藥材鹿角的性狀鑒定及其抗骨質疏松的活性分析

王曉明

《神農本草經》記載道：鹿角乃為藥材之上品?！吨袊幍洹分兄赋鏊幱寐菇菫槊坊?、動物馬鹿，具有活血、強筋壯骨及溫腎補虛的作用[1]。現實當中，存在著多種帶角的鹿，不同樣式的角枝實為鹿類動物最為典型的結構特征。我國與鹿之間淵源深厚，實為鹿類進化的中心，有著豐富的鹿資源，不僅能有馬鹿、梅花鹿等藥典當中記載的鹿，而且還有其他數十種鹿科動物，其數量在全球鹿類總數中的比重達45.8%。盡管藥典當中明確規(guī)定可當作中藥來用的鹿角僅為馬鹿、梅花鹿的角及其角盤，但其他鹿類的角同樣有著不錯的藥用價值，比如毛冠鹿、赤麂、林麂及馬鹿等。骨質疏松實為一種臨床多發(fā)病，典型特征為骨組織顯微結構出現進行性改變、骨量減少等，患此病后，患者非常容易引發(fā)骨折，尤其是全身代謝性骨癥，因而對人們日常生活、工作均造成了嚴重影響。骨質疏松有著十分復雜的發(fā)病機制，且許多學者[2-3]指出，其發(fā)病根源在于骨膠原合成速度較正常低。因此，此病可看作一種膠原病。本文圍繞中醫(yī)“腎藏精，主骨”等理論，探討鹿角對骨質疏松所產生的影響，現探討如下。

1 材料與方法

1.1 材料

2021年1月—2022年1月期間，選取7種鹿角，即赤麂、毛冠鹿、小麂、林麂、黑麂、馬鹿及梅花鹿角等,并圍繞梅花鹿鹿角，測定其抗骨質疏松的活性。

1.2 方法

1.2.1 鹿角的性狀鑒定

以手摸、眼觀等方式來分析鹿角的性狀特點，以鹿角的形態(tài)特征為依據（如角干形態(tài)、分叉等），進行鹿角形態(tài)公式的編制，用B代表角柄，C代表角干部分，A表示角的前叉，P代表角的后叉，S代表坐地叉，α代表前叉與后叉間的角度，X為分一叉，而“X……”代表分叉數據＞3個，“⌒”此角呈虹狀，據此來闡述鹿角的物理特征。

1.2.2 梅花鹿鹿角盤抗骨質疏松的活性測定

（1）實驗動物。小鼠80只，（22.3±1.2）g，雌雄均為40只。（2）實驗藥品。葡萄糖酸鈣片（海南制藥廠有限公司，國藥準字H46020253，規(guī)格：0.5 g×100片）、注射用環(huán)磷酰胺（江蘇恒瑞醫(yī)藥股份有限公司，國藥準字H32020857，規(guī)格：0.2 g×10瓶）、羥脯氨酸標準品（浙江紫荊生物技術有限公司杭州分公司，國械注準20163400047，規(guī)格：20人份）等。（3）儀器。山東高密彩虹分析儀器有限公司產的紫外可見分光光度計（UV-754型）；上海亞榮生化儀器廠生產的旋轉蒸發(fā)器（RE-52AA型）；金羊天平儀器廠生產的電子計數天平。（4）實驗方法。①提取有效部位。把梅花鹿的鹿角研磨成粉（300 g），采用乙醇（70%）浸泡，時間為24 h，過濾且合并提取液，用旋轉蒸發(fā)儀對提取液進行減壓濃縮，且將乙醇回收，用凍干機把濃縮之后的提取液進行凍干處理，最終便能獲得乙醇提取物（70%）；提取乙醇后，把粉干燥處理，然后用蒸餾水（80℃）進行提?。?4 h），過濾、合并水提液，且進行減壓濃縮，把濃縮的水體液進行凍干處理，最終便能獲得鹿角盤水提物。②制備供試藥品。乙醇提取物組：取凍干之后的鹿角盤70%乙醇提取物0.6 g、1.8 g，置入到容量瓶中（100 mL），用生理鹽水稀釋到刻度，配成溶液6 mg/mL、18 mg/mL。環(huán)磷酰胺：取注射用環(huán)磷酰胺（0.4 g），融入生理鹽水中（200 mL），得到溶液2 mg/mL備用。③實驗分組。隨機將小鼠分成空白組、水提物低劑量組（500 mg/kg）、環(huán)磷酰胺模型組（20 mg/kg）、水提物高劑量組（1 000 mg/kg）、乙醇提取物高劑量組（180 mg/kg）、乙醇提取物低劑量組（60 mg/kg）。④構建動物模型及給藥。建立環(huán)磷酰胺骨質疏松模型，采用上午造模而下午用藥的范式，除空白組外，其他組均灌胃使用造模藥物：環(huán)磷酰胺20 mg/（kg·d），連續(xù)用藥14 d。

1.3 觀察指標

分析鹿角的性狀，對比各組免疫器官指數[免疫器官質量（mg）/小鼠體重（g）=免疫器官指數]、古骨計量學指標（如股骨長度、股骨橫徑等）。

1.4 統計學方法

采用SPSS 21.0統計學軟件處理數據，計數資料用n（%）表示，行χ2檢驗；計量資料以（±s）表示，行t檢驗，P＜0.05則差異有統計學意義。

2 結果

2.1 鹿角的性狀鑒定結果

（1）毛冠鹿。又被稱之為青麂。雄性具非常短且不分叉的樁角，被毛遮蓋而不明顯，公式為♂C。（2）赤麂。雄性赤麂長，并且向后還有彎曲的雙叉角，其角向后且朝內彎曲，最突出特點即為角柄多長于角干，公式為♂Cx。（3）小麂。雄性小麂的角較為簡單，公式為：♂Cx，C＞B。（4）黑麂。相似于赤麂，其角柄較角干長，并且很小，公式：♂C，C＜B。（5）林麂。其角比較小，角尖且直，角柄長于角干，公式為：♂Cx，C＜B。（6）梅花鹿。其角一般為4叉角，眉叉于角干近基部與角干之間呈銳角，且向前伸出，二叉處在角干的中部，公式為♂A1P1A2P2A3P3。（7）馬鹿。角枝呈現為圓形，分為6～9叉。眉叉在鹿角主干的基部伸出，向前方延展，并且與主干間呈近似直角，公式為♂A1P1SA1P2A1P3。

2.2 藥材鹿角抗骨質疏松的活性分析

20 mg/（kg·d）環(huán)磷酰胺能夠降低小鼠胸腺指數（t=4.28，P＜0.05），且股骨橫徑、股骨干重、股骨長減少（t=5.47、6.12、6.61，P＜0.05），羥脯氨酸、骨鈣含量較空白組低（t=5.41、6.29，P＜0.05），造成小鼠骨丟失。組合物低劑量組股骨干重、橫徑較模型組高（t=4.26、5.14，P＜0.05）。與模型組相比，組合物高劑量組股骨干重有明顯增加（t=4.91，P＜0.05），且組合物髙、低劑量都能夠對小鼠骨鈣的流失進行拮抗，差異有統計學意義（t=6.81、7.56，P＜0.05），見表1、表2。

表1 各組小鼠臟器指數對比（mg/kg，±s）

表1 各組小鼠臟器指數對比（mg/kg，±s）

組別 數量 脾臟指數 胸腺指數 肝臟指數空白組 10 4.72±1.00 3.56±0.97 49.67±14.08環(huán)磷酰胺模型組 10 4.69±2.18 1.43±0.36 47.67±10.49水提物低劑量組 10 4.02±1.35 1.96±0.93 49.98±19.17水提物高劑量組 10 4.61±1.15 1.86±0.73 49.80±15.31乙醇提取物低劑量組 10 3.38±1.23 1.53±0.51 37.80±7.05乙醇提取物高劑量組 10 3.44±1.26 1.72±0.65 47.06±8.26組合物低劑量組 10 3.75±1.44 1.82±0.71 44.14±8.39組合物高劑量組 10 3.75±1.49 2.22±0.50 46.07±14.44

表2 各組股骨計量學指標對比（±s）

表2 各組股骨計量學指標對比（±s）

組別 數量 股骨干重（g） 股骨長（mm） 股骨橫徑（mm）空白組 10 0.049±0.003 15.18±0.56 1.65±0.08環(huán)磷酰胺模型組 10 0.035±0.003 13.74±0.40 1.49±0.08水提物低劑量組 10 0.046±0.003 14.90±0.47 1.54±0.12水提物高劑量組 10 0.041±0.002 14.80±0.30 1.51±0.05乙醇提取物低劑量組 10 0.041±0.003 14.80±0.38 1.51±0.10乙醇提取物高劑量組 10 0.042±0.003 14.81±0.65 1.55±0.14組合物低劑量組 10 0.046±0.003 14.77±0.47 1.60±0.09組合物高劑量組 10 0.045±0.001 14.84±0.38 1.52±0.05

3 討論

鹿角每年都會脫落，之后會有新的角干產生，而對于新生鹿角而言，其外觀會變得更為復雜[4]。需要指出的是，鹿角大小不一，部分比較簡單，僅有一個角干，且沒有分叉，如毛冠鹿，但通常情況下，鹿角均會有分叉；有些角的形態(tài)卻比較復雜，并且還比較大，比如馬鹿、梅花鹿等，馬鹿角成角規(guī)模大，而且還有著非常多的分叉[5-6]。依據鹿角的不同形狀特征，可對其進行準確區(qū)分?，F階段，在研究藥用鹿角上，大多集中于梅花鹿、馬鹿的鹿角上，而對諸如赤麂、毛冠鹿、小麂、林麂、黑麂等，卻較少涉足[7-8]。因此，通過對多種鹿角的性狀特征進行研究，且展開比對，能夠為藥用鹿角資源的合理化、充分化利用，提供可靠保障與理論支撐，而到底何種鹿角的藥用價值更高，仍需深究。

需要指出的是，骨組織多有礦物質、有機質等構成，而在礦物質當中，含量最高的是骨鈣、骨磷，而在骨骼當中的鈣、磷，其存在形式為羥基磷酸鈣，組建成了骨骼的基本框架[9]，同時還是骨的重要硬度部分。另需指出的是，在骨骼當中，骨膠原占比大于90%[10]，所以，通過明確羥脯氨酸的具體含量，便能夠將骨當中的有機質含量給推算出來。因此，羥脯氨酸的含量多少，能夠將骨質量狀況、骨骼硬度、骨骼礦化程度及骨量多少等給反映出來；另外，通過與小鼠骨長、骨干重、骨徑等骨計量學指標相結合，能夠從中明確小鼠骨質疏松的具體程度[11]。針對葡萄糖酸鈣來講，其不僅有著良好的補鈣效果，而且還是對骨質疏松進行預防的不錯藥物，本文將葡萄糖酸鈣當作對照，目的在于分析鹿角盤水提物、鹿角盤組合物以及醇提物對骨質疏松所產生的影響，并且分析其與葡萄糖酸鈣之間的聯系，從中找出供試藥物對抗骨質疏松作用的具體途徑。

對于骨質疏松而言，其作為一種以骨組織微觀結構出現進行性改變以及骨量異常減少為典型特征的骨病類型，患病后，骨脆性會大幅增加，容易引發(fā)以骨折為典型特征的全身性骨代謝疾病[12]。針對環(huán)磷酰胺來講，其乃是當前臨床中一種比較常用的抗腫瘤藥物，有研究[13]指出，其容易造成患者骨的快速丟失。另有報道[3]指出，環(huán)磷酰胺會將脂質過氧化進行激活，從而容易產生骨髓損傷毒性，最終會減少骨細胞的數量。經本次試驗得知，小鼠環(huán)磷酰胺20 mg/（kg·d）持續(xù)灌胃14 d，模型小鼠的股骨干重有明顯減少。另外，橫徑、股骨長均有顯著減少，羥脯氨酸、骨有機質同時也處于不斷減少狀態(tài)，與骨質疏松的基本特征相符，提示模型構建成功。有學者[14]指出，環(huán)磷酰胺能夠通過抑制骨細胞，從而達到阻止骨膠原合成的目的，并且還能減少其分泌量，從而減少鈣鹽沉積，加速鈣吸收，減少骨量，從而引發(fā)骨質疏松。而針對葡萄糖酸鈣來分析，其能夠對環(huán)磷酰胺所造成的鈣丟失進行抑制，但對羥脯氨酸所造成的影響卻并不明顯，鹿角盤水提物可以增加股骨干重、骨鈣的含量；水提取物高劑量組不僅能對小鼠骨干重、骨鈣含量進行改善，而且還能促進羥脯氨酸含量的增加。高劑量組股骨干重增加幅度高于模型組；高、低劑量組都可以對小鼠骨鈣的流失進行拮抗，其多作用于小鼠股骨干重及骨徑。另外，還需要強調的是，由環(huán)磷酰胺所造成的小鼠丟失實驗當中，鹿角盤70%乙醇提取部位、水提物高劑量可以對環(huán)磷酰胺的副作用所造成的骨膠原、骨鈣流失進行抑制。因此，單純的鈣制劑難以對骨骼對鈣的利用進行改善，而高劑量鹿角盤水提物、乙醇提取物等，則能加速骨細胞對膠原的分泌，促進鈣沉積以及骨形成，因而能夠對骨質疏松進行有效防止，所以，鹿角盤實為一種抗骨質疏松中藥的重要資源。

綜上，鹿角盤對環(huán)磷酰胺所導致的骨質疏松，有著良好的拮抗作用，應用效能突出。