草莓脫毒方法研究進(jìn)展

于文華，何 川，孟祥坤，于 新，德克·西勒，宋 國(guó)，李新柱

（1.金正大生態(tài)工程集團(tuán)股份有限公司，山東 臨沂 276700；2.養(yǎng)分資源高效開發(fā)與綜合利用國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，山東 臨沂 276700；3.山東省水肥一體化工程技術(shù)研究中心，山東 臨沂 276700）

草莓種苗繁殖主要為匍匐莖進(jìn)行無性繁殖，多年無性繁殖造成病毒在草莓體內(nèi)積累，致使草莓品質(zhì)日益退化，產(chǎn)量越來越低。據(jù)調(diào)查，種苗露地常規(guī)繁殖，病毒感染率以每年20%～30%的速度遞增，造成產(chǎn)量降低20%～50%。利用草莓莖尖脫毒結(jié)合組織培養(yǎng)快繁技術(shù)培育草莓組培苗，可部分或全部脫除病毒，使品種的優(yōu)良性狀得以保持，產(chǎn)量提高。培育和應(yīng)用脫毒組培苗己成為改善草毒品質(zhì)、提高草莓產(chǎn)量的有效途徑[1]。

一、莖尖培養(yǎng)

羅靜靜等[2]，以“妙香7 號(hào)”草莓莖尖為材料進(jìn)行組織培養(yǎng)，得出組培苗的繁殖系數(shù)比自繁苗的田間繁殖系數(shù)提高了58.5%，畝產(chǎn)量增加了24.49%，草莓果實(shí)的可溶性糖含量提高了22.7%，可滴定酸含量稍徽下降，Vc 含量提高了16.76%，大大提高了草莓的產(chǎn)量和品質(zhì)。王瑋瑋等[3]采用“紅顏”草莓莖尖進(jìn)行組培，發(fā)現(xiàn)在培養(yǎng)基中加入1 g/L 活性炭可以有效抑制褐變，并且在瓶苗期促進(jìn)幼苗生長(zhǎng)增值。王峰[4]研究比較草莓莖尖得到的脫毒苗與常規(guī)苗的生長(zhǎng)狀況，發(fā)現(xiàn)脫毒苗植株相對(duì)較健壯，病蟲害發(fā)生減少，草莓產(chǎn)量和品質(zhì)也得到大大提高。趙海紅[5]以草莓匍匐莖莖尖為材料進(jìn)行脫毒苗組織培養(yǎng)，得出培養(yǎng)基中加入6-BA2.0 mg/L 和GA31.0 mg/L 時(shí)，可以有效促進(jìn)草莓脫毒苗的快速繁殖。

二、花粉培養(yǎng)

龍照春等[6]分別以草莓莖尖、花藥、幼葉等為材料進(jìn)行脫毒技術(shù)研究，得出采用草莓花藥進(jìn)行組織培養(yǎng)，脫毒率可以達(dá)到100%。其培養(yǎng)基為，愈傷組織誘導(dǎo)：LS+BA2 mg/L+NAA0.5 mg/L，誘導(dǎo)率可達(dá)92.8%；不定芽誘導(dǎo)：LS+BA 2 mg/L+NAA0.3 mg/L，分化率10%；生根培養(yǎng)：MS+BA0.2 mg/L，生根率100%。采用莖尖脫毒，當(dāng)莖尖小于0.5 mm 時(shí)，脫毒率可以達(dá)到20%。

晁慧娟等[7]以“甜查理”草莓花藥為材料，進(jìn)行72 h 低溫處理后，其愈傷組織出愈率達(dá)到70.9%，不定芽分化率達(dá)到38%。肖君澤等[8]以“章姬”草莓花藥為材料進(jìn)行組織培養(yǎng)，取材為單核期花粉，此時(shí)花藥呈淡黃色，直徑約為1 mm，花蕾直徑4 mm 左右，花瓣尚未開裂，此為培養(yǎng)愈傷組織和不定芽的較佳時(shí)期。其誘導(dǎo)愈傷組織形成和分化不定芽的較佳培養(yǎng)基均為MS+6-BA2.0 mg/L，較佳增殖培養(yǎng)基為MS+6-BA1.5 mg/L。

王敬東等[9]在草莓花藥培養(yǎng)的培養(yǎng)基中添加了TDZ，得出較佳培養(yǎng)基為MS+TDZ1.0 mg/L+NAA0.5 mg/L，草莓愈傷組織分化率高達(dá)75%。程海洋等[10]將桃熏草莓的花苞進(jìn)行滅菌，然后從花苞中剝離出花藥進(jìn)行組織培養(yǎng)，誘導(dǎo)愈傷組織的誘導(dǎo)率可達(dá)到90%以上，并且愈傷組織可以長(zhǎng)期保存。

三、根尖脫毒

錢長(zhǎng)根等[11]以草莓根尖作為材料，研究其脫毒苗的組培條件。首先將草莓進(jìn)行一段時(shí)間的熱處理，然后切取0.2 mm 根尖進(jìn)行組培，得出較適宜誘導(dǎo)培養(yǎng)基為MS+NH4NO3400 mg/L+KNO3500 mg/L+KH2PO450 mg/L+6-BA0.3～0.5 mg/L+2.4-D0.1～0.3 mg/L+水解乳蛋白1 g/L。增殖培養(yǎng)較適培養(yǎng)基為MS+NH4NO3400 mg/L+KNO3500 mg/L+KH2PO450 mg/L+6-BA0.2～0.5 mg/L+NAA0.1～0.3 mg/L+水 解 乳蛋白1 g/L。繼代培養(yǎng)的較適培養(yǎng)基為MS+NH4NO3400 mg/L+KNO3500 mg/L+KH2PO450 mg/L+6-BA0.1～0.3 mg/L+水解乳蛋白1 g/L。生根培養(yǎng)的較適培養(yǎng)基為MS+NH4NO3400 mg/L+KNO3500 mg/L+KH2PO450 mg/L+NAA 0.1～0.5 mg/L+水解乳蛋白1 g/L。

四、熱處理

李志強(qiáng)等[12]先將草莓苗進(jìn)行熱處理，然后再對(duì)莖尖進(jìn)行組織培養(yǎng)，得出以1/2MS+IBA0.1 mg/L 為生根培養(yǎng)基，生根率達(dá)到100%，珍珠巖與蛭石比例為1：1 作為基質(zhì)進(jìn)行移栽，成活率達(dá)到95%以上。顧地周等[13]將草莓苗進(jìn)行高溫處理，然后進(jìn)行莖尖組織培養(yǎng)，匍匐莖誘導(dǎo)率達(dá)到99.5%，再生苗脫毒率達(dá)到100%。趙霞等[14]將通過草莓莖尖進(jìn)行組織培養(yǎng)，得到草莓組培苗，然后將組培瓶放到38℃條件下進(jìn)行熱處理，培養(yǎng)46 天脫毒效果較佳。劉健[15]將草莓莖尖放到35～50℃之間進(jìn)行處理，發(fā)現(xiàn)在40℃條件下脫毒效果較佳，并且成活率較高。

五、超低溫脫毒

近年來有科學(xué)家發(fā)現(xiàn)，利用傳統(tǒng)方法對(duì)草莓輕型黃邊病毒進(jìn)行脫毒效果不佳，但經(jīng)過超低溫處理后，脫毒率可達(dá)到95%。竇炎丹[16]將草莓莖尖接種到培養(yǎng)基上，先在4℃條件下進(jìn)行培養(yǎng)，然后經(jīng)過冷凍保護(hù)脫水劑處理，再進(jìn)行液氮速凍，最后在40℃水浴鍋中進(jìn)行復(fù)蘇，發(fā)現(xiàn)經(jīng)過超低溫處理后，既可以提高草莓苗脫毒率，也可以提高成活率。陳曦等[17]將草莓莖尖經(jīng)過超低溫冷凍處理后，發(fā)現(xiàn)脫毒率可以達(dá)到100%。邱靜[18]以紅顏草莓莖尖為材料進(jìn)行超低溫脫毒處理，發(fā)現(xiàn)經(jīng)過處理后的草莓苗的4 種主要病毒（鑲脈病毒、輕型黃邊病毒、皺縮病毒和斑駁病毒）脫毒率可以達(dá)到100%。

六、結(jié)語

隨著草莓種植面積不斷擴(kuò)大，草莓品種越來越多，通過組織培養(yǎng)生產(chǎn)無毒草莓苗已經(jīng)是脫毒草莓生產(chǎn)的主要措施?，F(xiàn)在，研究草莓脫毒較佳方式的科技人員越來越多，并取得了一定成果。但生產(chǎn)上通過組培方式獲得脫毒草莓苗成本較高，以后還需不斷探索操作簡(jiǎn)單、成本低的脫毒育苗方法。