神經(jīng)導(dǎo)向因子-1、信號轉(zhuǎn)導(dǎo)及轉(zhuǎn)錄激活因子1在急性白血病患者中的表達(dá)及與臨床特征的關(guān)系

陳曉昕，袁文華，葛唱

鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院兒童重癥監(jiān)護(hù)室，鄭州 450052

白血病是一類造血干細(xì)胞的惡性克隆性疾病[1]。中國白血病發(fā)病率為（3～4）/10萬，且男性略多于女性[2]。白血病的明確病因至今未明，許多因素被認(rèn)為與白血病發(fā)生有關(guān)，病毒可能是主要因素，此外還有電離輻射、化學(xué)藥物或毒物、遺傳因素等[3]。按照病程和白血病細(xì)胞的成熟度進(jìn)行分類，可分為急性白血病和慢性白血病。其中急性白血病以起病急、進(jìn)展慢、病程可長達(dá)數(shù)年為特點，發(fā)病時骨髓中異常的原始細(xì)胞及幼稚細(xì)胞大量增殖并廣泛浸潤肝臟、脾臟、淋巴結(jié)等，抑制正常造血[4]。臨床上急性白血病以進(jìn)行性貧血、持續(xù)發(fā)熱或反復(fù)感染、出血和組織器官浸潤等為主要表現(xiàn)，骨髓和外周血中以原始細(xì)胞和早期幼稚細(xì)胞為特征[5]。神經(jīng)導(dǎo)向因子（neuroguidance factor，Netrin）是一類高度保守的、與層粘連蛋白相關(guān)的可分泌蛋白和膜結(jié)合蛋白。有研究發(fā)現(xiàn)，Netrin可參與血管和淋巴管的生成，同時在腫瘤中也發(fā)揮著一定的作用[6]。神經(jīng)導(dǎo)向因子-1（neuroguidance factor-1，Netrin-1）是Netrin家族的一員，主要位于17號染色體上，能參與腫瘤細(xì)胞的生長和侵襲[7]。信號轉(zhuǎn)導(dǎo)及轉(zhuǎn)錄激活因子1（signal transduction and activator of transcription 1，STAT1）是一種信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的重要蛋白，其編碼基因位于2號染色體上，既能參與正常生理功能，又與腫瘤的形成有著密切的聯(lián)系，能引起細(xì)胞的分化和凋亡[8]。但目前對于Netrin-1、STAT1與急性白血病發(fā)生發(fā)展的關(guān)系尚不明確，急性白血病患者中Netrin-1、STAT1的相關(guān)報道較少，因此本研究探討急性白血病患者中Netrin-1、STAT1的表達(dá)及其與臨床特征的關(guān)系，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集2020年1月至2022年1月鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院收治的急性白血病患者的病歷資料。納入標(biāo)準(zhǔn)：①符合《急性白血病》[9]中的診斷標(biāo)準(zhǔn)；②年齡＜14歲；③臨床資料完整。排除標(biāo)準(zhǔn)：①嚴(yán)重貧血，血紅蛋白濃度低于60 g/L；②凝血功能障礙；③存在其他惡性腫瘤。根據(jù)納入、排除標(biāo)準(zhǔn)，共納入45例急性白血病患者作為疾病組。另選取40例同期健康體檢人群作為對照組。兩組研究對象各臨床特征比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）（表1），具有可比性。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會批準(zhǔn)通過，所有患者均知情同意并簽署知情同意書。

表1 兩組研究對象的臨床特征

1.2 檢測方法

①采集所有研究對象靜脈血4 ml，室溫靜置15 min，以 3000 r/min離心 15 min，取上清，置于-80℃冰箱中，等待檢測。采用酶聯(lián)免疫吸附測定（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）檢測血清中Netrin-1水平，嚴(yán)格按照Netrin-1 ELISA試劑盒說明步驟進(jìn)行檢測。②采集所有研究對象靜脈血5 ml，加入肝素抗凝，以3000 r/min離心15 min，4℃下靜置10 h，經(jīng)過漂洗后進(jìn)行標(biāo)記，并在37℃下靜置2 h，然后進(jìn)行染色，最后采用熒光測定儀進(jìn)行測定，采用蛋白質(zhì)印跡（Western blot）法檢測STAT1。③采集疾病組患者靜脈血5 ml，檢測白細(xì)胞及血小板計數(shù)。白細(xì)胞正常值為（4～10）×109/L，血小板正常值為（100～300）×109/L。

1.3 觀察指標(biāo)

比較兩組研究對象Netrin-1、STAT1的表達(dá)水平；比較不同白細(xì)胞和血小板水平疾病組患者Netrin-1、STAT1的表達(dá)水平；比較不同Netrin-1、STAT1表達(dá)情況疾病組患者的臨床特征，Netrin-1＜70 ng/ml為低表達(dá)，≥70 ng/ml為高表達(dá)，STAT1＜6.4為低表達(dá)，≥6.4為高表達(dá)。

1.4 統(tǒng)計學(xué)分析

采用SPSS 24.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，符合正態(tài)分布的計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，組間比較采用t檢驗；計數(shù)資料以例數(shù)及率（%）表示，組間比較采用χ2檢驗；以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 Netrin-1、STAT1水平的比較

疾病組患者Netrin-1、STAT1水平均明顯高于對照組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）。（表2）

表2 兩組研究對象Netrin-1、STAT1水平的比較（±s）

表2 兩組研究對象Netrin-1、STAT1水平的比較（±s）

注：*與對照組比較，P＜0.01

組別疾病組（n=4 5）對照組（n=4 0）7 2.3 5±4.6 5*1 1.2 3±4.1 4 6.2 1±0.2 3*3.1 0±0.1 1 N e t r i n-1（n g/m l）S T A T 1

2.2 不同白細(xì)胞和血小板水平疾病組患者Netrin-1、STAT1表達(dá)水平的比較

白細(xì)胞≥50×109/L、血小板＜30×109/L疾病組患者Netrin-1表達(dá)水平明顯低于白細(xì)胞＜50×109/L、血小板（30～100）×109/L患者，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（t=33.884、57.688，P＜0.01）；白細(xì)胞≥50×109/L、血小板＜30×109/L疾病組患者STAT1表達(dá)水平明顯高于白細(xì)胞＜50×109/L、血小板（30～100）×109/L患者，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（t=68.381、68.299，P＜0.01）。（表3）

表3 不同白細(xì)胞和血小板水平疾病組患者Netrin-1、STAT1的表達(dá)水平

2.3 不同Netrin-1、STAT1表達(dá)情況疾病組患者臨床特征的比較

Netrin-1、STAT1高表達(dá)疾病組患者貧血、出血、發(fā)熱、浸潤發(fā)生率均明顯高于Netrin-1、STAT1低表達(dá)患者，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）。（表4）

表4 不同Netrin-1、STAT1表達(dá)情況疾病組患者臨床特征的比較[n（%）]

3 討論

白血病作為造血組織的惡性腫瘤，起源于骨髓單個造血祖細(xì)胞或干細(xì)胞的惡性病變[10]。白血病在中國惡性腫瘤病死率中居男性第六位，女性第八位，但經(jīng)過現(xiàn)代技術(shù)治療，已有不少患者獲得病情緩解，可長期生存，甚至獲得治愈[11]。白血病主要特點為骨髓中白血病細(xì)胞腫瘤性增生，能侵犯人體的每個臟器，繼而產(chǎn)生相應(yīng)的臨床癥狀[12]。急性白血病是指以起病急、貧血、發(fā)熱、消瘦、肝脾及淋巴結(jié)腫大、骨痛尤其胸骨壓痛、白細(xì)胞計數(shù)增高、血片中有原始細(xì)胞和幼稚細(xì)胞、骨髓增生明顯等為主要表現(xiàn)的疾病[13]。急性白血病病情進(jìn)展迅速，自然病程僅有數(shù)周至數(shù)月，一般可根據(jù)白血病細(xì)胞歸屬分為急性髓系白血病和急性淋巴細(xì)胞白血病兩大類[14]。

Netrin-1是Netrin家族中最早在胚胎發(fā)育期的細(xì)胞和軸突遷移中被發(fā)現(xiàn)的，由600多個氨基酸組成，其功能結(jié)構(gòu)區(qū)域有3個，可在血管內(nèi)皮上進(jìn)行表達(dá)，以調(diào)節(jié)炎癥細(xì)胞的遷移和分泌[15]。Netrin-1的作用主要與其受體有關(guān)，具有雙向作用，其受體具有吸引Netrin-1的作用。有研究表明，Netrin-1可促進(jìn)血管內(nèi)皮生長因子和血小板生長因子的表達(dá)，在血管生長和缺血中起到保護(hù)作用[16]。STAT1是在細(xì)胞內(nèi)以單體形式存在于STAT家族中的7個成員之一，主要分布于組織與細(xì)胞內(nèi)，其基因位于人2號染色體上，在小鼠基因中，存在于1號染色體上[17]。STAT1為一種由750多個氨基酸排列組成的蛋白質(zhì)，分為6個功能區(qū)域，分子量為91 kD[18]。STAT1的DNA在結(jié)合區(qū)內(nèi)有免疫球蛋白折疊，有317～488個氨基殘基，其激活主要通過干擾素的作用。STAT1既能參與機(jī)體的抗感染功能，又能對細(xì)胞的增殖、分化及凋亡進(jìn)行調(diào)節(jié)，同時對腫瘤發(fā)生發(fā)展有抑制作用[19]。激活后的STAT1可產(chǎn)生一些類似細(xì)胞因子，在細(xì)胞因子中具有一定的特異性，可與不同的細(xì)胞因子組成信號，轉(zhuǎn)導(dǎo)不同的刺激。在本研究中，急性白血病患者Netrin-1、STAT1水平均明顯高于非急性白血病患者，表明Netrin-1、STAT1對急性白血病患者具有一定的作用。李永婧等[20]運用ELISA法檢測急性淋巴細(xì)胞白血病患兒血清Netrin-1表達(dá)水平達(dá)70 ng/ml，顯示Netrin-1在患兒中存在異常表達(dá)，且不同濃度的Netrin-1對患兒的影響不同。孫琳琳等[21]研究表明，STAT1在白血病細(xì)胞的分化中產(chǎn)生一定的作用，且STAT1對白細(xì)胞的分化起調(diào)節(jié)作用，提示STAT1在急性白血病患者中存在異常表達(dá)。有研究發(fā)現(xiàn)，Netrin-1與白細(xì)胞和血小板存在一定的聯(lián)系，因Netrin-1濃度的不同，白細(xì)胞和血小板的表達(dá)也不同，當(dāng)白細(xì)胞水平下降時，Netrin-1表達(dá)水平會升高，同時，當(dāng)患者血小板下降時，Netrin-1表達(dá)水平也會隨之下降[22]。有相關(guān)文獻(xiàn)表明，在白血病患者的外周血白細(xì)胞的檢測中發(fā)現(xiàn)STAT1的存在，表明在白細(xì)胞中存在激活的STAT1，但在健康人群中沒有檢測到STAT1的激活，激活的STAT1活化炎癥細(xì)胞，可分泌大量的血小板源性生長因子，當(dāng)機(jī)體受損時，STAT1可調(diào)控血小板的功能，促進(jìn)血小板釋放[23]。本研究結(jié)果顯示，當(dāng)白細(xì)胞≥50×109/L、血小板＜30×109/L時，急性白血病患者Netrin-1表達(dá)水平顯著降低，STAT1表達(dá)水平顯著增高。Netrin-1、STAT1水平與臨床特征的關(guān)系分析結(jié)果顯示，Netrin-1、STAT1高表達(dá)患者貧血、出血、發(fā)熱、浸潤發(fā)生率均明顯高于Netrin-1、STAT1低表達(dá)患者。

綜上所述，急性白血病患者Netrin-1、STAT1的表達(dá)與臨床特征關(guān)系密切，Netrin-1、STAT1高表達(dá)時，急性白血病患者貧血、出血、發(fā)熱、浸潤發(fā)生率均較高。由于本研究樣本量較小，關(guān)于其在臨床特征中的更多問題需要更大樣本的臨床研究。