二維液相色譜在中藥分析的應(yīng)用

黃競(jìng)怡，佟玲，丁黎

（1.中國(guó)藥科大學(xué)藥物分析教研室，江蘇 南京210009；2.天士力制藥集團(tuán)股份有限公司研究院藥物分析所，天津300402）

二維液相色譜在中藥分析的應(yīng)用

黃競(jìng)怡1,2，佟玲2，丁黎1*

（1.中國(guó)藥科大學(xué)藥物分析教研室，江蘇 南京210009；2.天士力制藥集團(tuán)股份有限公司研究院藥物分析所，天津300402）

中藥的物質(zhì)體系復(fù)雜，對(duì)其組分的分離、鑒定和制備需要更高的分離度，二維液相色譜能將分離機(jī)理不同而又相互獨(dú)立的兩支色譜柱串聯(lián)構(gòu)成分離系統(tǒng)，應(yīng)用于復(fù)雜基質(zhì)的中藥材及中藥復(fù)方制劑的分析，可顯著提高峰容量和色譜峰鑒定的可靠性，降低色譜峰重疊，使分離效率與分析通量大為提高。綜述二維液相色譜基本原理及其在中藥分析中的應(yīng)用研究新進(jìn)展。

二維液相色譜；中藥分析；分離度；峰容量

中藥是一個(gè)復(fù)雜的物質(zhì)體系，其組分的極性分布范圍廣泛，且各組分間的含量差異巨大[1]。傳統(tǒng)的一維色譜分離度不夠，對(duì)中藥中微量化合物的分析會(huì)受到常量化合物的干擾，峰重疊現(xiàn)象嚴(yán)重[2]。二維液相色譜（2D-LC）是將分離機(jī)制不同而又相互獨(dú)立的兩支色譜柱串聯(lián)起來(lái)構(gòu)成的分離系統(tǒng)，通過柱切換技術(shù)實(shí)現(xiàn)樣品在一維和二維色譜柱之間的流動(dòng)。2D-LC分析時(shí)，樣品被第一維色譜柱分離后進(jìn)入切換閥的接口，再經(jīng)捕集或切割后進(jìn)入第二維色譜柱及后續(xù)檢測(cè)器。20世紀(jì)80年代，Davis 和Giddings（Anal Chem，1983年）研究發(fā)現(xiàn)，當(dāng)樣品中的組分?jǐn)?shù)超過整個(gè)系統(tǒng)峰容量（peak capacity）的37%時(shí)，色譜系統(tǒng)的分離度會(huì)大幅降低；若需完全分離樣品中98%的組分，系統(tǒng)的峰容量要大于色譜峰數(shù)的100倍。Giddings（Anal Chem，1967年）的研究表明，2D-LC系統(tǒng)的分離度是1D-LC系統(tǒng)分離度平方和的平方根，峰容量是1D-LC系統(tǒng)峰容量的乘積（兩者的分離能力見圖1），2D-LC顯著提高了分離能力， 降低了色譜峰重疊，兩維不同的分離機(jī)理組合可實(shí)現(xiàn)復(fù)雜樣品的高通量分析。

2 D-LC技術(shù)在脂質(zhì)體分析[3]、蛋白質(zhì)組學(xué)分析[4]、前體物質(zhì)篩選[5]等生物樣品復(fù)雜體系分析領(lǐng)域已得到廣泛應(yīng)用，近年來(lái)在中藥質(zhì)量控制領(lǐng)域也發(fā)揮了重要作用。

圖1 一維液相色譜與二維液相色譜分離能力對(duì)比[2]Figure 1 Comparison of separation capacity between 1D-LC and 2D-LC

1 二維液相色譜的基礎(chǔ)理論

1.1 正交性

在2D-LC系統(tǒng)中，正交性（orthogonality）（Erni等，J Chromatogr A，1978年）取決于每一維分離機(jī)制的相關(guān)性，是評(píng)價(jià)系統(tǒng)分離能力的重要指標(biāo)?，F(xiàn)有研究報(bào)道，2D-LC的正交性可用信息相似度（informational similarity，IS）（Liu等，Anal Chem，1995年）、 交互百分比（percentage of synentropy，PS）[6]、峰分布角（peak spreading angle）[7]和實(shí)際峰容量（Giddings，Anal Chem，1984年）表示。

提高2D-LC的正交性，主要有以下3種方法：①選擇不同分離機(jī)制的色譜系統(tǒng)，根據(jù)分離對(duì)象和目的進(jìn)行選擇性組合；②選擇合適的固定相[8]和流動(dòng)相，兼顧兩維流動(dòng)相的相容性[9]；③優(yōu)化合理的分析條件[10]。

1.2 峰容量

Giddings（Anal Chem，1984年）曾提出用峰容量描述色譜的分離能力。峰容量是指在一定分析時(shí)間內(nèi)，能夠在給定色譜系統(tǒng)中達(dá)到一定分離度的最大組分?jǐn)?shù)。在2D-LC系統(tǒng)中，峰容量為每一維峰容量的線性組合，當(dāng)兩維的分離完全正交，且所有色譜峰隨機(jī)分布在整個(gè)2D-LC系統(tǒng)中時(shí)，其峰容量等于兩維的乘積，即P2D=P1×P2。

但2D-LC系統(tǒng)的實(shí)際峰容量往往低于這個(gè)值[11]，主要原因有：①兩維分離模式并非完全正交；②第一維的采樣速率不足，導(dǎo)致采樣過疏（under-sampling）[12]。

2 二維液相色譜的分離模式

2 D-LC根據(jù)第一維餾分到第二維的轉(zhuǎn)移方式可分為離線（off-line）2D-LC和在線（on-line）2D-LC兩種模式[13]；根據(jù)第一維餾分是否全部轉(zhuǎn)移到第二維可分為全2D-LC（comprehensive 2D-LC）和中心切割2D-LC（heart-cutting 2D-LC）兩種模式（Bushey等，Anal Chem，1990年）；還可根據(jù)不同分離機(jī)制的色譜系統(tǒng)組合進(jìn)行分類，如正相/反相色譜、反相/反相色譜、離子色譜、生物膜色譜/反相色譜、手性色譜/非手性色譜等。

2.1 離線模式和在線模式

離線模式[14]是通過手動(dòng)或組分收集器獲得組分后，進(jìn)入第二維進(jìn)行分析，對(duì)儀器的要求較低。在線模式[15]是通過接口切換將第一維洗脫組分直接注入第二維色譜柱，或是利用收集切換裝置交替收集適量的第一維組分，且按照特定的時(shí)間間隔進(jìn)行第二維分離。

離線模式具有溶劑選擇范圍廣、操作簡(jiǎn)單等優(yōu)點(diǎn)[16]，缺點(diǎn)是不具有連續(xù)性，收集后的組分大多需要富集濃縮，易造成樣品的損失和污染，自動(dòng)化程度不高。在線模式具有樣品損失少、速度快和自動(dòng)化程度高等優(yōu)點(diǎn)[17]，缺點(diǎn)是溶劑的兼容性差，轉(zhuǎn)換閥、環(huán)線及檢測(cè)器的死體積易導(dǎo)致峰展寬現(xiàn)象。

2.2 全二維液相色譜和中心切割二維液相色譜

全2D-LC是讓第一維的所有組分均進(jìn)入到第二維分析，兩根色譜柱通過接口連接，既保持了第一維的分離度和分離效率[18]，又能得到樣品中全部組分的信息，適合復(fù)雜樣品體系中未知組分[19]的分析。中心切割2D-LC[14]是讓包含目標(biāo)化合物的第一維組分選擇性地進(jìn)入第二維分析，可通過對(duì)目標(biāo)組分選擇性分析來(lái)縮短分析時(shí)間、提高分析效率，但需要在特定的分離

模式下選擇合適的切割時(shí)機(jī)。

2.3 液相色譜分離機(jī)制的組合

根據(jù)樣品的性質(zhì)，可選擇將正相色譜、反相色譜、離子交換色譜、手性色譜、高速逆流色譜等不同分離機(jī)制的色譜組合，實(shí)現(xiàn)不同的分離目的。此外，近年來(lái)新型色譜填料[20]的研制與開發(fā)也拓展了2D-LC的應(yīng)用范圍。

3 二維液相色譜在中藥分析中的應(yīng)用

中藥復(fù)雜體系中成分的差異性和未知性為分離分析工作帶來(lái)諸多難題，2D-LC技術(shù)與質(zhì)譜（MS）技術(shù)聯(lián)用（2D-LC-MS）[21]在復(fù)雜中藥樣品組成的分離分析和制備鑒定方面表現(xiàn)出良好的前景，現(xiàn)對(duì)2D-LC技術(shù)在中藥材和中藥復(fù)方制劑分析中的應(yīng)用作一總結(jié)（見表1和表2）。

表1 2D-LC 在中藥材分析中的應(yīng)用實(shí)例Table1 Application examples of 2D-LC in the analysis of Chinese medicinal materials

續(xù)表1

表2 2D-LC 在中藥制劑分析中的應(yīng)用實(shí)例Table2 Application examples of 2D-LC in the analysis of TCM preparations

傳統(tǒng)的1D-LC-MS系統(tǒng)受中藥復(fù)雜基質(zhì)產(chǎn)生的離子抑制效應(yīng)（Davis 等，Anal Chem，1983年）影響，提供的化合物信息量大大減少，為此研究者們構(gòu)建了各種2D-LC系統(tǒng)對(duì)復(fù)雜中藥進(jìn)行了分離，如紅花[35]、大黃[36]、甘草[37]、六味地黃丸[40]、正天丸[42]、小兒清熱止咳口服液[44]和復(fù)方銀黃口服液[46]等（見表1和表2），通過比較峰容量和分離效果證實(shí)2D-LC技術(shù)相比1D-LC具有較高的分離效率。Zeng等[48]為比較1D-LC和2D-LC對(duì)復(fù)雜中藥樣品的分離鑒定能力，將降香、黃芩、半枝蓮、枳殼、甘草和葛根6種中藥混合后，

利用三根色譜柱構(gòu)建了平行1D-LC和2D-LC對(duì)混合物進(jìn)行分離，并對(duì)其中的黃酮類成分進(jìn)行質(zhì)譜鑒定，結(jié)果顯示，2D-LC鑒定出25種黃酮，1D-LC僅鑒定出14種黃酮，2D-LC相比于1D-LC具有更高的分離效率。

針對(duì)中藥材或中藥復(fù)方制劑的研究，首先要闡明其化學(xué)物質(zhì)基礎(chǔ)，目前基于液相-質(zhì)譜-數(shù)據(jù)庫(kù)(LCMS-DS)/制備型液相色譜(pHPLC)的中藥化學(xué)組分快速鑒別與制備技術(shù)已廣泛應(yīng)用于中藥的物質(zhì)基礎(chǔ)研究。現(xiàn)有2D-LC技術(shù)對(duì)中藥樣品的分析已發(fā)展到制備級(jí)別，能獲得在1D-LC上響應(yīng)低、受基質(zhì)影響大的化合物純品，這極大地解決了分離制備的難題。Jin等[34]利用C3和C18色譜柱構(gòu)建的2D-LC系統(tǒng)對(duì)忍冬的各成分進(jìn)行分離和制備，結(jié)果獲得了純度大于99%的7個(gè)化合物，且用核磁共振鑒定了其結(jié)構(gòu)。Qiu等[24]利用高速逆流色譜柱和制備脂質(zhì)體色譜柱串聯(lián)構(gòu)建了2D-LC系統(tǒng)，對(duì)蟾酥各組分進(jìn)行分離制備，獲得了9種純度大于85%的化合物，且通過核磁共振鑒定了其結(jié)構(gòu)。Jayaprakasha等[31]利用硅膠快速色譜柱和硅膠/二醇色譜柱構(gòu)建的2D-LC系統(tǒng)對(duì)姜黃中的姜黃素、去甲基姜黃素、雙脫甲氧基姜黃素和二氫雙脫甲氧基姜黃素進(jìn)行制備水平的分離分析，且與MS和定量核磁共振技術(shù)結(jié)合，鑒定了4種姜黃素其純度均大于90%。陳岑[47]利用親水作用色譜和反相色譜組合的離線2D-LC與MS系統(tǒng)聯(lián)用，分離和鑒定梔子豉湯組方藥材和全方的化學(xué)成分，包括16種環(huán)烯醚萜苷類和梔子黃色素類成分及11種大豆異黃酮類成分，通過比較方劑和單味藥材之間有效成分的差異分析該中藥組方特點(diǎn)。

近年來(lái)，基于新型填料、新型色譜分離機(jī)制發(fā)展起來(lái)的2D-LC技術(shù)應(yīng)用于中藥的分離分析，不僅極大地提高了系統(tǒng)峰容量、改善了峰重疊，且解決了兩維流動(dòng)相的兼容以及相同分離機(jī)制構(gòu)建2D-LC體系正交性不足的問題。Xue等[36]構(gòu)建了click dipeptide柱和C18柱的2D-LC系統(tǒng)對(duì)中藥大黃進(jìn)行分析，結(jié)果分離出400多個(gè)峰，而相同條件下，1D-LC僅分離出約60個(gè)峰。Liu等[35]發(fā)展了由麥芽糖柱作為第一維、酸胺柱和環(huán)糊精柱分別作為第二維的兩個(gè)離線模式2D-Hilic/Hilic體系，并用于中藥紅花中的強(qiáng)極性組分分析，結(jié)果顯示這兩個(gè)2D-LC體系的峰容量分別為879和554，相同條件下1D-LC的峰容量?jī)H為50。此外，高溫色譜柱[37]、整體柱等[31]也被用于構(gòu)建2D-LC體系對(duì)中藥進(jìn)行分析。

2 D-LC在中藥活性組分篩選和分離方面也表現(xiàn)突出，通過一維生物活性色譜柱篩選具有活性的中藥組分，再在第二維色譜柱上進(jìn)行分離和分析，從而快速鑒定特定活性組分。Wang等[43]使用全二維人血清白蛋白柱/反相色譜柱（2D-HSA/RPLC）的液相色譜體系，分離分析傳統(tǒng)中藥龍膽瀉肝湯劑，結(jié)果顯示100多種與HSA有活性作用的組分被分離，其中的19種化合物通過MS推測(cè)了其結(jié)構(gòu)。

4 展望

高自動(dòng)化的分析儀器，靈活的柱結(jié)合切換方式，系統(tǒng)針對(duì)性的分離分析條件[38]，以及多維信息整合和處理平臺(tái)是2D-LC的發(fā)展方向。2D-LC-MS憑借其強(qiáng)大的分離分析能力，在中藥的分析和物質(zhì)基礎(chǔ)研究上的優(yōu)勢(shì)日益凸顯，用于指導(dǎo)中藥的分離制備，可大大提高其分離效率和組分純度。相信隨著新技術(shù)和新方法的發(fā)展和完善，2D-LC技術(shù)必將在中藥分析領(lǐng)域有更加廣闊的應(yīng)用空間。

[1]Xie P S, Leung A Y.Understanding the traditional aspect of Chinese medicine in order to achieve meaningful quality control of Chinese materia medica[J].J Chromatogr A, 2009, 1216(11)： 1933-1940.

[2]Stoll D R, Li X, Wang X,et al.Fast, comprehensive two-dimensional liquid chromatography[J].J Chromatogr A, 2007, 1168(1/2)： 3-43.

[3]Wang S, Li J, Shi X,et al.A novel stop-flow two-dimensional liquid chromatography-mass spectrometry method for lipid analysis[J].J Chromatogr A, 2013, 1321： 65-72.

[4]Percy A J, Simon R, Chambers A G,et al.Enhanced sensitivity and multiplexing with 2D LC/MRM-MS and labeled standards for deeper

and more comprehensive protein quantitation[J].J Proteomics, 2014, 106： 113-124.

[5]Gandhi T, Fusetti F, Wiederhold E,et al.Apex peptide elution chain selection： a new strategy for selecting precursors in 2D-LC-MALDITOF/TOF experiments on complex biological samples[J].J Proteome Res, 2010, 9(11)： 5922-5928.

[6]Li X, Stoll D R, Carr P W.Equation for peak capacity estimation in two-Dimensional liquid chromatography[J].Anal Chem, 2009, 81(2)： 845-850.

[7]Van Gyseqhem E, Van Hemelryck S, Daszykowski M,et al.Determining orthogonal chromatographic systems prior to the development of methods to characterise impurities in drug substances[J].J Chromatogr A, 2003, 988(1)： 77-93.

[8]Liu Y, Guo Z, Feng J,et al.Development of orthogonal two-dimensional hydrophilic interaction chromatography systems with the introduction of novel stationary phases[J].J Sep Sci, 2009, 32(17)： 2871-2876.

[9]Qiu Y K, Yan X, Fang M J,et al.Two-dimensional countercurrent chromatography ×high performance liquid chromatography for preparative isolation of toad venom[J].J Chromatogr A, 2014, 1331： 80-89.

[10]Jandera P.Column selectivity for two-dimensional liquid chromatography[J].J Sep Sci, 2006, 29(12)： 1763-1783.

[11]Seeley J V.Theoretical study of incomplete sampling of the first dimension in comprehensive two-dimensional chromatography[J].J Chromatogr A, 2002, 962(1/2)： 21-27.

[12]Horie K, Kimura H, Ikegami T,et al.Calculating optimal modulation periods to maximize the peak capacity in two-dimensional HPLC[J].Anal Chem, 2007, 79(10)： 3764-3770.

[13]Dugo P, Favoino O, Tranchida P Q,et al.Off-line coupling of nonaqueous reversed-phase and silver ion high-performance liquid chromatography-mass spectrometry for the charaeterization of rice oil triaeylglycerol positional isomers[J].J Chromatogr A, 2004, 1041(1/2)：135-142.

[14]沈保家，秦昆明，劉啟迪，等.二維色譜技術(shù)及其在中藥領(lǐng)域中的應(yīng)用[J].中國(guó)科學(xué)：化學(xué)，2013, 43 (11)： 1480-1489.

[15]馬賽，梁瓊麟，羅國(guó)安，等.在線全二維液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用分析板藍(lán)根注射液[J].南昌大學(xué)學(xué)報(bào)理科版，2006，30(Suppl)： 1383-1384.

[16]Eggink M, Romero W, Vreuls R J,et al.Development and optimization of a system for comprehensive two-dimensional liquid chromatography with UV and mass spectrometric detection for the separation of complex samples by multi-step gradient elution[J].J Chromatogr A, 2008, 1188(2)： 216-226.

[17]丁坤，吳大朋，關(guān)亞風(fēng).二維液相色譜接口技術(shù)[J].色譜，2010，12(28)： 1117-1122.

[18]Yan S K, Xin W F, Luo G A,et al.An approach to develop twodimensional fngerprint for the quality control ofQingkailinginjection by high-performance liquid chromatography with diode array detection[J].J Chromatogr A, 2005, 1090(1/2)： 90-97.

[19]Cacciola F, Jandera P, Hajdú Z,et al.Comprehensive two-dimensional liquid chromatography with parallel gradients for separation of phenolic and favone antioxidants[J].J Chromatogr A, 2007, 1149(1)： 73-87.

[20]Sun C X, Zhao Y Y, Curtis J M.Elucidation of phosphatidylcholine isomers using two dimensional liquid chromatography coupled in-line with ozonolysis mass spectrometry[J].J Chromatogr A, 2014, 1351： 37-45.

[21]屠鵬飛，史社坡，姜勇.中藥物質(zhì)基礎(chǔ)研究思路與方法[J].中草藥，2012，43(2)： 209-215.

[22]Hou X F, Yuan X L, Zhang B,et al.Screening active anti-breast cancer compounds from Cortex Magnolia offcinalis by 2D LC-MS[J].J Sep Sci, 2013, 36(4)： 706-712.

[23]Song Y L, Jing W H, Du G,et al.Qualitative analysis and enantiospecifc determination of angular-type pyranocoumarins in Peucedani Radix using achiral and chiral liquid chromatography coupled with tandem mass spectrometry[J].J Chromatogr A, 2014, 1338： 24-37.

[24]Qiu Y K, Yan X, Fang M J,et al.Two-dimensional countercurrent chromatography×high performance liquid chromatography for preparative isolationof toad venom[J].J Chromatogr A, 2014, 1331： 80-89.

[25]盛龍生，王穎，馬仁玲，等.天然藥物成分分析2D-LC/MS 技術(shù)平臺(tái)的初步建立[J].中國(guó)天然藥物，2003, 1(1)： 61-64.

[26]Zhang J, Tao D Y, Duan J C,et al.Separation and identification of

compounds in Adinandra nitida by comprehensive two-dimensional liquid chromatography coupled to atmospheric pressure chemical ionization source ion trap tandem mass spectrometry[J].Anal Bioanal Chem, 2006, 386(3)： 586-593.

[27]Wang Y, Lu X, Xu G W.Development of a comprehensive twodimensional hydrophilic interaction chromatography/quadrupole timeof-fight mass spectrometry system and its application in separation and identifcation of saponins fromQuillaja saponaria[J].J Chromatogr A, 2008, 1181(1/2)： 51-59.

[28]陳學(xué)國(guó)，胡良海，孔亮，等.全二維液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用用于金銀花提取液的成分分析[C]//第十五次全國(guó)色譜學(xué)術(shù)報(bào)告會(huì)文集(下冊(cè)).鄭州：中國(guó)化學(xué)會(huì)色譜專業(yè)委員會(huì)和中國(guó)色譜學(xué)會(huì), 2005：714-715.

[29]胡良海，陳學(xué)國(guó)，孔亮，等.整體柱用于全二維液相色譜/質(zhì)譜快速分離當(dāng)歸提取物[C] //第十五次全國(guó)色譜學(xué)術(shù)報(bào)告會(huì)文集(下冊(cè)).鄭州： 中國(guó)化學(xué)會(huì)色譜專業(yè)委員會(huì)和中國(guó)色譜學(xué)會(huì), 2005：712-713.

[30]Li K Y, Zhu W Y, Fu Q,et al.Purification of amide alkaloids from Piper longum L.using preparative two-dimensional normal-phase liquid chromatography reversed-phase liquid chromatography[J].Analyst, 2013, 138(11)： 3313-3320.

[31]Jayaprakasha G K, Nagana Gowdab G A, Marquez S,et al.Rapid separation and quantitation of curcuminoids combining pseudo twodimensional liquid fash chromatography and NMR spectroscopy[J].J Chromatogr B Analyt Technol Biomed Life Sci, 2013, 937： 25-32.

[32]曾靜，郭志謀，李偉，等.離線二維液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法檢測(cè)姜黃中姜黃素類和倍半萜類化合物[J].中國(guó)科學(xué)：化學(xué)，2010，40(6)： 768-774.

[33]Li B, Zhang X, Wang J,et al.Simultaneous characterization of fifty coumarins from the roots of angelica dahurica by off-line twodimensional high-performance liquid chromatography coupled with electrospray ionization tandem mass spectrometry[J].Phytochem Anal, 2014, 25(3)： 229-240.

[34]Jin H L, Liu Y F, Feng J T,et al.Effcient purifcation of high-purity compounds from the stem of Lonicera japonica Thunb using twodimensional preparative chromatography[J].J Sep Sci, 2013, 36 (15)：2414-2420.

[35]Liu Y M, Guo Z M, Feng J T,et al.Development of orthogonal twodimensional hydrophilic interaction chromatography systems with the introduction of novel stationary phases[J].J Sep Sci, 2009, 32(17)：2871-2876.

[36]Xue M, Huang H, Ke Y,et al.“Click dipeptide”： a novel stationary phase applied in two-dimensional liquid chromatography[J].J Chromatogr A, 2009, 1216(49)： 8623-8629.

[37]田宏哲，徐靜，關(guān)亞風(fēng).高溫正相色譜/反相色譜 (HTNPLC/ RPLC)二維聯(lián)用系統(tǒng)的構(gòu)建與應(yīng)用[J].分析測(cè)試學(xué)報(bào), 2008, 27(7)：691-696.

[38]Xing Q Q, Liang T, Shen G B,et al.Comprehensive HILIC×RPLC with mass spectrometry detection for the analysis of saponins in Panax notoginseng[J].Analyst, 2013, 137(9)： 2239-2249.

[39]陳學(xué)國(guó)，孔亮，盛亮洪，等.全二維液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜用于銀杏葉提取物成分分析的研究[J].色譜, 2005, 23 (1)： 46-51.

[40]唐濤，張維冰，李彤，等.六味地黃丸組分的二維液相色譜分離[J].分析化學(xué), 2007, 35(12)： 1767-1771.

[41]張艷海，張大偉，孟兆青，等.在線二維液相色譜法快速測(cè)定桂枝茯苓膠囊中芍藥苷、丹皮酚、苦杏仁苷和肉桂酸的含量[J].中國(guó)中藥雜志, 2013, 38(23)： 4088-4093.

[42]蘭韜，焦豐龍，唐濤，等.正相模式/反相模式的二維液相色譜系統(tǒng)的構(gòu)建與應(yīng)用[J].色譜, 2008, 26(3)： 374-377.

[43]Wang Y, Kong L, Hu L,et al.Biological fngerprinting analysis of the traditional Chinese prescription Longdan Xiegan Decoction by on/ off-line comprehensive two-dimensional biochromatography[J].J Chromatogr B Analyt Technol Biomed Life Sci, 2007, 860(2)： 185-194.

[44]鄒萍，王紹艷，張志強(qiáng)，等.二維高效液相色譜技術(shù)用于分析中藥制劑中的麻黃類生物堿[J].分析測(cè)試學(xué)報(bào), 2007, 26(1)： 120-121.

[45]郭菲，王彥，王刃鋒，等.二維液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用分離中藥復(fù)方葛根芩連湯中的有效成分[J].色譜, 2008, 26(1)： 15-21.

[46]劉文翔.二維液相色譜分離中藥復(fù)方銀黃口服液中的有效成分[J].河南化工, 2010, 27(12)： 41-43.

[47]陳岑.二維液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)在梔子豉湯成分分析中的應(yīng)用研究[D].廣東： 廣東藥學(xué)院, 2014： 71-90.

[48]Zeng J, Zhang X L, Guo Z M,et al.Separation and identification of favonoids from complex samples using off-line two-dimensional liquid chromatography tandem mass spectrometry[J].J Chromatogr A, 2012, 1220： 50-56.

Application of Two-dimensional Liquid Chromatography in Analysis of Traditional Chinese Medicines

HUANG Jingyi1,2, TONG Ling2, DING Li1
(1.Department of Pharmaceutical Analysis, China Pharmaceutical University, Nanjing 210009, China; 2.Tasly Pharmaceutical Analysis Institute, Tianjin Tasly Group Co., Ltd., Tianjin 300402, China)

Traditional Chinese medicines (TCMs) are featured by high complexity of their components.Therefore, high chromatographic resolution is required for the separation, identifcation and preparation of those components in TCMs.Two-dimensional liquid chromatography (2DLC) is a separation system combining two independent columns with different separation mechanisms in tandem.When applied in the analysis of Chinese medicinal materials and compound preparations of TCMs with complex matrix, 2D-LC can improve peak capacity and reliability of peak identifcation, and reduce peak overlapping at the same time, signifcantly enhancing separation effciency and analysis throughput.The basic principles of 2D-LC and the recent progress in its application in the analysis of TCMs were reviewed.

two-dimensional chromatography; analysis of traditional Chinese medicines; resolution; peak capacity

R284.2

A

1001-5094（2015）05-0357-07

接受日期：2015-04-10

“十二五”科技重大專項(xiàng)“重大新藥創(chuàng)新”項(xiàng)目（No.2013zx09402202）

*通訊作者：丁黎，教授，博士生導(dǎo)師；

研究方向：中藥分析、體內(nèi)藥物分析、藥物代謝動(dòng)力學(xué)；

Tel：025-83271289； E-mail：dinglihg@sina.com