胃癌患者組織中BDNF、miR-1468表達(dá)變化及其診斷價(jià)值分析

焦凌玉，黃立娜，李曉麗

商丘市第一人民醫(yī)院病理科(河南 商丘 476000)

胃癌是常見的消化道惡性腫瘤，是全球第2大致死癌癥，已成為威脅人類生命安全的惡性腫瘤之一。胃癌為非特異性癥狀，致使早期診斷率較低，影響患者的治愈率、生存率[1]。研究表明[2]腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(BDNF)參與了神經(jīng)母細(xì)胞瘤、肝癌及肺癌等多種腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、侵襲轉(zhuǎn)移，但關(guān)于其在胃癌組織中表達(dá)的研究較少。近年來微小RNA與腫瘤發(fā)病之間關(guān)系成為了研究熱點(diǎn)，越來越多的研究顯示[3]miRNAs參與了胃癌細(xì)胞的代謝、分化、增殖及凋亡，但微小核糖核酸1648(miR-1468)在胃癌組織中的表達(dá)情況仍不明確。本次研究對(duì)胃癌組織中BDNF、miR-1468的表達(dá)水平進(jìn)行檢測(cè)，并分析其與臨床病理的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1一般資料收集2019年9月-2021年9月商丘市第一人民醫(yī)院進(jìn)行手術(shù)切除的胃癌組織80例，其中女性28例，男性52例，年齡25～79歲，平均年齡(61.56±3.78)歲；TNM分期：Ⅰ～Ⅱ期48例，Ⅲ～Ⅳ期32例；腫瘤浸潤(rùn)深度：T1、T2期31例，T3+T4期49例；腫瘤大?。骸? cm 24例，<5 cm 56例；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移：無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移33例，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移47例；組織分化程度：高、中分化45例，低、未分化35例。

1.2方法

1.2.1 BDNF檢測(cè) 采用免疫組化染色法，將胃癌組織進(jìn)行連續(xù)切片(5 μm)，先進(jìn)行脫蠟水化，然后室溫下加入3%H2O2；將切片放入檸檬酸緩沖液中，微波加熱，使抗原修復(fù)，冷卻，將山羊血清加入其中，然后封閉30 min；加入1∶300的鼠抗人BDNF多克隆抗體，隔夜(過夜反應(yīng))，加入生物素標(biāo)記的(1∶2 000)二抗，將緩沖液放置于保濕盒中，加入反應(yīng)液，PBS3次振洗；加入DAB試劑，觀察顯色情況，控制顯色時(shí)間，采用蒸餾水沖洗，采用蘇木精襯染，蒸餾水沖洗完成后，脫水，最后采用中性樹膠封片。

1.2.2 miR-1468檢測(cè) 將胃癌組織置于研缽中，加入液氮，將組織研磨成細(xì)粉并置入離心管中，氯仿萃取，采用異丙醇進(jìn)行沉淀，采用75%乙醇進(jìn)行洗滌，再將其置入DEPC水中保存。采用Nanodrop 2000超微量分光光度計(jì)對(duì)RNA的純度和濃度進(jìn)行測(cè)定。采用miRNA檢測(cè)試劑盒檢測(cè)miR-1468，以U6作為內(nèi)參，miR-1468的表達(dá)水平采用2-ΔΔCt法表示。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS 21.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件，計(jì)數(shù)資料以%表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)，以P<0.05表示有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

2 結(jié)果

2.1胃癌患者組織中BDNF表達(dá)水平與其臨床病理的關(guān)系胃癌組織中BDNF的陽(yáng)性表達(dá)與患者的性別、年齡、腫瘤大小、組織分化程度無關(guān)(P>0.05)，胃癌組織中BDNF的陽(yáng)性表達(dá)與患者的TNM分期、腫瘤浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)(P<0.05)；其中TNM分期為Ⅲ～Ⅳ期的陽(yáng)性表達(dá)率高于TNM分期為Ⅰ～Ⅱ期的患者(P<0.05)，腫瘤浸潤(rùn)較深(T3+T4)的陽(yáng)性表達(dá)率高于腫瘤浸潤(rùn)較淺(T1+T2)的患者(P<0.05)，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的陽(yáng)性表達(dá)率高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者(P<0.05)，見表1。

表1 胃癌患者組織中BDNF表達(dá)水平與其臨床病理的關(guān)系[n(%)]

2.2胃癌患者組織中miR-1468表達(dá)水平與其臨床病理的關(guān)系胃癌組織中miR-1468表達(dá)水平與患者的年齡、性別、組織分化程度無關(guān)(P>0.05)，胃癌組織中miR-1468表達(dá)水平與患者的TNM分期、腫瘤浸潤(rùn)深度、腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)(P<0.05)；其中TNM分期為Ⅲ～Ⅳ期的高表達(dá)率高于TNM分期為Ⅰ～Ⅱ期的患者(P<0.05)，腫瘤浸潤(rùn)較深(T3+T4)的高表達(dá)率高于腫瘤浸潤(rùn)較淺(T1+T2)的患者(P<0.05)，腫瘤≥5 cm的高表達(dá)率高于腫瘤<5 cm的患者(P<0.05)，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的高表達(dá)率高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者(P<0.05)，見表2。

表2 胃癌患者組織中miR-1468表達(dá)水平與其臨床病理的關(guān)系[n(%)]

3 討論

胃癌的發(fā)病機(jī)制尚不明確，研究認(rèn)為[4]其發(fā)病與慢性疾病進(jìn)展、飲食、遺傳、幽門螺旋桿菌感染等有關(guān)，飲食習(xí)慣中腌制食品含有的大量N-亞硝基化合物是引起人類癌癥最主要的化合物，是胃癌發(fā)病的高危因素；飲酒對(duì)胃的長(zhǎng)期刺激導(dǎo)致胃黏膜細(xì)胞損傷并在繁殖的細(xì)菌作用下促進(jìn)致癌物質(zhì)亞硝胺類合成也是胃癌發(fā)病的危險(xiǎn)因素；遺傳因素對(duì)胃癌發(fā)病的影響則可能與細(xì)胞色素P450酶系統(tǒng)與胃癌的易感性有關(guān)。胃癌早期臨床癥狀不明顯，導(dǎo)致患者未及時(shí)診斷疾病，致使錯(cuò)過早期最佳治療時(shí)機(jī)，因此，盡早診斷對(duì)胃癌治療具有重要意義。

BDNF位于11號(hào)染色體的短臂上，是神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子家族成員之一，可與高親和力受體酪氨酸激酶受體B或低親和力受體p75神經(jīng)生長(zhǎng)因子受體結(jié)合,可激活下游PI3K/PDK1/Akt/Ras/MAPK等信號(hào)通路,上調(diào)Ca2+通道發(fā)揮生物學(xué)效應(yīng)，參與多種非神經(jīng)系統(tǒng)、神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤的發(fā)生發(fā)展，并可以維持腫瘤細(xì)胞生存，影響腫瘤細(xì)胞增殖、侵襲轉(zhuǎn)移，還與腫瘤血管生成等惡性生物學(xué)行為有關(guān)[5-6]。miRNA是存在于真核生物中的非編碼RNA，長(zhǎng)約22個(gè)核苷酸，其可調(diào)控靶基因的表達(dá)，參與腫瘤細(xì)胞的增殖、分化、遷移、侵襲及凋亡，對(duì)于惡性腫瘤的診斷、預(yù)后具有重要意義。研究表明[7]miR-1468與胰腺癌、肺癌、肝細(xì)胞癌等多種系統(tǒng)腫瘤密切相關(guān)[8]。miRNA可通過促進(jìn)磷酸酶和張力蛋白同源物/磷脂酰肌醇3-激酶/絲氨酸蘇氨酸激酶信號(hào)傳導(dǎo)通路以及誘導(dǎo)上皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化等途徑促進(jìn)胃癌的發(fā)生，在缺氧環(huán)境下則可能在缺氧誘導(dǎo)因子-1α的作用下調(diào)節(jié)miRNA含量，如miR-224的表達(dá)，從而下調(diào)RASSF8基因并促進(jìn)胃癌細(xì)胞生長(zhǎng)。胃液中的miRNA直接由腫瘤釋放而未經(jīng)肝臟清除，其含量表達(dá)對(duì)于提示胃癌程度準(zhǔn)確度也相對(duì)較高，在胃癌患者與良性患者之間miRNA的表達(dá)差異較為顯著。

竇維佳等[9]認(rèn)為BDNF參與了胃癌的進(jìn)展，其在胃癌晚期患者體內(nèi)高度表達(dá)。本組結(jié)果顯示：胃癌組織中BDNF在患者TNM分期后期、腫瘤浸潤(rùn)較深、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移時(shí)的陽(yáng)性表達(dá)率較高，說明BDNF表達(dá)與胃癌的疾病發(fā)展密切相關(guān)，可作為胃癌診斷的重要指標(biāo)[10]。徐文靜[11]研究發(fā)現(xiàn)，BDNF在胃癌前病變時(shí)表現(xiàn)出過度表達(dá)，更易出現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、血管侵犯、腹腔轉(zhuǎn)移等不良預(yù)后，提示患者可能生存率更低，對(duì)于胃癌患者的預(yù)后有一定提示意義。BDNF可激活A(yù)kt信號(hào)通路并促進(jìn)化療藥物的安全使用，例如降低阿霉素引起的心臟毒性，從而發(fā)揮心臟保護(hù)作用以減輕胃癌治療過程中化療藥物帶來的損傷。郭東棟等[12]研究證實(shí)miR-1468在胃癌組織中高度表達(dá)會(huì)影響患者的預(yù)后。本組結(jié)果顯示：胃癌組織中miR-1468在患者TNM分期后期、腫瘤浸潤(rùn)較深、腫瘤較大、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移轉(zhuǎn)移時(shí)高度表達(dá)，說明miR-1468在胃癌晚期高度表達(dá)，其可能參與了胃癌的發(fā)展，檢測(cè)該指標(biāo)可以反映患者的預(yù)后。

綜上所述，胃癌組織中BDNF的陽(yáng)性表達(dá)與患者的TNM分期、腫瘤浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，miR-1468高表達(dá)與患者的TNM分期、腫瘤浸潤(rùn)深度、腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，對(duì)于胃癌的診斷具有較好價(jià)值。