高效液相色譜法在阿司匹林檢驗中的應(yīng)用及對不確定度標準的估算

秦迎春（湖南省張家界市食品藥品檢驗所，湖南 張家界 427000）

阿司匹林為臨床常用藥品，常有片劑、膠囊劑、散劑劑型，具有解熱鎮(zhèn)痛、抑制血栓形成的作用，屬于非甾體抗炎、抗血小板聚集藥物，適應(yīng)證范圍廣泛，既可應(yīng)用于抗血栓治療中，也可應(yīng)用于風(fēng)濕病等多種疾病治療中。通過對阿司匹林進行檢驗，以保證藥物質(zhì)量，保障患者用藥安全。研究發(fā)現(xiàn)，應(yīng)用高效液相色譜法對阿司匹林進行檢驗分析，檢測方法安全、可靠，檢驗檢測結(jié)果準確。有研究證實，高效液相色譜法具有分離效率高、靈敏度高等優(yōu)勢特點，該檢測方法在藥品檢驗中的作用顯著，可控制藥品質(zhì)量，為我國藥品檢驗提供了全新的思路[1]?；诖?，本文采用高效液相色譜法進行檢測，對阿司匹林腸溶片的藥物質(zhì)量進行分析。

1 檢驗方法

1.1 儀器以及試劑 儀器：LC-20AT高效液相色譜儀；SPD-20A檢測器（日本島津） CBM-20A色譜工作站；SIL-20A自動進樣器；AUW220D電子分析天平。試劑及試樣：阿司匹林腸溶片（沈陽奧吉娜藥業(yè)有限公司，100mg×30，批號：21112801）；甲醇（色譜純，國藥集團化學(xué)試劑有限公司，批號：20201106）；乙腈（色譜純，國藥集團化學(xué)試劑有限公司，批號：20200507）；磷酸二氫鈉（分析純，國藥集團化學(xué)試劑有限公司，批號：F20110524）。

1.2 試液制備 ①取阿司匹林對照品適量，精密稱定，30mg阿司匹林作為供試樣品，旨在配制標準溶液。將樣品置于燒杯中（100mL），摻入30mL的乙腈，在超聲下溶解，將溶解后的溶液置于容量瓶中（100mL），加入一定量的稀釋液搖勻，獲取到300ug/mL的標準溶液。②將0.3mg/mL標準溶液，分別分配在1.0mL、2.5mL、5.0mL、10.0mL容量瓶中，分別加入乙腈進行稀釋，進而獲取到不同濃度的樣品標準溶液。③取10片阿司匹林腸溶片進行研磨成細粉，取阿司匹林細粉適量，精密稱定，置入燒杯中（250mL），加入80mL的乙腈，超聲處理20min；將經(jīng)超聲處理的溶液轉(zhuǎn)移至250mL容量瓶中；用乙腈稀釋至刻度，搖勻后，靜置存放。取1mL的上清液置入10mL容量瓶中，加乙腈稀釋至刻度。搖勻，即得供試品溶液。④取10mL冰醋酸溶液置于試劑瓶中（100mL），加入純水稀釋，稀釋的溶液量為1000mL，將其搖勻，即得1%冰醋酸溶液。

1.3 色譜柱條件 色譜柱Inertsil ODS-3柱（5um 4.6×150mm）；流動相：乙腈-磷酸二氫鈉溶液（12∶88）；柱溫：25℃；流速：1.0ml/min；液體流動相，乙腈，磷酸二氫鈉，并對色譜柱的流速進行設(shè)置，設(shè)定適宜的溫度，并對進樣量和紫外線檢測波長進行設(shè)定。

1.4 觀察指標 觀察阿司匹林樣品檢測結(jié)果，計算平均回收率。

1.5 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS21.0軟件處理數(shù)據(jù)，計數(shù)資料采用χ2檢驗，以（%）表示。計量資料采用t檢驗，以（±s）表示。P＜0.05表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 分析阿司匹林色譜情況 阿司匹林色譜分析過程中，量取了不同容量對照組溶液，加入水和乙腈混合溶液，稀釋后，得到標準液，取一定量標準溶液進行實驗分析，發(fā)現(xiàn)阿司匹林腸溶片峰值在5.68min。

2.2 高效液相色譜法檢驗阿司匹林的回收率和重復(fù)性分析 檢測發(fā)現(xiàn)，高效液相色譜法檢驗重復(fù)性結(jié)果為0.64%；阿司匹林濃度范圍在0.01-0.06mg/mL時，呈現(xiàn)了明顯的線性關(guān)系，回收率達到了101.75%。

2.3 高效液相色譜法檢驗阿司匹林準確性分析 分別對兩種不同樣品溶液進行檢驗，檢測RSD結(jié)果為1.35%、2.14%，充分展現(xiàn)了高效液相色譜法檢驗準確性的優(yōu)勢，保證了檢驗穩(wěn)定性。

3 討論

當(dāng)前，阿司匹林在臨床上廣泛應(yīng)用，在治療心腦血管疾病、傷風(fēng)、關(guān)節(jié)痛等疾病方面發(fā)揮了藥物的藥理作用。研究發(fā)現(xiàn)，使用不同方法檢驗阿司匹林，存在一定的差異性，高效液相色譜法相比于其他檢驗方法，更具優(yōu)越性，檢驗結(jié)果更精準。

3.1 高效液相色譜技術(shù)原理及優(yōu)勢 研究發(fā)現(xiàn)，高效液相色譜技術(shù)在長期發(fā)展和應(yīng)用中，不斷提升了檢測速度和分離效率，自動化程度更高，廣泛應(yīng)用在生物科技工程、藥品檢驗等諸多領(lǐng)域中，被視為重要的藥品檢驗技術(shù)手段。①就高效液相色譜技術(shù)原理看，主要是在高壓輸液系統(tǒng)支持下，將隔離緩沖液與混合溶劑注入到色譜柱中，其液體為流動相。高壓輸液泵滿足色譜柱對液體流速的要求，分離效能顯著，其靈敏度達到了μL級要求，可在15-30min時間完成分析任務(wù)。②就高效液相色譜技術(shù)在藥品檢驗中的應(yīng)用情況看，能夠檢出藥物中的有效成分及具體含量，確保滿足國家規(guī)定標準后進入市場銷售。在藥物檢驗中應(yīng)用高效液相色譜法，不易受外界因素的干擾，檢測結(jié)果準確，穩(wěn)定性好，可保證藥品質(zhì)量。有相關(guān)研究指出，高效液相色譜技術(shù)可檢出不同劑型藥物中的有效成分含量，在具體檢驗不同劑型藥物中阿司匹林的含量時，將色譜柱選定為色譜柱Inertsil ODS-3柱，將流動相設(shè)定為乙腈（-0.05mol/L磷酸二氫鈉溶液），波長設(shè)定為230nm，流速設(shè)定為1.0mL/min，柱溫在24℃-26℃，檢測效果滿意；充分展現(xiàn)了高效液相色譜技術(shù)檢驗檢測便捷、檢測快速、可重復(fù)性等優(yōu)勢特點[2]。

3.2 高效液相色譜法應(yīng)用進展及藥品成分檢驗 我國藥品質(zhì)檢部門對藥品質(zhì)量標準設(shè)定了嚴格標準，對藥物檢驗檢測，可檢出藥物中的雜質(zhì)含量，確定有無有害物質(zhì)。借助高效液相色譜技術(shù)可檢出藥品中附加物的含量，與常規(guī)的液相色譜檢測技術(shù)比較，優(yōu)勢顯著。有研究發(fā)現(xiàn)，將高效液相色譜技術(shù)聯(lián)合質(zhì)譜技術(shù)、分子生物技術(shù)等技術(shù)，可進一步發(fā)揮相關(guān)技術(shù)在藥品檢驗中的作用。就高效液相色譜法應(yīng)用進展看，在現(xiàn)代科學(xué)技術(shù)發(fā)展推動下，高效液相色譜法具有較高的敏感度和分離度，受到藥品檢驗和藥品檢定單位的認可和青睞。最早是由國外一家公司推出了高效液相色譜儀，預(yù)示著高效液相色譜技術(shù)誕生，在色譜柱填料應(yīng)用支持下，進一步提高了分離速度，提高了色譜柱效率。有研究證實，高效液相色譜法比常規(guī)的液相色譜法優(yōu)勢更顯著，分離效能好，經(jīng)試驗研究發(fā)現(xiàn)，高效液相色譜法檢驗精確度高，檢驗結(jié)果誤差小，能夠保障檢驗質(zhì)量，因此，為實驗室檢驗工作提供了全新的思路[3]。

研究發(fā)現(xiàn)，高效液相色譜柱填料直徑小，大大提升了檢驗敏感性，也有實驗證實了這一觀點。將高效液相色譜技術(shù)應(yīng)用于藥物成分分析中，提高了分離速度，可在短時間內(nèi)得出檢驗結(jié)果，為藥品成分分析提供了科學(xué)的參考依據(jù)。有研究人員的研究結(jié)果顯示，高效液相色譜法可應(yīng)用于氨氯地平貝那普利膠囊成分檢驗中，檢驗回收率達到了99%。有研究結(jié)果證實，將高效液相色譜技術(shù)應(yīng)用于檢驗水楊酸軟膏中水楊酸含量發(fā)現(xiàn)，測定敏感度高，檢驗結(jié)果精準，滿足藥品質(zhì)量檢驗和藥品質(zhì)量控制要求。普遍研究發(fā)現(xiàn)，進行藥品檢驗時，會受到色譜儀靈敏度和敏感性的影響，為提高分離效率，建議使用靈敏度較高的色譜儀。應(yīng)用高效液相色譜法檢驗藥品，能夠解決上述問題，應(yīng)用高效液相色譜技術(shù)可有效分析A1z、A2z、A3z化合物，分析速度較快，節(jié)省了大量的時間，快速得出分析結(jié)論，展現(xiàn)了應(yīng)用高效液相色譜技術(shù)的靈敏度和精確度。其在分析常規(guī)藥物成分方面，檢測精度高，滿足藥品檢測需要，保證藥品使用效果。

3.3 高效液相色譜法在藥品質(zhì)量控制中的應(yīng)用 分析高效液相色譜法在藥品質(zhì)量中的應(yīng)用情況發(fā)現(xiàn)，在測定藥物成分基礎(chǔ)上，應(yīng)用高效液相色譜法可控制藥物質(zhì)量。有研究證實，應(yīng)用高效液相色譜法檢驗丹參酮注射液成分過程中，測定速度快，分離程度高，保證了藥物檢驗質(zhì)量，發(fā)揮了應(yīng)用高效液相色譜技術(shù)的作用。普遍研究發(fā)現(xiàn)，當(dāng)色譜柱之間＜2um時，柱效最好，分離速度很快。有研究人員將高效液相色譜法應(yīng)用于乙醚萃取血氧試驗中，發(fā)現(xiàn)分離效果好，研究結(jié)果顯示，檢測環(huán)孢素A的峰值＜10%，說明應(yīng)用高效液相色譜法切實可行，滿足精密度要求，應(yīng)用效果顯著。

3.4 分析藥品檢驗結(jié)果偏離原因 藥品本身具有特殊性，其質(zhì)量安全直接關(guān)乎到人們的生命安全，加大藥品質(zhì)量控制力度，可保證患者用藥安全。有研究結(jié)果顯示，采用高效液相色譜法分別對中藥和西藥樣品進行檢測，生化藥物≤1.5%（期望結(jié)果）為290，中藥材制劑≤2.0%（期望結(jié)果）為154，與其他檢驗方法比較，檢驗結(jié)果更精準。分析藥品檢驗結(jié)果出現(xiàn)偏差的相關(guān)因素發(fā)現(xiàn)，與人為因素、設(shè)備因素及其他因素均有一定的關(guān)系：①人為因素：相關(guān)檢驗人員自身的專業(yè)技能欠缺，理論知識匱乏，自身的專業(yè)素質(zhì)有待提升，因此，在藥品檢驗操作過程中，容易引發(fā)人為操作失誤等因素，操作行為不規(guī)范，進而影響到最終的檢驗結(jié)果，造成檢驗值偏差，影響藥品質(zhì)量判斷[4]。②設(shè)備因素：部分檢驗設(shè)備老化、陳舊，未及時更新?lián)Q代，加之，日常管理維護力度不夠，無法保證相關(guān)檢驗設(shè)備的精密性和靈敏性，因此，難以保證檢驗結(jié)果的準確性。③其他因素：包括藥品存儲環(huán)境不合理以及藥品檢驗過程中，出現(xiàn)的各種不確定因素，均會影響藥品最終的檢驗結(jié)果，致使最終的檢驗結(jié)果出現(xiàn)偏差。

基于此，為控制藥品檢驗結(jié)果出現(xiàn)偏離，建議在藥品檢驗中加強對檢驗全過程中的管控，加強對檢驗人員的技術(shù)培訓(xùn)和專業(yè)化指導(dǎo)，促使檢驗人員提高自身的專業(yè)水平，熟練掌握相關(guān)儀器設(shè)備，如在應(yīng)用色譜儀過程中，要精準設(shè)定相關(guān)的參數(shù)量，能夠科學(xué)配制標準溶液等，并在檢驗實踐中，不斷積累經(jīng)驗，規(guī)范自身操作行為，避免因人為因素造成檢驗結(jié)果偏離現(xiàn)象。同時，要定期更換檢驗儀器和設(shè)備，積極引進新技術(shù)、新方法，做好日常設(shè)備維護和保養(yǎng)工作，藥品檢驗前，對儀器進行調(diào)試和檢查，避免因儀器設(shè)備故障造成藥品檢驗結(jié)果偏離。此外，科學(xué)管理藥品，營造良好的藥品存儲環(huán)境，控制存儲時的溫度和濕度，避免藥品本身發(fā)生變質(zhì)，更好地為藥品檢驗提供保障，保證檢驗結(jié)果精準，將檢驗誤差控制在合理范圍內(nèi)。

3.5 本文研究成果 本研究中，對阿司匹林樣品標準溶液檢驗，主要將水-乙腈作為流動相，檢驗發(fā)現(xiàn)，與傳統(tǒng)的水-甲醇流動相比較，優(yōu)勢顯著。有研究證實，高效液相色譜法可控制檢驗檢測誤差，保證檢驗結(jié)果更貼近理論結(jié)果，高效液相色譜法不受阿司匹林輔料影響，檢驗結(jié)果更準確。本研究中，展現(xiàn)了高效液相色譜法檢驗優(yōu)勢，保證檢驗結(jié)果更可靠，避免重復(fù)操作，穩(wěn)定性好。研究發(fā)現(xiàn)，高效液相色譜法檢驗阿司匹林比兩步酸堿滴定法操作更簡單，可保證回收率，與本文研究結(jié)果一致[5]。本文檢測發(fā)現(xiàn)，高效液相色譜法檢驗重復(fù)性結(jié)果為0.64%；阿司匹林濃度范圍在0.01-0.06mg/mL時，呈現(xiàn)了明顯的線性關(guān)系，回收率達到了101.75%；說明高效液相色譜法可作為檢驗阿司匹林的有效技術(shù)手段，是檢測阿司匹林的理想實驗方法[6-7]。進一步研究發(fā)現(xiàn)，分別對兩種不同樣品溶液進行檢驗，檢測RSD結(jié)果為1.35%、2.14%，再次證實了高效液相色譜法的檢驗優(yōu)勢，表明高效液相色譜技術(shù)可實現(xiàn)定量分析，保證實驗結(jié)果準確，可將此種技術(shù)手段應(yīng)用在阿司匹林檢驗中[8]。本文研究成果，再次證實了高效液相色譜法在藥物檢驗檢測中的價值作用，應(yīng)用于阿司匹林檢驗中，展現(xiàn)了顯著的應(yīng)用效果，為臨床藥品成分檢驗、藥品質(zhì)量控制提供了技術(shù)保障。

綜上所述，高效液相色譜法在阿司匹林檢驗中的應(yīng)用價值較高，便于人員操作，穩(wěn)定性和回收率高，發(fā)揮了高效液相色譜技術(shù)的優(yōu)勢，值得廣泛推廣。