)驗的檢驗人員，但基因擴增技術(shù)能夠在短時間內(nèi)完成擴增，加之PCR檢驗程序復雜，可涉及標本采集、編號、準備試劑、提取、上機擴增以及產(chǎn)物檢測等諸多環(huán)節(jié)，每一個步驟的嚴謹程度和準確率均關(guān)乎檢驗結(jié)果。也正因如此，使得大部分進修者帶有習慣性和經(jīng)驗性錯誤的檢驗方式被不斷放大，出現(xiàn)不易察覺的風險。故此進修生在進入實驗室正式學習之前，第一件事為對其進行崗前教育，重點強調(diào)實驗室的分區(qū)制度、單一流向制度、日常、生物安全等。第二為強化職業(yè)責任感的培養(yǎng)，灌輸責任意識、服務(wù)意識，使得進修生可以時刻保持精益求精的專業(yè)態(tài)度。其次進行專業(yè)知識學習，并在培訓過程中要切實關(guān)注和掌握進修生學習動態(tài)，針對錯誤問題及時糾正，嚴格按照標準化操作流程進行操作。

4 增強進修生的安全防護意識

作為標準化的PCR實驗室，根據(jù)實際情況將其劃分為以下幾大主要區(qū)域，如試劑待檢區(qū)、標本制備區(qū)、檢測分析區(qū)等，而介于檢測標本具有一定傳染性和檢測重要性，各區(qū)域之間主要采用傳遞柜完成物品傳遞，以此可避免因人為工作造成的誤差等。同時，該科室明確規(guī)定不可將任何標本隨意帶出PCR實驗室，在避免污染環(huán)境的同時也要保障區(qū)域人民安全。而因當下科室所開展的所有檢測項目均具有一定傳染性，所以對所檢測的樣本，如血液、分泌物等均一律視為傳染性物質(zhì)，檢測人員必須按照統(tǒng)一規(guī)定制度采取相應(yīng)的防護措施，并明晰檢驗樣本前中后的順序。①檢驗前：個人防護佩戴齊整，PCR實驗室人員應(yīng)帶無粉乳膠手套，因有粉手套會抑制PCR反應(yīng)，影響檢測結(jié)果[3-4]。檢測不同類型樣本處理區(qū)實驗人員應(yīng)采用三級防護,熟練防護服的穿脫順序。②檢驗中：將可能出現(xiàn)的職業(yè)風險告知如下，因為操作失誤或者人為失誤等導致玻璃器皿的破損、液體飛濺等因素可致使檢測人員感染檢測病毒，如乙肝、丙肝病毒、艾滋病病毒、梅毒等。因為實踐操作過程中，使用相關(guān)儀器將產(chǎn)生人類肉眼和嗅覺無法感染到的氣體，可能會增加呼吸道病毒感染概率。由于實驗室電器設(shè)備眾多，使用不當會發(fā)生觸電事故；由于接觸到患者的血液、分泌物等標本和醫(yī)療廢物，可能會引起病原微生物的感染；PCR實驗引起的感染性物質(zhì)局部擴增，可能引起擴散和感染。如果檢測人員意識到上述職業(yè)風險或者發(fā)生上述情況后應(yīng)立即停止當下工作，對于身體存在實質(zhì)性傷口的人員應(yīng)該立即從近心端向遠心端擠壓傷口，盡可能擠壓出損傷處受到污染的血液，并使用流動水源反復沖洗[5-6]。沖洗完畢后涂抹消毒物品，必要時可包扎傷口；如果無實質(zhì)性傷口通過黏膜發(fā)生職業(yè)暴露時，可及時使用沖淋裝置；如通過眼睛進行傳播，需立即使用洗眼器完成眼部沖洗；無論任何職業(yè)暴露風險發(fā)生時，必須保持冷靜，及時處置，并于傷后24 h內(nèi)完成上報，告知生物安全主管，采取后續(xù)監(jiān)測流程[7-8]。③檢驗后：樣本嚴格按照SOP上面要求的溫度及時限進行保存。實驗結(jié)束后，對各區(qū)的工作臺面用10%次氯酸鈉液消毒液進行消毒清潔，然后用75%乙醇清潔，再用紫外線殺菌車照射1 h；地面用10%次氯酸鈉液消毒液進行消毒清潔，打開固定紫外燈消毒2 h。以《醫(yī)療廢物管理條例》為前提，所有醫(yī)療廢物必須遵守該規(guī)定條例規(guī)范處理，并必須區(qū)分生活垃圾和醫(yī)療垃圾，對于醫(yī)療垃圾可將其放置于黃色標志垃圾袋、對于生活垃圾可將其放置于黑色標志垃圾袋，并由專人完成不同垃圾的收集、處理等流程。

5 培養(yǎng)質(zhì)量控制理念，確保結(jié)果準確性

檢驗工作質(zhì)量為先，其檢測出的最終結(jié)果直接關(guān)乎臨床診斷和后續(xù)采取的治療方式，關(guān)系到患者個人生命安全、家庭生活等，由此說明檢測質(zhì)量的重要性。而對于提升檢驗質(zhì)量，只有不斷強化各個不同檢驗流程的質(zhì)量控制，提高操作規(guī)范和人員意識，才能從根本上幫助臨床提供更加精準的檢測數(shù)據(jù)，為臨床醫(yī)師后續(xù)采取的診療計劃打下良好依托[9-10]?！懊恳焕龢吮径际且活w期待的心”，我們的質(zhì)量方針是：公正、準確、快速、創(chuàng)新，打造無縫鏈接的服務(wù)鏈，追求零缺陷的質(zhì)量目標。質(zhì)量是生存的根本，質(zhì)量體系文件應(yīng)本著系統(tǒng)性、協(xié)調(diào)性、唯一性和適用性的原則。臨床檢驗是應(yīng)用成熟的技術(shù)及方法對患者的臨床標本進行檢測，要求每一次檢測以及對每一份標本的檢測都必須準確、及時，這就要求實驗室必須有嚴格的質(zhì)量保證程序[11-12]。在帶教過程中，要培養(yǎng)進修生質(zhì)量控制的理念，掌握定性及定量項目質(zhì)控框架的建立，熟知質(zhì)控規(guī)則。以乙肝病毒（HBV）為例，每批檢測至少有待檢血清、HBV-PCR反應(yīng)液20管（20μl/管）、HBVDNA裂解液、陽性模板、溴化乙錠、PCR擴增儀、電泳儀、紫外線分析儀，質(zhì)控品隨機放在臨床標本中，參與從提取到擴增的全過程，讓進修生理解室內(nèi)質(zhì)量控制是控制實驗的重復性和精密度，檢驗實驗的準確度，提高本室常規(guī)工作中的批間、批內(nèi)標本檢測的一致性[13-14]。真正做到“寫你所做、做你所寫、記錄你做和分析你做”，明確人員的職責、權(quán)限和行為規(guī)范，為實驗室實現(xiàn)質(zhì)量目標提供最有效、最切實可行的辦法。

6 提升操作技能，夯實理論知識

除了掌握理論知識，還應(yīng)加強進修生的操作技能，更好地將理論與實踐相結(jié)合，學習過程中熟讀試劑說明書及項目SOP。能夠熟練掌握所學項目的方法學性能驗證和實驗操作，樣本的結(jié)果分析處理。精密度、正確度、線性、抗干擾能力等均為定量檢測方法和程序分析性能驗證內(nèi)容，而測定下限、準確度以及特異性等均為定性檢測項目中應(yīng)該驗證的內(nèi)容[15-16]。熒光定量PCR儀和移液器均為臨床基因擴增實驗室至關(guān)重要的設(shè)備，帶教老師需要就此儀器進行詳細和全面的普及介紹，其中需包括PCR儀器使用方法、儀器保養(yǎng)、注意事項等[17]。同時移液器的正確使用十分關(guān)鍵，很容易在使用中出現(xiàn)各種細節(jié)問題，影響檢測結(jié)果，如移液器吸樣過快，導致氣溶膠產(chǎn)生，增加職業(yè)暴露風險，吸樣量不足，加樣器不穩(wěn)污染其他標本等，使得檢測結(jié)果存在較大出入等。使用后未將移液器歸回最大量程等，這些都將直接導致實驗結(jié)果的偏差。因此要求進修生的所有操作必須在帶教老師的指導、監(jiān)督下完成，當場糾正學生錯誤或不當?shù)牟僮鞑⒄f明原因，以確保結(jié)果的準確性。

7 制訂考核制度

進修生需要在培訓完成后根據(jù)檢驗操作標準通過考核，具體包括檢測項目操作、設(shè)備維護、操作熟練度、檢測結(jié)果準確性測評以及實驗室規(guī)章制度、臨床檢測意義等相關(guān)理論知識，所有進修生需通過考核標準。

8 結(jié)語

我國人口密度較高，在國家的重點關(guān)注下，很多基層醫(yī)院均紛紛建立了分子生物實驗室。分子生物學技術(shù)發(fā)展迅速，已應(yīng)用到臨床各個方面，作為醫(yī)學檢驗分子生物實驗室檢驗人員，必須具有規(guī)范的操作技能、扎實的理論知識，才能更好地服務(wù)于臨床。針對不同目的進修學員要因材施教，計劃合理、貼近實際的學習方案，使進修生通過培訓，熟練掌握和運用臨床基因擴增實驗室的基礎(chǔ)知識、流程規(guī)范、管理體系、質(zhì)量控制和性能驗證等，為今后從事日常臨床分子檢驗工作積累經(jīng)驗。進修生在按照培訓計劃完成規(guī)定的培訓任務(wù)后，應(yīng)分階段進行考核，根據(jù)人員的接受程度隨時進行調(diào)整，了解進修生在培訓過程中所存在的問題并及時解決，真正把培訓工作落到實處。在帶教過程中，我們還需與時俱進，努力提高自身知識水平，總結(jié)經(jīng)驗方法，加強交流，做到教學相長，以此培養(yǎng)出更多技能全面、理論扎實、醫(yī)德高尚的優(yōu)質(zhì)檢驗人才。