簡述動物源食品中氟喹諾酮類藥物殘留的危害及檢測方法

許 磊

(四川省內江市動植物疫病防控和農產品質量檢測中心，四川 內江 610200)

隨著畜禽養(yǎng)殖業(yè)的現(xiàn)代化、集約化和規(guī)?；a，獸藥添加劑的使用大大降低了動物的發(fā)病率和死亡率，提高了飼料利用率，使生產效率和畜禽產品質量得到顯著改善。然而，由于養(yǎng)殖人員缺乏科學知識以及過度追求經濟利益，致使濫用獸藥的現(xiàn)象普遍存在。一方面濫用獸藥極易造成動物源食品中有害物質的殘留，人體攝入后影響人類健康。另一方面獸藥會隨著養(yǎng)殖場排泄物的排放造成環(huán)境污染，給生態(tài)環(huán)境帶來極大危害[1]。

喹諾酮類藥物是一類化學合成的抗菌藥物，按發(fā)明先后及其抗菌性能不同，分為一、二、三、四代。其中第三代喹諾酮類藥物具有抗菌譜廣、抗菌活性強、吸收快、體內分布廣泛和毒副作用小等特點，被廣泛應用于畜牧、水產等養(yǎng)殖業(yè)中，本代藥物分子中均有氟原子，因此也被稱為氟喹諾酮類藥物。氟喹諾酮類藥物進入人體后部分敏感菌群會受到抑制，從而使人體內微生物群的動態(tài)平衡遭到破壞，損害人類的身體健康。隨著生活水平不斷提高，人們越來越關注畜產品的品質，希望享用綠色、無公害、低殘留的畜產品[2]。因此，畜產品中氟喹諾酮類藥物檢測成為畜產品檢測中最常規(guī)的檢測項目之一。本文將重點簡述動物源食品中氟喹諾酮類藥物殘留的危害及檢測方法。

1 氟喹諾酮類藥物殘留的危害

氟喹諾酮類藥物用藥量少，不能達到很好的疾病治療效果。用藥量大，不僅一定程度上加大動物本身病菌對其的抵抗能力，而且在動物體內也會有部分殘留。人類在食用此類食品后，藥物就會轉移富集到人體內，可能出現(xiàn)消化系統(tǒng)反應、中樞神經系統(tǒng)反應、過敏反應、光敏反應、心臟毒性、肝腎損害、軟骨損害、跟腱炎與腱斷裂等[3-4]。

1.1 消化系統(tǒng)的不良反應

胃和腸道反應是氟喹諾酮類藥物進入人體后最常見的不良反應。人類在食用含有氟喹諾酮類藥物殘留的食品后，少量藥物不會引起明顯生理反應，但隨著藥量的堆積，藥物會對胃和腸道造成刺激，表現(xiàn)為食欲減退、惡心、嘔吐、腹脹、腹瀉及便秘等癥狀。如果攝入藥量過大，最嚴重的甚至會引起消化道出血。

1.2 中樞神經系統(tǒng)的不良反應

中樞神經系統(tǒng)反應的發(fā)生率僅次于消化系統(tǒng)反應。人類在食用含有氟喹諾酮類藥物殘留的食品后，藥物進入人體，阻斷中樞神經系統(tǒng)抑制介質，導致中樞神經系統(tǒng)持續(xù)興奮，出現(xiàn)頭痛、頭暈、失眠、眩暈及情緒不安等癥狀，其中以失眠最為多見。當攝入藥量過大，嚴重者甚至會出現(xiàn)抽搐、幻覺、抑郁、精神異常等癥狀，但極為少見。

1.3 過敏反應

過敏反應主要發(fā)生在個別體質特殊的人群身上，多表現(xiàn)為血管神經性水腫、皮膚瘙癢、皮疹、蕁麻疹、皮炎等過敏癥狀，偶有出現(xiàn)過敏休克。

1.4 光敏反應

光敏反應是攝入氟喹諾酮類藥物后最特異的反應，表現(xiàn)為手、顏面及其他暴露在陽光下的皮膚區(qū)域出現(xiàn)紅腫、瘙癢、灼熱感，嚴重者甚至會出現(xiàn)中度紅斑或嚴重大皰疹。

1.5 心臟毒性

心臟毒性主要表現(xiàn)為Q-T間期延長和心率加快，雖然此類不良反應罕見，但心臟毒性一旦發(fā)生，后果嚴重，甚至可威脅生命。

1.6 肝腎損害

肝功能的損害主要表現(xiàn)為使血清轉氨酶、堿性磷酸酶、血清淀粉酶和乳酸脫氫酶等升高，造成鞏膜和皮膚黃染、以及肝炎、膽汁滯留或肝衰甚至死亡。

1.7 軟骨損害

氟喹諾酮類藥物容易濃縮、沉積在骨髓中，損害軟骨細胞的發(fā)育，病損程度與年齡、藥物劑量、血藥濃度有關，年齡越小，損傷程度越重，因此對于孕婦和骨骼正在發(fā)育的兒童尤其要禁止攝入氟喹諾酮類藥物。

1.8 跟腱炎與腱斷裂

當攝入氟喹諾酮類藥物后，肌腱中的所有蛋白質均明顯減少，造成肌腱的組織損傷與軟骨病變，因此老年人和運動員均應避免攝入氟喹諾酮類藥物。

近年來，隨著人們生活水平不斷提高，動物源食品的安全問題也越發(fā)受到關注，因此，氟喹諾酮類藥物殘留的檢測也成為畜產品檢測中最重要的檢測項目之一。

2 氟喹諾酮類藥物殘留的檢測

2.1 酶聯(lián)免疫法

酶聯(lián)免疫法是一種較為常見的生物檢測分析方法，是在免疫酶技術的基礎上發(fā)展起來的一種新型的免疫測定技術手段，與儀器分析技術相比具有方便、快捷、操作簡單等優(yōu)點，能最大限度減少工作強度，通常用于藥物殘留的定性檢測，以及量值的初略計算，對于快速篩選具有重要意義[3]。

2.1.1 實驗原理 酶標板微孔上預先包被了氟喹諾酮類抗原，樣品中殘留的氟喹諾酮類藥物和此抗原特異性競爭抗體，加入酶標記物，催化底物顯色，根據(jù)顯色的深淺來判斷樣品中氟喹諾酮類藥物的含量。顯色深含量少，顯色淺含量多。

2.1.2 樣品前處理 用均質器將樣品均質混勻，稱取(1±0.05)g均質后的樣品置于50mL離心管中，加入9.5mL去離子水、0.5mL 20倍濃縮樣品稀釋液，充分渦旋1min至組織完全分散。室溫下4000g以上離心10min，立即取50μL上清液進行檢測。

2.1.3 樣品檢測 記錄標準品和樣品對應的酶標板微孔編號，每個標準品和樣品都要做2孔平行，分別將50μL標準品和樣品加入到對應的酶標板微孔中，在每孔中加入50μL酶標記工作液，再在每孔中加入50μL抗體工作液，輕輕振蕩混勻后，用蓋板膜蓋板后于常溫避光環(huán)境中放置30min。小心揭開蓋板膜，甩干微孔內液體，用洗滌劑充分洗滌，吸水紙拍干。立即在每孔中加入100μL底物混合液，輕輕振蕩混勻，用蓋膜板蓋板后置于常溫避光環(huán)境中反應15～20min。揭開蓋板膜，在每孔中加入50μL終止液，輕輕振蕩混勻10s，終止5min內用酶標儀在波長450nm、630nm下進行檢測，讀取酶標板的吸光度值。

2.1.4 結果判定 將樣品的吸光度值與標準品的標準曲線進行比較再乘以對應的稀釋倍數(shù)，即可粗略估算出樣品中氟喹諾酮類藥物的含量。

2.2 高效液相色譜法

高效液相色譜法是一種新型高效準確的檢測技術，具有高靈敏度、準確度、精密度等特點[3]。使用高效液相色譜法可以在較短時間內準確計算出樣品中藥物殘留量，通常用于畜產品的定性定量檢測。

2.2.1 實驗原理 用磷酸鹽緩沖溶液提取樣品中的藥物，C18固相萃取柱凈化，磷酸-乙腈溶液洗脫后，用高效液相色譜儀測定，外標法定量。

2.2.2 樣品前處理 用均質器將樣品均質混勻，稱取(2±0.05)g均質后的試料置于50mL離心管中，加入10mL磷酸鹽緩沖溶液，10000r/min勻漿1min，中速振蕩5min，10000r/min離心5min，上清液轉入另一干凈離心管中。重復提取一次，離心后合并上清液，混勻，待凈化。C18固相萃取柱先依次用甲醇、磷酸鹽緩沖溶液各2mL預洗，取待凈化溶液5mL過柱，用水1mL淋洗，真空抽干。用磷酸-乙腈溶液1mL洗脫，真空抽干，收集洗脫液。經濾膜過濾后作為試樣溶液，用高效液相色譜儀測定。

2.2.3 樣品檢測 開啟高效液相色譜儀，設定好流速、檢測波長、柱溫、進樣量等參數(shù)條件，將待測試樣溶液放入檢測盤中進行檢測。

2.2.4 結果計算和判定 取試樣溶液和相應的對照溶液，作單點或多點校準，按外標法就可計算出試料中藥物殘留量。計算結果和國家規(guī)定的該藥物限量值進行比較，即可判定該樣品是否合格。

2.3 高效液相色譜串聯(lián)質譜法

高效液相色譜串聯(lián)質譜法具有更高的分辨率和更低的檢出限，能更高效地完成檢測任務，滿足日常工作中的檢測要求，該方法逐漸成為獸藥殘留檢測的主要方法[3]。

2.3.1 實驗原理 樣品用1%乙酸乙腈溶液提取，旋蒸或氮氣流下濃縮，磷酸鹽緩沖液復溶，正己烷去脂后，經C18固相萃取柱凈化，裝瓶，最后使用液相色譜串聯(lián)質譜儀檢測，得到樣品中殘留藥物的準確含量。

2.3.2 樣品前處理 用均質器將樣品均質混勻，稱取(2±0.05)g適量混勻后的樣品置于50mL離心管中，加入1%乙酸乙腈溶液10mL，渦旋提取2min，10000r/min離心5min，上清液轉入另一干凈離心管中。重復提取1次，離心后合并上清液，40℃旋蒸至干或氮氣吹干。2mL磷酸鹽緩沖溶液溶解殘渣，加入2mL正己烷，渦旋混合1min，10000r/min離心5分鐘，移去上層正己烷，下層溶液待凈化。分別用2mL乙腈、2mL磷酸鹽緩沖溶液活化和平衡C18固相萃取柱，將待凈化的溶液以自然滴液速度過柱，用2mL水淋洗，真空抽干。用1mL 0.1%乙腈/水溶液洗脫，真空抽干，收集洗脫液，過濾膜后用高效液相色譜串聯(lián)質譜儀測定。

2.3.3 樣品檢測 啟動高效液相色譜串聯(lián)質譜儀，分別設定好流速、進樣體積、流動相梯度洗脫等液相色譜條件，及MRM特征離子、離子源溫度、掃描方式等質譜條件，將待測試樣溶液放入檢測盤中進行檢測。

2.3.4 結果判定 取試樣溶液、溶劑標準溶液，作單點或多點校準，按內標法以峰面積比定量，計算出試料中藥物殘留量。計算結果和國家規(guī)定的該藥物限量值進行比較，即可判定該樣品是否合格。

隨著人們對食品安全的越發(fā)重視，獸藥添加劑的殘留受到極大關注，氟喹諾酮類藥物作為使用最普遍的獸藥種類之一，大量使用和濫用都會殘留在動物源食品中，殘留的藥物通過食品進入人體，損害人體健康。為保障動物源食品安全，有效控制超標食品流入市場，獸藥殘留檢測已成為最重要的監(jiān)測手段。