鳳仙花藥材質(zhì)量標準提升研究

祝清燦，鄒良梅，孫宜春，李慧馨，王 杏

(國藥集團同濟堂(貴州)制藥有限公司，貴州 貴陽 550026)

鳳仙花為鳳仙花科植物鳳仙花ImpatiensbalsaminaL.的新鮮或干燥花，夏末秋初采收，氣微，味微苦、澀，為《貴州省中藥材、民族藥材質(zhì)量標準》收錄的貴州省少數(shù)民族用藥，主要分布于熱帶及亞熱帶地區(qū)，在我國主要產(chǎn)于西南部廣西、貴州、云南、四川等省區(qū)，生于池塘、水溝旁、田邊、沼澤地或庭院、路邊，具有祛風(fēng)除濕、活血止痛、解毒殺蟲的功效，用于骨折，風(fēng)濕痹痛，腰脅疼痛，婦女閉經(jīng)腹痛，跌撲損傷，鵝掌風(fēng)，灰指甲等[1]。鳳仙花主要含糖類、苷類、黃酮類、醌類、甾醇類、香豆素類化學(xué)成分[2]。文獻報道，風(fēng)仙花的有效成分為黃酮類和萘醌衍生物，主要含山柰酚、蘆丁、槲皮素等[3-4]。山柰酚具有抗菌、消炎、抗癌等生理活性[5]。鳳仙花資源十分豐富，具有廣闊的應(yīng)用價值。原標準項下僅收載性狀鑒別項目，不利于質(zhì)量控制。因此，筆者對鳳仙花進行顯微鑒別和薄層色譜鑒別研究，按《中國藥典》相應(yīng)方法對水分、總灰分、浸出物進行測定，為質(zhì)量標準修訂提供參考。

1 儀器與材料

1.1 儀器

WHF-3型三用紫外分析儀(武漢藥科新技術(shù)開發(fā)有限公司生產(chǎn))；CX41型顯微鏡(OLYMPUS CORPORATION)；101-2A型電熱鼓風(fēng)干燥箱(天津市泰斯特儀器有限公司)；HH-4型數(shù)顯恒溫水浴鍋(常州普天儀器制造有限公司(金壇市晶玻實驗儀器廠)，ME204TE/02型電子天平(梅特勒-托利多國際貿(mào)易(上海)有限公司)；SB25-12DTS型數(shù)控超聲波清洗器(寧波新芝生物科技股份有限公司)。

1.2 試藥

山柰酚對照品(批號：110861-201611)，購自中國食品藥品檢定研究院；甲醇(批號：20161001)、乙醇95%(批號：20170901)、甲酸(批號：20191009)、三氯甲烷(批號：20170801)、甲苯(批號：20200601)、三氯化鋁(批號：20200901)購自重慶川東化工(集團)有限公司；乙酸乙酯(批號：2016071501)購自成都科隆化學(xué)品有限公司；三氯甲烷、乙酸乙酯、甲酸、甲醇、乙醇、三氯化鋁、甲苯等均為分析純；水為自制純化水。

1.3 材料

硅膠G薄層板(青島海洋化工廠分廠生產(chǎn)，批號：20171222)；硅膠G薄層板(青島海浪硅膠干燥劑有限公司，批號：20140820)；硅膠G高效板(青島海洋化工廠分廠生產(chǎn)，批號；20170515)；硅膠預(yù)制板G(20047959)(國藥集團化學(xué)試劑有限公司，批號：20170912)。

樣品由國藥集團同濟堂(貴州)制藥有限公司種植部提供，經(jīng)貴州中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院何順志教授鑒定為鳳仙花科植物鳳仙花ImpatiensbalsaminaL.的新鮮或干燥花。憑證標本存放于國藥集團同濟堂(貴州)制藥有限公司。樣品來源見表1。

表1 樣品來源信息

2 方法與結(jié)果

2.1 顯微鑒別

將樣品粉碎(過四號篩)肉眼觀察和制片置顯微鏡下觀察。其特征為：粉末棕褐色?；ǚ哿１姸?，黃色，橢圓形或類長方形，直徑20～40 μm，4孔溝，表面具顆粒狀紋理。常見非腺毛，多破碎，由1～16個細胞組成。草酸鈣針晶成束或散在存在于薄壁細胞或黏液細胞中，長39～124 μm。表皮細胞表面觀類多角形、不規(guī)則形，波狀彎曲，氣孔不定式[6]。螺紋導(dǎo)管散在或多存在于薄壁細胞中，直徑6～12 μm。鳳仙花粉末顯微特征見圖1。

注：1.花粉粒；2.非腺毛；3.草酸鈣針晶束；4.表皮細胞；5.導(dǎo)管。

2.2 薄層鑒別

2.2.1 供試品溶液制備 取本品粉末(過三號篩)約0.5 g，置25 mL容量瓶中，加甲醇25 mL，超聲處理30 min，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇2 mL使溶解，作為供試品溶液。

2.2.2 對照品溶液制備 取山柰酚對照品適量，加甲醇制成每1 mL含0.2 mg的溶液，作為對照品溶液[7]。

2.2.3 薄層鑒別方法與結(jié)果 照薄層色譜法按照2020年版《中國藥典》(四部)通則0502試驗[8]，吸取上述兩種溶液各2～5 μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸(5∶2∶1)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以2%三氯化鋁乙醇溶液，晾干，置紫外燈(365 nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點。

注：1，2，4：供試品；3，5：山柰酚對照品。

2.3 水分含量測定

精密稱取10批鳳仙花藥材粉末(過二號篩)約4 g，按照2020年版《中國藥典》(四部)通則“0832水分測定法”的第二法(烘干法)進行測定[8]，每批樣品平行測定兩份，取平均值。結(jié)果，10批樣品中水分的含量最低為6.9%，最高為12.5%，平均值為10.4%，以平均測定值的120%設(shè)限，為12.5%，故建議將水分標準定為不得過13.0%。鳳仙花藥材水分含量測定結(jié)果見表2。

2.4 總灰分含量測定

精密稱取10批鳳仙花藥材粉末(過二號篩)各約2.5 g，按照2020年版《中國藥典》(四部)通則“2302灰分測定法”的第一法(總灰分測定法)進行測定[8]，每批樣品平行測定兩份，取平均值。結(jié)果，10批樣品中總灰分的含量最低為7.9%，最高為12.2%，平均值為9.96%，以平均測定值的120%設(shè)限，為11.95%，故建議將總灰分標準定為不得過12.0%。鳳仙花藥材總灰分含量測定結(jié)果見表2。

2.5 浸出物含量測定

取10批鳳仙花藥材粉末(過二號篩)各約3 g，水溶性浸出物測定法按照2020年版《中國藥典》四部通則2201項下“熱浸法”測定[8]，用水作溶劑，每批樣品平行測定兩份，取平均值。結(jié)果，10批樣品中浸出物最低值為28.4%，最高值為35.0%，平均值為31.6%，以平均值的80%設(shè)限，為25.3%，故建議將浸出標準定為不得少于25.0%。鳳仙花藥材浸出物含量測定結(jié)果見表2。

表2 鳳仙花水分測定結(jié)果 (%)

3 討論

3.1 供試品溶液制備

根據(jù)化學(xué)成分的溶解性，分別對提取溶劑(甲醇、乙酸乙酯、水、乙醇)，提取方法(超聲、回流)，提取溶劑用量(15 mL、25 mL、35 mL)，提取時間(10 min、20 min、30 min)，樣品取樣量(0.5 g、1.0 g、1.5 g)等條件進行考察，結(jié)果表明，以本文中制備方法制備的供試品溶液鑒別斑點最清晰。

3.2 薄層色譜條件考察

根據(jù)展開樣品主要化學(xué)成分的極性，對展開系統(tǒng)如：甲苯-乙酸乙酯-甲酸(5∶2∶1)，三氯甲烷-甲醇-甲酸(9∶1∶0.2)，三氯甲烷-乙酸乙酯-甲酸(10∶3∶1)，硅膠板(不同廠家)，點樣量(2 μL、3 μL、5 μL、7 μL)，薄層板預(yù)平衡時間(0 min、10 min、20 min)，展開溫度(5 ℃、25 ℃、30 ℃)等進行了考察。結(jié)果表明，使用文中所用的色譜條件時，展開效果較好，斑點清晰，偽品無相應(yīng)斑點。

3.3 浸出物測定方法考察

在進行浸出物測定時，對浸出方法(冷浸法、熱浸法)，浸出溶劑種類(甲醇、乙醇、水)，浸出溶劑濃度(20%，50%，70%，95%)進行考察，結(jié)果，使用本文的浸出方法和溶劑測定時，浸出物含量最高。

綜上，鳳仙花的顯微鑒別特征易見；薄層色譜鑒別方法專屬性強，薄層色譜斑點清晰，分離度較好，偽品為陰性；增加水分、總灰分、浸出物檢查后，質(zhì)量標準更完善，可以為提高鳳仙花藥材的質(zhì)量控制標準提供科學(xué)依據(jù)。