正交試驗法結(jié)合信息熵理論優(yōu)化玄參生物活性成分的提取工藝

鄧 瑩， 劉 杰， 韓忠耀， 鄧先擴， 李 香

(黔南民族醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校， 貴州 都勻 558000)

0 引言

【研究意義】玄參藥材來源于玄參科植物玄參(ScrophularianingpoensisHemsl.)的干燥根，具有清熱涼血、滋陰降火及解毒散結(jié)等功效，常用于治療熱入營血、溫毒發(fā)斑、骨蒸勞嗽、目赤、咽痛、白喉、瘰疬及癰腫瘡毒等癥[1]；是玄麥柑橘顆粒、養(yǎng)陰清肺丸、金嗓散結(jié)丸等多種制劑的組方藥材，為我國常用的大宗藥材，年需求量7 000～8 000 t[2]。中藥材有效成分的含量對保證用藥質(zhì)量尤為重要。因此，研究玄參藥材活性成分的提取工藝，可為其質(zhì)量控制奠定基礎(chǔ)，對促進玄參藥材產(chǎn)業(yè)的發(fā)展具有重要現(xiàn)實意義?！厩叭搜芯窟M展】玄參的化學(xué)成分主要有環(huán)烯醚萜類、苯丙素苷類、有機酸類、黃酮類及總黃酮類等[3]，其中，哈巴苷和哈巴俄苷具有抗炎作用[4-5]，肉桂酸具有瀉下及抗細菌、真菌的作用[6]，黃酮類具有抗炎鎮(zhèn)痛和抗腫瘤抗氧化等作用[7]，是玄參的主要生物活性成分。對玄參生物活性成分的提取工藝研究，主要集中在哈巴苷和哈巴俄苷[8-10]、環(huán)烯醚萜苷和苯丙素苷[11]、總黃酮[7]、多糖[12]及肉桂酸[13]等方面。信息熵賦權(quán)法能夠處理數(shù)量較大且較復(fù)雜的數(shù)據(jù)，用其處理后得到的多指標(biāo)權(quán)重系數(shù)計算綜合評分，可使結(jié)果更客觀[14]。信息熵賦權(quán)法和逆概率加權(quán)等數(shù)學(xué)模型作為新興交叉學(xué)科，近年來被廣泛應(yīng)用于中藥、民族藥的質(zhì)量控制，以及指導(dǎo)中藥、民族藥加工工藝優(yōu)化的生產(chǎn)實踐[14-18]。李燕等[14]在單因素試驗的基礎(chǔ)上，通過信息熵賦權(quán)法計算所測各指標(biāo)的權(quán)重系數(shù)進而計算其綜合評分，并采用L9(34)正交試驗設(shè)計優(yōu)化了千里光的提取工藝，結(jié)果表明：在最佳提取工藝條件下，千里光藥材生物活性成分綠原酸、金絲桃苷、總黃酮和總生物堿含量提取率的RSD均小于1.5%(n=3)。韓忠耀等[16]基于信息熵賦權(quán)法對苗藥水冬瓜根皮提取工藝進行優(yōu)化，證明信息熵賦權(quán)法可用于苗藥水冬瓜根皮藥材提取工藝的優(yōu)選。【研究切入點】已報道的玄參提取工藝中所用的評價指標(biāo)均為單一指標(biāo)或同一類指標(biāo)，而中藥通過多成分、多靶點發(fā)揮藥效，已成為學(xué)術(shù)界的共識，玄參通過多指標(biāo)評價提取工藝的研究較少。在結(jié)果評價中，以傳統(tǒng)的主觀賦值綜合評分法確定各指標(biāo)權(quán)重系數(shù)存在客觀性和科學(xué)性不足的問題，而用信息熵賦權(quán)法確定多指標(biāo)成分的權(quán)重系數(shù)則可使結(jié)果更具科學(xué)性[15]。但以信息熵賦權(quán)法結(jié)合正交試驗優(yōu)化玄參提取工藝的研究鮮見報道?！緮M解決的關(guān)鍵問題】采用單因素試驗研究甲醇體積分數(shù)、液固比、提取時間及提取次數(shù)4個因素對玄參哈巴苷、哈巴俄苷、肉桂酸和總黃酮等生物活性成分提取量的影響，并在此基礎(chǔ)上采用L9(34)正交試驗結(jié)合信息熵理論確定各指標(biāo)的客觀權(quán)重系數(shù)，優(yōu)化玄參生物活性成分的提取工藝，以期為提高玄參的利用率及標(biāo)準(zhǔn)化提取工藝的制定提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

1.1.1 玄參 試驗用玄參購于貴州省遵義市道真縣玄參種植基地，經(jīng)黔南民族醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校中藥教研室鑒定為玄參正品。

1.1.2 儀器 Agilent 1260型高效液相色譜儀，安捷倫科技公司；Agilent C18色譜柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)，安捷倫科技公司；Cary 100型雙光束紫外-可見分光光度計，安捷倫科技公司；SG-4050C型數(shù)顯恒溫水浴鍋，上海碩光科技有限公司；FA1004B型電子天平，溫州瑞昕儀器有限公司；超聲儀和電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱等。

1.1.3 試劑 哈巴苷(批號CHB-H-006)、哈巴俄苷(批號CHB190105)、肉桂酸(批號CHB190106)和蘆丁(批號190115)對照品，均購于成都克洛瑪生物科技有限公司；乙腈為色譜純，水為娃哈哈純凈水，其余試劑均為分析純。

1.2 試驗方法

1.2.1 材料預(yù)處理

1) 標(biāo)準(zhǔn)溶液制備。參照文獻[19]制備哈巴苷和哈巴俄苷質(zhì)量濃度分別為0.06 mg/mL和0.23 mg/mL的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液；參照文獻[13]制備肉桂酸質(zhì)量濃度為0.1 mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液；參照文獻[16]制備質(zhì)量濃度為0.32 mg/mL的蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液。

2) 供試品溶液的制備。將采購的玄參藥材干燥后粉碎，粉末過3號篩，稱取適量粉末依照L9(34)正交試驗設(shè)計，對各藥材進行提取，總黃酮含量待測液直接過濾冷藏備用，哈巴苷、哈巴俄苷和肉桂酸待測液用0.45 μm微孔濾膜過濾冷藏備用。

1.2.2 哈巴苷、哈巴俄苷及肉桂酸系統(tǒng)適用性試驗 哈巴苷與哈巴俄苷色譜條件參照文獻[19]的方法進行；肉桂酸參照文獻[13]的方法進行。

1.2.3 繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線 哈巴苷和哈巴俄苷參照文獻[19]的方法，肉桂酸參照文獻[13]的方法，以濃度為橫坐標(biāo)(x)、峰面積(Y)為縱坐標(biāo)進行線性回歸擬合；蘆丁參照文獻[16]的方法，以含量為橫坐標(biāo)(x)、吸光度(Y)為縱坐標(biāo)進行線性回歸擬合。

1.2.4 方法學(xué)考察 參照文獻[13，16，19]的方法分別考察哈巴苷、哈巴俄苷、肉桂酸和蘆丁的精密度、重復(fù)性及穩(wěn)定性。

1.2.5 加樣回收率試驗 稱取已知含量的玄參樣品粉末6份，精密加入哈巴苷、哈巴俄苷、肉桂酸和蘆丁對照品溶液適量，按1.2.1的方法制備哈巴苷、哈巴俄苷、肉桂酸和總黃酮供試品溶液，分別測定哈巴苷、哈巴俄苷、肉桂酸及總黃酮含量，計算平均回收率。

1.2.6 哈巴苷、哈巴俄苷、肉桂酸和總黃酮的含量測定 按照1.2.1的方法分別制備哈巴苷、哈巴俄苷、肉桂酸和總黃酮樣品溶液，然后按1.2.2進樣測定，再按1.2.3根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線法計算哈巴苷、哈巴俄苷、肉桂酸和總黃酮的含量。

1.2.7 不同因素對玄參生物活性成分提取的影響 以哈巴苷、哈巴俄苷、肉桂酸和總黃酮提取量為評價指標(biāo)，采用超聲提取法考察不同因素對玄參生物活性成分提取量的影響[20]。每組試驗3次重復(fù)，取平均值進行計算。

1) 甲醇體積分數(shù)(A)。試驗設(shè)5個處理：A1～A5，甲醇體積分數(shù)依次為20%、30%、40%、50%及60%。精密稱取玄參藥材粗粉5份各1.0 g，固定提取次數(shù)為2次，每次30 min，分別加入10倍量不同體積分數(shù)甲醇進行超聲提取，比較玄參總黃酮、哈巴苷、哈巴俄苷和肉桂酸提取量，初步確定甲醇體積分數(shù)。

2) 液固比(B)。試驗設(shè)6個處理：B1～B6，液固比(mL/g)依次為10∶1、20∶1、30∶1、40∶1、50∶1和60∶1。精密稱取玄參藥材粗粉6份各1.0 g，固定提取次數(shù)為2次，每次30 min，提取溶劑為40%甲醇，在不同液固比條件下進行超聲提取。比較玄參總黃酮、哈巴苷、哈巴俄苷和肉桂酸提取量，初步確定提取液固比。

3) 提取時間(C)。試驗設(shè)4個處理：C1～C4，提取時間依次為30 min、45 min、60 min和75 min。精密稱取玄參藥材粗粉4份各1.0 g，甲醇體積分數(shù)為40%，液固比(mL/g)為30∶1，固定提取次數(shù)為2次，每次分別提取30 min、45 min、60 min和75 min。比較玄參總黃酮、哈巴苷、哈巴俄苷和肉桂酸提取量，初步確定超聲提取時間。

4) 提取次數(shù)(D)。試驗設(shè)4個處理：D1～D4，提取次數(shù)依次為1次、2次、3次和4次。精密稱取玄參藥材粗粉4份各1.0 g，再加入40%甲醇30 mL進行超聲提取，分別提取1次、2次、3次和4次，每次60 min。比較玄參總黃酮、哈巴苷、哈巴俄苷和肉桂酸提取量，初步確定提取次數(shù)。

1.2.8 正交試驗優(yōu)化玄參的提取工藝 根據(jù)單因素試驗結(jié)果，選取甲醇體積分數(shù)(A)、液固比(B)、提取時間(C)和提取次數(shù)(D)為考察因素，采用L9(34)正交試驗，以哈巴苷、哈巴俄苷、肉桂酸和總黃酮提取量為評價指標(biāo)，優(yōu)化玄參的提取工藝。正交試驗因素與水平詳見表1。

表1 玄參提取工藝優(yōu)化L9(34)正交試驗的因素與水平

1.2.9 信息熵賦權(quán)法的應(yīng)用 參照文獻[14，16-18]的方法建立哈巴苷、哈巴俄苷、肉桂酸和總黃酮提取量原始矩陣(Xij)，然后將其轉(zhuǎn)換為概率矩陣(Pij)mn，再采用信息熵(Hi)賦權(quán)法對(Pij)mn進行加權(quán)賦值并計算綜合評分(M)。

Mi=P1iW1+P2iW2+P3iW3+P4iW4

式中，Pij表示第j次試驗在第i指標(biāo)下的概率，i、j分別表示矩陣的行、列；Hi表示第i項指標(biāo)的信息熵；Wi表示第i項指標(biāo)的權(quán)重系數(shù)；Mi表示第i項指標(biāo)的綜合評分。

1.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析

采用SPSS 17.0進行顯著性分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 哈巴苷、哈巴俄苷、肉桂酸和蘆丁系統(tǒng)適用性試驗與方法學(xué)考察

2.1.1 系統(tǒng)適用性 試驗結(jié)果顯示，哈巴苷、哈巴俄苷和肉桂酸的色譜峰與其他色譜峰均完全分離，峰型較好，分離度>1.50，且拖尾因子介于0.95～1.05。哈巴苷、哈巴俄苷和肉桂酸對照品溶液與供試品溶液的高效液相色譜圖出峰時間一致，峰形相似，且理論塔板數(shù)不低于5 000。表明，哈巴苷、哈巴俄苷及肉桂酸的系統(tǒng)適用性試驗方法穩(wěn)定性較好，適用于上述3種成分的含量測定。

2.1.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線 經(jīng)擬合得到哈巴苷、哈巴俄苷、肉桂酸和總黃酮的標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程：Y哈巴苷=22.195x-0.026 1(R2=1.000 0)；Y哈巴俄苷=13.161x+1.809(R2=0.999 9)；Y肉桂酸=534.39x-47.421(R2=0.999 9)；Y總黃酮=0.354 6x-0.282 7(R2=0.999 0)。

2.1.3 方法學(xué)考察 哈巴苷、哈巴俄苷、肉桂酸及蘆丁精密度試驗的RSD分別為0.76%、0.30%、1.30%及0.25%，表明儀器精密度良好；4個指標(biāo)重復(fù)性試驗的RSD分別為1.18%、1.78%、1.82%和2.53%，表明檢測方法重復(fù)性較好；哈巴苷、哈巴俄苷和肉桂酸穩(wěn)定性試驗的RSD分別為1.14%、1.88%和0.81%，表明3個指標(biāo)在24 h內(nèi)保持穩(wěn)定，總黃酮穩(wěn)定性試驗的RSD為1.36%，表明玄參總黃酮在120 min內(nèi)穩(wěn)定性良好。哈巴苷、哈巴俄苷、肉桂酸和蘆丁的平均回收率分別為98.12%、98.99%、96.82%和97.40%，RSD依次為2.02%、2.31%、1.56%和2.14%。表明，哈巴苷、哈巴俄苷、肉桂酸和總黃酮的提取方法與檢測方法準(zhǔn)確可靠。

2.2 不同因素處理玄參哈巴苷、哈巴俄苷、肉桂酸和總黃酮的提取量

從圖1看出，不同因素處理玄參哈巴苷、哈巴俄苷、肉桂酸和總黃酮的提取量存在差異。

圖1 不同因素處理玄參哈巴苷、哈巴俄苷、肉桂酸和總黃酮的提取量

2.2.1 甲醇體積分數(shù) 隨著甲醇體積分數(shù)的增加哈巴苷、肉桂酸和總黃酮的提取量均呈先增后減趨勢，哈巴俄苷的提取量呈先增后減再增趨勢。哈巴苷提取量為1.07～1.49 mg/g，呈A3>A4>A5>A2>A1，其中，A3最高，A4(1.43 mg/g)其次，A1最低。哈巴俄苷提取量為0.92～1.37 mg/g，呈A3>A5>A4>A2>A1，其中，A3最高，A5(1.30 mg/g)其次，A1最低。肉桂酸提取量為0.28～0.39 mg/g，呈A2>A3>A4>A5>A1，其中，A2最高，A3(0.35 mg/g)其次，A1最低?？傸S酮提取量為1.25～1.31 mg/g，呈A3>A4>A5>A2>A1，其中，A3最高，A4(1.29 mg/g)其次，A1最低。綜上看出，哈巴苷、哈巴俄苷及總黃酮提取量均在A3時達最大值，肉桂酸提取量在A2時達最大。因此，選擇甲醇體積分數(shù)30%甲醇、40%甲醇和50%甲醇為后續(xù)優(yōu)化體積分數(shù)。

2.2.2 液固比 隨著液固比的增加，哈巴苷、肉桂酸、總黃酮和哈巴俄苷的提取量均呈先增后減趨勢。哈巴苷提取量為1.01～1.49 mg/g，呈B3>B4>B5>B6>B2>B1，其中，B3最高，B4(1.45 mg/g)其次，B1最低。哈巴俄苷提取量為0.92～1.32 mg/g，呈B4>B5>B3>B2>B6>B1，其中，B4最高，B5(1.28 mg/g)其次，B1最低。肉桂酸提取量為0.28～0.47 mg/g，呈B3>B2>B4>B1>B5>B6，其中，B3最高，B2(0.42 mg/g)其次，B6最低?？傸S酮提取量為1.21～1.35 mg/g，呈B3>B4>B2>B5>B1>B6，其中，B3最高，B4(1.33 mg/g)其次，B6最低。綜上看出，當(dāng)加入的溶劑量為30 mL時哈巴苷、肉桂酸及總黃酮的提取量達最高，繼續(xù)增加溶劑量3個指標(biāo)呈逐漸下降趨勢；哈巴俄苷提取量在加入溶劑量為40 mL時達最高。從節(jié)約溶劑的角度和提取量最大化考慮選取液固比(mL/g)20∶1、30∶1和40∶1進行后續(xù)試驗。

2.2.3 提取時間 哈巴苷和肉桂酸的提取量隨提取時間增加呈增加趨勢，哈巴俄苷和總黃酮的提取量則隨著提取時間的增加呈先增后減趨勢。哈巴苷提取量為0.95～1.27 mg/g，呈C4>C3>C2>C1，其中，C4最高，C3(1.26 mg/g)其次，C1最低。哈巴俄苷提取量為1.24～1.32 mg/g，呈C3>C2>C4>C1，其中，C3最高，C2(1.26 mg/g)其次，C4最低。肉桂酸提取量為0.28～0.36 mg/g，C4>C3>C2>C1，其中，C4最高，C3(0.35 mg/g)其次，C1最低?？傸S酮提取量為1.22～1.36 mg/g，呈C3>C2>C4>C1，其中，C3最高，C2(1.32 mg/g)其次，C1最低。綜上看出，在提取時間為C3時，哈巴俄苷和總黃酮的提取量均達最大值；繼續(xù)增加提取時間，哈巴苷和肉桂酸的提取量增加較少，而哈巴俄苷和總黃酮的提取量則呈下降趨勢?？赡苁请S著提取時間的增加，其他成分的溶出使藥材溶液達到飽和狀態(tài)，使哈巴俄苷和總黃酮的溶出減少。因此，選擇提取時間45 min、60 min和75 min進行后續(xù)試驗。

2.2.4 提取次數(shù) 提取次數(shù)是決定中藥中有效成分提取是否完全的關(guān)鍵因素。隨著提取次數(shù)的增加，哈巴苷、肉桂酸、總黃酮和哈巴俄苷的提取量均呈逐漸增加趨勢，呈D4>D3>D2>D1。哈巴苷提取量為1.03～1.28 mg/g，其中，D4最高，D3(1.26 mg/g)其次，D1最低。哈巴俄苷提取量為1.14～1.26 mg/g，其中，D4最高，D3(1.23 mg/g)其次，D1最低。肉桂酸提取量為0.36～0.43 mg/g，其中，D4最高，D3(0.40 mg/g)其次，D1最低?？傸S酮提取量為1.19～1.34 mg/g，其中，D4最高，D3(1.29 mg/g)其次，D1最低。綜上看出，在提取次數(shù)為2次時4種成分的提取量已趨于穩(wěn)定，當(dāng)提取到第3次和第4次時4種成分的提取量與第2次時的提取量差異不顯著。因此，從節(jié)約能源和節(jié)省時間的角度考慮，選取1次、2次和3次為后續(xù)試驗的提取次數(shù)。

2.3 正交試驗優(yōu)化

2.3.1 4個指標(biāo)的綜合評分 哈巴苷、哈巴俄苷、肉桂酸和總黃酮提取量4個指標(biāo)的信息熵(Hi)分別為0.990 208 10、0.992 185 35、0.989 887 52和0.989 703 14，其權(quán)重系數(shù)依次為0.257 573 91、0.205 562 71、0.266 006 69和0.270 856 70。從表2看出，各處理的綜合評分為6.652～9.052分，呈T4>T7>T1>T3>T9>T5>T2>T6>T8。

2.3.2 最優(yōu)提取工藝條件 從表2看出，各處理的哈巴苷提取量為1.07～1.68 mg/g，呈T1>T7>T4>T5>T6>T9>T8>T3>T2；哈巴俄苷提取量為0.70～1.37 mg/g，呈T3>T5>T9>T4>T2>T7>T6>T1>T8；肉桂酸提取量為0.28～0.47 mg/g，呈T2=T3>T9>T5=T7>T1>T6=T8>T4；總黃酮提取量為1.29～3.23 mg/g，呈T6>T9>T8>T3>T2>T5>T4>T1=T7。從表3看出，甲醇體積分數(shù)3個水平的綜合評分為7.774～8.102分，呈k1>k2>k3；液固比的綜合評分為7.383～8.799分，呈k1>k3>k2；提取時間的綜合評分為7.546～8.222分，呈k2>k3>k1；提取次數(shù)的綜合評分為7.907～8.053分，呈k1>k2>k3。從極差(R值)看出，各因素對哈巴苷、哈巴俄苷、肉桂酸和總黃酮提取量綜合評分的影響程度為B>C>A>D，即液固比>提取時間>甲醇體積分數(shù)>提取次數(shù)；結(jié)合k值得出A1B1C2D1是最佳提取工藝，即：甲醇體積分數(shù)為30%，液固比為20∶1，提取時間為60 min，提取次數(shù)為1次。以R值最小的D因素作為誤差項進行方差分析可知，液固比(B)和提取時間(C)為顯著性影響因素(P<0.05)。

表2 玄參生物活性成分提取工藝優(yōu)化的正交試驗設(shè)計、結(jié)果與綜合評分

表3 正交試驗結(jié)果的極差

表4 正交試驗結(jié)果的方差

2.3.3 驗證試驗 由于篩選出的最佳處理組合不在試驗設(shè)計方案中，因此進行驗證試驗。精密稱取玄參藥材粗粉3份各1.0 g，在優(yōu)化條件下進行驗證試驗，3次重復(fù)。從表5看出，哈巴苷、哈巴俄苷、肉桂酸和總黃酮提取量均較高，依次為1.59～1.64 mg/g、1.12～1.16 mg/g、0.54～0.57 mg/g和2.29～2.36 mg/g，RSD為1.51%～2.76%，均小于3.00%。表明，優(yōu)化的提取工藝穩(wěn)定可行。

表5 驗證試驗玄參生物活性成分的提取量

3 討論

李燕等[14，16-18]在單因素試驗的基礎(chǔ)上，通過信息熵賦權(quán)法計算所測各指標(biāo)的權(quán)重系數(shù)計算其綜合評分，并結(jié)合L9(34)正交試驗設(shè)計優(yōu)化了不同中藥材的提取工藝，其生物活性成分提取率的RSD均小于1.5%～3.0%(n=3)。

已有關(guān)于玄參藥材提取方法的研究多是單個指標(biāo)的提取[21]，以多指標(biāo)綜合評價玄參提取工藝的研究較少。本試驗根據(jù)玄參藥理作用選取玄參主要生物活性成分哈巴苷、哈巴俄苷、肉桂酸和總黃酮的提取量作為評價指標(biāo)，相對于單一評價指標(biāo)，該提取工藝所選取的指標(biāo)更符合中藥的藥效發(fā)揮特點，使研究結(jié)果更真實、全面和準(zhǔn)確。而對于提取工藝中多指標(biāo)的評價方法，所報道的玄參提取工藝[10]中多以主觀賦值的綜合評分法來對結(jié)果進行評價，本試驗在單因素考察的基礎(chǔ)上，采用信息熵賦權(quán)法結(jié)合正交試驗對玄參藥材的提取工藝進行優(yōu)化，在優(yōu)化的提取工藝條件下玄參藥材的生物活性成分哈巴苷、哈巴俄苷、肉桂酸及總黃酮提取量分別為1.61 mg/g、1.14 mg/g、0.55 mg/g和2.33 mg/g，RSD均小于3%(n=3)。證明，正交試驗結(jié)合信息熵賦權(quán)法優(yōu)化玄參提取工藝的方法可行，其有效節(jié)約了試驗成本，減少了試驗次數(shù)，使試驗結(jié)果更具客觀性和科學(xué)性。與李燕等[14，16-18]的研究結(jié)論類似。

4 結(jié)論

采用單因素試驗在其他處理條件固定的情況下篩選得到，當(dāng)甲醇體積分數(shù)為40%時，哈巴苷、哈巴俄苷、肉桂酸和總黃酮的提取量最高，分別為1.49 mg/g、1.37 mg/g、0.35 mg/g和1.31 mg/g；當(dāng)液固比(mL/g)為30∶1時上述4種成分提取量最高，分別為1.49 mg/g、1.26 mg/g、0.47 mg/g和1.35 mg/g；當(dāng)提取時間為60 min時4種成分提取量最高，分別為1.26 mg/g、1.32 mg/g、0.35 mg/g和1.36 mg/g；當(dāng)提取次數(shù)為2次時4種成分提取量最高，分別為1.28 mg/g、1.23 mg/g、0.42 mg/g和1.26 mg/g。通過信息熵理論將哈巴苷、哈巴俄苷、肉桂酸和總黃酮提取量的權(quán)重系數(shù)確定為0.257 573 91、0.205 562 71、0.266 006 69和0.270 856 70；結(jié)合經(jīng)正交試驗確定玄參藥材生物活性成分的最佳提取工藝：提取溶劑為30%甲醇、液固比(mL/g)為20∶1、提取時間60 min、提取1次。在此提取工藝條件下，玄參藥材中哈巴苷、哈巴俄苷、肉桂酸及總黃酮提取量依次為1.61 mg/g、1.14 mg/g、0.55 mg/g和2.33 mg/g，RSD均小于3%。表明，優(yōu)化后的提取工藝穩(wěn)定性好、玄參生物活性成分提取量高，可為玄參藥材提取工藝的標(biāo)準(zhǔn)化制定提供參考。