淺析牛結(jié)節(jié)性皮膚病診斷與綜合防治措施

錢玉璽，劉夕驗

（山東省沂水縣動物疫病預防控制中心，山東 沂水 276400）

近年來，牛養(yǎng)殖業(yè)不斷發(fā)展與壯大，養(yǎng)牛產(chǎn)業(yè)已成為我國畜牧業(yè)經(jīng)濟的支柱產(chǎn)業(yè)。隨著人民生活水平不斷提高，人們對優(yōu)質(zhì)牛肉、牛奶及其他牛產(chǎn)品的需求量也呈不斷上升趨勢，這直接促進了牛養(yǎng)殖業(yè)發(fā)展。然而，牛疾病的發(fā)生與傳播仍是阻礙養(yǎng)牛產(chǎn)業(yè)發(fā)展的制約性因素。牛結(jié)節(jié)性皮膚病是一種急性、亞急性或慢性的病毒性傳染病，是OIE規(guī)定必須報告的疫病[1]。本病最早發(fā)現(xiàn)于1929年，我國于1989年首次報道本病。本病不僅對牛的健康造成一定的損害，對養(yǎng)殖場戶也會造成一定的經(jīng)濟損失。

1 病原特性

本病的病原為牛結(jié)節(jié)性皮膚病病毒，屬痘病毒科中羊痘病毒屬中的一種，形態(tài)特征與痘病毒相似，有囊膜，無血凝活性[2]。本病毒對外界環(huán)境的抵抗力較強，在正常溫度下存活時間可達40 d，存在于皮膚痂皮中的病毒存活時間更長。本病毒對熱敏感，55 ℃ 環(huán)境條件下經(jīng)120 min或65 ℃ 環(huán)境條件下經(jīng)30 min均可將其殺死，并且不耐強酸、強堿，對氯仿、甲醛、乙醚敏感[3]。

2 流行病學

各個年齡階段，不同品種、性別的牛對本病均具有一定的易感性，主要傳染源是患病牛，其皮膚結(jié)節(jié)、唾液、乳汁、肌肉、淋巴結(jié)、內(nèi)臟、鼻腔分泌物及精液內(nèi)都有病毒存在，患病?？祻秃笕钥蓴y帶病毒達21 d以上[4]。本病主要呈直接接觸傳播外，可通過節(jié)肢動物（蚊、蠓）進行傳播，還可以經(jīng)飲水、飼料傳染。本病在蚊蟲肆虐的季節(jié)較為多發(fā)，有時冬季也可發(fā)生。感染公牛的精子中也可存在病毒，但對其接種疫苗后可阻止病毒垂直傳播。本病的發(fā)病率存在較大差異，即使是在同一疫區(qū)，各個養(yǎng)殖場的發(fā)病情況也不盡相同。相關(guān)流行病學調(diào)查研究表明，本病的發(fā)病 率 為2 % ～ 20 %，病 死 率 通 常 為10 % ～20 %；個別地區(qū)的發(fā)病率可達80 % 以上，病死率為40 % ～ 75 %[5-6]。

3 臨床癥狀

本病自然感染的潛伏期為14～35 d，臨床癥狀往往呈急性經(jīng)過發(fā)病初期體溫上升至41 ℃，呈稽留熱，持續(xù)約5～7 d?；疾∨３霈F(xiàn)鼻炎、結(jié)膜炎和角膜炎。發(fā)病4～12 d后體表的頸部、胸部、會陰等處皮膚出現(xiàn)圓形隆起、質(zhì)地堅硬、直徑大小2～4 cm或更大的結(jié)節(jié)，觸摸有痛感。這些皮膚結(jié)節(jié)可聚集成大小不等的不規(guī)則腫塊，發(fā)病14 d后皮膚結(jié)節(jié)發(fā)生漿液性壞死和結(jié)痂，再加上蚊蟲叮咬和摩擦，結(jié)節(jié)破潰處結(jié)痂脫落，形成空洞[7]。

患病牛的肩前、腹股溝外、股前等部位的淺表淋巴結(jié)腫大最為突出，胸下部、四肢和陰部出現(xiàn)水腫；眼結(jié)膜、口腔黏膜、氣管發(fā)生潰瘍，引起病牛出現(xiàn)大量流淚、流涎和流鼻液等癥狀，這些分泌物都含有病原。此外，泌乳牛產(chǎn)乳量急劇下降，妊娠母?？砂l(fā)生流產(chǎn)，繼發(fā)子官內(nèi)膜炎。公?；疾『?8～42 d內(nèi)發(fā)生不育，還可能發(fā)生睪丸炎，造成公牛的永久性不育[8-9]。

4 病理變化

對病死牛進行解剖可見皮下組織有漿液性浸潤，結(jié)節(jié)腔內(nèi)含有干酪樣灰白色壞死組織，有的結(jié)節(jié)還伴有化膿和出血。結(jié)節(jié)還可蔓延至皮下組織和骨骼。患病牛體表肌肉、氣管炎、肺、瘤胃、皺胃，甚至腎表面都可能有類似結(jié)節(jié)分布。結(jié)節(jié)處的皮膚、皮下組織及臨近的肌肉組織有呈紅色或黃色的漿液性、出血性滲出液。對表皮細胞進行組織性觀察還可觀察到表皮細胞、脂腺細胞腫脹，胞質(zhì)內(nèi)有空泡，有的相互融合形成微水泡，這種微水泡也見于表皮基底層。除上述病理變化外，病死牛還會出現(xiàn)淋巴結(jié)增生性腫大、充血和出血；口腔、鼻腔黏膜潰瘍[10-11]。發(fā)病嚴重的牛會因縱膈淋巴結(jié)感染而挺起胸膜炎，關(guān)節(jié)內(nèi)有纖維蛋白滲出物，睪丸和膀胱也出現(xiàn)炎型病變。

5 診斷

有經(jīng)驗的獸醫(yī)可根據(jù)臨床癥狀、流行病學和病理變化可作出初步診斷，若需要進一步明確確診則需要進行實驗室檢查。常用的實驗室診斷方法有以下幾種：

5.1 鏡檢

用透射電子顯微鏡診斷是初步診斷本病最直接、最快速的方法。將病料研磨制成懸濁液，滴1滴懸濁液在蠟板上，1 min后加1滴pH7.8的Tris/EDTA緩沖液，20 s后滴加pH7.2的1 % 磷鎢酸，10 s后用濾紙吸干或自然干燥，鏡檢[12]。

5.2 動物試驗與病毒分離鑒定

可取病牛新鮮結(jié)節(jié)做成乳劑，皮內(nèi)或皮下接種于易感牛，4～7 d內(nèi)接種部發(fā)生堅硬、疼痛性腫脹，局部淋巴結(jié)腫大，此時可在腫脹物及其下層肌肉以及唾液、血液和脾臟中分離病毒[13]。

5.3 血清學試驗

包括間接熒光抗體技術(shù)、病毒中和試驗和酶聯(lián)免疫吸附試驗。用ELISA檢測的樣本應在出現(xiàn)臨床癥狀的第1周而中和抗體產(chǎn)生之前采集。病毒中和試驗常用且有效，但由于疙瘩皮膚病感染主要引起細胞免疫，因此對于中和抗體水平低的牛，這種方法診斷較難。

5.4 PCR方法

通用的實時定量PCR方法在檢測CaPV病毒時較其他診斷方法更為敏感。該檢測方法主要是檢測CaPV病毒的DNA，因此不能區(qū)分同屬的不同品種。RT-PCR方法已經(jīng)在很多文獻中被報道。采用RT-PCR方法對CaPV進行檢測，比傳統(tǒng)的凝膠PCR檢測方法更為靈敏。該方法的檢測水平每次反應均少于10個基因拷貝，與其他痘病毒無交又反應，在檢測其他痘病毒或者陰性樣本時，也未出現(xiàn)假陽性結(jié)果。RTPCR檢測方法具有定量、簡單、靈敏、特異等特點，可對CaPV病毒進行快速和高通量的測定。

6 綜合防控技術(shù)

對于本病目前尚無特異性治療方法，對患病牛一般進行對癥治療。對已經(jīng)出現(xiàn)破潰結(jié)節(jié)的患病牛往往首先采用外科方法處理，徹底用藥物清創(chuàng)，潰瘍面涂擦碘甘油，有時為了防止并發(fā)癥，全身可使用抗生素或磺胺類藥物采取治療[14]。

平時加強飼養(yǎng)管理，非必要不從外地引進牛只，必要引進時一定要做好本病的檢測，對引進牛就行隔離和抗體檢測，確保觀察2個月以上且無病后，方可進行混群飼養(yǎng)。當一旦有疫情發(fā)生時，要立即隔離患病牛和可疑患病牛，疫區(qū)要嚴格封鎖，對發(fā)病圈舍內(nèi)的地面、墻面、器具等進行消毒，糞便進行無害化處理，做好消滅蚊蠅工作，控制傳播媒介的傳播[15]。

因為本病的病原與綿羊痘病毒、山羊痘病毒存在抗原同源性和交叉保護，這幾種病毒的疫苗都能夠用來預防牛的結(jié)節(jié)性皮膚病。近年來，臨床上應用分離病毒制備的雞胚化弱毒苗對牛進行免疫接種，具有一定的免疫保護作用。

綜上所述，要想減少本病的發(fā)生，從業(yè)者一定要樹立“養(yǎng)防結(jié)合，防重于治”的科學養(yǎng)殖理念，摸清本病的發(fā)病規(guī)律和流行特點，掌握本病的診斷技術(shù)和病理變化特點，做好疫苗預防，加強飼養(yǎng)飼喂和生產(chǎn)管理，以降低本病的發(fā)病率。