高良姜素對卵巢癌A2780細(xì)胞增殖、遷移和凋亡影響的研究

任春慧 馮 晨 李婉玉 方 超 毛藝純 馮 華*

（1.牡丹江醫(yī)學(xué)院附屬紅旗醫(yī)院核磁共振科，黑龍江 牡丹江，157011；2.牡丹江醫(yī)學(xué)院附屬紅旗醫(yī)院骨外一科，黑龍江 牡丹江,157011；3.牡丹江醫(yī)學(xué)院病理生理學(xué)教研室，黑龍江 牡丹江，157011）

卵巢癌（ovarian cancer，OC）是女性生殖系統(tǒng)最常見的惡性腫瘤之一。約80%患者就診時已處于晚期。其常規(guī)治療方法是手術(shù)切除聯(lián)合化療藥物，但預(yù)后并不十分理想[1-2]。高良姜素（Galangin，GLA）是中藥高良姜的主要活性成分，其不僅具有抗炎、抗氧化、降血脂等作用，而且表現(xiàn)出一定的抗癌活性[3-5]。有研究表明PI3K/AKT信號通路是腫瘤細(xì)胞內(nèi)最重要的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路之一，在腫瘤細(xì)胞增殖、遷移、侵襲、凋亡、細(xì)胞周期進(jìn)程及血管形成中發(fā)揮著重要作用[6-8]。本研究以GLA為研究對象，旨在探討GLA是否對卵巢癌A2780細(xì)胞增殖、遷移以及凋亡能力產(chǎn)生影響，以及是否通過PI3K/AKT信號通路產(chǎn)生抑癌作用。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 試劑

GLA（G100561），相對分子量270.24（MW），純度＞98%，購自上海阿拉丁生物科技有限公司。卵巢癌A2780細(xì)胞購自 武 漢procell公 司；GAPDH（WL01114）、AKT（WL0003b）、p-AKT（Ser473）（WLP001a）、Bcl-2（WL01556）和Bax（WL01637）抗體（萬類生物，沈陽）；CCK-8試劑盒（博士德，武漢）；BCA蛋白定量試劑盒（北京普利萊基因技術(shù)有限公司）；TUNEL細(xì)胞凋亡試劑盒（碧云天，武漢）；流式凋亡檢測試劑盒（萬類生物，沈陽）。

1.1.2 儀器設(shè)備

酶標(biāo)儀（生產(chǎn)企業(yè)：Molecular Devices公司，型號：SpectraMax 190）；熒光正置式生物顯微鏡（生產(chǎn)企業(yè)：日本尼康公司，型號：Eclipse Ci-L）；流式細(xì)胞儀（生產(chǎn)企業(yè)：美國BD公司，型號：Accuri C6）；CO2恒溫細(xì)胞培養(yǎng)箱（生產(chǎn)企業(yè)：日本三洋公司，型號：MCO-20AIC）。

1.2 方法

1.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)

將卵巢癌A2780細(xì)胞加入含10%胎牛血清、1%青霉素和鏈霉素的RPMI 1640培養(yǎng)基中，置于37℃、5% CO2的培養(yǎng)箱培養(yǎng)，根據(jù)細(xì)胞生長情況，隔天換液，鏡下觀察細(xì)胞密度達(dá)到70%～80%時可以進(jìn)行傳代。細(xì)胞每隔2～3天傳代一次。

1.2.2 CCK-8法

A2780細(xì)胞經(jīng)胰酶消化后，離心5 min，1 000 rpm/min，離心半徑10 cm；制備懸液；使用細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)，以8×103個/孔的細(xì)胞密度培養(yǎng)于96孔培養(yǎng)板中過夜，每孔加入100 μL完全培養(yǎng)基，平行設(shè)置3個重復(fù)孔，用不同濃度梯度GLA（0 μmol/mL、1 μmol/mL、5 μmol/mL、10 μmol/mL、20 μmol/mL、30 μmol/mL、40 μmol/mL、50 μmol/mL、60 μmol/mL、70 μmol/mL、80 μmol/mL）作用于A2780細(xì)胞24 h后，向每孔中加入10 μL CCK-8試劑，將96孔培養(yǎng)板置入CO2培養(yǎng)箱中繼續(xù)孵育1～2 h。于酶標(biāo)儀450 nm處測定OD值，根據(jù)測定的OD值繪制細(xì)胞存活率的柱狀圖，細(xì)胞存活率（%）=[OD（實(shí)驗(yàn)組）-OD（空白對照組）]/[OD（正常對照組）-OD（空白對照組）]×100%。確定不同濃度作用下GLA對于卵巢癌SKOV3和A2780細(xì)胞的影響；計(jì)算A2780細(xì)胞的IC50值，IC50=1 g-1[Xm-i（∑p-0.5）]。根據(jù)IC50值，選取細(xì)胞生存率＞60%且數(shù)值較高濃度作為GLA給藥濃度，用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。同時再根據(jù)實(shí)驗(yàn)分組，采用不同時間點(diǎn)（24 h、48 h、72 h）的不同濃度GLA作用于卵巢癌A2780細(xì)胞，于酶標(biāo)儀450 nm處測定各組OD值，根據(jù)測定的OD值繪制細(xì)胞生存曲線。

1.2.3 細(xì)胞分組

取對數(shù)生長期細(xì)胞加入不同濃度GLA，根據(jù)GLA對于卵巢癌A2780細(xì)胞的IC50值確定加藥濃度，共分為4個組：①對照組，即0 μmol/mL組；②10 μmol/mL 組；③20 μmol/mL組；④40 μmol/mL組。

1.2.4 細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)

細(xì)胞傳代，以5×106個/孔細(xì)胞將A2780細(xì)胞常規(guī)培養(yǎng)于6孔板中，倒置顯微鏡下觀察，當(dāng)培養(yǎng)的細(xì)胞融合達(dá)到80%以上時，用200 μL移液器吸頭在6孔板內(nèi)做劃痕，每孔用PBS緩沖液沖洗漂浮細(xì)胞，再分別加入不同濃度（0 μmol/mL、10 μmol/mL、20 μmol/mL、40 μmol/mL）的GLA，在無血清的培養(yǎng)基中繼續(xù)培養(yǎng)。在倒置光學(xué)顯微鏡下，分別于0 h，24 h，48 h在40倍的放大倍數(shù)下拍照獲得圖片。用Image J軟件測量劃痕面積。細(xì)胞遷移率=（0 h劃痕面積-24 h/48 h劃痕面積）/0 h劃痕面積×100%。

1.2.5 流式細(xì)胞術(shù)

細(xì)胞傳代，以5×105個/孔將卵巢癌A2780細(xì)胞常規(guī)培養(yǎng)于6孔板中過夜，再分別加入0 μmol/mL、10 μmol/mL、20 μmol/mL和40 μmol/mL的GLA在CO2培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)24 h，將每孔中的細(xì)胞用不含EDTA的胰酶消化，將細(xì)胞重懸于1 mL預(yù)冷的PBS（pH 7.2～7.3）中洗滌2次；調(diào)整轉(zhuǎn)速為1 500 rpm/min，離心半徑6.5 cm，離心10 min；棄上清，加入500 μL比例為1∶100的Binding buffer；在膜聯(lián)蛋白結(jié)合緩沖液中孵育細(xì)胞制備懸浮液，在室溫避光5 min后，首先添加5 μL的Annexin V-FITC，再次添加10 μL的Propidium Iodide進(jìn)行染色，室溫下避光孵育15 min。在1 h以內(nèi)用流式細(xì)胞儀上機(jī)檢測凋亡細(xì)胞的百分比，細(xì)胞凋亡率（%）=（凋亡細(xì)胞數(shù)/總體細(xì)胞數(shù)）×100%，早期凋亡和晚期凋亡細(xì)胞均記為凋亡細(xì)胞。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。

1.2.6 TUNEL實(shí)驗(yàn)

細(xì)胞傳代，以每孔接種1×105個細(xì)胞將A2780細(xì)胞接種于24孔板中過夜，再分別加入不同濃度（0 μmol/mL、10 μmol/mL、20 μmol/mL和40 μmol/mL）的GLA在CO2培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)細(xì)胞24 h，胰酶消化，用PBS緩沖液沖洗2次，將細(xì)胞于4%的多聚甲醛在pH 7.4的NaH2PO4溶液中固定30 min，PBS緩沖液洗滌細(xì)胞3次，切片浸于0.3%Triton X-100中透化5 min；用PBS緩沖液沖洗3次；在37℃避光情況下向樣品中加入TUNEL 檢測液（50 μL TdT 和450 μL 熒光素標(biāo)記的dUTP液），避光，37℃孵育60 min；DAPI室溫下復(fù)染細(xì)胞核15 min；將細(xì)胞放入終止緩沖液孵育10 min，蒸餾水沖洗，抗熒光衰減封片劑封片，熒光顯微鏡（生產(chǎn)企業(yè)：日本OLYMPUS，型號：Olympus BX51）下觀察陽性細(xì)胞數(shù)，TUNEL陽性產(chǎn)物呈現(xiàn)綠色熒光，DAPI染色細(xì)胞呈現(xiàn)藍(lán)色熒光。100倍放大視野下隨機(jī)選取7個位置進(jìn)行拍照，并進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)，凋亡細(xì)胞百分比=綠色熒光細(xì)胞數(shù)/藍(lán)色核細(xì)胞數(shù)×100%。

1.2.7 Western Blot法

細(xì)胞傳代，取卵巢癌A2780細(xì)胞接種于6孔板中，孵育過夜后用不同濃度（0 μmol/mL、10 μmol/mL、20 μmol/mL和40 μmol/mL）的GLA處理細(xì)胞24 h，胰酶消化，用4℃預(yù)冷的PBS緩沖液沖洗2次，加入RIPA裂解液（RIPA∶PMSF=100∶1），置于冰上裂解0.5～1 h；小心用細(xì)胞刮刀將細(xì)胞沿同一方向刮下，移入1.5 mL EP管中；在4 ℃、12 000 rpm/min（離心半徑6.5 cm）下離心15 min，小心吸取上清液至標(biāo)記的預(yù)冷1.5 mL EP管中。將蛋白樣品利用BCA法測定蛋白濃度，根據(jù)BCA測定試劑盒說明書，配制蛋白標(biāo)準(zhǔn)溶液，根據(jù)檢測樣品數(shù)量，配制所需BCA工作液，按50（A液）：1（B液）比例，充分混勻備用；將制備好的蛋白標(biāo)準(zhǔn)溶液和蛋白樣品加入到96孔板中，向標(biāo)準(zhǔn)孔和樣品孔中加入BCA工作液，200 μL/孔，在37℃培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)30 min；用酶標(biāo)儀測定562 nm波長處每孔的OD值，根據(jù)不同濃度標(biāo)準(zhǔn)蛋白品的OD值，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算樣品中總蛋白濃度；計(jì)算出Western Blot實(shí)驗(yàn)所需上樣量。按照4（5×蛋白上樣緩沖液）：1（蛋白樣品）配制，100℃金屬浴加熱變性10 min，用于后續(xù)Western Blot實(shí)驗(yàn)。將等量的蛋白樣品加入到12%SDS-聚丙烯酰胺凝膠，進(jìn)行電泳分離，恒流200 mA轉(zhuǎn)膜2 h左右。用5%脫脂奶粉對PVDF膜進(jìn)行封閉，加入稀釋的一抗Bcl-2（1∶500），Bax（1∶500），p-AKT（1∶500），AKT（1∶500）以 及GAPDH（1∶500），4 ℃冰箱孵育過夜。次日將過夜的一抗回收，加入TBST洗液，洗滌3次，10 min/次，加入按1∶5 000稀釋的二抗室溫孵育1 h，然后TBST洗滌3次，10 min/次，在避光條件下配制所需ECL發(fā)光液，現(xiàn)用現(xiàn)配，配制比例為A液∶B液=1∶1，備用。將PVDF膜上均勻涂滿ECL發(fā)光液，在化學(xué)發(fā)光成像儀（生產(chǎn)企業(yè)：美國GE公司，型號：Amersham Imager600）下顯影，GAPDH為內(nèi)參，用Image J軟件計(jì)算灰度值。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

2 結(jié)果

2.1 GLA對卵巢癌A2780細(xì)胞增殖的影響

CCK-8法結(jié)果顯示，在加入了GLA的卵巢癌A2780細(xì)胞株中，細(xì)胞增殖率減慢，且隨著GLA濃度增加，細(xì)胞增殖率越低。見圖1A。根據(jù)酶標(biāo)儀測得450 nm的OD值計(jì)算GLA對A2780細(xì)胞的半數(shù)抑制濃度（IC50）約為52.10 μmol/mL。當(dāng)GLA濃度達(dá)到50 μmol/mL時，A2780細(xì)胞存活率不足60%，故將GLA用藥濃度梯度分別設(shè)定為0 μmol/mL（即對照組）、10 μmol/mL、20 μmol/mL和40 μmol/mL。細(xì)胞增殖曲線結(jié)果顯示，隨著藥物作用時間的延長和藥物濃度的增加，與對照組相比，GLA組細(xì)胞存活率顯著降低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。見圖1B。

圖1 GLA對卵巢癌A2780細(xì)胞增殖的影響

2.2 GLA對卵巢癌A2780細(xì)胞遷移的影響

細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，在劃痕24 h和48 h后，和對照組相比，GLA各組細(xì)胞遷移率逐漸降低，劃痕48 h的細(xì)胞遷移率明顯大于劃痕24 h的細(xì)胞遷移率。見圖2A。A2780細(xì)胞在劃痕24 h后，對照組細(xì)胞遷移率為（67.83±2.7）%，而GLA組 細(xì) 胞 遷 移 率 分 別 為（45.33±2.5）%（P＜0.05）、（29.67±7.2）%（P＜0.01）、（26.67±3.7）%（P＜0.01）；在 劃痕48 h后，對照組細(xì)胞遷移率為（86.50±3.5）%，而GLA組細(xì)胞遷移率分別為（59.67±4.1）%（P＜0.05）、（49.33±5.0）%（P＜0.01）、（30.33±4.9）%（P＜0.001）。見圖2B。表明GLA可抑制A2780細(xì)胞的遷移能力，呈劑量依賴性關(guān)系。

圖2 GLA對卵巢癌A2780細(xì)胞遷移的影響

2.3 GLA對卵巢癌A2780細(xì)胞凋亡的影響

流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果顯示，不同濃度GLA作用于A2780細(xì)胞，對照組的總細(xì)胞凋亡率為（5.27±0.82）%，而GLA組的總細(xì)胞凋亡率分別為（6.84±0.82）%，（11.77±0.6）%，（17.79±1.14）%，各組實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。在TUNEL實(shí)驗(yàn)中，TUNEL染色細(xì)胞呈現(xiàn)綠色熒光，DAPI染色細(xì)胞呈現(xiàn)藍(lán)色熒光，以TUNEL陽性細(xì)胞數(shù)與DAPI染色細(xì)胞總數(shù)之比表示凋亡率。結(jié)果顯示，不同濃度GLA作用于A2780細(xì)胞，對照組細(xì)胞凋亡率最低，而GLA各組隨著藥物濃度的提升，細(xì)胞凋亡率呈逐漸上升趨勢，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。數(shù)據(jù)量化見表1。為了進(jìn)一步闡明GLA誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的機(jī)制，應(yīng)用Western Blot實(shí)驗(yàn)檢測不同濃度GLA作用于A2780細(xì)胞其Bcl-2和Bax蛋白的表達(dá)情況。與對照組相比，GLA各組Bcl-2表達(dá)降低，而Bax表達(dá)升高，呈濃度依賴性，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見圖3A、B、C。數(shù)據(jù)量化見表2。結(jié)果表明，GLA以劑量依賴性誘導(dǎo)A2780細(xì)胞的凋亡。

表1 A2780細(xì)胞各實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞凋亡率 （±s，%）

表1 A2780細(xì)胞各實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞凋亡率 （±s，%）

注：與對照組相比，*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001。

組別 細(xì)胞凋亡率GLA（0 μmol/mL） 5.97±0.12 GLA（10 μmol/mL） 26.03±4.82*GLA（20 μmol/mL） 33.98±2.87**GLA（40 μmol/mL） 62.20±4.94***

表2 A2780細(xì)胞各實(shí)驗(yàn)組Bcl-2、Bax蛋白相對表達(dá)量 （±s）

表2 A2780細(xì)胞各實(shí)驗(yàn)組Bcl-2、Bax蛋白相對表達(dá)量 （±s）

注：與對照組相比，*P＜0.05，**P＜0.01。

組別 Bcl-2 Bax GLA（0 μmol/mL） 1.0±0.1 1.0±0.08 GLA（10 μmol/mL） 0.89±0.08* 1.36±0.1*GLA（20 μmol/mL） 0.70±0.06* 1.61±0.07*GLA（40 μmol/mL） 0.62±0.05* 1.85±0.19**

圖3 GLA對卵巢癌A2780細(xì)胞凋亡蛋白的影響

2.4 GLA對卵巢癌A2780細(xì)胞PI3K/AKT信號通路蛋白的影響

應(yīng)用Western Blot實(shí)驗(yàn)檢測經(jīng)過不同濃度GLA干預(yù)后，A2780細(xì)胞PI3K/AKT信號通路相關(guān)蛋白表達(dá)情況。結(jié)果顯示，與對照組相比，GLA各組AKT蛋白表達(dá)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），而p-AKT蛋白的表達(dá)顯著下調(diào)。p-AKT/AKT的比率呈下降趨勢，并且呈濃度依賴性，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見圖4A、B。數(shù)據(jù)量化見表3。

圖4 GLA對卵巢癌A2780細(xì)胞PI3K/AKT信號通路蛋白的影響

表3 A2780細(xì)胞各實(shí)驗(yàn)組p-AKT/AKT蛋白相對表達(dá)量 （±s）

表3 A2780細(xì)胞各實(shí)驗(yàn)組p-AKT/AKT蛋白相對表達(dá)量 （±s）

注：與對照組相比，*P＜0.05。

組別 P-AKT/AKT GLA（0 μmol/mL） 1.0±0.12 GLA（10 μmol/mL） 0.81±0.06*GLA（20 μmol/mL） 0.71±0.06*GLA（40 μmol/mL） 0.58±0.08*

3 討論

隨著人口老齡化的不斷上升，OC患者每年以數(shù)十萬的速度持續(xù)增長，OC已經(jīng)成為影響女性生活質(zhì)量的關(guān)鍵要素之一，并且在一些相對不發(fā)達(dá)國家，防治形勢更為嚴(yán)峻。目前臨床上主要缺乏對早期卵巢癌患者特異性診斷方法和行之有效的治療藥物。因此，尋找新的抗腫瘤藥物已成為目前攻克卵巢癌急需解決的關(guān)鍵問題。GLA作為一種合成類抗癌藥物，脂溶性較強(qiáng)，通過與癌細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)的融合從而進(jìn)入其內(nèi)部來發(fā)揮作用。盧丹等[9]發(fā)現(xiàn)GLA不僅可以通過線粒體途徑促進(jìn)胰腺癌PCNA-1細(xì)胞凋亡，而且還可以調(diào)控LC3-II/LC3-I和P62蛋白表達(dá)誘導(dǎo)細(xì)胞自噬。還有學(xué)者研究表明GLA可以抑制腎癌細(xì)胞增殖、遷移和侵襲，并通過線粒體途徑誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡[10]。

PI3K/AKT信號通路是OC最常見的重要通路，受某些轉(zhuǎn)錄因子和甲基化修飾的調(diào)控，其活性對于平衡細(xì)胞增殖和細(xì)胞死亡至關(guān)重要[11-12]。其對下游的底物分子和蛋白質(zhì)進(jìn)行調(diào)控，包括PI3K家族成員激活、PTEN功能失調(diào)、AKT1和AKT2擴(kuò)增和mTOR活性降低等[13-15]。當(dāng)AKT受到刺激之后，會發(fā)生磷酸化變成一種多功能蛋白激酶，是機(jī)體內(nèi)重要的信號分子調(diào)節(jié)點(diǎn)。Gozde等[16]研究證實(shí)，AKT的激活可增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞增殖并抑制其死亡。MK2206是一種變構(gòu)型AKT抑制劑。它對AKT的亞型表現(xiàn)出了高度特異性的選擇，可以同時靶向AKT1和AKT2。當(dāng)MK2206與中藥丹皮酚聯(lián)合作用于卵巢癌SKOV3和A2780細(xì)胞時，這種聯(lián)合療法不僅誘導(dǎo)了細(xì)胞自噬，而且抑制了小鼠體內(nèi)腫瘤細(xì)胞生長。這說明兩種藥物形成了有效的治療組合，可能最大限度發(fā)揮了藥效動力學(xué)，顯示出了良好的抗癌效果。但目前國內(nèi)外文獻(xiàn)報(bào)道關(guān)于在卵巢癌中GLA作用于PI3K/AKT信號通路的相關(guān)研究則鮮有報(bào)道。

本研究選取GLA作為研究對象，CCK-8結(jié)果顯示GLA可抑制A2780細(xì)胞的增殖能力，并呈時間和濃度依賴性，表明GLA能夠抑制卵巢癌A2780細(xì)胞增殖活性。其他學(xué)者研究表明GLA也可抑制胰腺癌、肺腺癌、胃癌等細(xì)胞的增殖。OC的治療難點(diǎn)不僅是卵巢癌細(xì)胞的增殖能力強(qiáng)，還有其強(qiáng)大的侵襲遷移能力更是會對臨床治療造成巨大的阻礙。細(xì)胞侵襲和遷移能力是評估腫瘤細(xì)胞惡性程度的一項(xiàng)重要指標(biāo)[17-19]。通過劃痕實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)經(jīng)過GLA干預(yù)后的卵巢癌A2780細(xì)胞向劃痕區(qū)域移行減慢，其在劃痕24 h和48 h的遷移率明顯低于對照組。實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明了GLA能夠顯著抑制卵巢癌A2780細(xì)胞的遷移能力，呈劑量依賴性。細(xì)胞凋亡可被一些突變基因所破壞，從而導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞處于失控性生長狀態(tài)，并且能夠在復(fù)雜的微環(huán)境中獲得生存信號[20]。本研究應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)和TUNEL實(shí)驗(yàn)檢測出GLA能夠誘導(dǎo)卵巢癌A2780細(xì)胞的凋亡，并呈現(xiàn)一定的劑量依賴性。Western Blot實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示GLA處理的A2780細(xì)胞Bax蛋白表達(dá)量增加，Bcl-2蛋白的表達(dá)受到了抑制。PI3K/AKT信號傳導(dǎo)通路與OC的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，一直是眾多學(xué)者研究的重點(diǎn)。在本研究中，GLA組AKT蛋白表達(dá)無顯著性差異，而p-AKT蛋白的表達(dá)顯著下調(diào)。p-AKT/AKT的比率呈下降趨勢，并呈濃度依賴性。結(jié)果表明GLA能夠顯著抑制PI3K/AKT信號通路激活，主要是通過調(diào)控PI3K/AKT蛋白磷酸化來發(fā)揮作用。

綜上所述，GLA可能通過調(diào)控PI3K/AKT信號通路來抑制卵巢癌A2780細(xì)胞的增殖和遷移，誘導(dǎo)細(xì)胞的凋亡。通過上述的實(shí)驗(yàn)結(jié)果有力地支持了GLA可以作為一種潛在的治療卵巢癌輔助用藥，并提供了理論依據(jù)。