食管癌中Cdh1蛋白的表達(dá)與臨床病理特征的相關(guān)性

羅 沖 張向東 劉曉政 夏永欣

食管癌是一種臨床常見惡性腫瘤，調(diào)查研究顯示，中晚期食管癌患者5年內(nèi)生存率在13%左右[1]。早期食管癌患者5年內(nèi)生存率高達(dá)89%，但是臨床首次確診早期食管癌患者僅占4%[2]。Cdh1蛋白在介導(dǎo)上皮細(xì)胞以及維持組織的正常結(jié)構(gòu)狀態(tài)中有著至關(guān)重要的作用，有關(guān)資料顯示，Cdh1蛋白在甲狀腺癌患者、胃癌患者以及乳腺癌患者等癌組織中呈現(xiàn)異常表達(dá)[3]。

1 材料與方法

1.1 一般資料

選取2017年1月至2019年1月本院收治的72例食管癌患者為研究對(duì)象，手術(shù)中切取癌組織及癌旁組織，并分別作為實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組。72例食管癌患者中男性50例、女性22例，平均年齡為(57.7±5.8)歲；腫瘤部位：18例上段、30例中段、24例下段；分化程度：62例中低分化、10例高分化；TNM分期：33例Ⅰ期～Ⅱ期、39例Ⅲ期～Ⅳ期。

1.2 方法

1.2.1 免疫組織化學(xué)分析方法 將研究對(duì)象的組織做成石蠟切片(置于烘箱中烘120 min，再用磷酸鹽緩沖液沖洗3次，每次沖洗3 min)，取一定量檸檬酸鹽緩沖液，加入微波盒中，加熱至沸騰，將脫蠟水化后的組織切片置于高溫切片架上，放入已經(jīng)沸騰的緩沖液中；自然冷卻后取出玻片。每張切片在室溫下孵育，去除磷酸鹽緩沖液，在玻片上加以相應(yīng)稀釋倍數(shù)的抗體，再在室溫下孵育120 min。去除磷酸鹽緩沖液加入1滴酶標(biāo)抗鼠或兔聚合物，再在室溫下孵育0.5 h。去除磷酸鹽緩沖液，在切片上加入DAB(二氨基聯(lián)苯胺)液，再在顯微鏡下觀察5 min。

1.2.2 實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)檢測(cè)方法 將研究對(duì)象的組織(10 mg)置于離心管中，采用RNA提取試劑盒反轉(zhuǎn)錄試劑盒(購(gòu)自大連寶生物公司)將RNA轉(zhuǎn)化為cDNA(采用分光光度儀檢測(cè))。根據(jù)Cdh1蛋白mRNA序列，分析特異性。建立實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)體系，根據(jù)需要配置合適的體系，實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)結(jié)束后建立熔解曲線，再在儀器上直接讀數(shù)，分析Cdh1蛋白mRNA水平。

1.3 觀察指標(biāo)

分析2組食管癌患者的Cdh1蛋白表達(dá)(采用免疫組織化學(xué)和實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng))以及與臨床病理特征的相關(guān)性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 2組Cdh1蛋白表達(dá)陽(yáng)性率比較

實(shí)驗(yàn)組Cdh1蛋白的陽(yáng)性率為20.8%(15/72)，對(duì)照組的陽(yáng)性率為100%(72/72)，實(shí)驗(yàn)組Cdh1蛋白表達(dá)陽(yáng)性率低于對(duì)照組(χ2=6.5541，P=0.0218)。

2.2 Cdh1蛋白表達(dá)與食管癌臨床病理特征的相關(guān)性分析

Cdh1蛋白表達(dá)與患者的年齡、腫瘤位置、性別等沒有相關(guān)性(P>0.05)，Cdh1蛋白表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期和浸潤(rùn)程度密切相關(guān)(P<0.05)，見表1。

2.3 Cdh1蛋白不同表達(dá)患者的生存情況

72例患者均隨訪3年，其中45例患者無(wú)腫瘤復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移，27例發(fā)生腫瘤復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移死亡，Cdh1蛋白表達(dá)與患者的生存時(shí)間有直接性的關(guān)系(P<0.05)，見表2。

表1 Cdh1蛋白表達(dá)與臨床病理特征的相關(guān)性分析(例，%)

表2 Cdh1蛋白不同表達(dá)患者的生存圖相關(guān)性分析/例

3 討論

食管癌是一種常見的消化道腫瘤，確切病因不明，現(xiàn)認(rèn)為其發(fā)生是多因素共同作用的結(jié)果，包括易感因素，遺傳因素、環(huán)境因素等等。食管癌的人群分布與年齡和職業(yè)以及生活習(xí)慣等密切相關(guān)，早期食管癌患者臨床癥狀不典型?，F(xiàn)階段來(lái)看，治療食管癌患者尚未有特效藥物，因此，闡述食管癌的發(fā)生和發(fā)展機(jī)制對(duì)實(shí)現(xiàn)靶向精準(zhǔn)治療、降低死亡率有重要的臨床意義。

Cdh1蛋白是一種經(jīng)典鈣黏蛋白家族中的一員，是位于16號(hào)染色體的基因，該基因與16號(hào)染色體上鈣黏著蛋白家族的其他成員一起存在于一個(gè)基因簇中。Cdh1蛋白在維系細(xì)胞間連接生物學(xué)功能方面具有重要意義，其基因的突變與胃癌，乳腺癌，結(jié)腸直腸癌，甲狀腺癌和卵巢癌有關(guān)。Cdh1蛋白表達(dá)低下導(dǎo)致復(fù)合物功能障礙，繼而影響到細(xì)胞粘附，Cdh1蛋白基因功能的喪失被認(rèn)為通過增殖、侵襲和/或轉(zhuǎn)移來(lái)促進(jìn)癌癥進(jìn)展。有關(guān)資料顯示，Cdh1蛋白被認(rèn)為與食管癌患者的預(yù)后效果密切相關(guān)[4]。國(guó)內(nèi)大量研究資料顯示，Cdh1蛋白在胃癌和膀胱癌患者中存在低表達(dá)，并且發(fā)現(xiàn)Cdh1蛋白與食管癌患者的預(yù)后密切相關(guān)[5]。

本文主要從Cdh1蛋白(上皮型鈣黏蛋白)的表達(dá)進(jìn)行研究，結(jié)果表明：所有組織中Cdh1蛋白均有表達(dá)，但是在癌組織中表達(dá)明顯降低，表達(dá)陽(yáng)性率要低于癌旁組織和正常組織，說明了Cdh1蛋白表達(dá)下降有可能促進(jìn)腫瘤的發(fā)生和發(fā)展，因此分析兩者之間的關(guān)系具有重大作用。而且本文研究結(jié)果還顯示Cdh1蛋白表達(dá)與患者的年齡、腫瘤位置、性別等未有相關(guān)性(P>0.05)，Cdh1蛋白表達(dá)與患者的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期和浸潤(rùn)程度密切相關(guān)(P<0.05)。上述研究結(jié)果顯示，Cdh1蛋白表達(dá)水平在腫瘤的分化程度和是否有淋巴轉(zhuǎn)移的病例上呈現(xiàn)反比性關(guān)系即腫瘤分化程度越低，Cdh1蛋白表達(dá)越低；臨床分期越高，Cdh1蛋白表達(dá)越低；出現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移食管癌患者的Cdh1蛋白表達(dá)水平明顯低于未出現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移食管癌患者。

在腫瘤組織實(shí)現(xiàn)淋巴或血道轉(zhuǎn)移過程中，腫瘤細(xì)胞間識(shí)別粘附作用缺陷可能與Cdh1蛋白密切相關(guān)(也就是Cdh1蛋白在腫瘤組織的高表達(dá)密切相關(guān)，有可能是粘附蛋白分子復(fù)合物缺陷所致)。研究顯示，Cdh1蛋白的高表達(dá)改變不良粘附機(jī)制缺陷[6]。腫瘤浸潤(rùn)程度以及腫瘤分化程度以及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移以及腫瘤的具體部位等臨床病理特征是影響食管癌患者預(yù)后效果的重要影響因素。Cdh1蛋白被認(rèn)為與腫瘤的發(fā)生和轉(zhuǎn)移浸潤(rùn)等密切相關(guān)，Cdh1蛋白是一種腫瘤轉(zhuǎn)移抑制因子。腫瘤細(xì)胞在分化時(shí)，分化程度越低將會(huì)喪失組織積極性，極易發(fā)生細(xì)胞轉(zhuǎn)移，導(dǎo)致預(yù)后效果不良。有學(xué)者認(rèn)為[7]，食管癌患者的預(yù)后效果比較差，上述研究結(jié)果顯示，Cdh1蛋白表達(dá)與患者的生存時(shí)間有直接性的關(guān)系(P<0.05)，陰性率越高，患者的生存時(shí)間越短，預(yù)后也就越差。深入分析Cdh1蛋白的表達(dá)水平能夠作為食管癌患者預(yù)后效果診斷的輔助檢測(cè)指標(biāo)[8]。

綜上所述，食管癌中Cdh1蛋白的表達(dá)呈下降趨勢(shì)，與患者的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移以及TNM分期和浸潤(rùn)程度等病理特征密切相關(guān)。Cdh1蛋白作為基因編碼鈣粘蛋白超家族的一員，Cdh1蛋白表達(dá)在食管癌中降低，可能與 SMO 形成的復(fù)合體發(fā)生改變，繼而誘發(fā)信號(hào)通路異常激活有關(guān)，這可能是引起食管癌的機(jī)制之一，其檢測(cè)有可能成為新的臨床診斷食管癌的標(biāo)志物或者治療食管癌的新靶點(diǎn)。