豬繁殖與呼吸綜合征病毒NSP4研究進(jìn)展

沙惠陽(yáng)，張 航，黃良宗，馬春全，趙孟孟

(佛山科學(xué)技術(shù)學(xué)院生命科學(xué)與工程學(xué)院，廣東佛山 528231)

豬繁殖與呼吸綜合征(Porcine reproductive and respiratory syndrome，PRRS)是由豬繁殖與呼吸綜合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus，PRRSV)感染引起的一種高度接觸性傳染病。PRRS俗稱(chēng)豬藍(lán)耳病，由于PRRSV入侵會(huì)降低生豬免疫力，常伴隨混合感染而使疾病很難得到有效防控。1987年該病首次在美國(guó)報(bào)道，1990年荷蘭成功分離PRRSV并命名Lelystad virus(LV)株，1991年在美洲分離出VR2332株，2種PRRSV基因組序列差異較大并分別命名為歐洲株基因Ⅰ型和美洲株基因Ⅱ型。1996年中國(guó)首次成功分離到PRRSV[1]，命名為CH-1a。劉光清[2]等對(duì)PRRSV CH-1a株ORF1進(jìn)行測(cè)序分析，結(jié)果表明ORF1全長(zhǎng)11882 bp，與LV株同源性較低，與VR2332株同源性較高。2006年中國(guó)暴發(fā)以高致病性豬繁殖與呼吸綜合征病毒(HP-PRRSV)為主要病原的“高熱癥”[3]，HP-PRRSV成為中國(guó)具有更高致病力流行株，2015年以后NADC-30 like毒株為流行毒株[4]，給中國(guó)養(yǎng)豬業(yè)造成更嚴(yán)重?fù)p失。目前一直沒(méi)有針對(duì)該病毒的有效藥物，疫苗的效果也有限，不斷重組與變異的PRRSV使得PRRS防控形勢(shì)更加嚴(yán)峻。

PRRSV是一種不分節(jié)段、有囊膜單股正鏈RNA病毒，核衣殼外圍包被脂質(zhì)雙層膜，對(duì)一些脂類(lèi)溶劑如乙醚、氯仿敏感，這些物質(zhì)會(huì)溶解脂質(zhì)雙層膜而使病毒失活。PRRSV 基因組包括10個(gè)開(kāi)放閱讀框(open reading fame，ORF)。ORF1a和ORF1b占據(jù)整個(gè)PRRSV基因組3/4，翻譯形成2個(gè)多聚蛋白pp1a和pp1ab。pp1a和pp1ab可被NSP4水解成13個(gè)非結(jié)構(gòu)蛋白，即NSP lα、NSP lβ及NSP2～NSP12，PRRSV基因組編碼8個(gè)結(jié)構(gòu)蛋白GP2a、E、GP3、GP4、GP5、GP5a、M、N。

NSP4具有3C樣絲氨酸蛋白酶(3CLSP)活性，最適溫度為8℃，最適pH為7.5，該酶能夠適應(yīng)高濃度Na+環(huán)境，對(duì)二價(jià)金屬離子(Zn2+、Cu2+)具有較高敏感性且蛋白酶抑制劑乙二胺四乙酸(EDTA)和苯甲基磺酰氟(PMSF)能抑制NSP4 3CLSP活性。NSP4可通過(guò)鉸鏈區(qū)(hinge region)信號(hào)作用主動(dòng)進(jìn)入細(xì)胞核，因此細(xì)胞核存在大量NSP4而細(xì)胞漿少量存在，鉸鏈區(qū)145-168位氨基酸可影響NSP4核定位。很多病毒與宿主相互作用過(guò)程中通過(guò)抑制IFN逃避宿主免疫反應(yīng)，其中PRRSV NSP4能抑制IFN-I產(chǎn)生，且該抑制作用與3CLSP 活性密切相關(guān)。PRRSV 3CLSP晶體結(jié)構(gòu)由3部分組成，2個(gè)反向平行β折疊桶(結(jié)構(gòu)域Ⅰ和結(jié)構(gòu)域Ⅱ)和1個(gè)C末端α/β結(jié)構(gòu)域(結(jié)構(gòu)域Ⅲ)。NSP4 3CLSP活性區(qū)域位于結(jié)構(gòu)域Ⅰ和結(jié)構(gòu)域Ⅱ之間，第39位組氨酸(His)、第64位天冬氨酸(Asp)和第118位絲氨酸(Ser)構(gòu)成His-Asp-Ser 催化三聯(lián)體，是NSP4發(fā)揮3CLSP活性重要氨基酸位點(diǎn)，這3個(gè)氨基酸突變會(huì)使3CLSP喪失蛋白酶活性[5]。NSP4 3CLSP參與誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡反應(yīng)，可以作為一種重要靶蛋白揭示PRRSV復(fù)制機(jī)理。NSP4在PRRSV復(fù)制早期出現(xiàn)，PRRSV感染早期可在宿主體內(nèi)檢測(cè)到NSP4抗體[6]。對(duì)NSP4功能進(jìn)一步解析，將有助于探索PRRSV免疫逃逸與持續(xù)感染，為防控PRRS提供理論基礎(chǔ)。作者對(duì)NSP4遺傳變異、對(duì)病毒復(fù)制影響、誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡、調(diào)節(jié)宿主免疫、調(diào)控抗病毒反應(yīng)、與宿主相互作用、在PRRSV檢測(cè)方面進(jìn)行綜述，為疫苗設(shè)計(jì)與開(kāi)發(fā)藥物提供理論參考。

1 NSP4遺傳變異分析

NSP4基因高度保守，董建國(guó)[7]通過(guò)對(duì)HP-PRRSV HuN4株與PRRSV CH-1a株NSP4氨基酸序列進(jìn)行比對(duì)，發(fā)現(xiàn)高致病性HuN4株和CH-1a株NSP4 氨基酸(aa)相似性高達(dá)96.5%，僅在7個(gè)aa位點(diǎn)存在差異，CH-1a株的第6、76、80、154、178、185、186位的氨基酸分別為精氨酸(Arg)、丙氨酸(Ala)、蘇氨酸(Thr)、纈氨酸(Val)、纈氨酸(Val)、纈氨酸(Val)、異亮氨酸(Ile)，而HuN4株則分別為蘇氨酸(Thr)、纈氨酸(Val)、丙氨酸(Ala)、賴(lài)氨酸(Lys)、異亮氨酸(Ile)、天冬氨酸(Asp)、蘇氨酸(Thr)。此外，NSP4催化三聯(lián)體His39-Asp64-Ser118序列保守性高，未發(fā)生突變。其中PRRSV NSP4第185位天冬氨酸(Asp)發(fā)生突變，影響NSP4切割核轉(zhuǎn)錄因子(NF-κB)必要調(diào)節(jié)蛋白(NEMO)和MAVS的能力，從而調(diào)控IFN-Ⅰ表達(dá)[8]。其他氨基酸突變是否對(duì)空間構(gòu)象造成影響，該影響是否與病毒毒力、細(xì)胞噬性相關(guān)，還需進(jìn)一步試驗(yàn)驗(yàn)證。Wang[9]等發(fā)現(xiàn)NADC30-like株與國(guó)內(nèi)流行疫苗株在NSP4發(fā)生重組，是否影響疫苗效果還需進(jìn)一步研究。

2 NSP4對(duì)病毒復(fù)制影響

在非結(jié)構(gòu)蛋白前體多聚蛋白pp1a和pp1ab加工過(guò)程中，NSP4作為一種重要的復(fù)制和轉(zhuǎn)錄酶，切割PRRSV增殖過(guò)程中的多聚蛋白，并且NSP4負(fù)責(zé)NSP3～NSP12切割。Tian[10]等通過(guò)人工合成10條多肽并以之為底物(含NSP4預(yù)測(cè)切割位點(diǎn))，通過(guò)“多肽底物-反相高效液相色譜”方法體外測(cè)定蛋白酶活性，發(fā)現(xiàn)NSP4可順式切割NSP4-NSP5，Tian[6]等證實(shí)NSP4可反式切割NSP3-NSP4和NSP11-NSP12，NSP4不能在體外切割NSP8-NSP9[11]。董建國(guó)[7]利用大腸埃希氏菌表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)并純化PRRSV HuN4株和CH-1a株NSP4重組蛋白，建立體外測(cè)定NSP4酶動(dòng)力學(xué)方法，以及PRRSV NSP4熒光定量PCR方法，結(jié)果表明CH-1a NSP4體外切割NSP11-NSP12效率高于HuN4株，但HuN4株NSP4基因轉(zhuǎn)錄水平高于CH-1a株，導(dǎo)致整體上HuN4 NSP4酶催化效率高于CH-1a株，進(jìn)而快速切割NSP11-NSP12。NSP11可抑制IFN-β產(chǎn)生和宿主先天性免疫，有利于PRRSV增殖，使得相同時(shí)間內(nèi) HuN4株病毒粒子生成數(shù)量多于CH-1a株。Liu[12]等從含駱駝重鏈抗體可變區(qū)噬菌體展示文庫(kù)中分離出3個(gè)PRRSV NSP4特異性納米抗體(Nb41、Nb42、Nb43)，利用慢病毒載體將納米抗體基因?qū)隡arc-145細(xì)胞，測(cè)試這些細(xì)胞內(nèi)表達(dá)的納米抗體與PRRSV NSP4是否互作。結(jié)果表明，Nb42識(shí)別NSP4非功能表位，Nb41和Nb43通過(guò)識(shí)別NSP4功能表位抑制PRRSV復(fù)制 ，并在0.001感染復(fù)數(shù)(MOI)或更低感染復(fù)數(shù)下完全阻斷PRRSV復(fù)制。

3 NSP4誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡

在PRRSV所有結(jié)構(gòu)和非結(jié)構(gòu)蛋白中，NSP4作為最主要凋亡誘導(dǎo)蛋白，一方面可激活促凋亡蛋白Bim，另一方面能夠降解抗凋亡蛋白Bcl-xL，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，凋亡與其3CLSP密切相關(guān)[13]。在凋亡過(guò)程中，NSP4發(fā)揮生物學(xué)功能需要宿主細(xì)胞蛋白參與，NSP4可以與細(xì)胞色素C1(cyto.c1)蛋白互作。NSP4和cyto.c1能在細(xì)胞質(zhì)中共定位，NSP4剪切cyto.c1蛋白具有劑量依賴(lài)性特點(diǎn)，而且NSP4任一酶活性氨基酸位點(diǎn)突變均喪失剪切cyto.c1蛋白能力，cyto.c1蛋白E230aa-G231aa是決定NSP4能否切割cyto.c1蛋白關(guān)鍵位點(diǎn)[14]。

4 NSP4調(diào)節(jié)宿主免疫

NSP4在調(diào)節(jié)宿主免疫方面發(fā)揮極其重要的作用。NF-κB必要調(diào)節(jié)蛋白NEMO是誘導(dǎo)IFN產(chǎn)生的關(guān)鍵蛋白，仙臺(tái)病毒(SEV)作用于NEMO缺陷型小鼠胚胎成纖維細(xì)胞(MEF)時(shí)，MEF由于缺失NEMO使干擾素調(diào)節(jié)因子3(IRF3)磷酸化過(guò)程受阻，導(dǎo)致IFN-β產(chǎn)生受到抑制。PRRSV感染豬肺泡巨噬細(xì)胞(PAM)可抑制IFN-β表達(dá)，該抑制作用通過(guò)NSP4切割NEMO途徑實(shí)現(xiàn)。NSP4在細(xì)胞質(zhì)多個(gè)位點(diǎn)與NEMO特異性的相互作用。Chen J Y等研究表明將PRRSV NSP4 第64位的D突變?yōu)锳后，發(fā)現(xiàn)野生型NSP4(NSP-WT)能夠切割宿主蛋白NEMO，而酶活性缺失體不能切割NEMO，得出該切割作用與NSP4酶活性有關(guān)，酶活性缺失體不能抑制IFN-β表達(dá)[15]。

線(xiàn)粒體定位抗病毒蛋白(MAVS也稱(chēng)IPS-1、VISA或CARDIF)，缺失會(huì)減弱機(jī)體對(duì)IFN-β的誘導(dǎo)作用。不同PRRSV對(duì)IFN-β抑制作用不同，黃琛[16]在PAM驗(yàn)證出HP-PRRSV NSP4比傳統(tǒng)株CH-1a NSP4對(duì)IFN-β抑制作用更強(qiáng)，HP-PRRSV感染明顯下調(diào)VISA蛋白水平，但 CH-1a對(duì)VISA表達(dá)沒(méi)有作用。HP-PRRSV NSP4能夠切割維甲酸誘導(dǎo)基因-I(RIG-I)/黑色素瘤相關(guān)基因5(MDA5)信號(hào)通路中重要接頭分子MAVS及NEMO，NSP4能夠同時(shí)抑制IRF3磷酸化和NF-κB活化。HP-PRRSV NSP4切割MAVS及抑制IFN-β的產(chǎn)生依賴(lài)其3CLSP活性，與蛋白酶體和細(xì)胞凋亡途徑無(wú)關(guān)。HP-PRRSV NSP4切割接頭分子MAVS的位點(diǎn)位于MAVS第268位谷氨酸(Gln)，切割之后形成兩個(gè)片段，使得MAVS喪失誘導(dǎo)IFN-β能力。

NSP4抑制IκB激酶復(fù)合體α(IκB kinase α，IκKα)對(duì)IFN-β的誘導(dǎo)表達(dá)。PRRSV NSP4作為一個(gè)絲氨酸蛋白酶與IκKα相互作用，在IκKα兩端特異切割I(lǐng)κKα，NSP4蛋白酶活性在抑制IκKα激活NF-κB通路和IFN-β啟動(dòng)子活性中發(fā)揮關(guān)鍵作用，其N(xiāo)SP4保守氨基酸序列His39-Asp64-Ser118催化三聯(lián)體任一位點(diǎn)發(fā)生氨基酸突變都會(huì)影響對(duì)IκKα切割，該結(jié)果有助于揭示PRRSV逃逸宿主天然免疫機(jī)制[17]。

NSP4切割信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)及轉(zhuǎn)錄激活酶2(STAT2)抑制IFN-β表達(dá)。PRRSV NSP4蛋白在拮抗JAK-STAT信號(hào)通路中發(fā)揮重要作用，PRRSV NSP4蛋白依賴(lài)其自身絲氨酸蛋白酶活性切割JAK-STAT信號(hào)通路中重要信號(hào)分子STAT2。在JAK-STAT信號(hào)通路傳遞途徑中，STAT2與STAT1結(jié)合形成異源二聚體，NSP4切割STAT2致使異源二聚體缺乏，干擾素刺激基因因子3(ISGF3)復(fù)合體不能與干擾素刺激元件ISRE結(jié)合，拮抗IFN-β生成，同時(shí)鑒定出NSP4切割STAT2位點(diǎn)是E719[18]。

NSP4可通過(guò)多種途徑切割多個(gè)信號(hào)分子來(lái)實(shí)現(xiàn)對(duì)IFN-β的調(diào)控，相關(guān)研究表明NSP4氨基酸突變對(duì)NSP4誘導(dǎo)IFN-β產(chǎn)生影響。NSP4在細(xì)胞核抑制IFN-β產(chǎn)生，NSP4第155位蘇氨酸(Thr)被賴(lài)氨酸(Lys)取代可以增加NSP4在細(xì)胞核中的分布，從而抑制IFN-β體外轉(zhuǎn)錄[19]。HP-PRRSV NSP4第185位天冬氨酸(Asp)發(fā)生突變，會(huì)使NSP4切割NF-κB必要調(diào)節(jié)蛋白(NEMO)和MAVS能力受損，從而拮抗IFN-β產(chǎn)生[8]。

丁國(guó)飛[20]等通過(guò)NSP4蛋白質(zhì)組學(xué)方法篩選到包括轉(zhuǎn)綠因子Snf2相關(guān)CBP激活蛋白(SRCAP)在內(nèi)的42個(gè)可能與NSP4互作細(xì)胞蛋白，進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)PRRSV感染細(xì)胞后，NSP4與SRCAP互作激活Notch信號(hào)通路，從而促進(jìn)PRRSV的增殖與復(fù)制，揭示了一種全新PRRSV感染機(jī)制。

巨噬細(xì)胞清道夫受體A(SRA又稱(chēng)CD204)，可以幫助吞噬細(xì)胞識(shí)別致病菌。有報(bào)道PRRSV侵入機(jī)體后，NSP4可通過(guò)直接與SRA啟動(dòng)子-84到-214區(qū)域結(jié)合抑制SRA基因轉(zhuǎn)錄，幫助PRRSV逃逸宿主免疫反應(yīng)。通過(guò)與紫外線(xiàn)(UV)滅活的 PRRSV 比較，未滅活的PRRSV感染抑制 SRA轉(zhuǎn)錄，紫外線(xiàn)UV滅活的PRRSV不能抑制SRA轉(zhuǎn)錄，NSP4調(diào)控 SRA轉(zhuǎn)錄與PRRSV復(fù)制有關(guān)[21]。

豬感染HP-PRRSV會(huì)阻滯豬白細(xì)胞抗原Ⅰ類(lèi)(SLA-Ⅰ)抗原呈遞途徑。HP-PRRSV感染抑制β2微球蛋白(β2M)的表達(dá)，β2M與SLA-I重鏈和可變肽形成異源三聚體復(fù)合物，在SLA-Ⅰ抗原呈遞過(guò)程中發(fā)揮著關(guān)鍵作用[22]。NSP4外源性表達(dá)在mRNA和蛋白質(zhì)水平下調(diào)β2M的表達(dá)，并降低細(xì)胞表面SLA-Ⅰ表達(dá)。

5 NSP4調(diào)控抗病毒反應(yīng)

PRRSV感染Marc-145細(xì)胞顯著下調(diào)外源性鋅指抗病毒蛋白(ZAP)表達(dá)，NSP4利用3CLSP切割ZAP，從而拮抗ZAP抗病毒作用，NSP4第180位絲氨酸(Ser)是降解ZAP所必需，180位氨基酸突變下調(diào)PRRSV降解ZAP能力，從而拮抗其抗病毒作用[23]。楊玉婷[24]通過(guò)Western blot發(fā)現(xiàn)NSP4在E411位點(diǎn)切割ZAP的能力與NSP4含量呈正相關(guān)，自噬溶酶體途徑和泛素-蛋白酶體途徑不影響NSP4切割ZAP，NSP4酶活突變體喪失對(duì)ZAP切割能力，NSP4切割ZAP依賴(lài)3CLSP。mRNA脫帽酶1a(DCP1a)是一種免疫調(diào)節(jié)因子，參與從真核mRNA中去除5′-甲基鳥(niǎo)苷帽，被鑒定為干擾素刺激基因，NSP4也可切割豬mRNA脫帽酶1a(pDCP1a)。PRRSV感染不影響pDCP1a mRNA轉(zhuǎn)錄和亞細(xì)胞定位，通過(guò)切割pDCP1a顯著下調(diào)pDCP1a的表達(dá)，從而致弱pDCP1a抗病毒活性，切割位點(diǎn)位于pDCP1a第238位谷氨酸(E238)[25]。

6 NSP4與宿主相互作用

豬核糖核酸酶L(sRNase L)是一種干擾素誘導(dǎo)產(chǎn)生的抗病毒蛋白，sRNase L激活后參與一系列機(jī)體免疫反應(yīng)，抑制PRRSV在宿主細(xì)胞增殖。張梅潔[26]通過(guò)構(gòu)建熒光素酶活性試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)與sRNase L互作的PRRSV蛋白是NSP4、NSP12和N，且在細(xì)胞內(nèi)共定位。尹曼曼[27]篩選PAM cDNA文庫(kù)中與NSP4相互作用的宿主蛋白，發(fā)現(xiàn)豬免疫球蛋白lambda輕鏈相似肽5(sIGLL5)與NSP4互作，NSP4和sIGLL5在HEK-293細(xì)胞共定位。PRRSV感染過(guò)程中，NSP4可通過(guò)與TRIM蛋白家族成員TRIM28互作，介導(dǎo)部分TRIM28以核轉(zhuǎn)錄蛋白CRM1依賴(lài)方式從細(xì)胞核轉(zhuǎn)移至細(xì)胞漿中。出核TRIM28作為E3泛素連接酶，使早期自噬調(diào)控分子Vps34發(fā)生類(lèi)泛素蛋白修飾，增強(qiáng)Vps34和自噬關(guān)鍵調(diào)控蛋白復(fù)合物Beclin1互作，進(jìn)而調(diào)控細(xì)胞自噬體形成[28]。該研究揭示了PRRSV誘導(dǎo)細(xì)胞自噬的新分子機(jī)制，從蛋白翻譯后修飾角度闡明了PRRSV與宿主細(xì)胞的互作機(jī)制。RBM39(RNA binding motif protein 39)通過(guò)與NSP4互作調(diào)節(jié)c-Jun磷酸化，進(jìn)而促進(jìn)PRRSV感染[29]。此外NSP4可與F-action和myosin ⅡA互作，完成PRRSV在細(xì)胞之間的傳遞與感染[30]。

7 NSP4在PRRSV檢測(cè)方面應(yīng)用

NSP4在病毒復(fù)制早期出現(xiàn)，并切割其他非結(jié)構(gòu)蛋白，在PRRSV復(fù)制周期中存在較長(zhǎng)時(shí)間，機(jī)體感染早期可檢測(cè)到NSP4抗體，可用于檢測(cè)PRRSV早期感染。同時(shí)，NSP4主要是在病毒復(fù)制過(guò)程中產(chǎn)生，用NSP4作為診斷抗原檢測(cè)NSP4抗體可區(qū)分自然感染與滅活疫苗免疫接種。Brown E[31]等克隆表達(dá)VR2332株NSP1、NSP2、NSP4、NSP7和NSP8，并且以這些蛋白作為包被蛋白分別建立ELISA方法，結(jié)果表明NSP2 ELISA和NSP7 ELISA檢測(cè)效果最好，NSP4 ELISA與待檢血清反應(yīng)弱于前兩者。劉磊[32]等以NSP4重組蛋白作為包被抗原，建立了NSP4抗體ELISA檢測(cè)方法，并與愛(ài)德士IDEXX ELISA檢測(cè)結(jié)果對(duì)比，總符合率為93.19%，結(jié)果說(shuō)明PRRSV NSP4是具有良好潛力的候選蛋白。Cao[33]等開(kāi)發(fā)NSP4蛋白包被間接ELISA(NSP4涂層iELISA)，并將其效果與N涂層iELISA進(jìn)行了比較，結(jié)果表明NSP4涂層和N涂層iELISAs之間一致性為92.2%。此外，檢測(cè)了50份接種HP-PRRSV豬血清樣本，用NSP4包被iELISA檢測(cè)出PRRS抗體陽(yáng)性，但N包被iELISA檢測(cè)結(jié)果陰性，Western blot分析結(jié)果與NSP4包被和NSP2包被iELISA分析結(jié)果一致性分別為92%和96.1%。結(jié)果表明大部分采集自接種活HP-PRRSV菌株的豬血清樣本，其N(xiāo)包被iELISA檢測(cè)結(jié)果陰性，NSP4包被iELISA檢測(cè)結(jié)果陽(yáng)性，因此使用NSP4包被iELISA可以幫助區(qū)分HP-PRRSV疫苗的假陰性和真陰性反應(yīng)。

8 小結(jié)

PRRSVNSP4參與多種免疫抑制反應(yīng)，NSP4具有3CLSP活性，在PRRSV復(fù)制、抑制宿主IFN-β產(chǎn)生、誘導(dǎo)宿主細(xì)胞凋亡以及在PRRSV檢測(cè)等方面具有重要作用[9,34]。PRRSV NSP4基因保守性較高，不同PRRSV之間氨基酸相似性高，根據(jù)這一特性未來(lái)可開(kāi)發(fā)出針對(duì)PRRSV 的高效新型檢測(cè)試劑與檢測(cè)方法。

PRRSV作為一種免疫抑制性病毒，進(jìn)化出多種策略逃逸宿主抗病毒天然免疫反應(yīng)。PRRSV除了能抑制IFN-β產(chǎn)生，還可靶向干擾素誘導(dǎo)基因(ISGs)拮抗宿主抗病毒反應(yīng)。研究病毒如何逃逸宿主免疫有助于深入解析宿主免疫反應(yīng)調(diào)控機(jī)制。作為PRRSV編碼的一種重要蛋白酶，NSP4在拮抗宿主天然免疫反應(yīng)中發(fā)揮重要作用，NSP4除拮抗IFN-Ⅰ信號(hào)通路，還可激活Notch信號(hào)通路、調(diào)控抗原呈遞途徑、參與誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡等方面協(xié)助病毒逃逸宿主免疫應(yīng)答。NSP4與多種宿主蛋白互作，NSP4具有切割宿主蛋白的作用，這可能成為PRRSV 逃逸宿主免疫反應(yīng)的主要機(jī)制之一。深入研究PRRSV NSP4調(diào)節(jié)宿主免疫反應(yīng)機(jī)制有助于深入了解PRRSV致病機(jī)理并確定其毒力因子，以此為前提可為弱化PRRSV、開(kāi)發(fā)有效疫苗提供新靶點(diǎn)和理論基礎(chǔ)。

PRRSV NSP4作為主要蛋白酶之一，在病毒增殖中發(fā)揮重要作用，3C樣絲氨酸蛋白酶特征成為藥物設(shè)計(jì)重要靶點(diǎn)[17,19]。納米抗體作為治療PRRSV感染的新型抗病毒藥物，有巨大發(fā)展?jié)摿?。Shi[35]團(tuán)隊(duì)開(kāi)展靶向NSP4抗病毒藥物篩選，得到2種抑制效果顯著的抗病毒候選藥物。迄今為止，PRRSV仍在全球流行，對(duì)養(yǎng)殖業(yè)危害巨大，有效防控PRRSV仍是世界性難題，研究PRRSV分子致病機(jī)制可為預(yù)防與控制該病提供科學(xué)依據(jù)。