基于元素及穩(wěn)定同位素分析的大黃魚產地區(qū)分技術

梅光明，楊盈悅，張玉汝，趙月涵，張小軍*，黃麗英，鄭斌

（1.浙江省海洋水產研究所，浙江 舟山 316021；2.浙江省海水增養(yǎng)殖重點實驗室，浙江 舟山 316021；3.浙江海洋大學 食品與醫(yī)藥學院，浙江舟山 316022；4.浙江舟山環(huán)境工程設計有限公司，浙江舟山 316000）

大黃魚（Larimichthys crocea）是石首科、黃魚屬魚類，又名黃花魚、黃瓜魚［1］，因肉質鮮嫩細膩，且富含氨基酸、脂肪酸和礦物元素等營養(yǎng)成分［2］，深受消費者喜愛。目前學界將分布在我國近岸沿海的大黃魚分為岱衢族、閩—粵東族和硇洲族3個地理種群，其中，閩—粵東族主要分布于東海南部和南海北部（福建崳山島以南到珠江口），硇洲族主要分布于珠江口以西至瓊州海峽以東，岱衢族主要分布于黃海南部和東海北部沿岸淺海［3-4］。浙江沿海的岱衢洋、大目洋、貓頭洋及江外漁場、舟外漁場等都是岱衢族大黃魚的主要生棲場所［5-9］。20 世紀70 年代起，由于過度捕撈及受環(huán)境污染影響，野生大黃魚驟降為稀缺資源，目前依靠人工養(yǎng)殖技術，大黃魚已成為我國產量最大的海水養(yǎng)殖魚類［10］。2020 年全國大黃魚養(yǎng)殖產量達2.54×108kg［11］，主要分布在福建、浙江和廣東等地。從以近岸傳統(tǒng)網箱養(yǎng)殖為主向深水網箱、牧場化圍欄和深遠海養(yǎng)殖等發(fā)展。普遍認為自然海域野生大黃魚的品質優(yōu)于養(yǎng)殖大黃魚，不同地域環(huán)境、不同養(yǎng)殖模式和不同品系的大黃魚在營養(yǎng)及口感上也存在明顯差異［12-16］。不同產地大黃魚市場售價差距較大，如野生大黃魚每斤售價高達千元及以上，養(yǎng)殖大黃魚每斤售價為一二十元至上百元不等。在巨大經濟利益驅動下，以養(yǎng)殖大黃魚充當野生大黃魚、以普通網箱養(yǎng)殖大黃魚冒充深海養(yǎng)殖大黃魚，“掛羊頭賣狗肉”類造假銷售事件時有發(fā)生。與此同時，近年來國內關注的水產品“三魚兩藥”問題，從大黃魚中檢出禁用藥物氧氟沙星等也時有報道，因此，有必要建立大黃魚產地的準確溯源技術，為維護消費者合法權利和保障水產品質量安全提供有效手段。

利用農產品地理環(huán)境、生產方式、氣候條件及種間差異等因素引起的礦物元素質量分數(shù)差異或13C、15N和18O 等同位素分餾效應成為國內外農產品溯源中常用的一種手段，目前該項技術已應用于谷物、畜禽肉和果蔬［17-19］等農產品的產地溯源，而在水產品產地溯源上的應用研究較少。文獻［20-27］報道了礦物元素或穩(wěn)定同位素分析在蛤仔、鰻魚、鯖魚、鱸魚、鱈魚、中華絨螯蟹、鮑魚、扇貝和帶魚等水產品產地溯源中的應用，尚未見該項技術應用于大黃魚產地溯源的報道，當前在大黃魚產地區(qū)分上仍缺乏有效的技術手段。本研究嘗試采用具有高通量和高分辨率分析優(yōu)勢的電感耦合等離子體質譜儀及元素分析—同位素質譜儀，對浙江市場上常見的4 種來自不同產地的大黃魚樣品（福建寧德養(yǎng)殖、浙江溫州養(yǎng)殖、浙江舟山養(yǎng)殖和舟山漁場自然海域捕撈）進行19 種礦物元素和碳、氮元素及其穩(wěn)定同位素質量分數(shù)差異分析，結合主成分分析、聚類分析和Fisher 判別等統(tǒng)計學方法，對4 種不同產地大黃魚進行產地判別研究，為大黃魚產地鑒別提供參考。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

Vario EL III-Isoprime 元素分析—同位素質譜儀（配高溫燃燒爐、吸附—解吸裝置和高靈敏度熱導檢測器，德國Elementar 公司）；Agilent 7900 電感耦合等離子體質譜（美國安捷倫公司）；ETHOSUP 型微波消解儀（意大利Milestone 公司）；VB24 plus 型微波消解趕酸架（北京萊伯泰科儀器股份有限公司）；T18 實驗室高速分散機（德國IKA 公司）；SCIENT—10N 真空冷凍干燥機（寧波新芝生物科技股份有限公司）；M5X 微量電子天平（瑞士梅特勒—托利多公司）；905—ULTS 超低溫冰箱（美國Thermo 公司）。

19 種單元素標準溶液Mg（GSB 04—1735—2004）、Al（GSB 04—1713—2004）、Na（GSB 04—1738—2004）、Sn（GSB 04—1753—2004）、Ca（GSB 04—1720—2004）、Fe（GSB 04—1726—2004）、Se（GSB 04—1751—2004）、Sr（GSB 04—1754—2004）、K（GSB 04—1733—2004）、Zn（GSB 04—1761—2004）、Ba（GSB 04—1717—2004）、Mn（GSB 04—1736—2004）、Cu（GSB 04—1725—2004）、Ni（GSB 04—1740—2004）、V（GSB 04—1759—2004）、Ti（GSB 04—1757—2004）、Co（GSB 04—1722—2004）、Mo（GSB 04—1737—2004）、Cr（GSB 04—1723—2004），濃度均為1 000 μg·mL?1，國家有色金屬及電子材料分析測試中心；酪蛋白和USGS40 標準品，英國Elmental Microanalysis公司；GBW10023 扇貝粉，67%～70% HNO3，MOS級，德國CNW 公司；30% H2O2，優(yōu)級純，國藥集團化學試劑有限公司；WO3，高純線狀銅及銀棉，上海艾利蒙塔貿易有限公司；高純He、N2和O2，濃度≥99.999%，上海彌正氣體有限公司；高純CO2，濃度≥99.995%，普萊克斯（上海）工業(yè)氣體有限公司。

1.2 樣品來源

2020 年9 月至2021 年6 月共收集39 份大黃魚樣品。其中福建寧德養(yǎng)殖大黃魚樣本10份，近岸普通網箱養(yǎng)殖；浙江溫州養(yǎng)殖大黃魚樣本10 份（產地為溫州蒼南、平陽和南麂島），含普通網箱養(yǎng)殖和深水網箱養(yǎng)殖；浙江舟山養(yǎng)殖大黃魚9 份（產地為舟山嵊泗和東極），含深水網箱和圍網養(yǎng)殖；舟山漁場自然海域捕撈大黃魚10份，于舟山市國際水產城碼頭某停靠漁船購入，經漁民捕撈日志確認在北緯30°28'、東經122°42'的舟山漁場海域捕獲，并經浙江省海洋水產研究所漁業(yè)資源專家鑒定，符合野生岱衢族大黃魚生物學特征。大黃魚單體體重400～550 g，體長22～30 cm，將新鮮樣品裝入帶冰泡沫箱，6 h 內運回實驗室處理。取背部肌肉，勻漿、冷凍干燥，在瑪瑙研缽內碾碎后過16 目篩，樣品于?65 ℃凍藏備用。

1.3 方法

1.3.1 礦物元素

依據(jù)GB 5009.268—2016［28］中ICP-MS 法測定19 種礦物元素質量分數(shù)。取凍干后的大黃魚樣品粉末0.1 g（精確到0.000 1 g）于聚四氟乙烯消解罐中，加入6 mL HNO3和2 mL H2O2，靜置2 h 后進行微波消解。微波消解程序：（1）由室溫升至140 ℃，需時5 min；（2）再升至200 ℃，需時10 min，恒溫20 min；（3）15 min 內由200 ℃降至室溫。微波消解后于160 ℃下趕酸20 min，冷卻后用純水定容至50 mL，待ICP-MS 測定。測定過程中在線加入1 μg·mL?1的Sc、Ge、Rh 和In 混合內標液，同時測定質控樣品GBW10023 扇貝粉，對結果進行質量控制（當質控樣品各元素測定結果在標準參考值范圍內時，代表該批實驗數(shù)據(jù)的準確性較好）。

1.3.2 C、N 元素

用Vario EL Ⅲ元素分析儀測定C、N 元素質量分數(shù)。取2 mg 凍干后的大黃魚樣品，用錫囊緊密包裹成小球，放入儀器進樣盤，樣品經過高溫燃燒氧化還原后，各氣體通過吸附/解析柱分離，熱導檢測器檢測。儀器條件：氧化管填充WO3，溫度1 150 ℃；還原管填充線狀銅及銀棉，溫度810 ℃；高純He 作為載氣及參比氣。

1.3.3 碳、氮穩(wěn)定同位素比率δ13C、δ15N

將Vario EL Ⅲ元素分析儀氧化還原產生的N2、CO2經接口進入Isoprime 同位素質譜儀，測定碳、氮穩(wěn)定同位素比率δ13C、δ15N。同位素質譜儀條件：應用連續(xù)流進樣系統(tǒng)，CO2、N2作為參比氣，USGS40（L-glutamic Acid）作為標準品（δ13CVPDB=?26.39±0.04‰，δ15NAIR=?4.52±0.06‰），對參比氣CO2、N2進行校準。碳、氮穩(wěn)定同位素比率計算式為：

1.4 數(shù)據(jù)處理

用3 次重復測定的平均值加減標準偏差表示測定數(shù)據(jù)。用IMB SPSS23 進行數(shù)據(jù)統(tǒng)計、方差分析（ANOVA）、事后多重比較（LSD 和Tamhane′sT2檢驗）和Fisher 判別分析，用R（4.1.2）中FactoryMine R 包和NbClust 包進行主成分分析（principal component analysis，PCA）和聚類分析（cluster analysis，CA），用Origin 8.5 繪圖。

2 結果與分析

2.1 礦物元素的質量分數(shù)

4 種產地大黃魚樣本中19 種礦物元素的測定結果見表1。單因素ANOVA 及事后多重比較表明，Mg質量分數(shù)，各產地樣本間除福建寧德養(yǎng)殖大黃魚與浙江舟山養(yǎng)殖大黃魚不存在顯著性差異（p>0.05）外，均存在顯著差異（p<0.05），Mg 質量分數(shù)最高的為舟山漁場海域捕撈大黃魚，均值高達1.43 g·kg?1；Al 質量分數(shù)，除浙江溫州養(yǎng)殖大黃魚與浙江舟山養(yǎng)殖大黃魚之間無顯著性差異（p>0.05）外，其余各產地間均存在顯著性差異（p<0.05），Al 質量分數(shù)最高的為福建寧德養(yǎng)殖大黃魚（17.49 mg·kg?1），最低的為浙江舟山養(yǎng)殖大黃魚（1.98 mg·kg?1）；K 質量分數(shù)，舟山漁場海域捕撈大黃魚顯著高于浙江舟山養(yǎng)殖大黃魚（p<0.05），二者又均明顯高于福建寧德養(yǎng)殖大黃魚與浙江溫州養(yǎng)殖大黃魚（p<0.05）；Ti質量分數(shù)，福建寧德養(yǎng)殖與浙江舟山漁場海域捕撈大黃魚均明顯高于浙江溫州養(yǎng)殖和浙江舟山養(yǎng)殖大黃魚（p<0.05）；Cr 質量分數(shù)，福建寧德養(yǎng)殖大黃魚顯著低于浙江溫州養(yǎng)殖大黃魚（p<0.05）；Cu 質量分數(shù)，浙江溫州養(yǎng)殖大黃魚和浙江舟山養(yǎng)殖大黃魚均顯著高于福建寧德養(yǎng)殖大黃魚和舟山漁場海域捕撈大黃魚（p<0.05）；Zn 質量分數(shù)，福建寧德養(yǎng)殖大黃魚顯著低于其他3個產地，其中舟山漁場海域捕撈大黃魚最高（均值為17.4 mg·kg?1），顯著高于浙江溫州養(yǎng)殖大黃魚（p<0.05），但與浙江舟山養(yǎng)殖大黃魚無顯著差異（p>0.05）；Se 及Ba 質量分數(shù)，舟山漁場海域捕撈大黃魚最高，均顯著性高于其他3個產地的（p<0.05）；Sn 質量分數(shù)，浙江溫州養(yǎng)殖大黃魚顯著高于其他3個產地的（p<0.05）。此外，舟山漁場海域捕撈大黃魚的Na 和Mo 平均質量分數(shù)最高；浙江溫州養(yǎng)殖大黃魚的Fe、V 和Ni 平均質量分數(shù)最高；浙江舟山養(yǎng)殖大黃魚的Ca、Mn、Co 和Sr 平均質量分數(shù)最高。但上述元素質量分數(shù)范圍在4個產地間無顯著差異（p>0.05）。

表1 不同產地大黃魚肌肉中19 種礦物元素的質量分數(shù)Table 1 Quality scores of 19th mineral elements in muscles of L.crocea from different producing areas

2.2 δ13C、δ15N 值和C、N 質量分數(shù)

表2 為不同產地大黃魚樣本中的δ13C、δ15N 值和C、N 質量分數(shù)。δ13C 值為?16.78‰～?24.24‰，平均值：舟山漁場海域捕撈大黃魚（?17.62‰）>浙江溫州養(yǎng)殖大黃魚（?20.43‰）>福建寧德養(yǎng)殖大黃魚（?20.64‰）>浙江舟山養(yǎng)殖大黃魚（?21.34‰）；δ15N 值為7.66‰～12.79‰，平均值：舟山漁場海域捕撈大黃魚（11.79‰）>福建寧德養(yǎng)殖大黃魚（10.98‰）>浙江溫州養(yǎng)殖大黃魚（10.78‰）>浙江舟山養(yǎng)殖大黃魚（8.83‰）；C 質量分數(shù)為44.03%～60.42%，平均值：福建寧德養(yǎng)殖大黃魚（53.45%）>浙江溫州養(yǎng)殖大黃魚（52.19%）>浙江舟山養(yǎng)殖大黃魚（50.96%）>舟山漁場海域捕撈大黃魚（47.69%）；N 質量分數(shù)為7.99%～13.69%，平均值：舟山漁場海域捕撈大黃魚（12.57%）>浙江舟山養(yǎng)殖大黃魚（11.03%）>福建寧德養(yǎng)殖大黃魚（10.37%）>浙江溫州養(yǎng)殖大黃魚（10.07%）。根據(jù)單因素ANOVA 及事后多重比較，福建寧德養(yǎng)殖大黃魚的δ13C 值和N 質量分數(shù)均顯著低于舟山漁場海域捕撈大黃魚（p<0.05），δ15N 值顯著高于浙江舟山養(yǎng)殖大黃魚（p<0.05），C 質量分數(shù)顯著高于舟山漁場海域捕撈大黃魚（p<0.05）；浙江溫州養(yǎng)殖大黃魚的δ15N 值顯著高于舟山養(yǎng)殖大黃魚（p<0.05），其余指標與浙江舟山養(yǎng)殖大黃魚無顯著差異（p>0.05）；舟山漁場海域捕撈大黃魚的δ13C 值和N 質量分數(shù)均顯著高于其他3個產地大黃魚（p<0.05），δ15N 值顯著高于浙江舟山養(yǎng)殖大黃魚（p<0.05），而C 質量分數(shù)顯著低于其他3個產地大黃魚（p<0.05）。劉小琳等［29］得到在寧波舟山一帶海域捕撈的大黃魚其δ13C和δ15N 值分別為（?17.02±1.38）‰ 和（11.29±0.25）‰，石焱［30］調查得到夏季福建閩江口大黃魚的δ13C 和δ15N 值分別為（?19.71±0.57）‰和（11.16±1.11）‰，與本研究測得的舟山漁場海域捕撈大黃魚的數(shù)值一致。

表2 不同產地大黃魚肌肉中穩(wěn)定同位素比值δ13C、δ15N 和碳、氮質量分數(shù)Table 1 Stable isotope ratios of δ13C，δ15N and quality scores of C，N in muscles of L.crocea from different producing areas

2.3 主成分分析（PCA）

PCA 是數(shù)據(jù)處理中一種常用的線性降維方法，通過對復雜數(shù)據(jù)的降維處理，揭示隱藏在數(shù)據(jù)背后的簡單結構，再通過正交變換將存在多重線性關系的高維數(shù)據(jù)映射為線性不相關的低維數(shù)據(jù)［31-32］。為更好探究元素及穩(wěn)定同位素對大黃魚產地判別的效率，選取礦物元素中質量分數(shù)差異顯著的Mg、Al、K、Ti、Cr、Cu、Zn、Se、Sn、Ba 及穩(wěn)定同位素δ13C、δ15N和C、N 作為變量進行主成分分析（見圖1）。由圖1知，散點圖彼此無重疊，通過PCA 可區(qū)分4 種大黃魚產地。圖2 為元素在前2個主成分中的貢獻圖，元素越靠近相關圓表示其在PCA 中貢獻率越大。結果表明，Mg、N、Se、Sn、C 這5個元素對主成分的貢獻率較大，而δ15N 對主成分的貢獻率較小。圖3為主成分方差貢獻率，其中，第1 主成分（PC1）占41.2%，第2 主成分（PC2）占22.9%，前6個主成分方差累計貢獻率為90.5%，前6個主成分表達了大部分數(shù)據(jù)信息（圖3（a））；依據(jù)各元素在主成分組件中的方差貢獻率，得到對PC1 有重要貢獻的元素為N、Mg、Se、C、K、δ13C、Ba（圖3（b）），對PC2 有重要貢獻的元素為Sn、Al、Ti、Cu、Cr、Zn（圖3（c））。對4 種不同產地大黃魚進行主成分分析，發(fā)現(xiàn)貢獻較大的前5個元素分別為N、Mg、Se、Sn、C，貢獻最小的為δ15N。

圖1 不同產地大黃魚PCA 中PC1、PC2 得分散點圖Fig.1 The scatter plots of PC1 and PC2 in PCA of L.crocea from different producing areas

圖2 元素在前2個主成分中的貢獻Fig.2 Contribution of elements in the first two principal component analysis

圖3 主成分方差貢獻率Fig.3 Variance contribution rates of principle component

2.4 聚類分析（CA）

CA 是一種無監(jiān)督的分類方法，按照組內樣本之間相似度較高、組間樣本之間相似度較低的原則，將樣本歸為不同類［33-34］。為更加直觀地了解大黃魚產地的分布情況，選取具有顯著性差異的礦物元素Mg、Al、K、Ti、Cr、Cu、Zn、Se、Sn、Ba 及穩(wěn)定同位素比值δ13C、δ15N 和C、N 作為變量進行CA，CA 中內部選用歐式距離算法，類間距離選用類平均法（圖4）。從聚類距離（圖中彩色處）處將樹狀圖切割，可將大黃魚樣品分為5 類：第1 類全部為舟山漁場海域捕撈（n=10），第2 類全部為福建寧德養(yǎng)殖（n=10），第3 類為浙江溫州養(yǎng)殖（3 條），第4 類全部為浙江舟山養(yǎng)殖（n=9），第5 類為浙江溫州養(yǎng)殖（7 條）。結果表明，CA 法適合對4 種不同產地大黃魚進行判別分析，而浙江溫州養(yǎng)殖大黃魚樣本分為兩類的原因可能是，其產地覆蓋蒼南、平陽和南麂島等地，地域較為分散，使得該區(qū)域養(yǎng)殖的大黃魚在穩(wěn)定同位素比值和礦物元素質量分數(shù)上存在一定差異。

圖4 不同產地大黃魚CA 結果Fig.4 Cluster analysis results of L.crocea from different producing areas

2.5 Fisher 判別分析

Fisher 判別分析與PCA 是從不同角度對數(shù)據(jù)進行降維處理，PCA 是為了尋找方差盡可能大的維度，F(xiàn)isher 判別分析是為了實現(xiàn)最大的類間距離以及最小的類內距離，利用已知類別的樣本建立判別模型，對未知類別的樣本進行分類［35-37］。目前Fisher 判別分析已應用于牛奶、三疣梭子蟹的產地溯源，具有較好的判別效果。為進一步探究礦物元素Mg、Al、K、Ti、Cr、Cu、Zn、Se、Sn、Ba，穩(wěn)定同位素比值δ13C、δ15N 和C、N 在大黃魚產地溯源中的應用效果，對4 種不同產地大黃魚進行了Fisher 判別分析。從每個產地的10個樣本中隨機抽取3個作為測試集，得到12個測試集樣本，測試集樣本不參與Fisher 判別分析，用于對所建判別式的預測。其余28個樣本作為訓練集，建立判別式，進行判別分析。4 種不同產地大黃魚的判別式分別為：

利用上述判別式預判測試集樣本，各產地大黃魚預判準確率為100%（表3）。為檢驗判別式的可靠性，采用“留一法”交叉驗證進行檢驗，結果見表4。原始分類結果顯示，整體判別率為100%，4 種樣本準確判別率均為100%?！傲粢环ā苯徊骝炞C結果顯示，有85.7%的浙江舟山養(yǎng)殖大黃魚樣本被正確分類，14.3%的被誤判為溫州養(yǎng)殖大黃魚，其余3 種大黃魚樣本均100%被正確分類。結果表明，所建立的判別式可對4 種不同產地大黃魚樣品進行正確分類，效果較好。

表3 不同產地大黃魚測試集樣本Fisher 判別結果Table 3 Fisher discriminant results of L.crocea from different producing areas

表4 Fisher 判別分析分類結果Table 4 Classification results of Fisher discriminant analysis of L.crocea

3 討論

礦物元素在生態(tài)環(huán)境中的分布具有不均勻性，水、空氣和飼料等不同物質的礦質元素組成各不相同，特征不同［38］。不同生境中的礦物元素又會通過生命活動進入其他生物體并持續(xù)累積，導致不同地區(qū)的生物體礦物元素含量存在較大差異［39］，利用這種微化學“指紋”差異可實現(xiàn)對農產品的產地溯源。目前基于礦物元素質量分數(shù)差異的分析已被用于鑒別不同產地或不同養(yǎng)殖方式的水產品［40］。本研究結果表明，在相同海域環(huán)境下，舟山漁場海域捕撈大黃魚的Mg、Al、K、Ti、Se 和Ba 質量分數(shù)均顯著高于舟山養(yǎng)殖大黃魚，這與鐘愛華等［41］研究得到的舟山海域放養(yǎng)大黃魚Ca、Mg 和Se的質量分數(shù)高于舟山海域深水網箱和普通網箱養(yǎng)殖的結論相似。浙江舟山養(yǎng)殖大黃魚和浙江溫州養(yǎng)殖大黃魚除在Mg、K 和Sn 質量分數(shù)上存在顯著差異外，其余16 種元素的質量分數(shù)均無顯著差異，這與兩地地緣關系較近、海域環(huán)境相似和大黃魚養(yǎng)殖模式相同有關。雖然福建寧德與浙江溫州在地理位置上相距不遠，但兩地養(yǎng)殖的大黃魚中Mg、Al、Ti、Cr、Cu、Zn 和Sn 這7 種元素的質量分數(shù)存在顯著差異，可能與兩地大黃魚的養(yǎng)殖模式不同有關。目前我國大黃魚養(yǎng)殖產量最高的福建，以普通網箱養(yǎng)殖為主（占92.8%），而浙江以深水網箱養(yǎng)殖為主（占85.9%），普通網箱養(yǎng)殖僅占7.92%，其余為圍網養(yǎng)殖［42］。在不同養(yǎng)殖模式下，大黃魚的生長環(huán)境和餌料來源有所不同。普通網箱養(yǎng)殖設置在近岸沿海，投喂冰鮮餌料或人工配合飼料；深水網箱養(yǎng)殖通常設置在靠近外海區(qū)域，具有一定潮流速，在獲取投喂的冰鮮餌料或人工配合飼料的同時也能捕獲一定的天然餌料；自然海域的大黃魚則完全依靠天然餌料。此外，不同海域環(huán)境質量也存在一定差異，如徐亞巖等［43］指出，在我國四大海域的海洋沉積物中，重金屬質量分數(shù)東海>黃海>渤海和南海。攝食結構及海域環(huán)境共同影響各產地大黃魚礦物元素的累積。

生物體中13C、15N、2H和18O 等穩(wěn)定同位素受攝食結構、氣候環(huán)境、生長代謝類型等的影響，發(fā)生自然分餾效應［44］，從而可利用生物體穩(wěn)定同位素自然豐度比值的差異進行農產品產地溯源［45］。水產品中的δ13C 與其攝食物來源密切相關，食物中C3、C4植物比例不同，δ13C 不同；δ15N 則受食物中動植物比例和環(huán)境狀況等因素的影響［46］，由于在海洋生物中δ15N的富集程度較高，δ15N 值常被用于確定生物在食物網中的營養(yǎng)位置［47］。本研究發(fā)現(xiàn)，舟山漁場海域捕撈大黃魚的δ13C和δ15N 值在4 種樣品中均最高，這與其攝食物來源密切相關。受目前我國海洋漁業(yè)資源保護和禁捕規(guī)定等政策影響，大黃魚養(yǎng)殖中逐漸用配合飼料替代冰鮮小雜魚等鮮活餌料，因此自然海域捕撈的大黃魚其動物性餌料攝入占比通常高于養(yǎng)殖大黃魚，在深水網箱養(yǎng)殖中，由于天然餌料補充，使得其動物性餌料的攝入高于近岸普通網箱養(yǎng)殖，這也解釋了δ15N呈舟山漁場海域捕撈大黃魚>福建寧德養(yǎng)殖大黃魚>浙江溫州養(yǎng)殖大黃魚和浙江舟山養(yǎng)殖大黃魚的現(xiàn)象。另外，由于配合飼料中添加了大豆蛋白、豆粕等植物性碳源，使得養(yǎng)殖大黃魚中的δ13C 值低于天然海域捕撈大黃魚。本研究也發(fā)現(xiàn)，舟山漁場捕撈大黃魚的高氮低碳現(xiàn)象可能與魚的低脂肪、高蛋白質相關。由于自然海域野生大黃魚為洄游性生物，生活在深海區(qū)，運動消耗能量較大，不利于脂肪積累；普通網箱養(yǎng)殖大黃魚運動空間狹窄，且有充足的餌料，能量消耗低，很容易積累脂肪；深水網箱養(yǎng)殖的大黃魚由于處于半開放性海域，潮流較急、活動空間較大，脂肪含量一般低于普通網箱養(yǎng)殖大黃魚高于野生大黃魚［12］。

4 結論

基于礦物元素穩(wěn)定同位素比值和碳、氮元素的質量分數(shù)差異，結合PCA、CA 和Fisher 判別分析，對4 種不同產地大黃魚進行了區(qū)分。方差分析表明，10 種礦物元素（Mg、Al、K、Ti、Cr、Cu、Zn、Se、Sn、Ba）、同位素比值δ13C、δ15N 和C、N 在不同產地大黃魚間存在顯著差異。利用元素及穩(wěn)定同位素比值差異結合化學計量學分析手段，可有效區(qū)分大黃魚產地，為解決大黃魚產地溯源提供了一種有效可靠的方法。