巴西酒神菊化學(xué)成分及其體外抑制MDA-MB-231細(xì)胞增殖作用

李 影， 黃璐琦， 劉宏棟， 閔建新， 朱金華， 周小青， 李 斌*

(1.江西中醫(yī)藥大學(xué)院士工作站，江西 南昌 330004；2.中國中醫(yī)科學(xué)院，北京 100700；3.江西中醫(yī)藥大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，江西 南昌 330004)

巴西酒神菊Baccharistrimera(Less.) DC為菊科酒神菊屬植物，廣泛分布于南美洲[1]，其地上部位在巴西民間應(yīng)用歷史悠久，具有保肝、抗炎等藥理作用，用于治療肝病、糖尿病、痛風(fēng)等[2-3]。隨著我國中醫(yī)藥事業(yè)的深入發(fā)展，中藥資源的種類和數(shù)量日益減少，故有效開展外來資源的“中藥化”“本土化”研究意義重大。本實(shí)驗(yàn)對(duì)巴西酒神菊進(jìn)行系統(tǒng)的化學(xué)成分和藥理活性研究，從中分離得到25個(gè)化合物，其中化合物1～2、21為首次從酒神菊屬植物中分離得到，3～7、12～15、23～24為首次從巴西酒神菊中分離得到，15～16具有體外抑制MDA-MB-231乳腺癌細(xì)胞增殖的作用。

1 材料

R-1001-VN型核磁共振波譜儀(瑞士Bruker公司)；Triple ESI 5600+ 型高分辨飛行時(shí)間質(zhì)譜聯(lián)用儀(美國AB SCIEX公司)；LC-20AT 型高效液相色譜儀(日本島津公司)；Waters 515 制備型液相色譜儀(美國Waters公司)；ODS反相色譜填料(日本YMC公司)；Sephadex LH-20凝膠(美國Amersham PharmaciaBiotech公司)；中壓制備液相色譜儀(瑞士Buchi公司)；QUINTI電子分析天平(德國賽多利斯公司)。薄層色譜、柱色譜用硅膠(青島海洋化工有限公司)。其他試劑均為市售分析純和色譜純。

藥材于2018年12月采自巴西亞馬遜支流城市北科倫斯，經(jīng)安徽中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院彭華勝教授鑒定為菊科植物巴西酒神菊Baccharistrimera(Less.) DC.的花和枝干。

2 提取與分離

取干燥巴西酒神菊10 kg，95%乙醇加熱回流提取2次，每次2 h，合并提取液，濃縮干燥，得浸膏900.0 g，經(jīng)硅膠柱，依次用石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯、甲醇洗脫，減壓回收溶劑，得石油醚部位0.3 g、二氯甲烷部位400.0 g、乙酸乙酯部位147.6 g、甲醇部位351.8 g。

二氯甲烷部位(400.0 g)經(jīng)大孔樹脂，乙醇-水梯度洗脫，得30%乙醇部位(5.3 g)、50%乙醇部位(90.9 g)、70%乙醇部位(85.3 g)、95%乙醇部位(153.9 g)，即Fr.1～Fr.4。Fr.2(90.9 g)經(jīng)聚酰胺柱，乙醇-水梯度洗脫，得10%乙醇部位(20.1 g)、20%乙醇部位(22.2 g)、30%乙醇部位(9.8 g)、35%乙醇部位(10.9 g)、45%乙醇部位(11.0 g)、50%乙醇部位(16.1 g)，即Fr.2-1～Fr.2-6。Fr.2-3(950.0 mg)經(jīng)硅膠柱，二氯甲烷-甲醇(150∶1～ 0∶1)洗脫，ODS柱乙醇-水(0∶100～100∶0)、制備HPLC(甲醇-水)分離，得化合物4(6.0 mg)、5(2.8 mg)、6(2.5 mg)、7(3.0 mg)、8(50.0 mg)、9(2.8 mg)、10(20.0 mg)、11(2.8 mg)、24(6.0 mg)。Fr.2-4(5.3 g)經(jīng)硅膠柱，二氯甲烷-甲醇(250∶1～ 0∶1)洗脫，重結(jié)晶分離，得化合物14(15.0 mg)。Fr.2-5(1.2 g)經(jīng)硅膠柱，二氯甲烷-甲醇(100∶1～0∶1)洗脫，重結(jié)晶分離，得化合物17(2.8 mg)、19(5.0 mg)、23(2.1 mg)。Fr.3(85.3 g)經(jīng)硅膠柱，石油醚-二氯甲烷(10∶1～ 0∶1)、二氯甲烷-甲醇(200∶1～ 0∶1)梯度洗脫，得Fr.3-1～Fr.3-8，F(xiàn)r.3-1(3.6 g)經(jīng)ODS柱，乙醇-水(0∶100～100∶0)洗脫，重結(jié)晶分離，得化合物16(2.0 g)；Fr.3-4(43.9 g)經(jīng)ODS柱，乙醇-水(0∶100～100∶0)洗脫，制備HPLC(甲醇-水)分離，得化合物12(5.0 mg)、13(3.0 mg)；Fr.3-5(22.7 g)經(jīng)硅膠柱，二氯甲烷-甲醇(200∶1～ 0∶1)洗脫，重結(jié)晶分離，得化合物15(40.0 mg)、18(3.0 mg)。Fr.4(150.0 g)經(jīng)硅膠柱，石油醚-乙酸乙酯(300∶1～ 0∶1)洗脫，得Fr.4-1～Fr.4-10，其中Fr.4-1(3.1 g)重結(jié)晶分離，得化合物21(5.0 mg)；Fr.4-3(3.1 g)經(jīng)硅膠柱，石油醚-乙酸乙酯(250∶1～ 0∶1)洗脫，制備HPLC(70%甲醇-水)純化，得化合物2(4.2 mg)；Fr.4-4(1.2 g)經(jīng)硅膠柱，石油醚-乙酸乙酯(300∶1～ 0∶1)洗脫，重結(jié)晶分離，得化合物1(2.8 mg)；Fr.4-6(1.2 g)分別經(jīng)硅膠柱，石油醚-乙酸乙酯(100∶1～0∶1)洗脫，以及凝膠柱，二氯甲烷-甲醇(2∶1)洗脫，重結(jié)晶分離，得化合物20(2.0 mg)、22(3.0 mg)；Fr.4-7(1.8 g)分別經(jīng)硅膠柱，石油醚-二氯甲烷-(50∶1～0∶1)、二氯甲烷-甲醇(300∶1～ 0∶1)洗脫，以及凝膠柱，二氯甲烷-甲醇(2∶1)洗脫，制備HPLC(甲醇-水)、重結(jié)晶純化，得化合物3(3.0 mg)、25(3.0 mg)。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1：白色針晶(二氯甲烷)，mp 167～168 ℃；HR-ESI-MSm/z：457.404 8[M+H]+，分子式C31H52O2。1H-NMR(600 MHz，CDCl3)δ：0.98(3H，s，H-18)，0.94(3H，d，J=0.8 Hz，H-19)，1.17(3H，s，H-21)，0.92(3H，d，J=6.8 Hz，H-26)，0.84(3H，d，J=6.9 Hz，H-27)，1.08(3H，s，H-28)，1.04(3H，s，H-29)，0.87(3H，d，J=1.0 Hz，H-30)，1.11(3H，s，H-31)；13C-NMR(150 MHz，CDCl3)δ：40.1(C-1)，34.3(C-2)，218.4(C-3)，47.6(C-4)，55.5(C-5)，19.8(C-6)，34.7(C-7)，40.4(C-8)，50.1(C-9)，37.0(C-10)，22.1(C-11)，25.7(C-12)，43.4(C-13)，50.2(C-14)，31.2(C-15)，27.0(C-16)，50.5(C-17)，15.4(C-18)，16.2(C-19)，85.9(C-20)，25.2(C-21)，37.3(C-22)，36.2(C-23)，85.4(C-24)，38.2(C-25)，17.7(C-26)，18.9(C-27)，26.9(C-28)，21.2(C-29)，16.4(C-30)，23.1(C-31)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[4]報(bào)道基本一致，故鑒定為alnincanone。

化合物2：白色粉末；HR-ESI-MSm/z：459.418 6[M+H]+，分子式C31H54O2。1H-NMR(600 MHz，CDCl3)δ：3.20(1H，dd，J=11.5，4.8 Hz，H-3)，0.94(3H，s，H-18)，0.84(3H，s，H-19)，1.16(3H，s，H-21)，0.92(3H，d，J=6.8 Hz，H-26)，0.84(6H，d，J=6.9 Hz，H-27)，0.97(3H，s，H-28)，0.77(3H，s，H-29)，0.86(3H，s，H-30)，1.10(3H，s，H-31)；13C-NMR(150 MHz，CDCl3)δ：39.2(C-1)，27.5(C-2)，79.1(C-3)，39.1(C-4)，56(C-5)，18.4(C-6)，35.4(C-7)，40.4(C-8)，50.8(C-9)，37.3(C-10)，21.6(C-11)，25.7(C-12)，43.3(C-13)，50.2(C-14)，31.2(C-15)，26.9(C-16)，50.5(C-17)，15.6(C-18)，16.3(C-19)，85.9(C-20)，25.1(C-21)，37.3(C-22)，36.1(C-23)，85.3(C-24)，38.1(C-25)，17.7(C-26)，18.9(C-27)，28.1(C-28)，15.5(C-29)，16.5(C-30)，23.1(C-31)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[4]報(bào)道基本一致，故鑒定為 β-alnincanyl。

化合物3：白色粉末；HR-ESI-MSm/z：459.419 3[M+H]+，分子式C31H54O2。1H-NMR(600 MHz，CDCl3)δ：3.20(1H，dd，J=11.5，4.7 Hz，H-3)，0.90(3H，s，H-18)，0.85(3H，s，H-19)，1.16(3H，s，H-21)，1.06(3H，s，H-26)，1.03(3H，d，J=3.6 Hz，H-27)，0.97(3H，s，H-28)，0.77(3H，s，H-29)，0.96(3H，s，H-30)，4.74(1H，s，H-31α)，4.68(1H，s，H-31β)；13C-NMR(150 MHz，CDCl3)δ：39.2(C-1)，27.6(C-2)，79.1(C-3)，39.1(C-4)，56.0(C-5)，18.4(C-6)，35.4(C-7)，40.5(C-8)，50.8(C-9)，37.3(C-10)，21.7(C-11)，24.9(C-12)，42.5(C-13)，50.5(C-14)，31.4(C-15)，27.7(C-16)，49.9(C-17)，16.6(C-18)，16.4(C-19)，75.5(C-20)，25.5(C-21)，39. 5(C-22)，28.5(C-23)，156.7(C-24)，34.2(C-25)，22.1(C-26)，22.1(C-27)，28.1(C-28)，15.5(C-29)，15.6(C-30)，106.3(C-31)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[5]報(bào)道基本一致，故鑒定為 foliasalacins A4。

化合物4：白色晶體(二氯甲烷)，mp 130～132 ℃；HR-ESI-MSm/z：331.190 5[M+H]+，分子式C20H26O4。1H-NMR(600 MHz，CDCl3)δ：6.76(1H，dd，J=7.5，2.2 Hz，H-3)，5.87(1H，t，J=1.7 Hz，H-14)，4.76(2H，d，J=1.8 Hz，H-16)，0.86(3H，d，J=6.6 Hz，H-17)，4.31(1H，d，J=8.1 Hz，H-19α)，3.93(1H，dd，J=8.1，2.2 Hz，H-19β)，0.66(3H，s，H-20)；13C-NMR(150 MHz，CDCl3)δ：19.8(C-1)，27.8(C-2)，135.5(C-3)，138.7(C-4)，45.7(C-5)，34.6(C-6)，27.8(C-7)，36.8(C-8)，38.9(C-9)，48.2(C-10)，34.7(C-11)，22.2(C-12)，169.9(C-13)，115.6(C-14)，173.8(C-15)，71.8(C-16)，15.8(C-17)，169.2(C-18)，73.1(C-19)，17.8(C-20)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[6]報(bào)道基本一致，故鑒定4為desoxyarticulyn。

化合物5：無色油狀物；HR-ESI-MSm/z：325.183 0[M+H]+，分子式C20H36O3。1H-NMR(600 MHz，CDCl3)δ：5.53(1H，t，J=3.4 Hz，H-3)，4.03(1H，q，J=3.3 Hz，H-7)，3.71～3.65(2H，m，H-15)，0.91(3H，d，J=6.6 Hz，H-16)，1.01(3H，d，J=7.2 Hz，H-17)，4.15～4.12(2H，m，H-18)，1.35(3H，s，H-19)，0.99(3H，s，H-20)；13C-NMR(150 MHz，CDCl3)δ：17.9(C-1)，26.6(C-2)，121.9(C-3)，148.8(C-4)，37.4(C-5)，42.4(C-6)，73.8(C-7)，39.2(C-8)，38.1(C-9)，46.4(C-10)，36.7(C-11)，30.2(C-12)，30.2(C-13)，40.0(C-14)，61.4(C-15)，20.0(C-16)，12.6(C-17)，63.2(C-18)，23.5(C-19)，20.3(C-20)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[7]報(bào)道基本一致，故鑒定為7α，15，18-trihydroxy-ent-cleroda-3-ene。

化合物6：無色油狀物；HR-ESI-MSm/z：447.271 5[M+Na]+，分子式C24H40O6。1H-NMR(600 MHz，CDCl3)δ：5.53(1H，s，H-3)，4.01(1H，d，J=2.7 Hz，H-7)，4.02(2H，s，H-15)，4.12(2H，m，H-16)，1.00(3H，s，H-17)，4.13(2H，s，H-18)，1.35(3H，s，H-19)，1.00(3H，s，H-20)，2.05(6H，s，2OCOCH3)；13C-NMR(150 MHz，CDCl3)δ：18.0(C-1)，26.6(C-2)，121.8(C-3)，148.7(C-4)，37.4(C-5)，42.4(C-6)，73.6(C-7)，39.2(C-8)，38.2(C-9)，46.4(C-10)，36.0(C-11)，24.0(C-12)，35.2(C-13)，30.6(C-14)，66.8(C-15)，62.6(C-16)，12.6(C-17)，63.2(C-18)，23.4(C-19)，20.3(C-20)，21.1(-CH3CO)，21.1(-CH3CO)，171.2(-CH3CO)，171.3(-CH3CO)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[7]報(bào)道基本一致，故鑒定為 15，16-diacetoxy-7α，18-dihydroxy-ent-cleroda-3-ene。

化合物7：無色油狀物；HR-ESI-MSm/z：359.219 8[M+Na]+，分子式C20H32O4。1H-NMR(600 MHz，CDCl3)δ：5.52(1H，t，J=3.5 Hz，H-3)，4.02(1H，q，J=3.4 Hz，H-7)，2.44(1H，p，J=7.6 Hz，H-13)，2.17～2.12(1H，m，H-14α)，2.65(1H，dd，J=17.4，8.4 Hz，H-14β)，3.90(1H，dd，J=9.0，7.2 Hz，H-16α)，4.43(1H，dd，J=8.9，7.4 Hz，H-16β)，1.01(6H，d，J=5.4 Hz，H-17，H-20)，4.16～4.07(2H，m，H-18)，1.35(3H，s，H-19)；13C-NMR(150 MHz，CDCl3)δ：18.0(C-1)，26.5(C-2)，121.7(C-3)，148.6(C-4)，37.3(C-5)，42.4(C-6)，73.4(C-7)，39.2(C-8)，38.1(C-9)，46.4(C-10)，37.2(C-11)，26.9(C-12)，36.3(C-13)，34.8(C-14)，177.2(C-15)，73.6(C-16)，12.6(C-17)，63.1(C-18)，23.4(C-19)，20.0(C-20)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[7]報(bào)道基本一致，故鑒定為15，16-epoxy-7α，18-dihydroxy-15-oxo-ent-cleroda-3-ene。

化合物8：白色結(jié)晶(二氯甲烷)，mp 203～205 ℃；HR-ESI-MSm/z：371.183 2[M+Na]+，分子式C20H28O5。1H-NMR(600 MHz，CDCl3)δ：1.32(1H，m，H-1α)，1.40(1H，s，H-1β)，2.34(1H，dd，J=14.2，2.4 Hz，H-2α)，2.17(1H，m，H-2β)，6.71(1H，dd，J=7.5，2.1 Hz，H-3)，4.10(1H，d，J=3.2 Hz，H-7)，2.49(1H，m，H-13)，2.68(1H，dd，J=17.3，8.4 Hz，H-14α)，2.17(1H，m，H-14β)，4.47(1H，m，H-16α)，3.93(1H，dd，J=9.1，7.1 Hz，H-16β)，1.03(3H，d，J=7.1 Hz，H-17)，0.86(3H，s，H-18)，5.30(1H，d，J=7.6 Hz，H-19α)，3.90(1H，dd，J=7.7，2.1 Hz，H-19β)；13C-NMR(150 MHz，CDCl3)δ：19.5(C-1)，27.8(C-2)，135.1(C-3)，139.2(C-4)，45.0(C-5)，40.6(C-6)，72.6(C-7)，40.5(C-8)，38.5(C-9)，48.3(C-10)，34.8(C-11)，26.7(C-12)，36.3(C-13)，36.3(C-14)，176.8(C-15)，73. 3(C-16)，12.1(C-17)，169.9(C-18)，72.8(C-19)，19.4(C-20)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[8]報(bào)道基本一致，故鑒定為 7α-hydroxy-3，13-clerodadiene-16，15：18，19-diolide。

化合物9：白色晶體(二氯甲烷)，mp 151～153 ℃；HR-ESI-MSm/z：333.206 2[M+H]+，分子式C20H28O4。1H-NMR(600 MHz，CDCl3)δ：6.75(1H，dd，J=7.5，2.2 Hz，H-3)，2.67(1H，dd，J=17.3，8.4 Hz，H-14α)，2.17(1H，dd，J=17.3，8.0 Hz，H-14β)，4.46(1H，dd，J=9.0，7.3 Hz，H-16α)，3.93(1H，d，J=1.9 Hz，H-16β)，0.82(3H，d，J=8.0 Hz，H-17)，4.29(1H，d，J=1.8 Hz，H-19α)，3.90(1H，d，J=2.1 Hz，H-19β)，0.59(3H，s，H-20)；13C-NMR(150 MHz，CDCl3)δ：19.8(C-1)，27.8(C-2)，135.6(C-3)，138.7(C-4)，45.7(C-5)，34.5(C-6)，27.8(C-7)，36.7(C-8)，38.8(C-9)，48.1(C-10)，34.8(C-11)，26.6(C-12)，35.4(C-13)，36.3(C-14)，176.9(C-15)，71.8(C-16)，15.7(C-17)，169.4(C-18)，73.4(C-19)，17.9(C-20)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[9]報(bào)道基本一致，故鑒定為6，6，7，8，9，10-hexahydro-7，8-dimethyl-7-[2-(tetrahydro-5-oxo-3-furanyl)ethyl]-1H-naphtho[1,8-c]furan-3(5H)-one。

化合物10：白色晶體(二氯甲烷)，mp 195～196 ℃；HR-ESI-MSm/z：347.185 7[M+H]+，分子式C20H26O5。1H-NMR(600 MHz，CDCl3)δ：1.54～1.79(6H，m，H-1，H-6，H-11)，6.73(1H，dd，J=7.5，2.1 Hz，H-3)，4.13(1H，d，J=3.1 Hz，H-7)，1.97～2.48(6H，m，H-2，H-8，H-10，H-12)，5.88(1H，t，J=1.7 Hz，H-14)，1.06(3H，d，J=7.1 Hz，H-17)，3.92(1H，dd，J=7.7，2.1 Hz，H-19α)，5.30(1H，d，J=7.6 Hz，H-19β)；13C-NMR(150 MHz，CDCl3)δ：19.4(C-1)，27.8(C-2)，135.0(C-3)，139.2(C-4)，45.0(C-5)，40.6(C-6)，72.4(C-7)，40.6(C-8)，38.6(C-9)，48.5(C-10)，35.6(C-11)，22.3(C-12)，169.8(C-13)，115.6(C-14)，173.8(C-15)，73.1(C-16)，12.2(C-17)，19.3(C-18)，72.7(C-19)，169.9(C-20)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[9]報(bào)道基本一致，故鑒定為7-[2-(2,5-dihydro-5-oxo-3-furanyl) ethyl]-6，6，7，8，9，10-hexahydro-9-hydroxy-7,8-dimethyl-1H-naphtho[1,8-c]furan-3(5H)-one。

化合物11：無色油狀物；HR-ESI-MSm/z：337.237 2[M+H]+，分子式C20H32O4。1H-NMR(600 MHz，CDCl3)δ：2.34(1H，d，J=2.5 Hz，H-2α)，2.16(1H，dd，J=4.9，2.2 Hz，H-2β)，6.72(1H，dd，J=7.5，2.2 Hz，H-3)，3.74～3.65(2H，m，H-15)，0.93(3H，d，J=6.6 Hz，H-16)，1.02(3H，d，J=7.2 Hz，H-17)，5.27(1H，d，J=7.6 Hz，H-19α)，3.90(1H，dd，J=7.6，2.2 Hz，H-19β)，0.84(3H，s，H-20)；13C-NMR(150 MHz，CDCl3)δ：19.4(C-1)，29.9(C-2)，135.3(C-3)，139.3(C-4)，45.1(C-5)，40.0(C-6)，73.0(C-7)，40.0(C-8)，38.4(C-9)，48.3(C-10)，35.9(C-11)，27.8(C-12)，30.2(C-13)，40.5(C-14)，61.3(C-15)，19.9(C-16)，19.6(C-17)，170.1(C-18)，73.0(C-19)，12.0(C-20)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[10]報(bào)道基本一致，故鑒定為7α-15-dihydroxy-ent-clerod-3-en-18，19-olide。

化合物12：黃色針晶(二氯甲烷)，mp 188 ℃；HR-ESI-MSm/z：329.102 4[M+H]+，分子式C18H16O6。1H-NMR(600 MHz，CDCl3)δ：6.58(1H，s，H-3)，6.55(1H，s，H-8)，7.85(2H，d，J=6.8 Hz，H-2′，H-6′)，7.02(2H，d，J=7.8 Hz，H-3′，H-5′)，12.78(1H，s，5-OH)，3.93(3H，s，6-OCH3)，3.90(3H，s，7-OCH3)，3.97(3H，s，4′-OCH3)；13C-NMR(150 MHz，CDCl3)δ：164.2(C-2)，104.3(C-3)，182.8(C-4)，153.4(C-5)，132.7(C-6)，158.9(C-7)，90.7(C-8)，153.2(C-9)，106.3(C-10)，123.7(C-1′)，128.2(C-2′，C-6′)，162.7(C-4′)，114.7(C-3′，C-5′)，61.0(6-OCH3)，56.5(7-OCH3)，55.7(4′-OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[11]報(bào)道基本一致，故鑒定為鼠尾草素。

化合物13：黃色粉末；HR-ESI-MSm/z：329.101 4[M+H]+，分子式C18H16O6。1H-NMR(600 MHz，CDCl3)δ：6.59(1H，s，H-3)，6.38(1H，s，H-6)，6.50(1H，s，H-8)，12.80(5-OH)，7.34(1H，s，H-2′)，6.98(1H，d，J=8.5 Hz，H-5′)，7.53(1H，d，J=8.2 Hz，H-6′)，3.98(3H，s，7-OCH3)，3.89(3H，s，3′-OCH3)，3.97(3H，s，4′-OCH3)；13C-NMR(150 MHz，CDCl3)δ：165.6(C-2)，104.8(C-3)，182.5(C-4)，157.8(C-5)，98.2(C-6)，164.1(C-7)，92.8(C-8)，162.3(C-9)，105.7(C-10)，123.9(C-1′)，108.9(C-2′)，152.4(C-3′)，149.4(C-4′)，111.3(C-5′)，120.3(C-6′)，56.0(7-OCH3)，56.3(3′，4′-OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[12]報(bào)道基本一致，故鑒定為5-羥基-7，3′，4′-三甲氧基黃酮。

化合物14：黃色粉末；HR-ESI-MSm/z：329.065 3[M-H]-，分子式C17H14O7。1H-NMR(600 MHz，CDCl3)δ：6.60(1H，s，H-3)，6.56(1H，s，H-6)，7.33(1H，d，J=1.8 Hz，H-2′)，7.04(1H，d，J=8.5 Hz，H-5′)，7.48(1H，dd，J=8.5，1.8 Hz，H-6′)，13.08(1H，s，5-OH)，4.01(3H，s，8-OCH3)，4.05(3H，s，3′-OCH3)；13C-NMR(150 MHz，CDCl3)δ：164.3(C-2)，104.1(C-3)，183.1(C-4)，153.2(C-5)，193.5(C-6)，155.1(C-7)，130.5(C-8)，147.0(C-9)，105.9(C-10)，123.5(C-1′)，108.4(C-2′)，149.4(C-3′)，152. 3(C-4′)，115.1(C-5′)，120. 9(C-6′)，61.0(8-OCH3)，56. 3(3′-OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[13]報(bào)道基本一致，故鑒定為5，7，4′-三羥基-3′，8-二甲氧基黃酮。

化合物15：黃色粉末；HR-ESI-MSm/z：345.096 5[M+H]+，分子式C18H16O7。1H-NMR(600 MHz，CDCl3)δ：6.61(1H，s，H-3)，6.56(1H，s，H-8)，7.35(1H，d，J=2.2 Hz，H-2′)，6.99(1H，d，J=8.5 Hz，H-5′)，7.53(1H，dd，J=8.5，2.1 Hz，H-6′)，4.00(3H，s，-OCH3)，3.98(3H，s，-OCH3)，3.97(3H，s，-OCH3)；13C-NMR(150 MHz，CDCl3)δ：164.1(C-2)，104.6(C-3)，182.8(C-4)，153.4(C-5)，132.7(C-6)，158.9(C-7)，90.7(C-8)，153.2(C-9)，106.3(C-10)，123.9(C-1′)，108.8(C-2′)，149.4(C-3′)，152.4(C-4′)，111.2(C-5′)，120.2(C-6′)，61.0(OCH3)，56.5(OCH3)，56.3(OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[14]報(bào)道基本一致，故鑒定為異澤蘭黃素。

化合物16：黃色粉末；HR-ESI-MSm/z：359.112 7[M+H]+，分子式C19H18O7。1H-NMR(600 MHz，CDCl3)δ：6.56(1H，s，H-3)，6.61(1H，s，H-8)，7.34(1H，d，J=1.8 Hz，H-2′)，6.98(1H，d，J=8.5 Hz，H-5′)，7.53(1H，dd，J=8.5，1.8 Hz，H-6′)，12.76(1H，s，5-OH)，3.99(3H，s，6-OCH3)，3.98(3H，s，7-OCH3)，3.97(3H，s，3′-OCH3)，3.93(3H，s，4′-OCH3)；13C-NMR(150 MHz，CDCl3)δ：164.1(C-2)，104.6(C-3)，182.8(C-4)，153.4(C-5)，132. 8(C-6)，158.9(C-7)，90.7(C-8)，153.2(C-9)，106.3(C-10)，123.9(C-1′)，111.3(C-2′)，149.5(C-3′)，152.4(C-4′)，108.9(C-5′)，120.2(C-6′)，61.0(6-OCH3)，56.5(3′-OCH3，7-OCH3)，56.3(4′-OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[15]報(bào)道基本一致，故鑒定為5-羥基-6，7，3′，4′-四甲氧基黃酮。

化合物17：黃色粉末；HR-ESI-MSm/z：611.303 6[M+H]+，分子式C27H30O16。1H-NMR(600 MHz，CD3OD)δ：6.21(1H，d，J=2.1 Hz，H-6)，6.40(1H，d，J=2.1 Hz，H-8)，7.66(1H，d，J=2.2 Hz，H-2′)，6.87(1H，d，J=8.4 Hz，H-5′)，7.63(1H，dd，J=8.4，2.2 Hz，H-6′)，5.11(1H，d，J=7.7 Hz，H-1″)；13C-NMR(150 MHz，CD3OD)δ：158.53(C-2)，135.6(C-3)，179.4(C-4)，163.0(C-5)，99.9(C-6)，166.1(C-7)，94.8(C-8)，159.3(C-9)，105.6(C-10)，123.1(C-1′)，116.0(C-2′)，145.8(C-3′)，149.8(C-4′)，117.7(C-5′)，123.5(C-6′)，104.7(C-1″)，75.7(C-2″)，78.2(C-3″)，71.4(C-4″)，77.2(C-5″)，68.5(C-6″)，102.4(C-1?)，72.2(C-2?)，72.1(C-3?)，73.9(C-4?)，69.7(C-5?)，17.9(C-6?)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[16]報(bào)道基本一致，故鑒定為蘆丁。

化合物18：黃色粉末；HR-ESI-MSm/z：303.021 1[M+H]+，分子式C15H10O7。1H-NMR(600 MHz，CD3OD)δ：6.18(1H，d，J=2.1 Hz，H-6)，6.38(1H，d，J=2.1 Hz，H-8)，7.73(1H，d，J=2.2 Hz，H-2′)，6.88(1H，d，J=8.5 Hz，H-5′)，7.63(1H，dd，J=8.5，2.2 Hz，H-6′)；13C-NMR(150 MHz，CD3OD)δ：148.0(C-2)，137.2(C-3)，177.3(C-4)，158.2(C-5)，99.2(C-6)，165.5(C-7)，94.4(C-8)，162.5(C-9)，104.5(C-10)，124.1(C-1′)，116.0(C-2′)，146.2(C-3′)，148.8(C-4′)，116.2(C-5′)，121.6(C-6′)。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[17]報(bào)道基本一致，故鑒定為槲皮素。

化合物19：黃色粉末；HR-ESI-MSm/z：287.050 1[M+H]+，分子式C15H10O6。1H-NMR(600 MHz，CD3OD)δ：6.18(1H，d，J=1.8 Hz，H-6)，6.36(1H，d，J=1.8 Hz，H-8)，8.08(2H，d，J=8.4 Hz，H-2′，H-6′)，6.90(2H，d，J=8.5 Hz，H-3′，H-5′)；13C-NMR(150 MHz，CD3OD)δ：147.9(C-2)，137.2(C-3)，177.4(C-4)，162.4(C-5)，99.9(C-6)，167.2(C-7)，94.9(C-8)，158.4(C-9)，104.2(C-10)，123.9(C-1′)，130.7(C-2′，C-6′)，116.4(C-3′，C-5′)，160.6(C-4′)。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[18]報(bào)道基本一致，故鑒定為山柰酚。

化合物20：白色針晶(二氯甲烷)，mp 161～170 ℃；HR-ESI-MSm/z：411.303 6[M-H]-，分子式C29H48O。1H-NMR(600 MHz，CDCl3)δ：3.52(1H，m，H-3)，5.34(1H，d，J=4.0 Hz，H-6)，0.72(3H，s，H-18)，1.03(3H，s，H-19)，1.04(3H，d，J=6.6 Hz，H-21)，5.17(1H，dd，J=15.2，8.7 Hz，H-22)，5.04(1H，dd，J=15.1，8.8 Hz，H-23)，0.82(3H，d，J=7.4 Hz，H-26)，0.87(3H，d，J=6.3 Hz，H-27)，0.81(3H，t，J=7.7 Hz，H-29)；13C-NMR(150 MHz，CDCl3)δ：37.4(C-1)，32.0(C-2)，72.0(C-3)，42.4(C-4)，140.9(C-5)，121.9(C-6)，29.8(C-7)，31.8(C-8)，50.3(C-9)，36.2(C-10)，21.3(C-11)，39.8(C-12)，42.4(C-13)，57.0(C-14)，24.5(C-15)，29.1(C-16)，56.1(C-17)，12.2(C-18)，19.6(C-19)，40.7(C-20)，21.4(C-21)，138.5(C-22)，129.4(C-23)，51.4(C-24)，31.3(C-25)，21.2(C-26)，19.1(C-27)，25.6(C-28)，12.4(C-29)。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[19]報(bào)道基本一致，故鑒定為豆甾醇。

化合物21：白色粉末；HR-ESI-MSm/z：423.224 9[M-H]-，分子式C29H60O。1H-NMR(600 MHz，CDCl3)δ：0.88(3H，d，J=7.1 Hz)，1.25(22H，s)，1.40～1.44(2H，m)，1.59(2H，s)，1.25(22H，s)，2.21(m，-CHOH)，3.58(1H，s，-OH)；13C-NMR(150 MHz，CDCl3)δ：14.1(-CH3)，22.8(-CH2)，25.8(-CH2)，29.5(-CH2)，29.5(-CH2)，29.7(-CH2)，29.8(-CH2)，29.8(-CH2)，29.9(-CH2)，29.9(-CH2)，32.1(-CH2)，32.1(-CH2)，37.6(-CH2)，72.2(-CH)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[20]報(bào)道基本一致，故鑒定為15-二十九烷醇。

化合物22：白色針晶(二氯甲烷)，mp 147～148 ℃；HR-ESI-MSm/z：415.301 6[M+H]+，分子式C29H50O。1H-NMR(600 MHz，CDCl3)δ：3.52(1H，ddd，J=15.9，11.1，4.6 Hz，H-3)，5.35(1H，d，J=5.2 Hz，H-6)，0.68(3H，s，H-18)，0.81(3H，d，J=6.8 Hz，H-19)，0.83(3H，d，J=6.8 Hz，H-21)，0.85(3H，d，J=7.4 Hz，H-26)，0.92(3H，d，J=6.5 Hz，H-27)，1.01(3H，s，H-29)；13C-NMR(150 MHz，CDCl3)δ：37.4(C-1)，19.2(C-2)，72.0(C-3)，42.4(C-4)，140.9(C-5)，121.9(C-6)，32.0(C-7)，32.1(C-8)，50.3(C-9)，36.7(C-10)，21.2(C-11)，39.9(C-12)，42.5(C-13)，56.9(C-14)，24.5(C-15)，28.4(C-16)，56.2(C-17)，12.0(C-18)，18.9(C-19)，36.3(C-20)，31.8(C-21)，34.1(C-22)，26.2(C-23)，46.0(C-24)，29.3(C-25)，20.0(C-26)，19.6(C-27)，23.2(C-28)，12.1(C-29)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[19]報(bào)道基本一致，故鑒定為 β-谷甾醇。

化合物23：無色針晶(甲醇)，mp 144～145 ℃；HR-ESI-MSm/z：177.057 2[M-H]-，分子式C10H10O3。1H-NMR(600 MHz，CD3OD)δ：7.57(1H，d，J=15.9 Hz，H-1′)，7.39(2H，d，J=8.2 Hz，H-2，H-6)，6.86(2H，d，J=8.6 Hz，H-3，H-5)，6.27(1H，d，J=15.9 Hz，H-2′)，3.72(3H，s，-COOCH3)；13C-NMR(150 MHz，CD3OD)δ：169.7，161.1，146.4，131.1，127.0，116.7，114.8，52.0。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[21]報(bào)道基本一致，故鑒定為對(duì)羥基苯甲酸乙酯。

化合物24：無色塊狀結(jié)晶(二氯甲烷)，mp 170～173 ℃；HR-ESI-MSm/z：417.153 8[M-H]-，分子式C22H26O8。1H-NMR(600 MHz，CDCl3)δ：3.10(2H，d，J=5.3 Hz，H-1，H-5)，4.73(2H，d，J=3.0 Hz，H-2，H-6)，3.92(2H，m，H-4α，H-8β)，4.28(2H，dd，J=8.7，5.9 Hz，H-4′α，H-8′β)，6.58(4H，s，H-1′，H-1″)，3.88(12H，s，-OCH3×4)；13C-NMR(150 MHz，CDCl3)δ：54.5(C-1，C-5)，86.2(C-2，C-6)，72.0(C-4，C-8)，132.2(C-1′，C-1″)，102.8(C-2′，C-6′，C-2″，C-6″)，147.3(C-3′，C-5′，C-3″，C-5″)，134.4(C-4′，C-4″)，56.5(4OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[22]報(bào)道基本一致，故鑒定為丁香樹脂醇。

化合物25：白色粉末；HR-ESI-MSm/z：429.121 0[M+H]+，分子式C30H52O。1H-NMR(600 MHz，CDCl3)δ：3.72(1H，m，H-3)，0.93(3H，s，H-23)，0.96(3H，s，H-24)，0.86(3H，d，J=0.9 Hz，H-25)，1.00(3H，s，H-26)，0.99(3H，s，H-27)，1.17(3H，s，H-28)，0.99(3H，s，H-29)，0.94(3H，s，H-30)；13C-NMR(150 MHz，CDCl3)δ：15.9(C-1)，35.2(C-2)，72.9(C-3)，49.3(C-4)，37.2(C-5)，41.8(C-6)，17.7(C-7)，53.3(C-8)，38.5(C-9)，61.5(C-10)，35.7(C-11)，30.8(C-12)，38.0(C-13)，39.8(C-14)，32.5(C-15)，36.2(C-16)，30.2(C-17)，42.9(C-18)，35. 5(C-19)，28.3(C-20)，32.9(C-21)，39. 4(C-22)，11. 8(C-23)，16.5(C-24)，18.4(C-25)，18.8(C-26)，20.3(C-27)，31.9(C-28)，35.3(C-29)，32.2(C-30)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[23]報(bào)道基本一致，故鑒定為表無羈萜醇。

4 體外抑制MDA-MB-231乳腺癌細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)

采用MTT法測試化合物15～18對(duì)MDA-MB-231細(xì)胞增殖的抑制活性。取對(duì)數(shù)生長期的細(xì)胞接種于96孔板中，每孔1×104個(gè)、100 μL，置于5% CO2、37 ℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)12 h，吸出培養(yǎng)基，實(shí)驗(yàn)組每孔分別加入不同濃度(10、100 μmol/mL)的藥物100 μL，對(duì)照組每孔加入100 μL DMSO溶液，另設(shè)置空白組，每組設(shè)2個(gè)平行孔，置于5% CO2、37 ℃培養(yǎng)箱中孵育46 h。孵育結(jié)束后，每孔加入5 g/L MTT溶液 10 μL，混勻，繼續(xù)培養(yǎng)4 h，棄去上清液后加入150 μL甲醇至藥物充分溶解，酶標(biāo)儀在490 nm波長處檢測吸光度A，計(jì)算細(xì)胞存活率，公式為存活率=[(A實(shí)驗(yàn)組-A空白組)/(A對(duì)照組-A空白組)]× 100%。

結(jié)果顯示，化合物15～16在10 μmol/mL時(shí)細(xì)胞存活率分別為(32.50±2.66)%、(24.77±2.32)%，對(duì)MDA-MB-231細(xì)胞增殖顯示抑制作用，而17～18無明顯作用。

5 討論

本實(shí)驗(yàn)運(yùn)用多種色譜、波譜鑒定技術(shù)對(duì)巴西酒神菊95%乙醇提取物的化學(xué)成分進(jìn)行系統(tǒng)研究，共分離鑒定25個(gè)化合物，包括達(dá)瑪烷型三萜、新克羅烷型二萜、黃酮等，其中化合物1～2、21為首次從該屬植物中分離得到，3～7、12～15、23～24為首次從該植物中分離得到。巴西酒神菊具有保肝和抗炎等作用，推測其可能具有抗腫瘤作用，因此，對(duì)化合物15～18進(jìn)行了體外抑制MDA-MB-231乳腺癌細(xì)胞增殖活性實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)15～16顯示抑制作用。前期報(bào)道，新克羅烷型二萜具有抗蛇毒蛋白水解、抗出血、保肝等多種作用，符合巴西酒神菊的臨床用途，故課題組后續(xù)將對(duì)其萜類成分進(jìn)行系統(tǒng)的藥理活性研究，有助于豐富拓展我國藥用資源，促進(jìn)中醫(yī)藥事業(yè)發(fā)展。