蒲桃殼化學成分的研究

曾 慧，周慧嫻，謝媛媛，向麗敏*，王淑美*

(1.廣東藥科大學，廣東 廣州 510006；2.國家中醫(yī)藥管理局中藥數(shù)字化質(zhì)量評價技術(shù)重點研究室，廣東 廣州 510006；3.廣東中藥質(zhì)量工程技術(shù)研究中心，廣東 廣州 510006)

蒲桃殼為桃金娘科蒲桃屬植物蒲桃Syzygiumjambos(L.)Alston的干燥果皮，又名水石榴、風鼓等，廣泛分布于我國南方各省[1]。收載于《本草綱目拾遺》，始載于《羅浮志》[2]，其根、莖、葉、果實和種子均可入藥[3]。蒲桃殼具有暖胃健脾、溫肺止咳、破血消腫之功效，主治胃寒呃逆、脾虛泄瀉、久痢、肺虛寒嗽、疽瘤等癥[4]。但是目前對于蒲桃殼化學成分的研究較少。

為了進一步明確蒲桃殼的主要活性成分，為蒲桃殼資源的綜合利用和開發(fā)提供參考，本實驗在前期研究的基礎(chǔ)上，繼續(xù)對蒲桃殼的化學成分進行研究，從蒲桃殼乙酸乙酯部位分離得到10個化合物，其中化合物1～6、10為首次從蒲桃屬中分離得到，化合物7～9為首次從該植物中分離得到。

1 材料

Avance Ⅲ 500 MHz核磁共振波譜儀(德國Bruker公司)；UHPLC-Q-Orbitrap HRMS液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用系統(tǒng)(美國Thermo Fisher Scientific公司)；LC 3050N型HPLC儀(北京創(chuàng)新通恒色譜技術(shù)有限公司)；YMC-Pack ODS-A半制備型色譜柱(250 mm×20 mm，5 μm，日本YMC公司)；YMC-Pack ODS-A半制備型色譜柱(250 mm×10 mm，5 μm，日本YMC公司)。薄層層析硅膠GF254、柱層析硅膠(100～200目、200～300目，青島海洋化工有限公司)；Sephadex LH-20凝膠柱(瑞士GE公司)。所用試劑均為分析純或色譜純(天津市致遠化學試劑有限公司)。

蒲桃果實2019年6月采自廣東省廣州市廣州大學城廣東藥科大學校園，經(jīng)廣東藥科大學中藥學院向麗敏博士鑒定為蒲桃Syzygiumjambos(L.)Alston的果實。將上述蒲桃果實去核，烘干得蒲桃殼藥材。藥材標本(編號201906)保存于廣東藥科大學中藥學院。

2 提取與分離

將15 kg干燥蒲桃殼粉碎，加入70%乙醇60 L回流提取4次，每次2 h，減壓回收乙醇得到浸膏，加入適量水溶解，依次用等體積的石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取，55 ℃減壓回收各溶劑，分別得到石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取部位。

取乙酸乙酯萃取部位149.1 g，經(jīng)硅膠柱層析分離，以二氯甲烷-甲醇(100∶ 0～1∶ 1)梯度洗脫，薄層檢識合并得18個組分Fr.1～Fr.18。Fr.8經(jīng)硅膠柱，以石油醚-乙酸乙酯(50∶ 1～1∶ 1)梯度洗脫，得15個組分；Fr.8-13經(jīng)Sephadex LH-20柱，以甲醇洗脫，得9個組分；Fr.8-13-5經(jīng)ODS柱，以甲醇-水(20∶ 80～100∶ 0)梯度洗脫，得9個組分；Fr.8-13-5-6經(jīng)半制備HPLC反復(fù)純化，得化合物7(40.0 mg)。Fr.10經(jīng)硅膠柱，以石油醚-乙酸乙酯(5∶ 1～1∶ 2)梯度洗脫，得12個組分；Fr.10-7經(jīng)ODS柱，以甲醇-水(20∶ 80～100∶ 0)梯度洗脫，得26個組分；其中組分Fr.10-7-4析晶得化合物4(12.5 mg)。Fr.10-7-2經(jīng)Sephadex LH-20柱，以甲醇洗脫，得5個組分，其中組分Fr.10-7-2-2析晶得化合物9(8.4 mg)；Fr.10-7-2-1經(jīng)半制備HPLC反復(fù)純化，得化合物10(81.4 mg)。Fr-10-7-14經(jīng)Sephadex LH-20柱，以甲醇洗脫，得4個組分；Fr-10-7-14-2經(jīng)半制備HPLC反復(fù)純化，得化合物5(98.3 mg)。Fr.12經(jīng)硅膠柱，以二氯甲烷-甲醇(50∶ 1～0∶ 100)梯度洗脫，得14個組分；Fr.12-5經(jīng)Sephadex LH-20柱，以二氯甲烷-甲醇(2∶ 1)洗脫得化合物8(58.6 mg)。Fr.13經(jīng)硅膠柱，以二氯甲烷-甲醇(100∶ 0～2∶ 1)梯度洗脫，得13個組分；Fr.13-9經(jīng)Sephadex LH-20柱，以二氯甲烷-甲醇(2∶ 1)洗脫，得12個組分；Fr.13-9-5經(jīng)ODS柱，以甲醇-水(20∶ 80～100∶ 0)梯度洗脫，得14個組分；Fr.13-9-5-3再經(jīng)半制備HPLC(甲醇-水15∶ 85)純化，得化合物1(65.4 mg)、2(40.0 mg)。Fr.13-10反復(fù)經(jīng)Sephadex LH-20柱，以甲醇洗脫，得Fr.13-10-4-1～Fr.13-10-4-4；Fr.13-10-4-3經(jīng)半制備HPLC(甲醇-水40∶ 60)純化，得化合物3(14.8 mg)。Fr.15經(jīng)ODS柱色譜分離，以甲醇-水(20∶ 80～100∶ 0)梯度洗脫，得15個組分；Fr.15-5經(jīng)Sephadex LH-20柱，以甲醇洗脫，得6個組分；Fr.15-5-2再經(jīng)半制備HPLC以甲醇-水(10∶ 90)純化，得化合物6(36 mg)。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1:白色粉末。HRESI-MS給出準分子離子峰[M-H]-m/z：269.103 2(calcd.for C13H17O6269.102 5)，提示其分子量270。1H-NMR(500 MHz，DMSO-d6)δ：7.33(5H，m，H-2，3，4，5，6)，4.24(1H，d，J=7.8 Hz，H-1′)；13C-NMR(125 MHz，DMSO-d6)δ：138.1(C-1)，128.1(C-3，5)，127.6(C-2，6)，127.3(C-4)，102.1(C-1′)，77.0(C-3′)，76.8(C-5′)，73.5(C-2′)，70.2(C-4′)，69.5(C-7)，61.2(C-6′)。以上數(shù)據(jù)與文獻[5]報道基本一致，故鑒定為苯甲醇-O-β-D-吡喃葡萄糖苷。

化合物2:白色粉末。HRESI-MS給出準分子離子峰[M+H]+m/z：285.130 7(calcd.for C14H21O6285.133 8)，提示其分子量284。1H-NMR(500 MHz，Methanol-d4)δ：7.23(5H，m，H-2，3，4，5，6)，4.10(1H，m，H-8a)，3.77(1H，m，H-8b)，2.95(2H，m，H-7)；13C-NMR(125 MHz，Methanol-d4)δ：140.2(C-1)，130.1(C-2，6)，129.5(C-3，5)，127.3(C-4)，71.8(C-8)，37.4(C-7)，104.5(C-1′)，78.2(C-3′)，78.1(C-5′)，75.2(C-2′)，71.8(C-4′)，62.9(C-6′)。以上數(shù)據(jù)與文獻[6]報道基本一致，故鑒定為苯乙醇-O-β-D-吡喃葡萄糖苷。

化合物3:白色粉末。HRESI-MS給出準分子離子峰[M-H]-m/z：297.134 0(calcd.for C15H21O6297.133 8)，提示其分子量298。1H-NMR(500 MHz，DMSO-d6)δ：7.27(2H，m，H-3，5)，7.22(2H，m，H-2，6)，7.17(1H，m，H-4)，4.11(1H，d，J=7.8 Hz，H-1′)，3.65～3.80(2H，m，H-8)，2.65(2H，t，J=7.7 Hz，H-7)；13C-NMR(125 MHz，DMSO-d6)δ：141.8(C-1)，128.4(C-3，5)，128.2(C-2，6)，125.7(C-4)，102.9(C-1′)，76.8(C-5′)，76.7(C-3′)，73.5(C-2′)，70.1(C-4′)，67.8(C-9)，61.1(C-6′)，31.5(C-7)，31.1(C-8)。以上數(shù)據(jù)與文獻[7]報道基本一致，故鑒定為苯丙醇-O-β-D-吡喃葡萄糖苷。

化合物4:無色針狀晶體(甲醇)。HRESI-MS給出準分子離子峰[M-H]-m/z：185.048 8(calcd.for C8H9O5185.045 0)，提示其分子量186。1H-NMR(500 MHz，Methanol-d4)δ：7.94(1H，s，H-6)，4.52(2H，s，H-7)，3.57(2H，q，J=7.0 Hz，H-8)，1.19(3H，t，J=7.0 Hz，H-9)；13C-NMR(125 MHz，Methanol-d4)δ：171.0(C-4)，149.4(C-3)，146.2(C-6)，144.5(C-5)，141.3(C-2)，67.5(C-8)，65.3(C-7)，15.5(C-9)。以上數(shù)據(jù)與文獻[8]報道基本一致，故鑒定為2-乙氧基亞甲基-3，5-二羥基-γ-吡喃酮。

化合物5:白色粉末。HRESI-MS給出準分子離子峰[M-H]-m/z：263.128 7(calcd.for C15H19O4263.128 4)，提示其分子量264。1H-NMR(500 MHz，Methanol-d4)δ：7.78(1H，d，J=16.1 Hz，H-4)，6.25(1H，d，J=16.1 Hz，H-5)，5.92(1H，s，H-8)，5.75(1H，s，H-2)，2.53(1H，d，J=16.9 Hz，H-10a)，2.19(1H，d，J=16.9 Hz，H-10b)，2.04(3H，s，H-15)，1.93(3H，s，H-14)，1.06(3H，s，H-12)，1.03(3H，s，H-13)；13C-NMR(125 MHz，Methanol-d4)δ：201.1(C-9)，169.6(C-1)，166.6(C-3)，151.1(C-7)，138.1(C-5)，129.6(C-4)，127.7(C-8)，119.8(C-2)，80.7(C-6)，50.8(C-10)，43.0(C-11)，24.8(C-15)，23.7(C-13)，21.4(C-14)，19.8(C-12)。以上數(shù)據(jù)與文獻[9]報道基本一致，故鑒定為脫落酸。

化合物6:淡黃色固體。HRESI-MS給出準分子離子峰[M-H]-m/z：385.186 3(calcd.for C19H29O8385.186 3)，提示其分子量386。1H-NMR(500 MHz，DMSO-d6)δ：4.32(1H，m，H-9)，4.17(1H，d，J=7.8 Hz，H-1′)，3.63(1H，m，H-6′)，2.88～3.18(4H，m，H-2′，3′，4′，5′)，2.16(1H，d，J=16.8 Hz，H-2a)，2.05(1H，d，J=16.7 Hz，H-2b)，1.81(3H，d，J=13.0 Hz，H-13)，1.18(3H，d，J=6.4 Hz，H-10)，0.93(3H，s，H-11)，0.92(3H，s，H-12)；13C-NMR(125 MHz，DMSO-d6)δ：197.3(C-3)，163.9(C-4)，133.3(C-8)，130.3(C-7)，125.6(C-5)，77.8(C-6)，74.5(C-9)，49.3(C-2)，40.9(C-1)，24.0(C-12)，23.0(C-11)，20.8(C-10)，18.8(C-13)，100.9(C-1′)，76.8(C-3′，5′)，73.6(C-2′)，70.0(C-4′)，61.1(C-6′)。以上數(shù)據(jù)與文獻[10]報道基本一致，故鑒定為roseoside。

化合物7:無色油狀。HRESI-MS給出準分子離子峰[M-H]-m/z：357.134 1(calcd.for C20H21O6357.133 8)，提示其分子量358。1H-NMR(500 MHz，DMSO-d6)δ：8.93(2H，s，H-4，4′)，6.89(2H，d，J=1.7 Hz，H-2，2′)，6.80～6.68(4H，m，H-5，5′，6，6′)，4.61(2H，d，J=4.3 Hz，H-7，7′)，4.12(2H，m，H-9b，9b′)，3.76(6H，s，2×OCH3)，3.72(2H，dd，J=9.1，3.7 Hz，H-9a，9a′)，3.03(2H，dd，J=6.4，4.6 Hz，H-8，8′)；13C-NMR(125 MHz，DMSO-d6)δ：147.5(C-4，4′)，145.9(C-3，3′)，132.2(C-1，1′)，118.6(C-6，6′)，115.1(C-5，5′)，110.4(C-2，2′)，85.2(C-7，7′)，70.9(C-9，9′)，55.6(3，3′-OCH3)，53.6(C-8，8′)。以上數(shù)據(jù)與文獻[11]報道基本一致，故鑒定為(+)-pinoresinol。

化合物8:白色粉末。HRESI-MS給出準分子離子峰[M-H]-m/z：153.018 2(calcd.for C7H5O4153.018 8)，提示其分子量154。1H-NMR(500 MHz，DMSO-d6)δ：6.78(1H，d，J=8.2 Hz，H-5)，7.29(1H，dd，J=8.2，2.1 Hz，H-6)，7.33(1H，d，J=2.1 Hz，H-2)；13C-NMR(125 MHz，DMSO-d6)δ：167.3(-COOH)，150.0(C-4)，144.9(C-3)，121.9(C-1)，121.7(C-6)，116.6(C-2)，115.2(C-5)。以上數(shù)據(jù)與文獻[12]報道基本一致，故鑒定為原兒茶酸。

化合物9:白色針狀晶體(甲醇)。HRESI-M給出準分子離子峰[M-H]-m/z：122.023 5(calcd.for C6H4NO2122.024 2)，提示其分子量123。1H-NMR(500 MHz，DMSO-d6)δ：13.33(1H，s，-COOH)，9.07(1H，dd，J=2.1，0.6 Hz，H-2)，8.78(1H，dd，J=4.8，1.7 Hz，H-6)，8.26(1H，dt，J=7.9，2.0 Hz，H-4)，7.54(1H，ddd，J=7.9，4.8，0.8 Hz，H-5)；13C-NMR(125 MHz，DMSO-d6)δ：166.3(-COOH)，153.3(C-6)，150.2(C-2)，136.9(C-4)，126.6(C-3)，123.8(C-5)。以上數(shù)據(jù)與文獻[13]報道基本一致，故鑒定為煙酸。

化合物10:無色油狀。HRESI-MS給出準分子離子峰[M+H]+m/z：163.060 0(calcd.for C6H9O5163.060 6)，提示其分子量162。1H-NMR(500 MHz，Methanol-d4)δ：4.51(1H，dd，J=7.3，4.7 Hz，H-2)，2.81(1H，dd，J=15.9，4.7 Hz，H-3a)，2.71(1H，dd，J=15.9，7.3 Hz，H-3b)，3.74，3.69(3H，s，2×OCH3)；13C-NMR(125 MHz，Methanol-d4)δ：175.1(C-1)，172.6(C-4)，68.7(C-2)，52.8，52.4(2×OCH3)，40.0(C-3)。以上數(shù)據(jù)與文獻[14]報道基本一致，故鑒定為蘋果酸二甲酯。

4 討論

本實驗在前期研究的基礎(chǔ)上，繼續(xù)對蒲桃殼的化學成分進行研究，從中分離得到10個化合物，鑒定出1個吡喃酮類(4)、1個木脂素類(7)、1個二甲酯類(10)、3個有機酸類(5、8～9)、4個糖苷類化合物(1～3、6)，其中化合物1～6、10為首次從蒲桃屬中分離得到；化合物7～9為首次從該植物中分離得到?；衔?具有較好的抗腫瘤、降血糖及抗炎活性[15]；化合物1～3具有抗補體活性[16]；化合物8具有顯著的抑菌[17]、抗氧化[18]及降血糖活性[19]。然而，本研究僅限于蒲桃殼乙酸乙酯部位的分離，對于其藥理作用及其機理，仍需要進一步的藥理研究，以期為蒲桃殼化學成分的生物活性評價與藥用研究提供基礎(chǔ)。