多指標(biāo)測定和物理指紋圖譜評價(jià)冰硼痔瘡栓浸膏粉干燥工藝

王 玉李希 馮建安黃嫣毛紅趙強(qiáng)

（四川省中醫(yī)藥科學(xué)院中醫(yī)研究所， 四川 成都610031）

中藥浸膏粉是中藥制劑生產(chǎn)過程中的重要中間體，其物理性質(zhì)直接影響貯存、混合、制劑等工藝，影響產(chǎn)品質(zhì)量［1?2］。浸膏的干燥是制劑生產(chǎn)中常見的工序，中藥浸膏干燥方式主要有常壓干燥、減壓干燥、噴霧干燥等［2?5］。物理指紋圖譜是綜合評價(jià)粉體學(xué)性質(zhì)及質(zhì)量的方法，以堆積性、均一性、流動(dòng)性、可壓性和穩(wěn)定性等為關(guān)鍵物理性質(zhì)，用于評價(jià)同類型粉末不同批次間的物理性質(zhì)對制劑成型性的影響［6?9］。

冰硼痔瘡栓由大黃、黃連、黃柏、紫草等中藥組成，具有消炎止痛、生肌止血之功，能夠緩解各期痔瘡疼痛和出血，調(diào)節(jié)微循環(huán)，促進(jìn)毛細(xì)血管新生，促進(jìn)創(chuàng)面修復(fù)，方中大黃酚、大黃酸、大黃素甲醚、蘆薈大黃素有收斂、止血之功，鹽酸小檗堿有抑菌作用，鹽酸黃柏堿有抗病原微生物的作用，β，β′?二甲基丙烯酰阿卡寧具有抗菌、抗炎、促進(jìn)傷口愈合的作用［10］。本研究采用多指標(biāo)含量測定和粉體物理指紋圖譜方法，考察干燥工藝對冰硼痔瘡栓浸膏粉的影響，以期為其干燥方法選擇和制劑成型工藝提供指導(dǎo)和依據(jù)。

1 材料

Waters e2695 高效液相色譜儀（美國Waters 公司）；BT?125D 分析天平［賽多利斯科學(xué)儀器（北京）有限公司］；BH?15 電子天平（啟東友銘衡器有限公司）；GZX?9070MBE 電熱鼓風(fēng)干燥箱（上海博訊實(shí)業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠）；KQ?300DE 數(shù)控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；電熱恒溫水浴鍋（北京市永光明醫(yī)療儀器有限公司）。

黃連、黃柏、大黃、地榆、苦參、紫草、甘草、爐甘石均購于四川省中藥飲片有限責(zé)任公司，經(jīng)四川省中醫(yī)藥科學(xué)院中醫(yī)研究所謝守德主任中藥師鑒定為正品。β，β′?二甲基丙烯酰阿卡寧（批號111689?201504，純度98.0%）、大黃酚（批號110796?201621，純度99.2%）、大黃素甲醚（批號 110758?201616，純 度 99.0%）、大黃酸（批號110757?201607，純度99.3%）、蘆薈大黃素（批號110795?201710，純度98.3%）、鹽酸小檗堿（批號110713?201814，純度86.7%）、鹽酸黃柏堿對照品（批號111895?201805，純度94.9%）對照品均購于中國食品藥品檢定研究院。乙腈為色譜純；其余均為分析純；水為超純水。

2 方法與結(jié)果

2.1 冰硼痔瘡栓浸膏粉制備 按處方比例稱取大黃、黃柏、黃連、地榆、苦參，加8 倍量70%乙醇提取2次，每次1 h，回收乙醇，濃縮至稠膏，加紫草、甘草、爐甘石細(xì)粉，60 ℃干燥，粉碎，過篩，即得冰硼痔瘡栓常壓干燥浸膏粉；減壓干燥為60 ℃減壓干燥，粉碎，過篩，即得冰硼痔瘡栓減壓干燥浸膏粉；噴霧干燥為進(jìn)風(fēng)溫度120 ℃，提取液相對密度1.06，即得冰硼痔瘡栓噴霧干燥浸膏粉［11?13］。

2.2 多指標(biāo)含量測定

2.2.1 色譜條件 Agilent ZORBAX SB?C18色譜柱（4.6 mm×150 mm，4 μm）；流動(dòng)相甲醇（A）?0.1%磷酸（每100 mL加0.05 g 十二烷基磺酸鈉）（B），梯度洗脫（0～30 min，28%～40% A；30～50 min，40%～60% A；50～60 min，60%～90%A；60～65 min，90%A）；體積流量1.0 mL／min；柱溫25 ℃［14?18］；檢測波長254 nm。

2.2.2 溶液制備 對照品溶液：精密稱取β，β′?二甲基丙烯酰阿卡寧、大黃酚、大黃素甲醚、大黃酸、蘆薈大黃素、鹽酸小檗堿、鹽酸黃柏堿對照品適量，加甲醇制成每1 mL分別含 187.082、55.254、65.538、50.047、47.086、448.066、56.750 μg 的貯備液，分別量取1 mL，置于10 mL量瓶中，甲醇定容，搖勻，即得。供試品溶液：取浸膏粉約0.02 g，精密稱定，置于具塞錐形瓶中，加10 mL甲醇，密塞，稱定質(zhì)量，超聲處理20 min，取出，放冷，甲醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。陰性樣品溶液：按處方比例及工藝分別制備缺黃連和黃柏、缺紫草、缺大黃的陰性樣品，按上述供試品溶液制備方法制備，即得。

2.2.3 方法學(xué)考察 專屬性試驗(yàn)：分別精密吸取對照品、供試品、陰性樣品溶液，在“2.2.1”項(xiàng)色譜條件下進(jìn)樣，色譜圖如圖1。

圖1 各成分HPLC 色譜圖

線性關(guān)系考察：分別精密吸取對照品溶液1、2、4、6、8 mL，置 于10 mL量瓶中，甲醇定容，搖勻，在“2.2.1”項(xiàng)色譜條件下進(jìn)樣測定。以各成分濃度（X）為橫坐標(biāo)，以峰面積（Y）為縱坐標(biāo)進(jìn)行回歸，結(jié)果見表1。

表1 各成分線性關(guān)系

精密度試驗(yàn)：精密吸取對照品溶液10 μL，在“2.2.1”項(xiàng)色譜條件下連續(xù)進(jìn)樣6次，測得鹽酸黃柏堿、蘆薈大黃素、鹽酸小檗堿、大黃酸、大黃酚、大黃素甲醚、β，β′?二甲基丙烯酰阿卡寧峰面積RSD 分別為1.26%、0.57%、0.29%、1.25%、0.42%、1.23%、0.44%，表 明儀器精密度良好。

重復(fù)性試驗(yàn)：按“2.2.2”項(xiàng)下方法平行制備6 份供試品溶液，在“2.2.1”項(xiàng)色譜條件下進(jìn)樣，測得鹽酸黃柏堿、蘆薈大黃素、鹽酸小檗堿、大黃酸、大黃酚、大黃素甲醚、β，β′?二甲基丙烯酰阿卡寧峰面積RSD 分別為1.78%、0.94%、1.86%、1.19%、0.26%、0.78%、0.32%，表明該方法重復(fù)性良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn)：分別取同一份供對照品、供試品溶液，分別于0、2、4、8、12、24 h 按“2.2.1”色譜條件進(jìn)樣，測得鹽酸黃柏堿、蘆薈大黃素、鹽酸小檗堿、大黃酸、大黃酚、大黃素甲醚、β，β′?二甲基丙烯酰阿卡寧對照品峰面 積 RSD 分別為 0.96%、0.39%、0.45%、0.39%、0.47%、1.85%、0.71%，供試品峰面積 RSD 分別為0.71%、0.62%、1.69%、1.07%、0.28%、1.76%、0.88%，表明溶液在24 h 內(nèi)穩(wěn)定性良好。

加樣回收率試驗(yàn)：取已知含量的本品6份，每份0.02 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入對照品溶液1 mL，在“2.2.1”項(xiàng)色譜條件下進(jìn)樣測定，計(jì)算回收率。結(jié)果，鹽酸黃柏堿、蘆薈大黃素、鹽酸小檗堿、大黃酸、大黃酚、大黃素甲醚、β，β′?二甲基丙烯酰阿卡寧平均加樣回收率分別為 99.85%、99.45%、100.48%、98.90%、99.06%、102.86%、98.71%，RSD 分別為2.99%、2.76%、2.64%、2.43%、2.59%、2.34%、2.01%。

2.2.4 不同干燥方法含量測定 取不同干燥方法的樣品各3批，在“2.2.1”項(xiàng)色譜條件下進(jìn)樣測定，計(jì)算含量，結(jié)果見表2。由此可知，噴霧干燥所得樣品指標(biāo)成分含量均較高，干燥方法對指標(biāo)成分含量影響較大。

表2 各成分含量測定結(jié)果（mg／g）

2.3 粉體物理指紋圖譜 根據(jù)粉末的物理特性歸納為5 個(gè)方面，分別為均一性、堆積性、可壓性、流動(dòng)性和穩(wěn)定性［2?8，12?13］，冰硼痔瘡栓浸膏粉的制劑工藝不涉及粉體的可壓性。因此，本研究從4 個(gè)方面開展冰硼痔瘡栓浸膏粉的物理指紋圖譜構(gòu)建，以更好的控制粉體性質(zhì)。

2.3.1 粉體物理指標(biāo)及測定方法 粒徑及粒徑分布：取浸膏粉適量，在激光粒度儀中測定D0.1（10% 通過粒徑）、D0.5（50%通過粒徑）、D0.9（90%通過粒徑），通過下列公式計(jì)算粒徑分布寬度（span）和粒徑范圍（width），span ＝（D0.9－D0.1）／D0.5，width ＝D0.9－D0.1。松密度（Da）：取浸膏粉適量，稱定質(zhì)量（Ma），緩慢倒入已干燥的量筒中，鋪平表面，讀出待測粉的體積（Va），計(jì)算Da，Da＝Ma／Va。振實(shí)密度（Dc）：取浸膏粉適量，用BT?301 振實(shí)密度測試儀測定。豪斯納比率（IH）：IH ＝Dc／Da。休止角（α）：取浸膏粉適量，用粉體綜合測試儀直接測定。含水量（MC）：按照2020 年版《中國藥典》四部水分測定法第二法（烘干法）測定。吸濕性（H）：取干燥具塞稱量瓶，置（25±1 ℃）恒溫干燥器（下部放置氯化鈉飽和溶液）中飽和24 h，精密稱定質(zhì)量（m1）；取適量粉末，平鋪于已飽和的稱量瓶中，厚度約為1 mm，稱定質(zhì)量（m2）；敞開稱量瓶口，與瓶蓋同置于上述恒溫條件下，待吸濕達(dá)到平衡，稱定質(zhì)量（m3），計(jì)算H，H＝（m3－m2）／（m2－m1）。

2.3.2 粉體物理指紋圖譜構(gòu)建 根據(jù)粉末的物理特性，將粉體的均一性、堆積性、流動(dòng)性和穩(wěn)定性4 個(gè)方面作為一級指標(biāo)。其中，均一性由粒徑分布寬度（span）和粒徑范圍（width）表示；堆積性由松密度（Da）和振實(shí)密度（Dc）表示；流動(dòng)性由豪斯納比率（IH）和休止角（α）表示；穩(wěn)定性由含水量（MC）和吸濕性（H）表示。Span、width、Da、Dc、IH、α、MC、H均作為二級指標(biāo)。通過對二級指標(biāo)的測定參數(shù)，將各指標(biāo)轉(zhuǎn)化至0～10，作為粉末物理指紋圖譜參數(shù)，見表3。

表3 粉體物理性質(zhì)數(shù)值范圍及轉(zhuǎn)換方式

2.3.3 浸膏粉體學(xué)性質(zhì)分析 分別采用不同干燥方式干燥10 批樣品，按粉體物理指標(biāo)測定方法進(jìn)行粉體學(xué)二級指標(biāo)測定，根據(jù)表3 轉(zhuǎn)化方式轉(zhuǎn)化，以同種干燥方式所得的10批浸膏粉各標(biāo)準(zhǔn)化物理參數(shù)的平均值所構(gòu)成的形狀為對照指紋圖譜，與不同干燥方式所得物理參數(shù)置于同一雷達(dá)圖中，見圖2。

圖2 不同干燥方式所得物理指紋譜雷達(dá)圖

浸膏粉體的成型性主要由其物理性質(zhì)反映，各批浸膏粉span 和width 越接近對照指紋圖譜其均一性越好，常壓干燥浸膏粉、減壓干燥浸膏粉、噴霧干燥浸膏粉均一性依次增加；各批浸膏粉Da和Dc反映浸膏粉的松軟程度。常壓干燥浸膏粉、減壓干燥浸膏粉物理性質(zhì)相當(dāng)，噴霧干燥浸膏粉粒度小、較均一，其松軟程度較低；IH 和α反映粉體的松散程度，IH 和α越大，粉體顆粒間的摩擦力越大，流動(dòng)性越差。常壓干燥浸膏粉、減壓干燥浸膏粉、噴霧干燥浸膏粉松散程度有微小差別；MC 和H反映粉體的穩(wěn)定性。3 種干燥方式所得浸膏粉性質(zhì)無明顯差異，但冰硼痔瘡栓浸膏粉為復(fù)方提取物，成分復(fù)雜，影響其吸濕性。綜上所述，噴霧干燥浸膏粉的均一性、堆積性、流動(dòng)性、穩(wěn)定性較常壓干燥浸膏粉和減壓干燥浸膏粉更優(yōu)。

2.3.4 不同干燥方法樣品物理指紋圖譜評價(jià) 采用主觀評價(jià)法評價(jià)物理指紋圖譜相似度［8?21］，通過將物理指紋圖譜在同一張圖譜中疊加，計(jì)算其相似度，按相似度公式1 計(jì)算向量之間的夾角余弦，從整體上直觀評估粉體性質(zhì)的相似度，相似度越接近1，粉體間的物理性質(zhì)越相似。

其中，X1i，X2i，……Xni和X1j，X2j，……Xnj為計(jì)算向量，Cij為夾角余弦。

經(jīng)直觀評價(jià)法計(jì)算，10 批常壓干燥所得浸膏粉物理指紋圖譜與對照物理指紋圖譜相似度較低，僅80.63%，其余批浸膏粉物理指紋圖譜與對照物理指紋圖譜相似度較好（90.01%～99.41%）。10 批減壓干燥所得浸膏粉物理指紋圖譜與對照物理指紋圖譜相似度較低，僅73.94%，其余批浸膏粉物理指紋圖譜與對照物理指紋圖譜相似度較好（86.49%～98.52%）。10 批噴霧干燥所得浸膏粉物理指紋圖譜與對照物理指紋圖譜相似度較低，僅85.24%，其余批浸膏粉物理指紋圖譜與對照物理指紋圖譜相似度較好（94.26～99.87%）。相似度計(jì)算結(jié)果中，常壓干燥和噴霧干燥所得浸膏粉物理指紋圖譜相似度在80% 以上，表明這2種方法所得10 批浸膏粉物理性質(zhì)接近，結(jié)合含量測定結(jié)果，確定為噴霧干燥。

3 討論

粉體物理指紋圖譜包含豐富的粉末信息，能夠反映粉末綜合性質(zhì)，用于評價(jià)不同粉末之間或同種粉末不同批次之間的物理性質(zhì)差異，為制劑的成型提供可靠途徑。本實(shí)驗(yàn)選擇粒徑分布寬度和粒徑范圍反映均一性；松密度和振實(shí)密度反映堆積性；豪斯納比率和休止角反映流動(dòng)性；含水量和吸濕性反映穩(wěn)定性，通過8 個(gè)物理指標(biāo)綜合評價(jià)冰硼痔瘡栓浸膏粉質(zhì)量，考察不同干燥方法對浸膏粉物理性質(zhì)的影響。