一款含藍(lán)銅勝肽精華液的制備及其抗皺功效評價

趙絢 王領(lǐng) 劉佳偉

關(guān)鍵詞：藍(lán)銅勝肽；抗皺；功效評價

隨著社會的進(jìn)步、科學(xué)技術(shù)的發(fā)展以及生活水平的提高，人們追求天然、綠色、健康安全的意識日漸增強(qiáng)，綠色化、功能化的化妝品深受人們青睞。近年來，以勝肽為主要活性成分的護(hù)膚品在市場上比比皆是，其中蟄伏多年的藍(lán)銅勝肽開始重新活躍，頻頻出現(xiàn)在各種化妝品配方中，被稱為“寶藏成分”。

藍(lán)銅勝肽（CopperTripeptide-1，GHK-Cu）為甘氨酰-組氨酰-賴氨酸三肽（GHK）與二價銅離子相結(jié)合而成的化合物，因其與水相溶后溶液為藍(lán)色，也被稱為“藍(lán)銅肽”[1]。藍(lán)銅勝肽是一種活性三肽，在1973年，由Pickart研究團(tuán)隊(duì)首次從“人的血漿里分離純化而得”[1]。通過進(jìn)一步的研究，學(xué)者們發(fā)現(xiàn)Cu2+與藍(lán)銅勝肽之間擁有良好的親和性，兩者間能自發(fā)結(jié)合從而形成GHK-Cu化合物[2，3]。藍(lán)銅勝肽以GHK為載體，絡(luò)合和運(yùn)載Cu2+進(jìn)入細(xì)胞從而發(fā)揮相應(yīng)的作用[2，3]。

銅離子的存在，對自然界中多種生物的生命活動都有著十分重要的作用與功能，包括細(xì)胞呼吸作用、抗氧化防御、結(jié)締組織的形成和血液凝固等多種生命活動過程[1-3]。除此之外，藍(lán)銅勝肽具有多種優(yōu)勢：（1）刺激膠原蛋白與彈力蛋白形成，緊致松弛肌膚，逆轉(zhuǎn)老化肌膚變薄，修復(fù)保護(hù)性肌膚屏障蛋白[4，5]；（2）恢復(fù)肌膚修復(fù)能力，增加皮膚細(xì)胞間黏質(zhì)產(chǎn)生，改善老化肌膚結(jié)構(gòu)，平滑粗糙肌膚，減少皮膚受損[5]；（3）刺激葡萄糖聚胺形成，增加皮膚厚度，減少皮膚松弛，緊實(shí)肌膚[6，7]等。因此，藍(lán)銅勝肽的重要性不言而喻，成功的從眾多多肽中脫穎而出，成為護(hù)膚品領(lǐng)域的新貴。其抗衰老的原理是藍(lán)銅勝肽可以促進(jìn)膠原蛋白生成，刺激葡萄糖聚胺合成，而膠原蛋白增長可以增強(qiáng)皮膚彈性，改善細(xì)紋，使面部飽滿堅(jiān)實(shí)。藍(lán)銅勝肽性情溫和兼具多種功效，可抗老、可修復(fù)、可抗皺、可抑制脫發(fā)、可抗自由基等[7]。多種功效協(xié)同作用使其獨(dú)一無二，成為現(xiàn)下精簡護(hù)膚的一種有效手段。

材料與方法

01材料與儀器

甘油聚醚-26，北京信諾久恒科貿(mào)有限公司；雙丙甘醇，北京信諾久恒科貿(mào)有限公司；透明質(zhì)酸鈉，華熙生物科技股份有限公司；皺波角叉菜，上海博爍實(shí)業(yè)有限公司；泛醇，上海理鴻化工科技有限公司；PEG/PPG-17/4二甲基醚，上海理鴻化工科技有限公司；1，2-己二醇，北京信諾久恒科貿(mào)有限公司；對羥基苯乙酮，北京信諾久恒科貿(mào)有限公司；三肽-1銅，山東濟(jì)肽生物科技有限公司。

面部影像分析VISIA圖像分析軟件（Canfied公司，美國）、皮膚彈性測試探頭Cutometer（MPA580，德國CK公司）、皮膚顯微鏡及活性皮膚表面分析系統(tǒng)VisioScan（VC20plus，德國CK公司）

測試產(chǎn)品為含有藍(lán)銅勝肽的化妝品，實(shí)驗(yàn)室自制，詳見表1。

02含藍(lán)銅勝肽的精華液配方組成及工藝流程

將A相中甘油聚醚-26、雙丙甘醇、透明質(zhì)酸鈉、皺波角叉菜進(jìn)行預(yù)分散，后加入剩余其他原料，放入85℃水浴鍋中攪拌均勻，攪拌器轉(zhuǎn)速為300r/min，保溫30min后降溫，當(dāng)產(chǎn)品溫度降至65℃時加入B相中1，2-己二醇和對羥基苯乙酮，攪拌均勻。繼續(xù)降溫，產(chǎn)品溫度降至45℃時，加入剩余其他原料，攪拌均勻，得含藍(lán)銅勝肽的精華液。

03方法

3.1受試者篩選

受試者篩選工作參考2015版《化妝品安全技術(shù)規(guī)范》。受試者的選擇遵循人體測試的醫(yī)學(xué)和倫理學(xué)標(biāo)準(zhǔn)，所有受試者的測試均必須出于受試者本人自愿，并在測試前簽署知情同意書。

招募健康男女受試者30人，年齡為18～45歲，志愿者排除條件符合《化妝品接觸性皮炎診斷標(biāo)準(zhǔn)及處理原則》納入、排除標(biāo)準(zhǔn)。

3.2產(chǎn)品評價

參照2015版《化妝品安全技術(shù)規(guī)范》對所制備產(chǎn)品進(jìn)行安全性、穩(wěn)定性、感官評價。

3.3產(chǎn)品使用及測試安排

3.3.1實(shí)驗(yàn)樣品使用方式

受試者每日早晚潔面后，按照產(chǎn)品使用說明使用產(chǎn)品，每次使用0.3g～0.5g（一至兩泵）精華，輕輕按摩至吸收，實(shí)驗(yàn)期間停用其他抗皺護(hù)膚品。

3.3.2測試部位

面部左右臉頰部位。

3.3.3測試指標(biāo)

面部VISIA圖像分析、皮膚彈性數(shù)值、皮膚粗糙度數(shù)值

3.3.4對照組選擇

本研究為面部皮膚抗皺功效測試，對照選擇以自身前后對照。將所有受試者使用產(chǎn)品前的皮膚皺紋分值、皮膚粗糙度、皮膚彈性測試數(shù)據(jù)作為對照，分別在使用產(chǎn)品第14和28天后，測試受試者相應(yīng)的指標(biāo)作為實(shí)驗(yàn)組。

3.3.5實(shí)驗(yàn)流程

①志愿者由研究人員進(jìn)行篩選，滿足入組、排除標(biāo)準(zhǔn)，并且簽署志愿者協(xié)議書后參加測試，實(shí)驗(yàn)開始前48h停用類似功效化妝品。

②實(shí)驗(yàn)測試時，清水清洗受試部位，在溫度21.0℃±1.0℃，相對濕度50%±10%RH的恒溫恒濕環(huán)境中，靜坐30min之后進(jìn)行數(shù)據(jù)采集。填寫自評問卷。發(fā)放樣品和產(chǎn)品使用說明。

③受試者按照使用說明進(jìn)行使用，周期為28天，分別在第0天、第14天、第28天進(jìn)行皮膚測試和回訪。

3.3.6受試者自我評估（問卷調(diào)查）

在第0天、第14天、第28天測試時對受試者進(jìn)行產(chǎn)品使用評估調(diào)查。

3.4數(shù)據(jù)分析

應(yīng)用EXCEL軟件對各個測量值進(jìn)行描述性統(tǒng)計(jì)，包括數(shù)量、最大值、最小值、均值、標(biāo)準(zhǔn)差等。

應(yīng)用SPSS軟件Shapiro-WilkTest方法進(jìn)行數(shù)據(jù)改善值正態(tài)分布的顯著性檢驗(yàn)，若Sig.（雙側(cè)）>0.05，則呈正態(tài)分布，進(jìn)行配對樣本t檢驗(yàn)，顯著性差異水平α取0.05；若Sig.（雙側(cè)）<0.05，則呈非正態(tài)分布，進(jìn)行Wilcoxon檢驗(yàn)，顯著性差異水平α取0.05，分析使用產(chǎn)品前后皮膚參數(shù)是否具有顯著性差異。

結(jié)果與討論

01人體功效評價實(shí)驗(yàn)結(jié)果

1.1皮膚指標(biāo)分析測試結(jié)果

1.2皮膚抗衰指標(biāo)結(jié)果分析

皮膚老化是機(jī)體衰老的直接體現(xiàn)，主要表現(xiàn)為皺紋增生、皮膚干燥萎縮、色素沉著和失去彈性等[8]。皺紋和粗糙度是反映肌膚年輕狀態(tài)的重要指標(biāo)，皺紋分值和粗糙度值越低，肌膚越光滑，更顯年輕態(tài)。面部皺紋分值、粗糙度分值測量結(jié)果見表2，表3和圖1，在測試周期內(nèi)，與本底值相比，面部皺紋分值和粗糙度分值均呈下降趨勢，面部皺紋平均值在第14天和28天時，分別降低10.82%和21.13%，且面部皺紋分值改善表現(xiàn)出顯著性差異明顯（0.001≤P＜0.01）。另從圖2可見，測試者使用樣品后面部皺紋明顯減少。面部粗糙度平均值在第14天和28天時，分別降低19.91%和32.00%，且在第28天時，面部粗糙度值改善表現(xiàn)出顯著性差異明顯（0.001≤P＜0.01）。另從圖3可見，測試者使用樣品后面部粗糙度明顯減輕。

1.3皮膚彈性指標(biāo)結(jié)果分析

皮膚衰老過程中皮膚真皮層的變化主要為膠原蛋白減少，成纖維細(xì)胞增殖能力下降。皮膚衰老問題主要體現(xiàn)在皮膚粗糙增厚，彈性下降，皺紋增多，出現(xiàn)色斑，皮膚暗淡沒光澤[8，9]。補(bǔ)充膠原蛋白，增強(qiáng)彈力蛋白活性，改善皮膚彈性是延緩皮膚衰老的有效方法。面部彈性分值R2、Q1值測量結(jié)果見表2，表3和圖4，在測試周期內(nèi)，與本底值相比，面部彈性R2和Q1分值均呈上升趨勢，面部彈性R2值平均值在第14天和28天時，分別升高8.57%和13.18%，且在第28天時，面部彈性R2值改善表現(xiàn)出顯著性差異明顯（0.001≤P＜0.01）。面部彈性Q1平均值在第14天和28天時，分別上升8.63%和12.23%，且在第28天時，面部彈性Q1值改善表現(xiàn)出顯著性差異明顯（0.001≤P＜0.01）。

通過VISIA面部影像分析和皮膚表面分析可知，測試期內(nèi)，使用樣品后測試者面部皺紋和粗糙度明顯減少，表明該測試樣品具有一定的緊致肌膚和改善細(xì)紋的作用。通過面部彈性數(shù)據(jù)表明，與本底值相比，皮膚彈性數(shù)值呈上升趨勢，測試數(shù)據(jù)表明該樣品能夠有效提高皮膚彈性，使肌膚緊致。

02受試者主觀評價結(jié)果

受試者在使用28天后，對面部水潤度改善程度滿意的占比100%，對面部緊致度改善程度滿意的占比96.67%，對面部光澤感改善程度滿意的占比96.67%，對面部粗糙度改善程度滿意的占比96.67%，對面部彈性改善程度滿意的占比100%，對面部細(xì)紋改善程度滿意的占比100%，對面部整體改善程度滿意的占比100%。

結(jié)論

藍(lán)銅勝肽具有較好的抗衰老效果，并且可以刺激膠原蛋白與彈力蛋白形成，緊實(shí)肌膚及減少細(xì)紋，可用于制備具有一定功效的化妝品。本文通過配方設(shè)計(jì)制備了含藍(lán)銅勝肽的精華液，并運(yùn)用人體實(shí)驗(yàn)法通過30名受試者連續(xù)使用該精華液28天的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，進(jìn)一步驗(yàn)證了其抗皺功效，結(jié)果表明含藍(lán)銅勝肽的精華液有明顯的補(bǔ)水、提高皮膚彈性的效果，在降低皮膚粗糙度、淡化細(xì)紋方面也有顯著效果。因此，藍(lán)銅勝肽具有較好的開發(fā)價值和開發(fā)前景。