• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    條斑紫菜DnaJ基因家族鑒定及其在環(huán)境脅迫下的表達(dá)分析?

    2022-12-01 10:25:24孔凡娜殷吉強(qiáng)
    關(guān)鍵詞:條斑紫菜結(jié)構(gòu)域

    孫 斌, 孔凡娜, 殷吉強(qiáng)

    (中國(guó)海洋大學(xué)海洋生命學(xué)院, 海洋生物遺傳學(xué)與育種教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室, 山東 青島 266003)

    條斑紫菜(Pyropiayezoensis)具有由絲狀孢子體和葉狀配子體組成的異形世代交替的生活史。配子體自然情況下生長(zhǎng)于潮間帶的礁石上,受潮汐的影響,經(jīng)受周期性的干露失水、復(fù)水、光照、溫度等非生物因素的劇烈脅迫。復(fù)雜的生活環(huán)境賦予了條斑紫菜獨(dú)特的適應(yīng)機(jī)制,使其成為研究抗逆機(jī)制的潮間帶模式物種。同時(shí),隨著全球變暖等問(wèn)題的加劇,高溫、低鹽等惡劣條件均嚴(yán)重地影響紫菜的生長(zhǎng)[1],因此,有必要研究條斑紫菜的抗逆機(jī)制。

    熱激蛋白(Heat shock protein,HSP),又稱為熱休克蛋白,廣泛分布于生物界中[2],在植物抵御脅迫的過(guò)程中發(fā)揮著重要的作用。根據(jù)其分子量和功能的不同,可以將其分為6個(gè)家族:HSP100、HSP90、HSP70、HSP60、HSP40 和 小分子HSP(small HSP,sHSP)[3]。其中,HSP40作為HSP70的輔伴侶分子存在,具有1個(gè)高度保守的J結(jié)構(gòu)域,又被稱為DnaJ,可以促進(jìn)HSP70的ATP酶活性。DnaJ蛋白數(shù)量龐大且結(jié)構(gòu)多樣,一般可根據(jù)含有結(jié)構(gòu)域的不同分成 A、B、C 三類[4]:A類J蛋白包含J結(jié)構(gòu)域、富含甘氨酸和苯丙氨酸區(qū)域(G/F結(jié)構(gòu)域)和鋅指結(jié)構(gòu)域;B類J蛋白包含J結(jié)構(gòu)域、G/F結(jié)構(gòu)域;C類僅包含 J結(jié)構(gòu)域。其中,J結(jié)構(gòu)域有保守組氨酸/脯氨酸/天冬氨酸三肽(His/Pro/Asp,HPD),HPD是DnaJ蛋白與HSP70互作所必需的結(jié)構(gòu)[5]。DnaJ蛋白可參與維持細(xì)胞內(nèi)蛋白的正確折疊、組裝、運(yùn)輸、降解等多種生命活動(dòng)進(jìn)程,在生物體抵抗和適應(yīng)高低溫、干旱等逆境脅迫方面發(fā)揮著重要作用[6-9]。

    在藻類抵抗外界脅迫的過(guò)程中,HSP蛋白發(fā)揮著重要的作用。條斑紫菜中,高溫、低溫及低鹽脅迫均可以誘導(dǎo)hsp90的上調(diào)表達(dá)[10];在滸苔(Ulvaprolifera)中,hsp70在低鹽、高鹽及紫外照射脅迫下均上調(diào)表達(dá)[11];在壇紫菜(P.haitanensis)中,高溫可誘導(dǎo)hsp70的高表達(dá)[12]。隨條斑紫菜失水程度升高,hsp40表達(dá)量也逐漸升高,而且有著明顯的世代差異,在孢子體世代下的表達(dá)量顯著高于配子體世代[13]。在藍(lán)藻(Cyanobacterial)中,小分子熱激蛋白(sHSP)可以增加光系統(tǒng)Ⅱ的耐熱性[14],壇紫菜的sHSP基因在高溫和失水脅迫誘導(dǎo)下的表達(dá)量均顯著上調(diào)[15]。相較于其他HSP蛋白,有關(guān)DnaJ的研究大多集中在哺乳動(dòng)物、植物或者細(xì)菌上,在藻類中相對(duì)較少。因此,本研究通過(guò)生物信息學(xué)方法首次在全基因組水平對(duì)條斑紫菜DnaJ家族進(jìn)行鑒定和分析,并進(jìn)一步探究了PyDnaJ家族部分成員在失水、溫度脅迫處理下的表達(dá)模式,以期為解析條斑紫菜抗逆機(jī)制提供支持。

    1 材料與方法

    1.1 材料

    1.1.1 材料 本實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)的條斑紫菜RZ純系。

    1.1.2 試劑 RNA提取試劑盒(購(gòu)自O(shè)MEGA);DNA酶(購(gòu)自O(shè)MEGA);反轉(zhuǎn)錄試劑盒(購(gòu)自TAKARA);瓊脂糖凝膠回收試劑盒(購(gòu)自全式金);快速質(zhì)粒小提試劑盒(購(gòu)自天根); 2×Taq Plus Master Mix(購(gòu)自南京諾唯贊);ChamQTM SYBR Color qPCR Master Mix(購(gòu)自南京諾唯贊)。

    1.2 方法

    1.2.1 基因家族鑒定 本研究從 Pfam數(shù)據(jù)庫(kù)(http://pfam.xfam.org/)下載DnaJ基因家族的隱馬爾可夫模型(Hidden Markov Model,HMM)(PF00226),利用 Hmmer3.0軟件[16]的Hmmsearch程序檢索條斑紫菜中DnaJ蛋白序列(閾值 E<10-5);提取蛋白序列并構(gòu)建物種特異的HMM模型后,再次檢索條斑紫菜中的DnaJ蛋白序列(閾值 E<10-5);根據(jù)輸出文件提取條斑紫菜中符合條件的蛋白序列,分別上傳至Pfam數(shù)據(jù)庫(kù)和NCBI-CDD數(shù)據(jù)庫(kù)(http://www.ncbi.nlm.nih.gov/Structure/cdd/wrpsb.cgi)確認(rèn)獲得的蛋白序列是否含有DnaJ結(jié)構(gòu)域,排除假陽(yáng)性,最終得到PyDnaJ家族成員。通過(guò)SnapGene軟件[17]、在線網(wǎng)站Cell-PLoc2.0(http://www.csbio.sjtu.edu.cn/bioinf/Cell-PLoc-2/)分別對(duì)蛋白的等電點(diǎn)、分子量及亞細(xì)胞定位進(jìn)行分析。

    1.2.2 基因結(jié)構(gòu)及蛋白序列分析 使用TBtools[18]對(duì)DnaJ基因家族成員進(jìn)行分析,獲得基因結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)結(jié)果。使用MEME(https://meme-suite.org/meme/)對(duì)DnaJ家族成員的保守基序進(jìn)行預(yù)測(cè),分布模型為Any number of repetitions(ANR),預(yù)測(cè)保守基序數(shù)量為10,motif長(zhǎng)度設(shè)置為6~50 aa,并利用TBtools軟件實(shí)現(xiàn)motif預(yù)測(cè)結(jié)果的可視化。

    1.2.3 染色體定位及基因復(fù)制分析 利用TBtools對(duì)基因家族成員進(jìn)行染色體定位分析及可視化,進(jìn)一步利用McScanX[19]解析基因組復(fù)制事件,并利用DnaSP6[20]計(jì)算了非同義替換率/同義替換率(Ka/Ks)值。

    1.2.4DnaJ基因啟動(dòng)子區(qū)域順式作用元件預(yù)測(cè) 調(diào)取PyDnaJ基因家族成員的上游序列(2 000 bp)并上傳至PlantCARE數(shù)據(jù)庫(kù)(http://bioinformatics.psb.ugent.be/webtools/plantcare/html/)進(jìn)行順式作用元件的分析和預(yù)測(cè),并利用TBtools軟件進(jìn)行順式元件預(yù)測(cè)結(jié)果的可視化。

    1.2.5DnaJ基因家族系統(tǒng)進(jìn)化分析 本研究結(jié)合條斑紫菜、壇紫菜、萊茵衣藻(Chlamydomonasreinhardtii)、水稻(OryzasativaL.)DnaJ家族蛋白序列信息,探究DnaJ家族的系統(tǒng)進(jìn)化關(guān)系。利用本研究中基因家族鑒定方法,根據(jù)從NCBI下載的蛋白序列信息分別提取條斑紫菜、壇紫菜和萊茵衣藻中DnaJ家族成員蛋白序列,參考Luo等[21]的方法獲得水稻中的DnaJ家族蛋白序列,利用MegaX[22]對(duì)蛋白序列進(jìn)行序列比對(duì)及系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)的構(gòu)建,建樹(shù)方法為最大似然法(Maximum Likelihood),Bootstrap值設(shè)置為1 000。

    1.2.6 材料的處理和收集 用本實(shí)驗(yàn)室保存的條斑紫菜RZ作為實(shí)驗(yàn)材料。將健康生長(zhǎng)的孢子體和配子體材料吸干水分后,經(jīng)液氮冷凍,凍存于-80 ℃冰箱中。挑選同批培養(yǎng)的生長(zhǎng)狀態(tài)良好且日齡為30 d的條斑紫菜葉狀體分別進(jìn)行失水脅迫和溫度脅迫處理,處理方法參考Kim等[23]和Sun等[24],每組均設(shè)置3組平行,處理見(jiàn)表1。

    1.2.7 基因表達(dá)分析 本研究選取條斑紫菜DnaJ家族中的部分成員(PyDnaJ02、PyDnaJ09、PyDnaJ11、PyDnaJ12、PyDnaJ18、PyDnaJ19、PyDnaJ20、PyDnaJ25和PyDnaJ27)作為目的基因,引物序列如表2所示,利用qRT-PCR技術(shù)檢測(cè)分析不同成員在不同世代及失水、復(fù)水和溫度脅迫下的相對(duì)表達(dá)量的變化。每個(gè)處理設(shè)置3個(gè)生物學(xué)平行組和3個(gè)技術(shù)重復(fù)。選用PyUBC作為內(nèi)參基因[25],用2-△△Ct法計(jì)算得到目的基因在不同脅迫下的相對(duì)表達(dá)量。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 基因家族的鑒定

    經(jīng)過(guò)Hmmsearch檢索、CDD和Pfam結(jié)構(gòu)域預(yù)測(cè)分析,在條斑紫菜中共鑒定出27個(gè)DnaJ成員,分別命名為PyDnaJ01~PyDnaJ27。cDNA序列最長(zhǎng)為3 277 bp,最短為576 bp,編碼多肽的氨基酸數(shù)量為191~980,分子量為18.44~101.86 kDa,等電點(diǎn)為4.76~10.9。亞細(xì)胞定位預(yù)測(cè)結(jié)果顯示,有6個(gè)蛋白定位于高爾基體,2個(gè)蛋白定位于高爾基體/過(guò)氧化物酶體,9個(gè)定位于高爾基體/細(xì)胞核,1個(gè)定位于高爾基體/線粒體,2個(gè)定位于內(nèi)質(zhì)網(wǎng),1個(gè)定位于內(nèi)質(zhì)網(wǎng)/細(xì)胞核,2個(gè)定位于細(xì)胞核,4個(gè)定位于線粒體(見(jiàn)表3)。

    表1 條斑紫菜的不同處理?xiàng)l件

    表2 qRT-PCR所用引物序列

    表3 條斑紫菜DnaJ家族成員特征

    續(xù)表3

    2.2 基因結(jié)構(gòu)和蛋白序列分析

    基因結(jié)構(gòu)分析表明PyDnaJ基因家族成員含有較少的內(nèi)含子,其中PyDnaJ02、PyDnaJ06、PyDnaJ07、PyDnaJ09、PyDnaJ10、PyDnaJ14、PyDnaJ18、PyDnaJ21、PyDnaJ26和PyDnaJ27均含有1個(gè)內(nèi)含子,PyDnaJ05含有2個(gè)內(nèi)含子,PyDnaJ11含有3個(gè)內(nèi)含子,其余成員均不含有內(nèi)含子(見(jiàn)圖1)。

    圖1 PyDnaJ家族基因結(jié)構(gòu)和motif結(jié)構(gòu)分析

    蛋白結(jié)構(gòu)域分析發(fā)現(xiàn),PyDnaJ家族成員共含有10個(gè)不同的Motif,不同成員含有Motif數(shù)量不等,全部成員均含有Motif1(見(jiàn)圖2B),其為J結(jié)構(gòu)域核心序列,含有穩(wěn)定的HPD結(jié)構(gòu);除PyDnaJ02和PyDnaJ07外,其余25個(gè)蛋白均含有Motif2和Motif3,Motif1與Motif3(見(jiàn)圖2A)、Motif2(見(jiàn)圖2C)組成了完整的J結(jié)構(gòu)域(見(jiàn)圖2D)。結(jié)構(gòu)域分類結(jié)果顯示,條斑紫菜DnaJ家族成員根據(jù)所含結(jié)構(gòu)域可以分為三大類,其中PyDnaJ11、PyDnaJ13、PyDnaJ17、PyDnaJ25 4個(gè)成員屬于A類,除含有J結(jié)構(gòu)域外,含有Motif7和Motif8。Motif7為富含甘氨酸和苯丙氨酸的G/F結(jié)構(gòu)域(見(jiàn)圖2E),Motif8為Cys-X-X-Cys-X-Gly-X-Gly (C-X-X-C-X-G-X-G)基序(見(jiàn)圖2F),4個(gè)motif8組成完整的鋅指結(jié)構(gòu)域; PyDnaJ03、PyDnaJ08、PyDnaJ20 3個(gè)成員屬于C類,僅含有J結(jié)構(gòu)域;其余20個(gè)成員屬于B類,含有J結(jié)構(gòu)域和G/F結(jié)構(gòu)域。

    (A:基序3;B:基序1;C:基序2;D:DnaJ家族J結(jié)構(gòu)域的HMM標(biāo)簽;E:基序7;F:基序8。A:motif3;B:motif1;C:motif2;D:HMM logo of J domain in DnaJ family;E:motif7;F:motif8.每列字母的總高度表示該位置的序列保守性(以bits為單位),而該列中字母的高度反映了該位置相應(yīng)氨基酸的相對(duì)頻率。The overall height of each stack of letters indicates the sequence conservation at that position (measured in bits), whereas the height of symbols within the stack reflects the relative frequency of the corresponding amino or nucleic acid at that position. )

    2.3 染色體定位與共線性分析

    染色體定位結(jié)果表明(見(jiàn)圖3),11個(gè)成員分布在PY_1染色體,8個(gè)成員分布在PY_2染色體,8個(gè)成員分布在PY_3染色體。

    (PY_(1~3):條斑紫菜1~3號(hào)染色體。PY_(1~3):P. yezoensis 1~3 chromosome.)

    共線性分析發(fā)現(xiàn),條斑紫菜DnaJ基因家族共存在2個(gè)共線基因(PyDnaJ01、PyDnaJ10),因此被視為片段重復(fù)事件,其Ka為0.084 6,Ks為0.096 9,Ka/Ks值為0.873 07。根據(jù)Ka/Ks值估算片段重復(fù)基因的進(jìn)化選擇模式,Ka/Ks>1表示正選擇,Ka/Ks< 1表示純化選擇,Ka/Ks= 1 表示中性選擇,故PyDnaJ01和PyDnaJ10的進(jìn)化選擇模式為純化選擇。

    2.4 DnaJ基因啟動(dòng)子區(qū)域順式作用元件預(yù)測(cè)

    為了更好的預(yù)測(cè)基因功能,本研究檢測(cè)了DnaJ家族成員起始密碼子上游2 000 bp的序列用于啟動(dòng)子區(qū)域順式作用元件的預(yù)測(cè)及分析(見(jiàn)圖4),主要檢測(cè)出兩類順式作用元件,一類是同非生物脅迫(干旱、低溫、缺氧)響應(yīng)相關(guān)的元件(MBS、LTR、ARE等),以及防御和應(yīng)激反應(yīng)相關(guān)的元件(TC-rich repeats)等;另一類是植物激素響應(yīng)元件,包括茉莉酸甲酯響應(yīng)相關(guān)元件(TGACG-motif、CGTCA-motif等)、脫落酸響應(yīng)相關(guān)元件(ABRE)和生長(zhǎng)素響應(yīng)相關(guān)元件(TGA-box等)。

    圖4 條斑紫菜DnaJ家族順式作用元件分布

    2.5 基因家族系統(tǒng)進(jìn)化分析

    本研究對(duì)來(lái)自條斑紫菜(P.yezoensis,Py)、壇紫菜(Porphyrahaitanensis,Ph)、萊茵衣藻(Chlamydomonasreinhardtii,Cr)和水稻(OryzasativaL.,Os)中的共135條DnaJ家族蛋白序列構(gòu)建系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)(見(jiàn)圖5),其中水稻DnaJ家族共有115個(gè)成員,隨機(jī)選出9個(gè)亞群的38個(gè)成員參與構(gòu)建系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)[16]。進(jìn)化樹(shù)分析,顯示135條序列分為A、B、C、D、E、F、G、H、I、J和K共11個(gè)亞群,其中,C亞群為紅藻和綠藻特有的亞群,I亞群為萊茵衣藻特有的亞群,其他亞群為紅藻和綠色植物共有的類群,說(shuō)明DnaJ家族在藻類與綠色植物分歧之前就已經(jīng)形成分化,在進(jìn)化過(guò)程中有的亞群在低等的綠藻和紅藻中單獨(dú)保留,有的則以直系同源的方式在不同的物種中形成。另外相對(duì)于綠色植物,條斑紫菜(27個(gè)成員)、壇紫菜(22個(gè)成員)中DnaJ成員的數(shù)量要遠(yuǎn)少于萊茵衣藻(48個(gè)成員)和水稻(115個(gè)成員),說(shuō)明綠色植物的DnaJ在進(jìn)化過(guò)程中可能發(fā)生了擴(kuò)張。

    圖5 PyDnaJ家族系統(tǒng)進(jìn)化分析

    2.6 基因表達(dá)水平檢測(cè)

    利用qRT-PCR技術(shù)檢測(cè)了PyDnaJ09、PyDnaJ12、PyDnaJ18、PyDnaJ19、PyDnaJ20、PyDnaJ25和PyDnaJ27在配子體和孢子體世代下的表達(dá)模式(見(jiàn)圖6),被選取的基因在孢子體世代的表達(dá)水平均極顯著高于配子體世代(P<0.01)。

    (**表示差異極顯著(P<0.01)。**:Extremely significant difference(P<0.01).)

    進(jìn)一步通過(guò)檢測(cè)PyDnaJ02、PyDnaJ09、PyDnaJ11、PyDnaJ12、PyDnaJ18、PyDnaJ25和PyDnaJ27在失水和復(fù)水脅迫下的表達(dá)模式(見(jiàn)圖7)發(fā)現(xiàn):在失水脅迫下,PyDnaJ02和PyDnaJ09在不同程度失水脅迫下的表達(dá)水平均表現(xiàn)出明顯下調(diào);PyDnaJ11和PyDnaJ18在中、低程度失水脅迫下(失水30%、50%)表現(xiàn)出極顯著下調(diào)(P<0.01);PyDnaJ27在低程度失水脅迫下(失水30%)表現(xiàn)出明顯下調(diào),在其他程度失水脅迫下的表達(dá)水平變化并不明顯;而PyDnaJ12在高程度失水脅迫(失水80%)下表現(xiàn)出極顯著上調(diào)(P<0.01);PyDnaJ25在中、高程度失水條件下(失水50%、80%)的表達(dá)水平極顯著上調(diào)(P<0.01)。在復(fù)水脅迫下,PyDnaJ02、PyDnaJ09、PyDnaJ11、PyDnaJ12、PyDnaJ18、PyDnaJ25和PyDnaJ27均表現(xiàn)出極顯著下調(diào)(P<0.01)。

    最后通過(guò)檢測(cè)PyDnaJ02、PyDnaJ09、PyDnaJ11、PyDnaJ12和PyDnaJ25在不同的溫度脅迫下的表達(dá)模式(見(jiàn)圖8)發(fā)現(xiàn):在高溫脅迫(24 ℃)下(見(jiàn)圖8A),PyDnaJ02、PyDnaJ11和PyDnaJ12的表達(dá)水平明顯下調(diào),PyDnaJ09和PyDnaJ25的表達(dá)水平明顯上調(diào);在0 ℃下(見(jiàn)圖8B),PyDnaJ02和PyDnaJ09的表達(dá)水平明顯下調(diào),PyDnaJ12和PyDnaJ25極顯著上調(diào)(P<0.01),PyDnaJ11的表達(dá)水平變化不明顯;在-8 ℃下(見(jiàn)圖8C),PyDnaJ11的表達(dá)水平極顯著下調(diào)(P<0.01),PyDnaJ02、PyDnaJ12和PyDnaJ25的表達(dá)水平極顯著上調(diào)(P<0.01),PyDnaJ09的表達(dá)水平變化不明顯。

    (A:失水組;B:復(fù)水組。30%:失水30%處理組;50%:失水50%處理組;80%:失水80%處理組;80%-30 min:失水80%后復(fù)水30 min處理組。*表示差異顯著(P<0.05),**表示差異極顯著(P<0.01)。A:Dehydration group;B:Rehydration group. 30%:30% dehydration group;50%:50% dehydration group;80%:80% dehydration group;80%-30 min:30 min rehydration after 80% dehydration group. *:Significant difference(P<0.05),**:Extremely significant difference(P<0.01).)

    (A:24 ℃處理組;B:0 ℃處理組;C:-8 ℃處理組;10 ℃:對(duì)照組。*表示與對(duì)照組差異顯著(P<0.05),**表示與對(duì)照組差異極顯著(P<0.01)。A:24 ℃ group;B:0 ℃ group;C:-8 ℃ group;10℃:Control group. *:Significant difference(P<0.05),**:Extremely significant difference(P<0.01).)

    3 討論

    DnaJ家族在生物體中有著重要的作用,但目前在高等植物、哺乳動(dòng)物和細(xì)菌中關(guān)于DnaJ家族的研究較多,在紅藻中的研究相對(duì)較少。高等植物中一般存在著較多的DnaJ家族成員,其中:擬南芥中有120個(gè)成員[26];高粱中有113個(gè)[27]成員;水稻中有115個(gè)[21]成員;甘藍(lán)(Brassicaoleracea)中有129個(gè)成員[28];辣椒(CapsicumannuumL.)中有76個(gè)[29]成員。而本研究利用生物信息學(xué)方法在大型紅藻條斑紫菜中共鑒定出27個(gè)DnaJ家族成員,在壇紫菜中鑒定出22個(gè)成員,說(shuō)明紫菜中DnaJ家族成員的數(shù)量明顯少于高等植物。結(jié)構(gòu)域分析顯示,與綠色植物中的DnaJ家族類似,其27個(gè)成員中均含有保守三肽HPD,PyDnaJ11、PyDnaJ13、PyDnaJ17、PyDnaJ254個(gè)成員中均存在3個(gè)結(jié)構(gòu)域,PyDnaJ03、PyDnaJ08、PyDnaJ203個(gè)成員中均僅存在J結(jié)構(gòu)域,其余20個(gè)成員則是均含有J結(jié)構(gòu)域和G/F結(jié)構(gòu)域。DnaJ蛋白所含結(jié)構(gòu)域的不同通常作為蛋白分類的依據(jù),且A和B類的功能類似,C類的功能不同于A和B類[30],水稻和大豆中的DnaJ家族成員均可分成3類,其中最多的是C類[9, 31];黃瓜中的DnaJ家族只有2類,缺少A類,最多的同樣是C類[32]。條斑紫菜中的DnaJ家族可分成3類,最多的是B類,條斑紫菜與高等植物在不同類別DnaJ蛋白數(shù)量上的差異可能反映了不同物種應(yīng)對(duì)外界脅迫的差異。DnaJ蛋白的功能與其亞細(xì)胞定位有一定的關(guān)系[26],因此本研究對(duì)條斑紫菜DnaJ蛋白家族成員進(jìn)行了亞細(xì)胞定位預(yù)測(cè),發(fā)現(xiàn)不同的成員分別定位于細(xì)胞核、高爾基體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、過(guò)氧化物酶體等不同的亞細(xì)胞位置,其中有18個(gè)成員定位到高爾基體,11個(gè)定位到細(xì)胞核;而在高等植物如擬南芥[33]中,發(fā)現(xiàn)有DnaJ蛋白定位到葉綠體中,并在葉綠體的發(fā)育、抗逆等過(guò)程中起到重要作用。之前也有研究發(fā)現(xiàn)萊茵衣藻中存在定位于葉綠體中的DnaJ蛋白[34],但是在本研究中沒(méi)有發(fā)現(xiàn)定位到葉綠體的DnaJ蛋白,具體原因需要進(jìn)一步的探索。

    高等植物中研究表明,DnaJ在溫度、干旱等逆境脅迫下,可以在植物體內(nèi)大量積累,從而增強(qiáng)植物的耐受性[21,35],本研究進(jìn)一步對(duì)條斑紫菜部分PyDnaJ基因在不同脅迫條件下的表達(dá)模式進(jìn)行了分析,研究結(jié)果表明,失水、溫度脅迫均可誘導(dǎo)PyDnaJ基因作出響應(yīng),而且不同成員在同一脅迫條件下、同一成員在不同脅迫下具有不同的表達(dá)模式,這種多樣化的應(yīng)對(duì)表達(dá)模式豐富了條斑紫菜對(duì)復(fù)雜生境的適應(yīng)機(jī)制,如PyDnaJ02在不同的失水脅迫下的相對(duì)表達(dá)量明顯下調(diào),而在-8 ℃下表現(xiàn)出明顯上調(diào),這可能說(shuō)明PyDnaJ02對(duì)失水脅迫不敏感,對(duì)低溫脅迫敏感;PyDnaJ12在失水80%的條件下相對(duì)表達(dá)量明顯上調(diào),在24 ℃下明顯下調(diào),在0和-8 ℃下明顯上調(diào),這說(shuō)明PyDnaJ12對(duì)高度失水、低溫脅迫比較敏感;值得注意的是,PyDnaJ25在不同失水和溫度脅迫下均表現(xiàn)出了很高的敏感性,可能該基因在條斑紫菜響應(yīng)逆境脅迫過(guò)程中有著重要作用,該研究結(jié)果與劉嬌等[13]的研究相似。同時(shí)順式元件分析表明,PyDnaJ家族的基因上游調(diào)控區(qū)也包含脅迫響應(yīng)元件和激素響應(yīng)元件。如:MBS(MYB binding site,MYB結(jié)合位點(diǎn))在玉米中參與到干旱脅迫響應(yīng)過(guò)程[36],GC-motif在玉米中參與到缺氧脅迫誘導(dǎo)過(guò)程中[37];TGACG-motif和CGTCA-motif參與到茉莉酸甲酯的響應(yīng)過(guò)程,茉莉酸甲酯可以作為植物響應(yīng)損傷、高溫等脅迫過(guò)程的信號(hào)分子[38-40];ABRE(Abscisic acid response element,脫落酸響應(yīng)元件)參與脫落酸的響應(yīng)過(guò)程,并在擬南芥響應(yīng)干旱、高鹽等過(guò)程中發(fā)揮作用[41]。這進(jìn)一步表明,PyDnaJ家族在轉(zhuǎn)錄水平和轉(zhuǎn)錄調(diào)控水平均參與了應(yīng)答環(huán)境脅迫。

    4 結(jié)語(yǔ)

    本研究利用生物信息學(xué)方法對(duì)條斑紫菜DnaJ基因家族成員的組成、蛋白特性、基因結(jié)構(gòu)和進(jìn)化特點(diǎn)等方面進(jìn)行了研究,并利用qRT-PCR技術(shù)對(duì)家族成員在不同脅迫條件下的表達(dá)模式進(jìn)行了分析,為進(jìn)一步解析條斑紫菜抗逆機(jī)制奠定了前期工作基礎(chǔ)。

    猜你喜歡
    條斑紫菜結(jié)構(gòu)域
    紫菜蛋花湯
    孩子(2021年1期)2021-02-02 12:24:16
    不同干條斑紫菜和烤條斑紫菜光合色素含量分析
    華中農(nóng)業(yè)大學(xué)在番茄果實(shí)顏色研究中取得新進(jìn)展
    蔬菜(2020年7期)2020-12-16 05:38:03
    紫菜包飯
    幽默大師(2019年10期)2019-10-17 02:09:18
    蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)域劃分方法及在線服務(wù)綜述
    揭秘“塑料袋紫菜”
    湖南雙季雜交晚稻對(duì)細(xì)菌性條斑病的田間抗性及條斑病發(fā)生動(dòng)態(tài)
    條斑紫菜中磷和鈣的亞細(xì)胞分布及其與富集砷的關(guān)系
    重組綠豆BBI(6-33)結(jié)構(gòu)域的抗腫瘤作用分析
    組蛋白甲基化酶Set2片段調(diào)控SET結(jié)構(gòu)域催化活性的探討
    国产一级毛片七仙女欲春2 | 久久亚洲精品不卡| 亚洲人成77777在线视频| 后天国语完整版免费观看| 桃色一区二区三区在线观看| 波多野结衣巨乳人妻| 久久国产精品影院| 他把我摸到了高潮在线观看| 国产伦人伦偷精品视频| 欧美色欧美亚洲另类二区| 脱女人内裤的视频| 欧美乱色亚洲激情| 777久久人妻少妇嫩草av网站| 国产精品98久久久久久宅男小说| 国产亚洲精品久久久久久毛片| 欧美在线黄色| 99久久无色码亚洲精品果冻| 在线播放国产精品三级| 黑人巨大精品欧美一区二区mp4| 精品国产一区二区三区四区第35| 美女高潮喷水抽搐中文字幕| a在线观看视频网站| 法律面前人人平等表现在哪些方面| 久久精品亚洲精品国产色婷小说| 波多野结衣高清无吗| 久久精品影院6| 两性夫妻黄色片| 老司机午夜十八禁免费视频| 看黄色毛片网站| 老汉色∧v一级毛片| 1024香蕉在线观看| 丝袜人妻中文字幕| 国产人伦9x9x在线观看| 一区二区三区激情视频| 美女高潮喷水抽搐中文字幕| 亚洲成人久久爱视频| 91老司机精品| 午夜视频精品福利| 国产精品九九99| 99在线视频只有这里精品首页| 男女那种视频在线观看| 悠悠久久av| 亚洲久久久国产精品| 一本久久中文字幕| 高潮久久久久久久久久久不卡| 亚洲成人免费电影在线观看| 欧美黑人欧美精品刺激| 欧美人与性动交α欧美精品济南到| 九色国产91popny在线| 久久香蕉精品热| 国产免费av片在线观看野外av| 免费搜索国产男女视频| 最近最新中文字幕大全电影3 | 亚洲av日韩精品久久久久久密| 男人操女人黄网站| 精品国产乱子伦一区二区三区| 欧美三级亚洲精品| 成人免费观看视频高清| 久久久久久亚洲精品国产蜜桃av| 久久久久免费精品人妻一区二区 | 午夜免费激情av| 日本三级黄在线观看| 国产黄片美女视频| 精品乱码久久久久久99久播| a在线观看视频网站| 观看免费一级毛片| 999精品在线视频| 欧美黑人欧美精品刺激| 亚洲激情在线av| 亚洲黑人精品在线| 观看免费一级毛片| 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 一二三四社区在线视频社区8| 桃红色精品国产亚洲av| 国内精品久久久久精免费| 亚洲精品国产区一区二| 丰满的人妻完整版| 久久久国产成人免费| 看免费av毛片| 神马国产精品三级电影在线观看 | a在线观看视频网站| 日韩欧美国产在线观看| 色哟哟哟哟哟哟| 亚洲熟妇中文字幕五十中出| 亚洲一卡2卡3卡4卡5卡精品中文| 精品第一国产精品| 亚洲成人久久性| 欧美激情 高清一区二区三区| 这个男人来自地球电影免费观看| 久久青草综合色| 久久久久久人人人人人| 露出奶头的视频| 在线看三级毛片| 一本大道久久a久久精品| 国产成人系列免费观看| 国产精华一区二区三区| 精品高清国产在线一区| 国产精品久久久av美女十八| 99riav亚洲国产免费| xxx96com| 午夜免费成人在线视频| 老汉色av国产亚洲站长工具| 日韩高清综合在线| 成人亚洲精品av一区二区| 真人做人爱边吃奶动态| 日韩国内少妇激情av| 久久国产精品影院| 亚洲自拍偷在线| 88av欧美| 亚洲精品中文字幕一二三四区| 欧美黄色淫秽网站| 亚洲中文日韩欧美视频| 中文亚洲av片在线观看爽| 国产高清激情床上av| 欧美性猛交黑人性爽| 精品久久久久久久毛片微露脸| 免费高清在线观看日韩| 这个男人来自地球电影免费观看| 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 高潮久久久久久久久久久不卡| 岛国在线观看网站| 嫩草影视91久久| 国产免费av片在线观看野外av| 日韩视频一区二区在线观看| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o| 欧美成人性av电影在线观看| 亚洲一卡2卡3卡4卡5卡精品中文| www.www免费av| 欧美中文日本在线观看视频| 变态另类成人亚洲欧美熟女| 日韩三级视频一区二区三区| 亚洲一区高清亚洲精品| 一级a爱视频在线免费观看| 日韩欧美一区二区三区在线观看| 好男人在线观看高清免费视频 | 国产精品自产拍在线观看55亚洲| 狂野欧美激情性xxxx| av免费在线观看网站| 国产精品免费一区二区三区在线| 无人区码免费观看不卡| 日韩精品中文字幕看吧| 啦啦啦 在线观看视频| 久久这里只有精品19| 国产免费男女视频| 亚洲男人天堂网一区| 国产成人av教育| 搞女人的毛片| 亚洲av成人av| 成人亚洲精品av一区二区| 黄网站色视频无遮挡免费观看| 黄片小视频在线播放| 麻豆成人午夜福利视频| 亚洲一区中文字幕在线| 亚洲精品美女久久av网站| 麻豆国产av国片精品| 欧美日本视频| 久久中文看片网| 国产麻豆成人av免费视频| 熟妇人妻久久中文字幕3abv| 国内揄拍国产精品人妻在线 | 在线观看舔阴道视频| 国产又爽黄色视频| 在线观看日韩欧美| 岛国在线观看网站| 欧美日韩中文字幕国产精品一区二区三区| 亚洲一区高清亚洲精品| 精品国产超薄肉色丝袜足j| 国产三级黄色录像| 日韩欧美在线二视频| 亚洲精品中文字幕在线视频| 51午夜福利影视在线观看| 国内久久婷婷六月综合欲色啪| 午夜两性在线视频| 极品教师在线免费播放| 最新美女视频免费是黄的| 97碰自拍视频| 麻豆av在线久日| 黄色毛片三级朝国网站| 丁香欧美五月| 99精品久久久久人妻精品| 国产伦一二天堂av在线观看| 岛国视频午夜一区免费看| 午夜激情福利司机影院| 日韩精品中文字幕看吧| 露出奶头的视频| 欧洲精品卡2卡3卡4卡5卡区| 日本五十路高清| 免费人成视频x8x8入口观看| 亚洲 欧美一区二区三区| 午夜福利18| 俺也久久电影网| 波多野结衣巨乳人妻| 国产真人三级小视频在线观看| 亚洲精品久久国产高清桃花| 亚洲专区字幕在线| 亚洲av美国av| 97超级碰碰碰精品色视频在线观看| 曰老女人黄片| 99国产综合亚洲精品| 日本三级黄在线观看| 久久久久久九九精品二区国产 | 可以免费在线观看a视频的电影网站| 少妇 在线观看| 琪琪午夜伦伦电影理论片6080| 免费看日本二区| 自线自在国产av| 狠狠狠狠99中文字幕| 精品一区二区三区av网在线观看| 一a级毛片在线观看| 后天国语完整版免费观看| 不卡av一区二区三区| 国产精品二区激情视频| 91麻豆av在线| 不卡一级毛片| 亚洲国产欧美一区二区综合| 欧美日本视频| 国产黄a三级三级三级人| 亚洲第一欧美日韩一区二区三区| 一区二区三区激情视频| 夜夜爽天天搞| 麻豆一二三区av精品| 亚洲精品久久成人aⅴ小说| 亚洲成人久久爱视频| 777久久人妻少妇嫩草av网站| 亚洲av美国av| svipshipincom国产片| 此物有八面人人有两片| 这个男人来自地球电影免费观看| 757午夜福利合集在线观看| 在线天堂中文资源库| 婷婷丁香在线五月| 国产精品久久久久久亚洲av鲁大| 91国产中文字幕| 欧美性长视频在线观看| 国产黄a三级三级三级人| √禁漫天堂资源中文www| 97碰自拍视频| 一本久久中文字幕| 婷婷精品国产亚洲av| 国产亚洲欧美在线一区二区| 国产成人啪精品午夜网站| 韩国精品一区二区三区| 欧美色视频一区免费| 757午夜福利合集在线观看| 国产一区二区激情短视频| svipshipincom国产片| 国产男靠女视频免费网站| 青草久久国产| 变态另类成人亚洲欧美熟女| 69av精品久久久久久| 波多野结衣巨乳人妻| 1024香蕉在线观看| 人妻久久中文字幕网| 国产精品综合久久久久久久免费| 大香蕉久久成人网| 又黄又爽又免费观看的视频| 香蕉丝袜av| 免费观看精品视频网站| 国产一卡二卡三卡精品| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看| 午夜福利在线在线| 国产真实乱freesex| 久久国产精品影院| 老鸭窝网址在线观看| 人人妻人人看人人澡| 午夜免费观看网址| 国产精品 欧美亚洲| 午夜福利18| 欧美日韩一级在线毛片| 亚洲精品一卡2卡三卡4卡5卡| 国产精品自产拍在线观看55亚洲| 淫妇啪啪啪对白视频| 一区福利在线观看| 精品久久蜜臀av无| 午夜视频精品福利| 国产熟女午夜一区二区三区| 亚洲精品一卡2卡三卡4卡5卡| 99国产综合亚洲精品| 精品国产乱子伦一区二区三区| 久久亚洲精品不卡| 亚洲精品国产一区二区精华液| 男人舔奶头视频| tocl精华| 国产乱人伦免费视频| 国产精品精品国产色婷婷| 怎么达到女性高潮| 亚洲男人天堂网一区| 亚洲国产精品久久男人天堂| 日韩 欧美 亚洲 中文字幕| 无人区码免费观看不卡| 男人舔女人的私密视频| 男人操女人黄网站| 又紧又爽又黄一区二区| 免费搜索国产男女视频| 手机成人av网站| 少妇裸体淫交视频免费看高清 | 欧美绝顶高潮抽搐喷水| 成在线人永久免费视频| 看黄色毛片网站| 长腿黑丝高跟| 精品国产乱子伦一区二区三区| 草草在线视频免费看| 亚洲一区高清亚洲精品| 久久国产乱子伦精品免费另类| 国产国语露脸激情在线看| 一区二区三区激情视频| 在线观看免费日韩欧美大片| 女同久久另类99精品国产91| 中国美女看黄片| 美女国产高潮福利片在线看| 免费观看人在逋| 男男h啪啪无遮挡| 亚洲男人天堂网一区| 国内久久婷婷六月综合欲色啪| 精华霜和精华液先用哪个| xxxwww97欧美| 午夜福利在线在线| 97超级碰碰碰精品色视频在线观看| 一区二区三区高清视频在线| 后天国语完整版免费观看| 午夜两性在线视频| 在线观看免费日韩欧美大片| 亚洲精品在线美女| 黄片大片在线免费观看| 一边摸一边做爽爽视频免费| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放 | 日韩精品免费视频一区二区三区| 狂野欧美激情性xxxx| av中文乱码字幕在线| 中文字幕人妻熟女乱码| 一区二区三区高清视频在线| 国产极品粉嫩免费观看在线| ponron亚洲| 最近在线观看免费完整版| 成人特级黄色片久久久久久久| 亚洲五月天丁香| 日本熟妇午夜| 亚洲一码二码三码区别大吗| 色婷婷久久久亚洲欧美| 最近最新中文字幕大全免费视频| 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看 | av免费在线观看网站| 国产高清有码在线观看视频 | 激情在线观看视频在线高清| cao死你这个sao货| 亚洲精品一卡2卡三卡4卡5卡| 大型av网站在线播放| 亚洲最大成人中文| 最近最新中文字幕大全免费视频| 又黄又爽又免费观看的视频| 夜夜爽天天搞| 黑人巨大精品欧美一区二区mp4| 母亲3免费完整高清在线观看| 中文字幕精品免费在线观看视频| 午夜亚洲福利在线播放| 天天一区二区日本电影三级| 大型av网站在线播放| 757午夜福利合集在线观看| 51午夜福利影视在线观看| 一本大道久久a久久精品| 久久人妻福利社区极品人妻图片| 久久国产亚洲av麻豆专区| 久久精品影院6| 中文字幕久久专区| 成人免费观看视频高清| 男男h啪啪无遮挡| 久久久久久大精品| 国产激情偷乱视频一区二区| 欧美日韩中文字幕国产精品一区二区三区| 国产激情欧美一区二区| 十八禁网站免费在线| 看免费av毛片| 90打野战视频偷拍视频| 91在线观看av| 国产黄色小视频在线观看| 一本大道久久a久久精品| 日本免费a在线| 久久精品亚洲精品国产色婷小说| 国产高清有码在线观看视频 | 色av中文字幕| 国产又爽黄色视频| svipshipincom国产片| 国产蜜桃级精品一区二区三区| 精品久久久久久成人av| 国产av一区二区精品久久| 成人18禁在线播放| 免费电影在线观看免费观看| 黄色a级毛片大全视频| 天堂动漫精品| 热re99久久国产66热| 国产亚洲欧美在线一区二区| 好看av亚洲va欧美ⅴa在| 欧美激情高清一区二区三区| 欧美不卡视频在线免费观看 | 亚洲国产中文字幕在线视频| 欧美午夜高清在线| 色尼玛亚洲综合影院| 欧美午夜高清在线| 亚洲人成网站高清观看| 女生性感内裤真人,穿戴方法视频| 久久 成人 亚洲| 90打野战视频偷拍视频| 欧美 亚洲 国产 日韩一| 18禁美女被吸乳视频| 国产伦一二天堂av在线观看| 免费人成视频x8x8入口观看| 中文亚洲av片在线观看爽| 两性夫妻黄色片| 午夜视频精品福利| 国产亚洲欧美98| 精华霜和精华液先用哪个| 亚洲男人的天堂狠狠| 久久亚洲精品不卡| 国产在线精品亚洲第一网站| 免费高清视频大片| 看黄色毛片网站| 欧美日韩亚洲综合一区二区三区_| 搡老熟女国产l中国老女人| 免费看美女性在线毛片视频| 国产黄片美女视频| 香蕉国产在线看| 日韩免费av在线播放| 国产日本99.免费观看| 午夜影院日韩av| 国产成人欧美在线观看| 一区福利在线观看| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图| 国产精品免费一区二区三区在线| 成人欧美大片| av在线天堂中文字幕| www日本在线高清视频| a级毛片在线看网站| 国产亚洲av高清不卡| 1024手机看黄色片| 神马国产精品三级电影在线观看 | 无限看片的www在线观看| 亚洲av熟女| 欧美精品亚洲一区二区| 最近在线观看免费完整版| 男人舔奶头视频| 可以免费在线观看a视频的电影网站| 国产又色又爽无遮挡免费看| 中文字幕最新亚洲高清| 久久香蕉国产精品| 99国产精品一区二区三区| 色精品久久人妻99蜜桃| 丝袜在线中文字幕| 亚洲免费av在线视频| 精品国产一区二区三区四区第35| 天堂影院成人在线观看| 变态另类丝袜制服| 一本大道久久a久久精品| 久久亚洲真实| 欧美亚洲日本最大视频资源| 桃色一区二区三区在线观看| 精华霜和精华液先用哪个| 精品久久久久久成人av| www.999成人在线观看| 免费一级毛片在线播放高清视频| 国产精品av久久久久免费| 女性被躁到高潮视频| 高清毛片免费观看视频网站| 成人国产一区最新在线观看| 欧美中文日本在线观看视频| 午夜免费观看网址| 国产成人精品久久二区二区免费| 黄频高清免费视频| 亚洲熟女毛片儿| 国产国语露脸激情在线看| 天天躁狠狠躁夜夜躁狠狠躁| 国内久久婷婷六月综合欲色啪| 亚洲成av片中文字幕在线观看| 热re99久久国产66热| 两个人视频免费观看高清| 亚洲成人免费电影在线观看| 精品无人区乱码1区二区| 巨乳人妻的诱惑在线观看| 国产人伦9x9x在线观看| 久久久国产精品麻豆| 欧美精品啪啪一区二区三区| 久久久久九九精品影院| 男人舔女人的私密视频| 一卡2卡三卡四卡精品乱码亚洲| 在线永久观看黄色视频| 国产99久久九九免费精品| 黑丝袜美女国产一区| 欧美日韩瑟瑟在线播放| 制服诱惑二区| 天天躁狠狠躁夜夜躁狠狠躁| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图| 国产一区二区激情短视频| 不卡av一区二区三区| 黄片大片在线免费观看| 国产男靠女视频免费网站| 日本三级黄在线观看| 国产黄a三级三级三级人| 欧美 亚洲 国产 日韩一| a在线观看视频网站| 男人舔奶头视频| 亚洲男人的天堂狠狠| 老汉色av国产亚洲站长工具| 欧美性长视频在线观看| 一本一本综合久久| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| √禁漫天堂资源中文www| 黄色视频不卡| 亚洲午夜精品一区,二区,三区| 久久午夜亚洲精品久久| 久久久国产欧美日韩av| 两个人看的免费小视频| 香蕉丝袜av| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 很黄的视频免费| 黄色女人牲交| 一区二区三区国产精品乱码| 男女视频在线观看网站免费 | 欧美激情极品国产一区二区三区| 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲| 丝袜人妻中文字幕| av中文乱码字幕在线| 国产av一区在线观看免费| 变态另类丝袜制服| 美女国产高潮福利片在线看| 欧美日韩一级在线毛片| 国产精品香港三级国产av潘金莲| 啦啦啦韩国在线观看视频| 日本免费a在线| 妹子高潮喷水视频| 亚洲第一欧美日韩一区二区三区| 男女床上黄色一级片免费看| 99国产精品一区二区三区| 成年人黄色毛片网站| 亚洲国产毛片av蜜桃av| 国产精品一区二区免费欧美| 国产伦人伦偷精品视频| 国产成人欧美| 一卡2卡三卡四卡精品乱码亚洲| 亚洲av成人av| 亚洲午夜精品一区,二区,三区| 亚洲一卡2卡3卡4卡5卡精品中文| 欧美在线黄色| 久久 成人 亚洲| av超薄肉色丝袜交足视频| 午夜福利高清视频| 亚洲国产精品久久男人天堂| 一个人免费在线观看的高清视频| 美女国产高潮福利片在线看| 日本一区二区免费在线视频| 久久99热这里只有精品18| 亚洲av成人一区二区三| 午夜免费激情av| 欧美av亚洲av综合av国产av| 人人澡人人妻人| 日日干狠狠操夜夜爽| 一区二区三区高清视频在线| 国产成人啪精品午夜网站| 国产精品爽爽va在线观看网站 | 18禁美女被吸乳视频| 丝袜在线中文字幕| 99热这里只有精品一区 | 韩国精品一区二区三区| 中文字幕最新亚洲高清| 制服丝袜大香蕉在线| 欧美日韩黄片免| 老司机午夜福利在线观看视频| 亚洲av成人av| 国产乱人伦免费视频| 国内精品久久久久久久电影| 18禁国产床啪视频网站| 亚洲专区字幕在线| 国产熟女午夜一区二区三区| 日韩欧美一区视频在线观看| 国产成人精品久久二区二区免费| www.www免费av| 精品久久久久久,| 免费在线观看日本一区| cao死你这个sao货| 久久欧美精品欧美久久欧美| 日韩欧美国产在线观看| 免费女性裸体啪啪无遮挡网站| 999精品在线视频| 欧美中文综合在线视频| 亚洲狠狠婷婷综合久久图片| 国产黄片美女视频| 真人一进一出gif抽搐免费| 欧美+亚洲+日韩+国产| 精品欧美一区二区三区在线| 亚洲激情在线av| 99国产精品99久久久久| 色精品久久人妻99蜜桃| 无遮挡黄片免费观看| 亚洲 欧美一区二区三区| 中亚洲国语对白在线视频| 久久久久亚洲av毛片大全| 亚洲人成网站高清观看| 人成视频在线观看免费观看| 好男人电影高清在线观看| 制服人妻中文乱码| 免费女性裸体啪啪无遮挡网站| 老司机靠b影院| 亚洲男人的天堂狠狠| 听说在线观看完整版免费高清| 国产一级毛片七仙女欲春2 | 免费高清视频大片| 国产精品一区二区精品视频观看| e午夜精品久久久久久久| 亚洲精品美女久久av网站| 一级黄色大片毛片| 色哟哟哟哟哟哟| 国内久久婷婷六月综合欲色啪| 叶爱在线成人免费视频播放| 999久久久精品免费观看国产| bbb黄色大片| 一a级毛片在线观看| 夜夜躁狠狠躁天天躁|