宮頸活檢P16和Ki-67蛋白表達(dá)在高危HPV感染患者中預(yù)測(cè)早期宮頸癌的價(jià)值

宮頸癌屬于當(dāng)下顯著威脅女性生命安全的癌癥類型之一，應(yīng)及早診治，以提高療效，改善患者預(yù)后。目前，臨床預(yù)測(cè)早期宮頸癌的方法較多，常見如宮頸液基薄層細(xì)胞學(xué)檢測(cè)（Thinprep cytologic test，TCT）檢查、高危人乳頭狀瘤病毒（human papillomavirus，HPV）檢測(cè)、陰道鏡檢查等[1]。而HPV感染患者被診斷為早期宮頸癌的可能性較高，應(yīng)引起重視，并結(jié)合其他檢查項(xiàng)目以明確診斷[2]。近幾年隨著臨床研究的不斷深入，宮頸活檢抑制基因（P16）和增殖細(xì)胞核抗原（Ki-67）蛋白表達(dá)在早期宮頸癌診斷中獲得了廣泛運(yùn)用，并在一定程度上提高了該病的診斷率[3-4]?；诖?，本研究為了進(jìn)一步分析宮頸活檢P16和Ki-67蛋白表達(dá)在高危HPV感染患者中預(yù)測(cè)早期宮頸癌的價(jià)值，就我院婦科80例高危HPV感染患者的早期宮頸癌診斷情況進(jìn)行分析，旨在為臨床診斷提供參考，以提高診斷率，使患者及早獲得治療，繼而改善預(yù)后，降低死亡率?，F(xiàn)總結(jié)匯報(bào)如下。

1 資料及方法

1.1 一般資料 采取回顧性研究法，選取我院婦科2020年1月-2021年1月的80例高危HPV感染患者，年齡27-68歲，平均為（46.54±10.37）歲；孕次1-6次，平均（3.22±1.06）次；產(chǎn)次0-3次，平均為（1.21±1.15）次；已婚62例，未婚有性生活史18例；有生育史55例，無(wú)生育史25例。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)審批通過(guò)。納入標(biāo)準(zhǔn)：①因?qū)m頸接觸性出血、陰道流液或?qū)m頸炎就診，②高危HPV感染，③有性行為，④檢查前72h內(nèi)無(wú)陰道灌洗及用藥史，⑤患者均對(duì)研究?jī)?nèi)容知曉，并簽下同意書；排除標(biāo)準(zhǔn)：①宮頸治療史；②生殖道急性炎癥期與月經(jīng)期，③妊娠、哺乳期女性，④其他惡性腫瘤；⑤精神疾病、意識(shí)障礙。

1.2 方法

1.2.1 高危HPV感染診斷標(biāo)準(zhǔn) 將蘸有少許無(wú)菌生理鹽水的宮頸刷置于宮頸口，均勻同向旋轉(zhuǎn)幾圈后抽出，折斷宮頸刷柄，刷頭置于洗脫管內(nèi)，旋緊管蓋，做好標(biāo)簽，直立放于-20℃冰箱中保存待測(cè)。運(yùn)用HPV核酸擴(kuò)增分型檢測(cè)試劑盒（凱普生物化學(xué)科技公司）與HybrMax醫(yī)用核酸分子快速雜交儀檢測(cè)15種高危型HPV亞型（HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68），步驟為：分離提取樣本HPV-DNA，反向PCR擴(kuò)增，導(dǎo)流雜交，顯色。經(jīng)標(biāo)準(zhǔn)程序化處理后，根據(jù)有無(wú)斑點(diǎn)判定結(jié)果：所有高危型HPV亞型中出現(xiàn)任意1種或多種陽(yáng)性，視為高危HPV-DNA陽(yáng)性，診斷為高危HPV感染[5]。

1.2.2 宮頸活檢P16和Ki-67蛋白 所用標(biāo)本以10%甲醛溶液固定，蘇木精-伊紅染色，經(jīng)顯微鏡觀察后選取。運(yùn)用免疫組化方法進(jìn)行檢測(cè)，經(jīng)固定、石蠟包埋、切片、蘇木精-伊紅染色后于光鏡下進(jìn)行細(xì)胞形態(tài)觀察，判斷P16、Ki-67的陰陽(yáng)性，試劑盒為福州邁新公司生產(chǎn)的免疫組化試劑盒，嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書操作。運(yùn)用免疫組織化學(xué)法染色，滴加辣根過(guò)氧化物酶顯色，蘇木素輕度復(fù)染，光鏡下觀察，以磷酸鹽緩沖液代替一抗作陰性對(duì)照。P16判定標(biāo)準(zhǔn)：細(xì)胞核或細(xì)胞質(zhì)出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽(yáng)性細(xì)胞。Ki-67判定標(biāo)準(zhǔn)：細(xì)胞核出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽(yáng)性細(xì)胞。高倍鏡下于染色區(qū)域隨機(jī)選取5個(gè)視野，計(jì)數(shù)500個(gè)腫瘤細(xì)胞，分別計(jì)算P16、Ki-67細(xì)胞陽(yáng)性率，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)為細(xì)胞表達(dá)比例，＞5%視為陽(yáng)性[6]。

1.2.3 組織病理學(xué)檢測(cè) 運(yùn)用SLC-2000B型光學(xué)電子數(shù)碼陰道鏡觀察宮頸血管和上皮組織的變化，先行醋酸試驗(yàn)，觀察醋白上皮與血管，運(yùn)用綠色濾鏡觀察各種血管圖像，凍結(jié)最佳圖像，涂抹復(fù)方碘液進(jìn)行碘試驗(yàn)。于異常部位區(qū)活檢（包括宮頸上皮基底層的活組織部位），經(jīng)4%甲醛溶液固定后進(jìn)行病理檢查，診斷結(jié)果分為正常/炎癥、宮頸上皮內(nèi)瘤變（cervical intraepithelial neoplasia，CIN）1、CIN2-3、宮頸癌。

1.3 觀察指標(biāo) ①分析組織病理學(xué)診斷結(jié)果。②分析宮頸組織不同病變程度的P16和Ki-67蛋白表達(dá)陽(yáng)性率。③以宮頸組織病理學(xué)結(jié)果為金標(biāo)準(zhǔn)，評(píng)價(jià)宮頸活檢P16和Ki-67蛋白表達(dá)在高危HPV感染患者中預(yù)測(cè)早期宮頸癌的應(yīng)用價(jià)值，計(jì)算準(zhǔn)確度、敏感度、特異度、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值、陰性預(yù)測(cè)值。

1.4 數(shù)據(jù)處理 運(yùn)用SPSS21.0軟件處理數(shù)據(jù)，計(jì)數(shù)資料以%表示，行χ2檢驗(yàn)，P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 宮頸組織病理學(xué)結(jié)果 80例患者中，正常/炎癥有3例，CIN1有36例，CIN2-3有25例，宮頸癌有16例。

2.2 宮頸組織不同病變程度的P16和Ki-67蛋白表達(dá)陽(yáng)性率 宮頸組織病理學(xué)結(jié)果中，正常/炎癥、CIN1、CIN2-3、宮頸癌的P16陽(yáng)性率分別為0%、69.44%、92.00%、100.00%，正常/炎癥、CIN1、CIN2-3、宮頸癌的Ki-67陽(yáng)性率分別為0%、75.00%、96.00%、100.00%。見表1。

表1 宮頸組織不同病變程度的P16和Ki-67蛋白表達(dá)陽(yáng)性率[n(%)]

2.3 宮頸活檢P16和Ki-67蛋白表達(dá)預(yù)測(cè)早期宮頸癌的應(yīng)用價(jià)值 以宮頸組織病理學(xué)結(jié)果為金標(biāo)準(zhǔn)，經(jīng)計(jì)算，P16表達(dá)預(yù)測(cè)早期宮頸癌的準(zhǔn)確度、敏感度、特異度、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值、陰性預(yù)測(cè)值分別為80.00%、73.58%、92.59%、95.12%、64.10%，Ki-67表達(dá)預(yù)測(cè)早期宮頸癌的準(zhǔn)確度、敏感度、特異度、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值、陰性預(yù)測(cè)值分別為83.75%、76.92%、96.43%、97.56%、69.23%，聯(lián)合檢驗(yàn)預(yù)測(cè)早期宮頸癌的準(zhǔn)確度、敏感度、特異度、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值、陰性預(yù)測(cè)值分別為91.25%、85.42%、100.00%、100.00%、82.05%。見表2。

表2 宮頸活檢P16和Ki-67蛋白表達(dá)與宮頸組織病理學(xué)結(jié)果比較(n)

3 討論

宮頸癌為婦科常見的惡性腫瘤，患病率高，位居女性惡性腫瘤的第二位（僅次于乳腺癌）[7-8]。統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)顯示，我國(guó)每年新診斷的宮頸癌患者人數(shù)約占全球該病患者人數(shù)的25%[9]。而且該病的發(fā)病年齡呈年輕化發(fā)展趨勢(shì)，年輕化已成為宮頸癌防治工作面臨的新的嚴(yán)峻挑戰(zhàn)。該病的病灶主要位于宮頸陰道處或上皮細(xì)胞交匯部位，其發(fā)生和發(fā)展是一個(gè)多步驟、多因素的繁雜過(guò)程，其癌前病變過(guò)程漫長(zhǎng)，從癌前病變發(fā)展為宮頸癌的時(shí)間約為10年，主要可以分為如下幾個(gè)階段：低級(jí)別上皮內(nèi)瘤變—高級(jí)別上皮內(nèi)瘤變或原位癌—微小浸潤(rùn)癌—浸潤(rùn)癌[10]。早期發(fā)現(xiàn)癌前病變并予以有效治療則有可能治愈，而局部晚期患者的治療效果較不理想，存活率低（5年存活率不超過(guò)40%），復(fù)發(fā)者的存活率更低（不超過(guò)30%）[11-12]。宮頸癌是唯一能夠通過(guò)醫(yī)學(xué)干預(yù)，降低其發(fā)病率和死亡率的惡性腫瘤，盡早發(fā)現(xiàn)并積極治療癌前病變是關(guān)鍵。所以，對(duì)該病進(jìn)行篩查與早期診斷非常關(guān)鍵。

目前已明確高危型HPV感染是誘發(fā)宮頸癌癌前病變的主要危險(xiǎn)因素。隨著相關(guān)研究的不斷深入，新的篩查技術(shù)先后被研發(fā)出來(lái)，計(jì)算機(jī)輔助讀片技術(shù)的使用，讓細(xì)胞學(xué)篩查的準(zhǔn)確度得到了很大程度的提升；HPV、TCT的聯(lián)合應(yīng)用，能夠讓宮頸癌及其癌前病變的初篩率得到一定的提高。當(dāng)前普遍建議，女性應(yīng)從21歲開始就進(jìn)行宮頸癌篩查，其中21-29歲的婚育女性應(yīng)每三年檢查1次。篩查項(xiàng)目中，HPV一般不作為常規(guī)檢查項(xiàng)目，但可用于對(duì)非典型鱗狀上皮細(xì)胞的分型診斷。30-65歲的女性人群，則建議行細(xì)胞學(xué)、HPV的聯(lián)合檢查，如果兩項(xiàng)檢查的結(jié)果都呈陰性，則可調(diào)整檢查時(shí)間為3-5年一次。宮頸癌的零發(fā)病率是不可能的，但過(guò)度篩查與治療也會(huì)對(duì)女性的身體造成不必要甚至是不可逆的損傷，應(yīng)引起重視，合理選擇篩查方法。

細(xì)胞繁衍與細(xì)胞死亡之間的動(dòng)態(tài)平衡，對(duì)保持多細(xì)胞生物組織的自穩(wěn)定性有著至關(guān)重要的作用，一旦這一平衡遭到破壞，則可能引發(fā)相關(guān)疾病，如細(xì)胞繁衍能力異常提升、細(xì)胞凋亡抑制等，繼而增加癌癥的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)。P16是細(xì)胞繁殖指數(shù)，也是調(diào)控細(xì)胞增生的主要基因[13]。P16定位于9p21，其編碼相對(duì)分子質(zhì)量為1.6萬(wàn)。P16蛋白能夠通過(guò)和同細(xì)胞周期依賴性激酶4的競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合，繼而抑制cyclinD-CDK4復(fù)合物的形成，使其有激酶活性降低，使PRB蛋白磷酸化[13-14]。P16對(duì)細(xì)胞繁衍也有一定的調(diào)節(jié)作用，能夠抑制細(xì)胞的繁殖[15]。若P16出現(xiàn)基因突變或缺乏，則CDK4活性增強(qiáng)，細(xì)胞分裂加快，最終導(dǎo)致細(xì)胞惡性繁殖[16]。Ki-67是一種和細(xì)胞周期有關(guān)的蛋白質(zhì)，主要表達(dá)于繁衍期細(xì)胞的核抗原，基因處于人第10號(hào)染色體，Ki-67陽(yáng)性表達(dá)時(shí)提示癌細(xì)胞呈活躍繁衍狀態(tài)，且惡性程度越高其表達(dá)越強(qiáng)[17]。Ki-67在評(píng)估細(xì)胞繁衍活性中可發(fā)揮顯著的指導(dǎo)意義，且敏感度較高，它與細(xì)胞有絲分裂相關(guān)，也與細(xì)胞繁衍有關(guān)聯(lián)[18]。P16、Ki-67對(duì)早期宮頸癌的診斷有良好的輔助意義，其表達(dá)陽(yáng)性提示患早期宮頸癌的可能性較高[19-20]。

本研究結(jié)果顯示，正常/炎癥、CIN1、CIN2-3、宮頸癌的P16和Ki-67蛋白表達(dá)陽(yáng)性率出現(xiàn)遞增的趨勢(shì)，提示P16和Ki-67蛋白表達(dá)隨宮頸組織病變嚴(yán)重程度而逐漸增加。應(yīng)用價(jià)值評(píng)價(jià)結(jié)果顯示，P16和Ki-67蛋白表達(dá)聯(lián)合檢驗(yàn)預(yù)測(cè)早期宮頸癌的準(zhǔn)確度、敏感度、特異度、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值、陰性預(yù)測(cè)值分別為91.25%、85.42%、100.00%、100.00%、82.05%，明顯高于單項(xiàng)檢驗(yàn)，提示P16和Ki-67蛋白表達(dá)在高危HPV感染患者早期宮頸癌的預(yù)測(cè)中可發(fā)揮一定的診斷價(jià)值，敏感度、特異度高。

綜上所述，宮頸活檢P16和Ki-67蛋白表達(dá)在高危HPV感染患者中預(yù)測(cè)早期宮頸癌的應(yīng)用價(jià)值高，值得推廣。