骨質(zhì)疏松癥動(dòng)物模型中大鼠卵巢切除手術(shù)要點(diǎn)及其術(shù)后護(hù)理

馬艷芳 張 鑫 李 慧 程 東 孫昌華

(1.泰安市岱岳區(qū)畜牧獸醫(yī)事業(yè)發(fā)展服務(wù)中心，泰安 271000)(2.山東泰山生力源集團(tuán)股份有限公司，泰安 271000)(3.山東省疾病預(yù)防控制中心，濟(jì)南 250014)

骨質(zhì)疏松癥(osteoporosis，OP)是由Pommer在1885年提出來的，它是一種以骨組織微細(xì)結(jié)構(gòu)退變和骨質(zhì)量降低為特性的全身性骨骼疾病，易引起骨骼脆性增加，導(dǎo)致骨折的發(fā)生[1-7]。研究表明，骨折發(fā)生率與骨密度密切相關(guān)[8]。骨質(zhì)疏松癥及由其引起的骨折等并發(fā)癥，對(duì)中老年人尤其是絕經(jīng)后婦女的身體健康和生存質(zhì)量構(gòu)成了嚴(yán)重威脅，目前正日益成為一個(gè)公眾健康問題，因此骨質(zhì)疏松癥的防治成為廣大科研人員廣泛關(guān)注的熱點(diǎn)問題。

選擇并建立理想的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型是骨質(zhì)疏松癥預(yù)防和治療的基礎(chǔ)，深入實(shí)驗(yàn)研究的關(guān)鍵則是實(shí)驗(yàn)動(dòng)物和動(dòng)物模型的選擇。目前，常用于骨質(zhì)疏松研究的動(dòng)物有大鼠、兔、狗、小鼠、羊、豬和靈長(zhǎng)類動(dòng)物等，但主要選用大鼠[9]，其中SD大鼠[10-11]和Wistar大鼠[12-13]較為適宜。1969年Savill通過手術(shù)切除大鼠卵巢，造成動(dòng)物機(jī)體內(nèi)雌激素水平下降，使其對(duì)成骨細(xì)胞的促成熟功能和對(duì)破骨細(xì)胞的抑制功能減弱，最終使得骨量嚴(yán)重丟失，從而導(dǎo)致骨質(zhì)疏松，該模型與女性絕經(jīng)或卵巢切除后的骨丟失極為相似，是FDA和WHO推薦的研究絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥的經(jīng)典模型之一[14-18]。本文選擇SD大鼠作為模型動(dòng)物，探討卵巢切除手術(shù)過程中的技術(shù)要點(diǎn)及其術(shù)后護(hù)理，為骨質(zhì)疏松動(dòng)物模型的成功建立提供了參考依據(jù)。

1 材料

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與飼養(yǎng)環(huán)境

SD大鼠，SPF級(jí)，雌性，140只，體質(zhì)量220～250 g，購(gòu)于濟(jì)南朋悅實(shí)驗(yàn)動(dòng)物繁育有限公司，許可證號(hào)：SCXK(魯)2019-0003。本實(shí)驗(yàn)由山東省疾病預(yù)防控制中心實(shí)驗(yàn)動(dòng)物福利倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物倫理編號(hào)為201902007。

SD大鼠飼養(yǎng)于屏障環(huán)境動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室，使用許可證號(hào)：SYXK(魯)2018-0014，環(huán)境溫度20 ℃～26 ℃，相對(duì)濕度40%～70%，動(dòng)物照明晝夜交替12 h/12 h，SPF級(jí)大小鼠生長(zhǎng)繁殖飼料，自由采食飲水。

1.2 主要試劑與儀器

戊巴比妥鈉(上海氟德化工有限公司)、新潔兒滅、75%乙醇(山東利爾康消毒科技有限公司)、0.9%氯化鈉注射液(山東辰欣藥業(yè)股份有限公司)、青霉素(山東魯抗醫(yī)藥股份有限公司)、高壓蒸汽滅菌器(山東新華醫(yī)療器械股份有限公司)。

2 手術(shù)前準(zhǔn)備

2.1 手術(shù)器械、器皿消毒

本試驗(yàn)應(yīng)用高壓蒸汽滅菌法[19]，設(shè)定條件為121 ℃、30 min。

2.2 手術(shù)場(chǎng)所、輔助用具消毒

手術(shù)前將手術(shù)場(chǎng)所地面、手術(shù)臺(tái)、手術(shù)板等清潔干凈，用0.1%新潔兒滅噴灑、噴霧消毒，打開紫外線燈照射過夜。

2.3 禁食

動(dòng)物在手術(shù)麻醉前不禁飲水，禁食12～16 h。

2.4 麻醉

大鼠腹腔注射1%戊巴比妥鈉(40 mg/kg)，3～5 min后麻醉成功[20](圖1A)。

2.5 剃毛、保定

大鼠麻醉后，用剃毛刀清除腹部被毛，紗布清理殘留被毛，保證剃毛區(qū)干凈，大鼠仰臥位固定四肢和頭部于手術(shù)板上(圖1B)。

3 卵巢切除要點(diǎn)

3.1 大鼠保定與卵巢摘除

大鼠保定后，剃毛處碘伏消毒，兩指繃緊大鼠腹中部皮膚，沿腹部正中線在腹中部切2～3 cm的切口，止血鉗剝離切口處兩側(cè)皮膚(圖1C～E)。

眼科鑷提起皮膚開口處腹壁肌肉，縱向剪開2～2.5 cm開口，止血鉗分別夾住切口向兩側(cè)分離，眼科鑷緊貼腹壁內(nèi)側(cè)尋找子宮體或子宮角，動(dòng)作輕柔避免損傷腹腔其他組織臟器，子宮體或子宮角定位后順勢(shì)尋找被脂肪組織包裹呈粉紅色桑葚裝的卵巢(圖1F)。

卵巢定位后，在輸卵管下方子宮角處用可吸收縫合線結(jié)扎打結(jié)，剝離卵巢周圍脂肪后摘除卵巢，檢查卵巢是否切除干凈及術(shù)部有無出血，如有出血及時(shí)用無菌紗布按壓，順勢(shì)將子宮角和脂肪輕輕推回腹腔，采用同法摘除另一側(cè)卵巢(圖2)。

3.2 手術(shù)縫合及處理

關(guān)閉腹腔前仔細(xì)檢查是否有異物，腹腔注射1 mL 60萬U的青霉素，用可吸收縫合線縫合腹部肌肉層，創(chuàng)緣、創(chuàng)壁應(yīng)相互均勻接近對(duì)合，合理調(diào)整針間距，縫合時(shí)松緊適度，打結(jié)時(shí)適當(dāng)收緊，縫合完畢后用碘伏消毒(圖3A)。

用不可吸收縫合線縫合皮膚，縫合完畢后用眼科鑷輕輕調(diào)整縫合口，避免創(chuàng)緣內(nèi)翻而影響愈合(圖3B)。

皮膚縫合完畢后，縫合處碘伏消毒。手術(shù)結(jié)束后，解除保定并肌肉注射1 mL 60萬U的青霉素，仰臥于鼠盒內(nèi)(圖3C～D)。

4 術(shù)后護(hù)理措施

4.1 麻醉蘇醒期護(hù)理(圖4)

4.1.1保證呼吸暢通：手術(shù)結(jié)束后，大鼠在麻醉期需要一段時(shí)間方可蘇醒，蘇醒期間機(jī)體保護(hù)性反射還沒有完全恢復(fù)，容易發(fā)生嘔吐物、舌部或墊料阻塞而引起窒息死亡，為保證其呼吸道通暢，大鼠應(yīng)呈仰臥或側(cè)臥姿勢(shì)單籠飼養(yǎng)于鼠盒內(nèi)，盡量減少顆粒粉塵的吸入。

4.1.2保暖保溫：術(shù)后大鼠處于麻醉蘇醒過程，機(jī)體反應(yīng)處于抑制狀態(tài)，此時(shí)身體非常虛弱，避免出現(xiàn)低體溫休克或引發(fā)其他并發(fā)癥，需要保溫保暖，飼養(yǎng)室溫度應(yīng)保持在24～26 ℃，為大鼠提供一個(gè)較為舒適的環(huán)境。

4.1.3術(shù)部消毒：手術(shù)結(jié)束后，術(shù)部碘伏消毒，用無菌紗布沿術(shù)部、腹部包裹，仰臥后用消毒的百潔布覆蓋于體表。

4.1.4體征監(jiān)視：術(shù)后增加觀察頻率并詳細(xì)記錄，密切監(jiān)視大鼠呼吸、心跳、體溫等生命體征。

4.2 急性炎性期護(hù)理

手術(shù)的感染率與手術(shù)時(shí)無菌操作的執(zhí)行情況、清創(chuàng)是否徹底以及動(dòng)物的全身抵抗力等密切相關(guān)，同時(shí)與術(shù)后的護(hù)理情況也有很大關(guān)系，有時(shí)術(shù)后護(hù)理不良是術(shù)部感染的主要原因[21]。術(shù)后1～3 d的護(hù)理是手術(shù)成敗的關(guān)鍵，這期間創(chuàng)口進(jìn)入急性炎性期[22-23]。

4.2.1全面消毒：急性炎性期需進(jìn)行全面消毒，主要包括手術(shù)部位、飼養(yǎng)室、鼠盒籠具及墊料。術(shù)部采用碘伏消毒；飼養(yǎng)室選用0.1%新潔兒滅和84消毒液輪流交替使用；鼠盒籠具、墊料采用高壓蒸汽滅菌器消毒，每周至少更換2次。

4.2.2預(yù)防術(shù)后感染：按照臨床要求，防止術(shù)后創(chuàng)口感染和激發(fā)感染，故術(shù)后肌肉注射1 mL 60萬U的青霉素，連用3 d，抗菌消炎。

4.2.3狀態(tài)觀察及飲食護(hù)理：保證充足飲食，密切觀察動(dòng)物精神狀態(tài)、飲水、飲食及排便等情況。

4.3 創(chuàng)口恢復(fù)期護(hù)理

急性炎性期后創(chuàng)口開始進(jìn)入愈合階段，恢復(fù)期(時(shí)間段約為術(shù)后4～10 d)創(chuàng)口會(huì)有不同程度的發(fā)癢癥狀，大鼠表現(xiàn)為不斷舔咬和抓撓術(shù)部，動(dòng)物的本能活動(dòng)會(huì)延遲創(chuàng)口的愈合[24]，此時(shí)皮膚的縫合線會(huì)被大鼠自行拆除，故術(shù)部碘伏消毒持續(xù)至術(shù)后7 d即可。此時(shí)，大鼠各項(xiàng)體征和飲食情況逐步恢復(fù)正常，恢復(fù)期每日觀察動(dòng)物飲食飲水、精神及活動(dòng)等情況，飼養(yǎng)室定期消毒，鼠盒籠具及墊料定期更換，加強(qiáng)日常飼養(yǎng)管理。

5 結(jié)論

眾所周知，骨質(zhì)疏松是由各種原因?qū)е鹿墙M織結(jié)構(gòu)破壞，常見破骨細(xì)胞活性較成骨細(xì)胞活性更強(qiáng)，最終新骨形成減少而骨吸收增多[25-26]。隨著老齡化社會(huì)的來臨，骨質(zhì)疏松的發(fā)病率較高，嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量，因此，骨質(zhì)疏松越來越多的受到社會(huì)的關(guān)注。在研究人類疾病時(shí)，模型動(dòng)物和造模方法的選擇尤為重要，只有在模型與人類疾病發(fā)病機(jī)制和組織學(xué)變化相似的情況下，試驗(yàn)才有借鑒意義。因此，理想骨質(zhì)疏松試驗(yàn)動(dòng)物模型的病變過程、病理改變及轉(zhuǎn)歸都應(yīng)該與人類骨質(zhì)疏松盡可能相似[27]。

研究表明，大鼠是骨質(zhì)疏松造模最穩(wěn)定、最實(shí)用、應(yīng)用最廣泛的一種動(dòng)物模型，其中卵巢切除大鼠模型是目前公認(rèn)的研究絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松的經(jīng)典動(dòng)物模型[14,28]，此動(dòng)物模型于1969年Saville建立，后被反復(fù)證實(shí)，具有造模因素單一、模型確定、重復(fù)性好、實(shí)驗(yàn)結(jié)果可信度大、能很好的模擬絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥代謝的特點(diǎn)等優(yōu)點(diǎn)[29-34]。動(dòng)物模型是實(shí)驗(yàn)研究的基礎(chǔ)，本文從實(shí)驗(yàn)技術(shù)和動(dòng)物福利倫理角度探討了大鼠卵巢切除手術(shù)要點(diǎn)及其術(shù)后護(hù)理，為骨質(zhì)疏松動(dòng)物模型的成功建立提供了參考依據(jù)。