羊痘病毒分子特征及檢測(cè)方法研究進(jìn)展

陸建峰

引言

羊痘是綿羊痘和山羊痘的統(tǒng)稱，是由綿羊痘病毒、山羊痘病毒引起的一種傳染性疾病，羊痘屬于急性、熱性以及接觸性疾病，發(fā)病率很高，傳染率和死亡率都比較高。患有羊痘病癥的羊只，主要癥狀為發(fā)熱、身上無(wú)毛或少毛部位的皮膚出現(xiàn)丘疹或者皰疹，是所有動(dòng)物痘病中最嚴(yán)重的一種，嚴(yán)重影響?zhàn)B羊業(yè)的發(fā)展。羊痘是一種比較常見(jiàn)的疾病，在很多國(guó)家都有發(fā)生，我國(guó)很多地區(qū)都曾經(jīng)呈現(xiàn)暴發(fā)流行趨勢(shì)，我國(guó)將羊痘列為I類(lèi)動(dòng)物疾病。為了提高對(duì)羊痘的預(yù)防水平，必須要加強(qiáng)對(duì)羊痘病毒分子特征的研究，并且對(duì)羊痘的檢測(cè)方法進(jìn)行分析，從而研究出羊痘防治藥物，為羊養(yǎng)羊業(yè)的發(fā)展提供支持與幫助。

1羊痘病毒分子特征

1.1羊痘病毒的特征

羊痘病毒屬于痘病毒科，羊痘病毒屬包含綿羊痘病毒、山羊痘病毒、疙瘩皮膚病病毒三種，是唯一一種在細(xì)胞漿內(nèi)復(fù)制的有囊膜的雙股DNA病毒。分別引起山羊痘、綿羊痘、牛的結(jié)節(jié)性疹塊病。通過(guò)實(shí)驗(yàn)觀察發(fā)現(xiàn)羊痘病毒顆粒呈卵圓形或磚形，大小大約為（100～260）nm×（190～390）nm。羊痘病毒粒子在復(fù)制的過(guò)程中會(huì)產(chǎn)生細(xì)胞內(nèi)粒子和細(xì)胞外粒子兩種，其中細(xì)胞外病毒粒子具有傳染性。成熟的病毒粒子會(huì)以出芽的方式穿過(guò)宿主細(xì)胞的細(xì)胞膜進(jìn)行感染。感染羊痘病毒的羊只具有一定的潛伏期，大約在10-14天之后開(kāi)始出現(xiàn)癥狀，病羊的鼻、結(jié)膜和口腔分泌物中的病毒DNA以及感染性病毒的含量達(dá)到最大值，經(jīng)過(guò)3-6周之后會(huì)降低。羊痘病毒復(fù)制的主要場(chǎng)所是皮膚。

通過(guò)血清學(xué)研究發(fā)現(xiàn)，不同的羊痘病毒之間會(huì)出現(xiàn)交叉反應(yīng)，但是引起牛的結(jié)節(jié)性疹塊病的羊痘病毒不會(huì)對(duì)山羊和綿羊產(chǎn)生感染，從當(dāng)前的實(shí)驗(yàn)情況來(lái)看，利用羊痘病毒感染豚鼠、家兔、小鼠等動(dòng)物進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，均沒(méi)有成功。羊痘病毒可以在牛、綿羊、山羊源的組織培養(yǎng)細(xì)胞上生長(zhǎng)，而且對(duì)原代或次代羔羊睪丸細(xì)胞以及羔羊腎細(xì)胞的敏感程度最高。近年來(lái)，國(guó)內(nèi)外關(guān)于羊痘病毒的研究和報(bào)道都非常多，關(guān)于羊痘病毒的研究也越來(lái)越深入。

1.2羊痘病毒的基因組及其功能基因

羊痘病毒的基因組約有150kbp，其中包括中間編碼區(qū)和兩端相同的反向末端重復(fù)序列，在基因組的中間區(qū)域，有與其他痘病毒同源的保守序列，可以為病毒復(fù)制提供所需的蛋白。在羊痘病毒基因的左側(cè)與右側(cè)10和27kbp的基因結(jié)構(gòu)中包含了十分重要的具有編碼功能的基因序列。綿羊痘病毒、山羊痘病毒的基因組共有147個(gè)開(kāi)放閱讀框，而且綿羊痘病毒、山羊痘病毒的基因組十分相似，大約有96%的核苷酸完全相同，但是也有一些細(xì)微的差異，例如在基因末端的ITRs，綿羊痘病毒為2213bp～2349bp，但是山羊痘病毒為2198bp。所有羊痘病毒都有P32蛋白，這種蛋白是一種特異性強(qiáng)、具有免疫原性的結(jié)構(gòu)蛋白，也是當(dāng)前羊痘病毒研究領(lǐng)域中最熱門(mén)的課題之一。當(dāng)前在羊痘病毒研究領(lǐng)域中，基于P32基因的診斷方法和核酸疫苗的研究已經(jīng)取得了一定的進(jìn)展。

1.3羊痘病毒的免疫逃避機(jī)理

羊痘病毒在感染的過(guò)程中，主要是通過(guò)編碼一系列破壞和避免宿主免疫反應(yīng)的免疫調(diào)節(jié)基因并且將這些基因轉(zhuǎn)入宿主體內(nèi)從而達(dá)到感染目的。有研究人員將羊痘病毒滅活苗或減毒苗接種在成年的小白鼠身上進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)接種12個(gè)小時(shí)之后在注射疫苗的位置的巨噬細(xì)胞的功能降低，由此可見(jiàn)在這個(gè)部位與利于病毒的入侵。當(dāng)感染羊痘病毒之后大約需要五天時(shí)間可以使T細(xì)胞激活并分泌細(xì)胞因子，因此羊痘病毒能夠逃避宿主免疫反應(yīng)。羊痘病毒逃避宿主免疫反應(yīng)的能力并不取決于病毒的感染力，當(dāng)羊痘病毒入侵宿主之后，宿主脾臟的的巨噬細(xì)胞和淋巴細(xì)胞的活性增強(qiáng)，從而使得宿主產(chǎn)生免疫反應(yīng)，從而對(duì)病毒進(jìn)行一定程度的抑制。

2羊痘病毒的檢測(cè)方法和防治

羊痘病毒與羊接觸傳染性膿皰性皮炎病毒具有相同的抗原，因此當(dāng)羊只發(fā)病的時(shí)候，如果采用常規(guī)的血清學(xué)進(jìn)行檢測(cè)，則可能會(huì)出現(xiàn)由于抗體交叉而無(wú)法確定具體的病毒類(lèi)型的現(xiàn)象。因此，在羊痘病毒檢測(cè)過(guò)程中不能采用常規(guī)的血清學(xué)，常用的方法是電鏡觀察，但是很多地區(qū)的檢測(cè)設(shè)備不齊全，對(duì)于羊痘病毒的檢測(cè)以及診斷有一定影響，進(jìn)而可能耽誤疾病的治療。因此，必須要建立一種特異姓高、敏感性高、檢測(cè)速度快的羊痘病毒診斷方法，分子生物學(xué)診斷方法是羊痘病毒檢測(cè)過(guò)程中的一種高效檢測(cè)方法，也是當(dāng)前使用最多的檢測(cè)方法，采用分子生物學(xué)檢測(cè)方，可以簡(jiǎn)單陜速地從組織培養(yǎng)上清、活組織樣品中檢測(cè)出羊痘病毒的DNA片段，并且還可以通過(guò)對(duì)分子產(chǎn)物的酶切分析對(duì)羊痘病毒進(jìn)行鑒定。有研究人員根據(jù)綿羊痘病毒、山羊痘病毒的P32基因序列差異建立了區(qū)別綿羊痘病毒、山羊痘病毒的方法，另外也有學(xué)者建立了用于快速檢測(cè)潛伏期、臨床發(fā)病的和死后的羊體中羊痘病毒DNA的分子生物檢測(cè)方法。

當(dāng)前關(guān)于羊痘病毒的預(yù)防研究，主要是依靠弱毒活疫苗接種完成的，對(duì)羊痘病毒疫苗株和野毒株之間的氨基酸同源性進(jìn)行對(duì)比發(fā)現(xiàn)，兩者的同源性至少有99.9%，差別很小，因此羊痘病毒疫苗株和野毒株之間很易發(fā)生同源重組，恢復(fù)毒性，對(duì)此，在對(duì)羊痘病毒進(jìn)行預(yù)防的時(shí)候必須要弱化其毒性。由于羊痘病毒的宿主范圍比較單一，只對(duì)山羊綿羊產(chǎn)生作用，當(dāng)前我國(guó)正在研發(fā)新一代羊痘病毒活載體疫苗，將外來(lái)基因插在羊痘病毒的非編碼區(qū)，利用羊痘病毒的基因組生產(chǎn)活載體疫苗，實(shí)現(xiàn)對(duì)羊痘病毒的預(yù)防和控制。

3結(jié)語(yǔ)

綜上所述，羊痘病毒是一種感染性、病死率極高的傳染性疾病，在養(yǎng)羊過(guò)程中要積極加強(qiáng)對(duì)羊痘病毒的預(yù)防和控制。通過(guò)對(duì)羊痘病毒的分子特征進(jìn)行研究，有助于研發(fā)羊痘病毒的免疫藥物。在當(dāng)前的研究基礎(chǔ)上，還應(yīng)該要加強(qiáng)對(duì)羊痘病毒檢測(cè)方法以及防治方法的深入研究，以提高羊痘病毒防治水平。

（作者單位：735000甘肅省酒泉市肅州區(qū)畜牧獸醫(yī)局）endprint