CK-MB活性測定與質(zhì)量測定對小兒病毒性腸炎心肌損傷的評估分析*

潘章穎 徐龍華 劉小蘭

小兒病毒性腸炎是臨床上較為常見的一種急性腹瀉，常由輪狀病毒感染，影響腸道消化功能，致使糖類蓄積在腸道，導(dǎo)致水分進(jìn)入腸腔所致[1]。病毒性腸炎患兒因腹瀉引發(fā)機(jī)體水分及鹽分大量丟失，導(dǎo)致脫水、酸中毒及電解質(zhì)紊亂，進(jìn)而影響預(yù)后，增加患兒病死風(fēng)險[2]。隨著醫(yī)學(xué)發(fā)展，病毒性腸炎患兒預(yù)后雖然改善明顯，但其相關(guān)的并發(fā)癥也在影響患兒的預(yù)后，甚至有可能會導(dǎo)致患兒病死，其中，心肌損傷是小兒病毒性腸炎較為常見的并發(fā)癥類型。據(jù)相關(guān)數(shù)據(jù)顯示，病毒性腸炎患兒心肌損傷發(fā)生率高達(dá)50%～70%[3]。因此，早診斷、早治療并進(jìn)行動態(tài)觀察，盡量減少病毒性腸炎對患兒心肌造成損傷對預(yù)后改善至關(guān)重要。肌酸激酶同工酶-MB（creatine kinase-MB）是心肌損傷的敏感指標(biāo)，具有較高的特異性，是臨床上診斷心肌損傷廣泛應(yīng)用的檢測項(xiàng)目?；钚詼y定與質(zhì)量測定是臨床上檢測CK-MB 的兩種常用方案，但這兩種方案經(jīng)常存在檢測結(jié)果不一致情況，這種結(jié)果常常給臨床醫(yī)師診斷造成困惑。且在臨床中，CK-MB 質(zhì)量測定尚未廣泛開展，其與活性測定方法比較的臨床意義尚未明確。鑒于此，本研究通過對比分析CK-MB活性檢測及質(zhì)量檢測在小兒病毒性腸炎患兒中的檢驗(yàn)結(jié)果，并分析不同檢測結(jié)果對病毒性腸炎患兒心肌損傷的診斷價值，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 回顧性分析2021 年-12 月贛州市婦幼保健院收治的50 例發(fā)生心肌損傷的病毒性腸炎患兒的臨床資料作為心肌損傷組，另選取同期該院收治的50 例未發(fā)生心肌損傷病毒性腸炎患兒的臨床資料作為腸炎組。納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）小兒病毒性腸炎符合文獻(xiàn)[4]《兒童輪狀病毒胃腸炎預(yù)防診療專家共識（2020 年版）》中診斷標(biāo)準(zhǔn)，患兒存在眼窩凹陷，精神差、煩躁、萎靡、皮膚彈性下降、肢端溫度下降、脈搏增快，嬰幼兒存在囟門凹陷等臨床癥狀，糞常規(guī)檢查存在輪狀病毒特異性抗原陽性等；（2）臨床資料完整，且相關(guān)實(shí)驗(yàn)室數(shù)據(jù)資料清晰。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）合并諾如病毒性腸炎、先天性疾病等；（2）合并免疫系統(tǒng)、循環(huán)系統(tǒng)疾病；（3）肝腎功能障礙；（4）糞常規(guī)檢查存在大量紅、白細(xì)胞，或血氧標(biāo)本中存在黃疸、溶血、脂血等?；純杭覍倬獠殚喯嚓P(guān)病例資料，本研究經(jīng)贛州市婦幼保健院倫理委員會審批通過（批準(zhǔn)文號：M202008061）。

1.2 方法

1.2.1 CK-MB 活性測定方法 采集患兒肘靜脈血1.5 mL，以3 500 r/min 速率離心10 min（半徑15 cm）后取血清，采用酶聯(lián)免疫抑制法進(jìn)行CK-MB 活性測定，檢測單位U/L。CK-MB 酶聯(lián)免疫抑制試劑盒購自南京博研生物科技有限公司，嚴(yán)格按照試劑盒說明進(jìn)行操作。

1.2.2 CK-MB 質(zhì)量測定方法 采集患兒肘靜脈血1.5 mL，以3 500 r/min 速率離心10 min（半徑15 cm）后取血清，采用化學(xué)發(fā)光法進(jìn)行CK-MB 質(zhì)量測定，檢測單位ng/mL。CK-MB 化學(xué)發(fā)光試劑盒購自深圳市新產(chǎn)業(yè)生物醫(yī)學(xué)工程股份有限公司，嚴(yán)格按照試劑盒說明進(jìn)行操作。

1.3 觀察指標(biāo)及評價標(biāo)準(zhǔn) 比較兩組不同檢測方式下血清CK-MB 水平。繪制受試者工作特征曲線（receiver operator characteristic curve，ROC），獲取曲線下面積（area under curve，AUC），檢驗(yàn)CK-MB活性測定與質(zhì)量測定對小兒病毒性腸炎心肌損傷的診斷價值。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理 采用SPSS 25.0 數(shù)據(jù)分析軟件分析兩組收集所得的臨床資料，將符合Shapiro-Wilk 正態(tài)性分布特征的計量資料采用（）表示，組間用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，計數(shù)資料用率（%）表示，采用χ2檢驗(yàn)，繪制ROC 曲線，以AUC 檢驗(yàn)CK-MB 活性測定與質(zhì)量測定對小兒病毒性腸炎心肌損傷的診斷價值，兩個模型之間的AUC 比較采用Z檢驗(yàn)，統(tǒng)計量Z近似服從正態(tài)分布。P＜0.05 為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組一般資料比較 心肌損傷組男25例，女25 例；年齡6～29 個月，平均（17.56±3.17）個月；體重7～14 kg，平均（10.71±1.33）kg；病程2～8 d，平均（5.28±1.08）d。腸炎組男27例，女23 例；年齡7～30 個月，平均（18.63±3.11）個月；體重7～15 kg，平均（11.08±1.25）kg；病程2～7 d，平均（4.97±1.02）d。兩組患兒一般資料比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。

2.2 兩組CK-MB 活性測定與質(zhì)量測定結(jié)果比較 心肌損傷組CK-MB 活性測定和質(zhì)量測定均高于腸炎組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），見表1。

表1 兩組CK-MB活性測定與質(zhì)量測定檢測結(jié)果比較（）

表1 兩組CK-MB活性測定與質(zhì)量測定檢測結(jié)果比較（）

2.3 CK-MB 活性測定與質(zhì)量測定對小兒病毒性腸炎合并心肌損傷的診斷價值 將小兒病毒性腸炎心肌損傷發(fā)生情況作為狀態(tài)變量（發(fā)生心肌損傷=1，未發(fā)生心肌損傷=2），將CK-MB 活性測定、CK-MB 質(zhì)量測定作為檢驗(yàn)變量，并繪制ROC 曲線，結(jié)果顯示，CK-MB 活性測定與CK-MB 質(zhì)量測定診斷小兒病毒性腸炎合并心肌損傷的AUC 均＞0.7，診斷效能較好，當(dāng)達(dá)到最佳閾值時，可獲取最佳診斷參數(shù)。見表2 和圖1。CK-MB 質(zhì)量測定對小兒病毒性腸炎心肌損傷診斷效能高于CK-MB 活性測定，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（Z=2.163，P=0.031）。

表2 CK-MB活性測定與質(zhì)量測定對小兒病毒性腸炎心肌損傷的診斷價值

圖1 CK-MB活性測定與質(zhì)量測定對小兒病毒性腸炎心肌損傷的ROC曲線圖

3 討論

小兒病毒性腸炎除了可引發(fā)腸道內(nèi)感染外，還可引發(fā)腸外多臟器損害，其中心肌損傷是在小兒病毒性腸炎中發(fā)病率較高的一種并發(fā)癥，臨床認(rèn)為小兒病毒性腸炎并發(fā)心肌損傷的機(jī)制可能有兩種，一種是與小兒胃腸道系統(tǒng)發(fā)育不成熟，腸黏膜功能屏障較差，腸道免疫功能較弱，病毒易侵襲淋巴及血液循環(huán)系統(tǒng)，進(jìn)而侵犯心肌細(xì)胞，致使心肌損傷有關(guān)。另一種為小兒病毒性腸炎所致的脫水情況，導(dǎo)致機(jī)體內(nèi)血液循環(huán)容量降低，心肌細(xì)胞缺血缺氧，脂質(zhì)過氧化增強(qiáng)，進(jìn)而損傷心肌細(xì)胞所致[5-6]。并發(fā)心肌損傷的小兒病毒性腸炎患兒若不及時進(jìn)行干預(yù)，可進(jìn)一步發(fā)展成心臟增大、心力衰竭等疾病，嚴(yán)重威脅患兒的生命安全。當(dāng)心肌組織發(fā)生損傷時，CK-MB 從心肌釋放入血，其末端被血漿羧基肽酶N 水解，去掉一個賴氨酸殘基轉(zhuǎn)化為血清修飾亞型CK-MB1，血清CK-MB 水平升高[7]。因此，血清CK-MB 是臨床評估心肌細(xì)胞損傷的敏感性指標(biāo)之一，具有較高的特異性。CK-MB 活性測定與質(zhì)量測定是臨床上兩種常用測定方式，但其測定結(jié)果常常不一致，給臨床醫(yī)師診斷造成困惑。因此，探究CK-MB 活性測定與質(zhì)量測定的檢測結(jié)果對指導(dǎo)小兒病毒性腸炎心肌損傷具有積極意義。

本研究中發(fā)生心肌損傷的病毒性腸炎患兒的CK-MB 活性測定與質(zhì)量測定的值均高于未發(fā)生心肌損傷的病毒性腸炎患兒。本研究中繪制ROC 曲線，結(jié)果顯示，CK-MB 活性測定與質(zhì)量測定診斷小兒病毒性腸炎心肌損傷的AUC 均＞0.7，診斷效能較好，但CK-MB 質(zhì)量測定對小兒病毒性腸炎心肌損傷診斷效能高于CK-MB 活性測定。CK-MB 是由腦型亞單位（B）和肌型亞單位（M）構(gòu)成的二聚體，在機(jī)體中常有3 種CK 類型，依據(jù)電泳快慢進(jìn)行劃分一次為CK-BB、CK-MB 與CK-MM，CK-BB在平滑肌及腦組織中呈高表達(dá)，是電泳時移動速率最快的部分，在血清中幾乎為0，CK-MB 在心肌細(xì)胞中呈高表達(dá)，占血清中CK 的0～4%，是電泳時中速移動部分，CK-MM 在骨骼肌中呈高表達(dá)，占血清CK 的96%～100%，是電泳時慢速移動的部分[8-10]。正常情況下，CK-MM 是血清中CK 的主要存在形式，而CK-MB 一般不超過總活性的5%。在臨床診療過程中CK-MB 活性測定是常用的檢測方法，該種方法是應(yīng)用抗M 型單位的抗血清和CK-MM、CK-MB 中的M 亞單位形成抗原抗體復(fù)合物，進(jìn)而抑制CK-MB 中M 型活性，然后檢測CK 活力中B型單位酶活力。正常情況下，CK-BB 在機(jī)體中含量較低，可忽略不計，因此，將CK-BB 活性測定值乘以2，就能得到CK-MB 活性值。CK-MB 活性測定方式操作簡單，且可迅速得到結(jié)果[11-13]。但相關(guān)研究提出，CK-MB 活性測定在兒童輪狀病毒腸炎中存在假性升高的情況[14-15]。CK-MB 活性測定是基于血清中不存在CK-BB 及巨CK、線粒體CK等異常CK 基礎(chǔ)上，且當(dāng)平滑肌及腦組織細(xì)胞出現(xiàn)損傷或缺血、缺氧等情況時，存在于腦組織及平滑肌細(xì)胞胞質(zhì)及線粒體中的CK-BB 就會被釋放至血液中，致使血清CK-BB 呈異常高表達(dá)，測定的血清CK-B 亞單位活力已超過CK-MB 中B 亞單位的真實(shí)活力，導(dǎo)致檢測結(jié)果假性增高，增加臨床誤診風(fēng)險，而且CK-MB 活力測定也受測定時間的影響，隨著測定時間的延長，CK-MB 活性會出現(xiàn)酶活力衰減情況，這也會降低測定的精準(zhǔn)度[16-17]。

CK-MB 質(zhì)量測定的檢測原理是采用CK-MB 單克隆特異性抗體及捕獲抗體作為檢測卡，當(dāng)血液標(biāo)本加入檢測卡中時，被熒光標(biāo)記的抗體與血液標(biāo)本中的待測物進(jìn)行結(jié)合形成抗原抗體復(fù)合物，當(dāng)免疫復(fù)合物層析至檢測區(qū)時，與抗CK-MB 抗體產(chǎn)生反應(yīng)。血液標(biāo)本中CK-MB 水平越高，檢測區(qū)的復(fù)合物水平越高，進(jìn)而檢測條帶上的光密度值越高。該種測定方式可規(guī)避CK-BB 異常表達(dá)及巨CK、線粒體CK 等異常CK 干擾，進(jìn)而其對病毒性腸炎患兒心肌損傷的診斷價值更高[18-20]。未來，臨床上針對病毒性腸炎患兒可采取CK-MB 質(zhì)量測定方式來診斷其是否發(fā)生心肌損傷，以提高臨床診斷的準(zhǔn)確性，以更好指導(dǎo)小兒病毒性腸炎的診斷及治療。

綜上所述，相比CK-MB 活性測定，CK-MB 質(zhì)量測定對小兒病毒性腸炎心肌損傷的診斷價值更高，可為臨床診斷及治療小兒病毒性腸炎心肌損傷提供客觀指導(dǎo)，可在臨床廣泛應(yīng)用。