MYST2基因與大白豬瘦肉率和日增重的性狀關(guān)聯(lián)分析

李昌武，劉永剛，萬(wàn)長(zhǎng)華，廖 柱，謝式云，易永紅

（1.海南羅牛山畜牧有限公司，海南 ?？?570100；2.云南農(nóng)業(yè)大學(xué)，云南 昆明 650000；3.海南羅牛山股份有限公司，海南 ?？?570125）

我國(guó)是世界上豬肉消耗與生產(chǎn)大國(guó)，居民在豬肉上的消費(fèi)在各種肉類消費(fèi)總和中所占的比例不容小覷。我國(guó)畜牧業(yè)中養(yǎng)豬產(chǎn)業(yè)所占地位不言而喻，因此，在保留大白豬原有優(yōu)點(diǎn)的基礎(chǔ)上再進(jìn)一步提高其日增重和瘦肉率，能夠?yàn)槿藗兲峁└鄡?yōu)質(zhì)肉制品以及改善人們生活，同時(shí)也具有重要的經(jīng)濟(jì)價(jià)值，值得關(guān)注和研究。發(fā)掘及篩選與豬生長(zhǎng)速度及瘦肉率相關(guān)的基因，對(duì)我國(guó)積極參與國(guó)際上豬基因產(chǎn)權(quán)的爭(zhēng)奪并進(jìn)一步利用這些基因用于改進(jìn)我國(guó)養(yǎng)豬生產(chǎn)也具有重要的意義。隨著分子生物學(xué)技術(shù)的興起和迅速發(fā)展，發(fā)展了常規(guī)育種與分子標(biāo)記輔助選擇（MAS）相結(jié)合的方法，可以有效地加快豬生長(zhǎng)速度及瘦肉率性狀的選擇進(jìn)展。MYST2（組蛋白乙酰轉(zhuǎn)移酶2），也稱作HBO1和KAT7（Lysine Acetyltransferase 7，賴氨酸乙酰轉(zhuǎn)移酶7），是組蛋白乙酰轉(zhuǎn)移酶MYST（MOZ、YBF2、SAS2和Tip60）家族（HAT）的成員之一。MYST2基因目前已經(jīng)被證實(shí)在調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖[1]、控制脂肪的生成[2]、調(diào)節(jié)胚胎發(fā)育過(guò)程[3]以及胎兒肝臟中紅血球母細(xì)胞的存活密切相關(guān)[4]。Jishuang等[5]的研究表明，在AA雞（Arbor Acres Broiler Chicken，艾撥益加肉雞）中上調(diào)MYST2對(duì)其IMF（Intramuscular Fat，肌內(nèi)脂肪）的沉積有一定影響。Wang等[6]通過(guò)研究豬MYST2基因mRNA的替代以及該基因突變與產(chǎn)仔大小性狀的相關(guān)性中表明，該基因與大白母豬和地方種母豬所有產(chǎn)仔呈現(xiàn)大小顯著相關(guān)關(guān)系。

這些數(shù)據(jù)為進(jìn)一步了解豬的這種基因奠定了基礎(chǔ)。除此之外，也有相關(guān)證據(jù)表明MYST家族成員在控制細(xì)胞中具有核心和特異性作用，在細(xì)胞凋亡、細(xì)胞周期和成體干細(xì)胞穩(wěn)態(tài)到早期胚胎的形成中均起到一定的調(diào)節(jié)作用[7]。但是截至目前，還鮮少有關(guān)于利用豬MYST2基因作為大白豬瘦肉率和平均日增重的遺傳標(biāo)記的研究或進(jìn)行大白豬瘦肉率和平均日增重標(biāo)記輔助選育的報(bào)道。

1 研究目的

1）探明MYST2基因與大白豬的活體瘦肉率是否存在關(guān)聯(lián)；2）探明MYST2基因與大白豬的平均日增重是否存在關(guān)聯(lián)。

2 材料與方法

2.1 試驗(yàn)豬群與數(shù)據(jù)分析

2019年10月，隨機(jī)選擇云南農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科學(xué)技術(shù)學(xué)院試驗(yàn)動(dòng)物群中150頭180日齡的大白豬群為試驗(yàn)材料，采用已建立的PCR-PstI-RFLP方法進(jìn)行多態(tài)性檢測(cè)，并分析豬不同基因型與活體瘦肉率和平均日增重的相關(guān)關(guān)系。采用SAS統(tǒng)計(jì)軟件General Linear Module程序進(jìn)行單標(biāo)記方差分析并進(jìn)行顯著性檢驗(yàn)，所采用模型為：Yij=μ+Gi+Sj+bijX+Eij，其中Yij為性狀表現(xiàn)值，μ為平均值，Gi為基因型效應(yīng)（包括加性效應(yīng)和顯性效應(yīng)，加性效應(yīng)用1、0、-1分別代表AA、AB、BB基因型，顯性效應(yīng)用1、-1、1代表AA、AB、BB基因型），Sj為性別效應(yīng)，bij為活體體重的回歸系數(shù)，X為活體體重，Eij為殘差。

2.2 試驗(yàn)方法

（1）從豬耳組織中提取基因組DNA，根據(jù)豬MYST2基因序列和兩條遺傳標(biāo)記特異引物（表1），用該兩條引物在豬基因組DNA中進(jìn)行PCR擴(kuò)增，PCR反應(yīng)體系為：2.0 μL DNA （100 ng），2.5 μL 2 mmol/L mixed dNTPs，2.5 μL 10×Taq DNA polymerase buffer，2.5 μL 25 mmol/L MgCl2，1 μL 20 μmol/L第1引物，1 μL 20 μmol/L第2引物，2 unit of Taq DNA polymerase（1 U/μL），11.5 μL無(wú)菌水。得到PCR產(chǎn)物。所述的PCR程序?yàn)椋?4 ℃ 4 min，35個(gè)循環(huán)94 ℃ 50 s，58 ℃ 45 s，72 ℃ 50 s，然后72 ℃ 10 min，最后4 ℃終止反應(yīng)。

（2）將步驟（1）中得到的PCR產(chǎn)物用PstI限制性內(nèi)切酶酶切，反應(yīng)體系為：10 μL PCR產(chǎn)物，7 μL無(wú)菌水，1 μL PstI（10 U），2 μL 10×buffer，PCR產(chǎn)物PstI酶切反應(yīng)條件為：混合物在37 ℃恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)4 h。在含有EB（溴化乙錠）的2%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)酶切結(jié)果，凝膠成像系統(tǒng)觀察并記錄基因型。

3 結(jié)果與分析

3.1 試驗(yàn)結(jié)果

根據(jù)條帶差異，可分為3種基因型：1）AA型：具有282 bp、164 bp 2條帶；2）BB型：只有446 bp 1條帶；3）AB型：同時(shí)具有446 bp、282 bp、164 bp 3條帶（圖1）。

圖1 大白豬MYST2基因分型檢測(cè)結(jié)果

3.2 MYST2基因型與大白豬活體瘦肉率和平均日增重的關(guān)聯(lián)分析

在150頭大白豬群中進(jìn)行了不同基因型與活體瘦肉率和平均日增重間關(guān)聯(lián)分析，統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 MYST2基因型與大白豬活體瘦肉率和平均日增重的關(guān)聯(lián)分析

4 結(jié)論與討論

在參與試驗(yàn)的150頭大白豬中，基因型AA個(gè)體的活體瘦肉率極顯著高于BB基因型個(gè)體（P<0.01），基因型AA個(gè)體的活體平均日增重極顯著高于BB基因型個(gè)體（P<0.01）。經(jīng)分析結(jié)果綜合考慮，選擇MYST2基因中含有AA基因型的個(gè)體作為種畜，可以極顯著提高大白豬后代的瘦肉率與平均日增重。