降鈣素原檢測方法以及其臨床意義研究的進展

唐柳琳

恭城瑤族自治縣人民醫(yī)院 廣西 桂林 542500

降鈣素原(PCT)水平可在感染(infection)性疾病患者中出現(xiàn)特異性上升趨勢，臨床多將PCT指標用于鑒別細菌性與非細菌性、敗血癥、bacterial infection、膿毒癥、其他感染性疾病，同時PCT水平可作為臨床制定抗生素治療方案、預測疾病預后的重要指標[1-2]。相較于其他實驗室指標而言，PCT水平在診斷bacterial infection性疾病特異性較高，臨床診斷價值高，是診斷infection狀態(tài)重要的微生物學指標[3]。PCT水平可輔助診斷多種infection性疾病、監(jiān)測病程、指導用藥，臨床發(fā)展PCT檢測方法迅速，可進行快速定性[4]。

一、PCT實驗室檢測方法

1.免疫化學發(fā)光法

利用膠體金免疫層析技術，在標準品上結合有膠體金的綿羊克隆抗降鈣素抗體、小鼠單克隆抗降鈣素抗體，加入待檢標本中，標本中的PCT結合膠體金元素[5]，由此標記的抗原抗體復合物即可結合到固定的抗降鈣素抗體上，最后形成復合物，呈現(xiàn)“三明治式”，再通過發(fā)光比色評價PCT濃度，方法特異性高，且不會產生交叉反應，檢測的最低限度為10ng/L，具有10-60ng/L的標準曲線線性范圍，臨床均應用全自動化儀器進行免疫熒光法、免疫化學發(fā)光法，檢測結果準確性高、特異性高，尤其適用于監(jiān)測重度infection患者的PCT水平[6]。

2.放射免疫學分析法

利用人工合成PCT多抗特異的連接并識別合成氨基酸PCT，該方法可將檢測的血清PCT濃度精確到4pg/ml，但檢測結果是游離、結合型PCT、CT基因相關肽前體的混合物，導致無法有效區(qū)分該三種物質，雖然放射免疫學分析法檢測具有高靈敏度，但需要花費較長的檢測用時，一般在10h左右，同時檢測中存在放射性元素污染，因此在臨床應用限制較大[7]。

3.免疫熒光法

該方法是一種定量的免疫學檢測法，通過將PCT和下鈣素結合2種鼠單克隆抗體，將抗體經熒光標記在管壁上固定，PCT分子與血漿分別結合2種抗體，形成“雙抗體夾心復合物”[8-9]。

4.透射免疫濁度法

該方法的原理是通過試劑的PCT單抗與樣本中的PCT產生抗原-抗體反應，增加體系濁度，而標本中的PCT濃度與濁度在一定的濃度范圍內呈現(xiàn)線性正比[10-11]。臨床應用全自動生化分析儀適用于透射免疫濁度法，應用優(yōu)勢包括可快速獲得結果、操作步驟簡單、可同時大批量檢測[12]。

5.膠體金技術金標法

在檢測孔內加入樣本后，金標單抗結核樣本中的PCT，獲得帶金標記的抗原抗體復合物，復合物可在滲透作用下在反應膜條上移動，金標記復合物與膜上固定的抗體結合后形成抗原抗體復合物。當樣本PCT含量＞0.5ng/ml時呈現(xiàn)紅色反應，而PCT濃度與顏色深淺度呈現(xiàn)正比，與標準比色板顏色進行比對可獲得樣本PCT的濃度范圍[13-14]。檢測結果可分為四級，正常:＜0.5ng/ml；輕度上升:＞0.5ng/ml；明顯上升:＞2.0ng/ml；顯著上升:＞10.0ng/ml。金標膠體方法可判斷顏色，方便觀察，無需檢測儀器，操作簡單，快速，且結果與免疫熒光法結果一致性高，適合床邊檢測[15]。

6.凝膠層析法及高效液相色譜分析法

高效液相色譜分析法與凝膠層析法已經被臨床研究開發(fā)，該2種方法均具有精確的檢測結果，但檢測耗時，且檢測費用高昂、不易自動化，因此限制了該方法在臨床的應用[16]。

二、PCT檢測的臨床意義

1.臨床鑒別細菌性與非細菌性炎癥反應的應用

細菌會引起全身炎癥反應，提高血清PCT濃度，而血清中PCT濃度在有無病毒infection、有無器官排斥、有無自身免疫性疾病等變態(tài)炎性反應中處于較低水平，患者血清中PCT水平高低可幫助鑒別臨床非細菌與細菌性炎癥[17]。

2.敗血癥中的應用

infection死亡率高，可引起全身infection綜合征，是ICU收治的危重癥患者死亡的主要原因，在infection時，常規(guī)檢測實驗室指標與臨床癥狀診斷誤診風險高，相較于傳統(tǒng)檢測方法，PCT水平不受外界干擾，會影響檢測效果，相比較而言，infection初期即可出現(xiàn)PCT水平上升，診斷時準確率較高，若PCT水平上升或持續(xù)維持高水平則可提示疾病預后效果較為不良，如果PCT水平迅速下降到正常水平則提示疾病預后效果良好。

3.在膿毒癥、全身嚴重bacterial infection中的應用

ICU常見的嚴重疾病為膿毒癥，膿毒癥患者機體PCT水平明顯高于非infection膿毒癥患者的PCT水平，結果可幫助鑒別bacterial infection，全身infection后大部分炎癥因子會出現(xiàn)間歇性上升趨勢，經統(tǒng)計分析可發(fā)現(xiàn)嚴重infection輔助診斷中PCT指標可作為最佳的檢測指標，臨床將PCT水平作為膿毒癥的早期標志物，尤其可輔助診斷新生兒膿毒癥，PCT的敏感性、特異性均較高。

4.其他疾病中的應用

下呼吸道infection中可將PCT水平作為抗生素治療方案的參考依據(jù)，輔助降低使用抗生素的頻率，尤其是慢阻肺急性發(fā)作、急性支氣管疾病中較為顯著，PCT檢測指標是臨床預測急性infection心內膜炎的唯一指標，infection壞死胰腺時PCT水平較無菌壞死胰腺炎明顯升高，相比較之下，PCT指標與臨床有無infection壞死性胰腺炎指標接近，infection性休克疾病經敏感抗生素治療后PCT水平也隨之迅速下降，說明血清PCT水平對早期診斷bacterial infection性休克、評估疾病發(fā)展速度意義重大。

小結

PCT是無激素活性的蛋白質，與傳統(tǒng)炎癥指標比較而言，PCT優(yōu)勢包括敏感性、特異性高、反應簡單快速，健康人體內PCT含量＜0.1μg/L，含量極低。當機體出現(xiàn)真菌、細菌、寄生蟲等infection情況下即可出現(xiàn)明顯上升趨勢，病毒或局部infection后PCT值僅出現(xiàn)輕微上升，對鑒別真菌、細菌、病毒性infection、評估infection嚴重程度、判斷疾病預后意義重大。體內外的PCT水平具有良好的穩(wěn)定性，可作為新型的炎性標志物，隨著臨床不斷發(fā)展檢測技術，PCT也在臨床應用范圍越來越廣。