動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中兔的不同處死方法的統(tǒng)計(jì)分析*

李碩磊 劉繼超 張孟蕾 牛屹東

(北京大學(xué)人民醫(yī)院 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室，北京 100044)

隨著人類社會(huì)文明的發(fā)展，動(dòng)物福利越來越受到重視，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物“安樂死”也引起了廣泛關(guān)注?！鞍矘匪馈?euthanasia)一詞源于希臘文，意思是“幸福”的死亡。我國現(xiàn)有法規(guī)標(biāo)準(zhǔn)將“安樂死”稱為“安死術(shù)”，科學(xué)技術(shù)部于2006年發(fā)布的《關(guān)于善待實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的指導(dǎo)性意見》中就提出處死實(shí)驗(yàn)動(dòng)物需要用安死術(shù)[1]。安死術(shù)是指用公眾認(rèn)可的、以人道的方法處死動(dòng)物的技術(shù)。其含義是使動(dòng)物在沒有驚恐和痛苦的狀態(tài)下安靜地、無痛苦地死亡[2]。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中除了最常用到的嚙齒類動(dòng)物外還會(huì)用到大量的兔，通過已有文獻(xiàn)報(bào)道可知在實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的使用中，近些年來對(duì)嚙齒類動(dòng)物安樂死現(xiàn)狀已有相關(guān)研究分析，而對(duì)兔的安樂死現(xiàn)狀卻鮮有報(bào)道，本文對(duì)知網(wǎng)數(shù)據(jù)庫中篩選出的文獻(xiàn)進(jìn)行分析，并對(duì)國內(nèi)外幾種常用的安樂死方法進(jìn)行了介紹與對(duì)比，旨在掌握國內(nèi)近5年兔處死方法使用情況，以及“安樂死”執(zhí)行情況，為研究及管理人員提供參考。

1 材料和方法

在知網(wǎng)數(shù)據(jù)庫中，以“兔”“處死”和“兔”“安樂死”作為檢索詞對(duì)國內(nèi)2017—2021年的文獻(xiàn)進(jìn)行檢索，并按條件對(duì)檢索出的文獻(xiàn)進(jìn)行篩選，篩選條件為：文獻(xiàn)中開展了兔實(shí)驗(yàn)并將兔處死的文獻(xiàn)。本研究對(duì)符合條件的文獻(xiàn)中處死方法的使用情況、處死時(shí)是否使用麻醉以及“安樂死”執(zhí)行情況進(jìn)行了統(tǒng)計(jì)分析，統(tǒng)計(jì)分析采用 Excel軟件。

2 結(jié)果

2.1 檢索結(jié)果

按照方法中描述的檢索方法，以“兔”“處死”和“兔”“安樂死”作為檢索詞，共篩選出368篇文獻(xiàn)，符合研究條件的文獻(xiàn)有367篇，其中有學(xué)術(shù)期刊174篇，學(xué)位論文189篇，特色期刊2篇，會(huì)議1篇，圖書1篇。

2.2 處死方法

367篇文獻(xiàn)中有52篇明確提出了兔處死方法，占所有文獻(xiàn)的14.17%(52/367)。涉及空氣栓塞法、頸椎錯(cuò)位法、過量麻醉法、頸動(dòng)脈放血法和CO2窒息法等5種方法(表1)。有32篇文獻(xiàn)使用了空氣栓塞法，占61.54%(32/52)。文獻(xiàn)中描述空氣栓塞處死方法的術(shù)語有空氣栓塞法、心臟空氣栓塞法、耳緣靜脈空氣栓塞法、耳緣靜脈栓塞法和耳緣靜脈注射空氣法；有12篇文獻(xiàn)使用了過量麻醉法，占23.08%(12/52)。過量麻醉法使用麻醉藥的種類有戊巴比妥鈉，水合氯醛和速眠新，其中使用戊巴比妥鈉的有8篇(劑量為3%戊巴比妥鈉的有7篇，25%戊巴比妥鈉的有1篇)，占15.38%(8/52)，使用水合氯醛的有2篇(劑量為10%水合氯醛的有1篇，沒提到麻醉劑濃度的有1篇)，使用速眠新的有1篇，沒有提到麻醉劑的有1篇；有6篇文獻(xiàn)使用了頸椎脫臼法，占11.54%(6/52)。文中描述頸椎脫臼處死方法的術(shù)語有斷頸窒息法、頸椎錯(cuò)位法和頸椎脫臼法。頸動(dòng)脈放血法有1篇，占1.92%(1/52)。二氧化碳窒息法有1篇，占1.92%(1/52)。

2.3 符合相關(guān)法規(guī)、指南、標(biāo)準(zhǔn)推薦的安樂死方法

目前，國內(nèi)公認(rèn)的安樂死方法主要參考國科發(fā)財(cái)字[2006]398號(hào)《關(guān)于善待實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的指導(dǎo)性意見》、GB/T 39760—2021《實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 安樂死指南》、2020版《美國獸醫(yī)協(xié)會(huì) 動(dòng)物安樂死指南》。本研究使用空氣栓塞法的文獻(xiàn)有32篇，其中明確符合上述法規(guī)、指南、標(biāo)準(zhǔn)推薦的安樂死方法有1篇(非必要不使用該方法，如確實(shí)需要需麻醉后進(jìn)行)在麻醉后進(jìn)行，占空氣栓塞法的3.22%(1/32)。使用過量麻醉法處死兔的有12篇，其中明確符合上述法規(guī)、指南、標(biāo)準(zhǔn)推薦的安樂死方法有9篇(包括8篇注射戊巴比妥鈉和1篇注射速眠新)，占過量麻醉法的75%(9/12)。使用CO2窒息法的文獻(xiàn)有1篇，符合上述法規(guī)、指南、標(biāo)準(zhǔn)推薦的安樂死方法。

經(jīng)統(tǒng)計(jì)，在文獻(xiàn)撰寫中明確提及處死方法的52篇文獻(xiàn)，符合上述指南、法規(guī)、標(biāo)準(zhǔn)推薦動(dòng)物安樂死方法的文獻(xiàn)共計(jì)11篇，占21.15%(11/52)。

2.4 “安樂死”一詞的使用

在篩選出367篇較明確提出處死方法的文獻(xiàn)，其中僅有23篇文獻(xiàn)提到了“安樂死”一詞，占6.27%(23/367)。

3 討論

動(dòng)物實(shí)驗(yàn)是生命科學(xué)研究中不可或缺的研究方法，實(shí)驗(yàn)中不可避免地會(huì)對(duì)動(dòng)物產(chǎn)生傷害[3]?！鞍矘匪馈笔菍?shí)驗(yàn)動(dòng)物福利的核心之一，實(shí)驗(yàn)者應(yīng)在掌握了一定的專業(yè)技能后，在合適的時(shí)機(jī)采取恰當(dāng)?shù)姆椒▽?duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物實(shí)施“安樂死”，最大程度地降低動(dòng)物的痛苦[4]。本研究結(jié)果表明，我國科研人員的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物“安樂死”意識(shí)有所欠缺，并且在論文撰寫過程中存在動(dòng)物處死方法敘述不規(guī)范問題，本文就研究中發(fā)現(xiàn)的問題進(jìn)行討論并提出相應(yīng)建議。

3.1 “安樂死”在論文撰寫、福利倫理審查和發(fā)表審核方面被忽視

在本文調(diào)查的367篇文獻(xiàn)中，僅有52篇文獻(xiàn)明確提出了兔的處死方法，占14.17%(52/367)；23篇文獻(xiàn)提到了“安樂死”一詞，占6.27%(23/367)；11篇文獻(xiàn)使用了符合相關(guān)法規(guī)、指南、標(biāo)準(zhǔn)的安樂死方法，占21.15%(11/52)?？蒲腥藛T應(yīng)加強(qiáng)相關(guān)法律法規(guī)的學(xué)習(xí)，按法規(guī)標(biāo)準(zhǔn)、指南要求對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物實(shí)施“安樂死”，科研人員所在單位福利倫理審查機(jī)構(gòu)應(yīng)加強(qiáng)對(duì)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)開展前的福利倫理審查和指導(dǎo)，并對(duì)實(shí)驗(yàn)開始后課題所涉動(dòng)物實(shí)驗(yàn)進(jìn)行監(jiān)督、核查，學(xué)術(shù)雜志應(yīng)加強(qiáng)審核，規(guī)范論文在這方面的撰寫，促進(jìn)動(dòng)物“安樂死”的實(shí)施。

3.2 空氣栓塞法是最常用的處死方法

空氣栓塞法的具體方法是兔耳緣靜脈注射20～40 mL空氣，空氣進(jìn)入體內(nèi)靜脈，直至心臟、肺、腦等重要臟器，引起血液循環(huán)障礙，使其迅速死亡[5]。在美國獸醫(yī)協(xié)會(huì)( American Veterinary Medical Association，AVMA) 指南中指出空氣栓塞法不作為可接受的首選“安樂死”方法，在使用空氣栓塞法“安樂死”的動(dòng)物會(huì)出現(xiàn)抽搐、角弓反張、鳴叫等臨床癥狀，這很大程度上增加了動(dòng)物的痛苦，同時(shí)也會(huì)使實(shí)驗(yàn)者產(chǎn)生較大的心理壓力，如果必須使用該方法“安樂死”動(dòng)物時(shí)，必須先將動(dòng)物麻醉[6]。本調(diào)查中有32篇文獻(xiàn)選用了空氣栓塞處死法，但在麻醉狀態(tài)下處死動(dòng)物的僅有1篇，占使用空氣栓塞法的3.13%(1/32)，表明我國科研人員的“安樂死”意識(shí)較為欠缺，或?yàn)槲闹忻枋霾蛔悖部赡苌嫦舆`反動(dòng)物福利相關(guān)法規(guī)和標(biāo)準(zhǔn)?？諝馑ㄈㄒ灿幸欢ǖ膬?yōu)點(diǎn)，與過量麻醉法相比，其不會(huì)產(chǎn)生藥物殘留，避免了麻醉藥對(duì)組織和器官的傷害，但是空氣栓塞法必須在動(dòng)物麻醉后進(jìn)行，如考慮注射藥物對(duì)實(shí)驗(yàn)的影響可考慮使用氣體麻醉。

3.3 過量注射麻醉法(靜脈注射戊巴比妥鈉)是AVMA指南中首選推薦的兔安樂死方法

過量麻醉法屬于化學(xué)方法，麻醉劑種類有吸入性麻醉劑(異氟醚、氟烷、CO2等)和非吸入性麻醉劑(巴比妥類藥物等)。本調(diào)查中使用的非吸入性麻醉劑多為戊巴比妥鈉。巴比妥類藥物(以戊巴比妥鈉為主)是AVMA指南中兔安樂死的首選推薦方法，但根據(jù)本調(diào)查結(jié)果發(fā)現(xiàn)該方法僅有15.38%(8/52)的使用比例。此外，使用速眠新麻醉致死的文獻(xiàn)僅有1篇。水合氯醛作為鎮(zhèn)靜藥和抗驚厥藥物而非麻醉藥，現(xiàn)國內(nèi)外期刊已普遍不再建議使用水合氯醛進(jìn)行動(dòng)物麻醉。因此，符合安樂死方法的過量注射麻醉法僅占17.31%(9/52)。非吸入性麻醉法是指通過快速注射過量的麻醉劑，使動(dòng)物中樞神經(jīng)過度抑制而死亡，非吸入性麻醉劑有靜脈、腹腔等多種注射方法，優(yōu)先選擇靜脈注射。靜脈注射大量麻醉劑可以迅速抑制呼吸中樞和心臟跳動(dòng)，使動(dòng)物安靜地死去。兔麻醉處死一般采用耳緣靜脈注射麻醉劑，但需要經(jīng)過一定的專業(yè)訓(xùn)練才能熟練地找到血管并成功注射，并且雛兔血管較細(xì)，操作具有一定難度。靜脈注射具有難度時(shí)，可以選擇腹腔注射，但腹腔注射需要較大劑量的麻醉劑，而且動(dòng)物的疼痛和死亡時(shí)間都會(huì)有所增加[7]，所以可以在麻醉劑中加入局部麻醉藥以緩解腹腔注射帶來的痛苦[8]。

3.4 頸椎脫臼法是較常用的安樂死方法

頸椎脫臼法屬于物理方法，《實(shí)驗(yàn)動(dòng)物安樂死指南》中指出使用頸椎脫臼法的條件為：(1)其他“安樂死”方法影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果；(2)頸椎脫臼法可用于體質(zhì)量低于200 g的嚙齒類動(dòng)物、禽類，以及體質(zhì)量低于1 kg的兔。除非有特殊需求，實(shí)施頸椎脫臼前應(yīng)當(dāng)先給予動(dòng)物鎮(zhèn)定劑或吸入CO2，以減輕動(dòng)物的痛苦；(3)操作人員應(yīng)接受完整的技術(shù)訓(xùn)練，并以尸體多次練習(xí)后方可正式實(shí)施[9]。對(duì)于體質(zhì)量大于1 kg的兔，即使是技術(shù)熟練的操作者也不能保證將兔頸椎完全脫臼，這時(shí)可以借助固定動(dòng)物頭部的特殊裝置，通過拖拽后肢來完成頸椎脫臼[10]。本調(diào)查中有6篇論文使用了頸椎脫臼法處死動(dòng)物，但沒有1篇是在麻醉狀態(tài)下實(shí)施的，且根據(jù)實(shí)驗(yàn)方案可知，實(shí)驗(yàn)中涉及的兔的體質(zhì)量均超過1 kg?？梢钥闯瞿壳拔覈蒲腥藛T在涉及兔的實(shí)驗(yàn)中“安樂死”意識(shí)極為欠缺，并且可能存在操作嚴(yán)重不規(guī)范問題。

4 總結(jié)

隨著人們認(rèn)知的進(jìn)步，實(shí)驗(yàn)人員在從事生命科學(xué)研究時(shí)越來越重視動(dòng)物福利。動(dòng)物福利是社會(huì)進(jìn)步和經(jīng)濟(jì)發(fā)展到一定階段的必然產(chǎn)物，體現(xiàn)了人與動(dòng)物協(xié)調(diào)發(fā)展的趨勢(shì)[5]。從動(dòng)物種類、動(dòng)物痛苦程度、實(shí)驗(yàn)需求和成功率方面考慮，結(jié)合實(shí)際情況，選擇合適的安死術(shù)可以有效減輕動(dòng)物臨終前痛苦[11]，確保動(dòng)物的臨終福利得到保障。我國已經(jīng)出臺(tái)了《關(guān)于善待實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的指導(dǎo)性意見》、國家標(biāo)準(zhǔn)《實(shí)驗(yàn)動(dòng)物安樂死指南》等與實(shí)驗(yàn)動(dòng)物“安樂死”相關(guān)的法規(guī)和標(biāo)準(zhǔn)，但這僅是第一步，還需加強(qiáng)相應(yīng)技術(shù)的培訓(xùn)與考核，加強(qiáng)福利倫理委員會(huì)的審查與監(jiān)督，嚴(yán)格期刊雜志的投稿審核，提高科研實(shí)驗(yàn)人員動(dòng)物福利的意識(shí)，熟練掌握安樂死方法，將動(dòng)物福利落實(shí)到實(shí)處，落實(shí)在動(dòng)物“安樂死”方法這一動(dòng)物福利的核心點(diǎn)上，確保動(dòng)物實(shí)驗(yàn)?zāi)軌蚝弦?guī)、合法完成，確保實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)能夠科學(xué)有效獲得。