非洲馬瘟診斷與防治研究進(jìn)展

杭柏林,鄧麗,劉保國,潘豪,彎夢遼

（1.河南科技學(xué)院動物科技學(xué)院,河南 新鄉(xiāng) 453003;2.揚(yáng)州大學(xué)獸醫(yī)學(xué)院/教育部禽類預(yù)防醫(yī)學(xué)重點(diǎn)實驗室/江蘇省動物預(yù)防醫(yī)學(xué)重點(diǎn)實驗室,江蘇 揚(yáng)州 225009）

非洲馬瘟（African horse sickness,AHS)是由非洲馬瘟病毒（African horse sickness virus,AHSV）引起的一種高致死性傳染病[1],被世界動物衛(wèi)生組織（OIE）列為法定必須報告的動物疫病,被我國列為一類動物疫病和需要重點(diǎn)防范的外來動物疫病.非洲馬瘟主要分布在非洲大陸[2-3],非洲以外的地區(qū)或國家（如近東、中東、西班牙[4]、葡萄牙[5]）也曾有流行.目前,貿(mào)易全球化、交通便捷化、國際國內(nèi)馬術(shù)與賽馬的比賽增多、馬胚胎資源流動、馬匹的非法走私、氣候變暖導(dǎo)致媒介昆蟲分布改變等諸多因素使得非洲馬瘟病毒的傳播風(fēng)險不斷加大,一旦爆發(fā)將造成重大經(jīng)濟(jì)損失.因此,世界各國高度關(guān)注非洲馬瘟等外來動物疫病.

雖然我國是OIE 認(rèn)可的非洲馬瘟歷史無疫國,到目前為止還沒有發(fā)生非洲馬瘟,但是東南亞的多個國家（如泰國[6]、印度[7]、馬來西亞[8]）曾發(fā)生非洲馬瘟.我國云南地區(qū)與泰國接壤,滇馬等馬群的數(shù)量較多,同時該地區(qū)溫暖潮濕,有利于媒介昆蟲如庫蠓等的生存[8].因此,我國面臨著非洲馬瘟傳入的風(fēng)險,必須密切關(guān)注非洲馬瘟.

充分掌握非洲馬瘟診斷與防治的相關(guān)知識對防控非洲馬瘟具有關(guān)鍵作用,對保護(hù)我國馬相關(guān)產(chǎn)業(yè)具有重要意義.為此,本文通過對非洲馬瘟的診斷與防治方面進(jìn)行綜述,希望為我國非洲馬瘟的防控與科學(xué)研究提高幫助.

1 非洲馬瘟病毒概述

非洲馬瘟病毒（AHSV）是呼腸孤病毒科（Reoviridae）環(huán)狀病毒屬（Orbivirus）的成員[9].AHSV 的基因組為雙鏈RNA（dsRNA）,有10 個片段（大片段為L1～L3,中等片段為M4～M6,小片段為S7～S10）,其中7個片段分別編碼7 個結(jié)構(gòu)蛋白（VP1～VP7）,3 個片段（M5、S8 和S10）編碼4 個非結(jié)構(gòu)蛋白（NS1、NS2、NS3、NS3A）,S10 片段編碼兩個最小的蛋白NS3 和NS3A[10].AHSV 粒子的直徑大約為75 nm,表面無囊膜,衣殼為20 面體對稱.AHSV 粒子的衣殼分為兩層,外殼由VP2 和VP5 構(gòu)成,當(dāng)病毒入侵細(xì)胞通過細(xì)胞膜時被脫掉;內(nèi)殼由主要蛋白（VP3 和VP7）和微量蛋白（VP1、VP4 和VP6）構(gòu)成,微量蛋白組成病毒轉(zhuǎn)錄復(fù)合體[11-13].

VP2 蛋白的變異性最大,有15 個抗原位點(diǎn),是主要的血清型特異性抗原,能與中和抗體發(fā)生反應(yīng),與VP5 蛋白一起能被中和抗體識別.當(dāng)VP2 蛋白缺乏時,VP5 蛋白也能誘導(dǎo)產(chǎn)生一定程度的中和抗體.VP3蛋白也高度保守.VP6 蛋白被認(rèn)為是病毒dsRNA 的解旋酶[14-21].VP7 蛋白高度保守,是群特異性抗原,其對應(yīng)的基因片段常作為群特異性鑒定靶點(diǎn),VP7 蛋白免疫后有很好的保護(hù)作用[22-23].在感染細(xì)胞中,至少有3 種非結(jié)構(gòu)蛋白（NS1、NS2、NS3/NS3A）,NS1 蛋白形成病毒特異的微管結(jié)構(gòu).NS3 蛋白的變異性僅次于VP2,可分為3 個系統(tǒng)進(jìn)化群（ɑ、β 和γ）[12].

AHSV 有9 個血清型,毒力強(qiáng)弱有差異,部分型之間有交叉反應(yīng),如5 型與8 型、6 型與9 型、1 型與2型、3 型與7 型,但不能完全交叉保護(hù).動物康復(fù)后對相應(yīng)血清型的AHSV 有很好的免疫力.AHSV 主要在肺、脾、淋巴結(jié)中復(fù)制,病毒數(shù)量最高[24-25].AHSV 存在于體液（血液、滲出液、組織液等）中,紅細(xì)胞上最多.AHSV 有血凝活性,在pH 值為6.4 和37 ℃的條件下作用2 h 可凝集馬的紅細(xì)胞[19].

AHSV 對乙醚、氯仿、去氧膽酸鈉、胰蛋白酶有一定的抵抗力,經(jīng)質(zhì)量分?jǐn)?shù)0.1%福爾馬林作用48 h被滅活,能被質(zhì)量濃度為4 mg/L β- 丙內(nèi)酯和乙醚滅活[26-27].AHSV 對酸較為敏感,在pH 值為3.0 時迅速死亡,pH 值小于6.0 時易被滅活,在pH 值為6.0～10.0 之間相對穩(wěn)定.AHSV 不耐高溫,經(jīng)50 ℃3 h、60 ℃30 min 即失活,在-50 ℃～-20 ℃條件下極易失活,但在室溫、4 ℃、-70 ℃或凍干條件下能存活多年,復(fù)蘇后仍有較高活性.AHSV 在血液或血清中可長期存活,在尸體（即使尸體腐敗）中也能存活較長時間[19，28].

2 非洲馬瘟診斷

我國有《非洲馬瘟診斷技術(shù)》（GB/T 21675-2008）和《非洲馬瘟檢疫技術(shù)規(guī)范》（SNT 2856-2011）等行業(yè)標(biāo)準(zhǔn),但這些標(biāo)準(zhǔn)多年未修訂,新的診斷技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)還未被采用.

2.1 流行病學(xué)診斷

非洲馬瘟的傳染源主要是感染AHSV 的馬屬動物,在內(nèi)臟、血液、精液、尿液等中均含病毒[19,29].

非洲馬瘟是一種非接觸性的蟲媒性疫病,主要通過媒介昆蟲如庫蠓、蟄蠅、伊蚊和庫蚊等叮咬吸血而在易感動物間傳播,其中擬紋庫蠓為主要媒介[19,30],另一種庫蠓（Culicoides bolitinos）也能傳播AHSV[31].我國有超過300 種庫蠓屬昆蟲,為非洲馬瘟的發(fā)生提供了必要條件[26].在某些蜱蟲體內(nèi)也能分離到AHSV[32].在風(fēng)的作用下,帶病毒的庫蠓在水上能移動700 km、在陸地能移動150 km,從而導(dǎo)致長距離傳播[29,33].

AHSV 感染所有馬屬動物,以馬（特別是幼齡馬）最易感,病死率高達(dá)95%[11],騾和驢的易感性較差,斑馬感染后通常無癥狀,成為自然貯存宿主,可傳播病原[19,30].猴子感染AHSV 后不出現(xiàn)典型癥狀[25].因接觸到帶AHSV 的馬肉或馬血,駱駝、大象、狗也可能被感染[19],也可能是媒介昆蟲叮咬狗而導(dǎo)致傳播[34].狗常為急性致命感染,為終端宿主[33].在單峰駝、非洲象、黑犀牛、白犀牛、綿羊、山羊[35]中也檢測到AHSV的抗體[29，35].

非洲馬瘟的發(fā)生與流行具有明顯的季節(jié)性,常呈地方性流行或暴發(fā)流行,在溫暖潮濕季節(jié)多發(fā)[19].影響媒介昆蟲的因素（如地勢高、干燥、自然屏障、霜凍等）能使非洲馬瘟的發(fā)生率顯著降低[19].非洲馬瘟主要在非洲流行,但其他洲也時有發(fā)生.

非洲馬瘟不是人獸共患病,但疫苗毒株能導(dǎo)致人出現(xiàn)腦炎和視網(wǎng)膜炎[36].

2.2 臨床癥狀診斷

非洲馬瘟病毒感染后,潛伏期通常為5～14 d,最短為2 d,在潛伏期即能傳染.根據(jù)癥狀的不同,可分為四種類型[26].

（1）熱型.表現(xiàn)溫和,輕微發(fā)熱,眶上窩水腫,病程短,基本能很快恢復(fù),致死率較低,多見于有一定免疫力的宿主或低毒力病毒感染,是非洲馬類和驢常見的類型[19,29].

（2）心型.大頭癥（Dikkop）,為亞急性型,發(fā)熱,不超過40.5 ℃,可持續(xù)10 多天至幾周,水腫（皮下膠凍樣浸潤）多見于頭部（如上眼瞼、口唇、舌和腭等部位）、頸部、胸部、肩部、腹部,水腫部位不低于四肢,伴有心臟衰弱等,舌腹側(cè)面偶有出血斑,伴有腹痛,偶爾結(jié)膜充血,眼中有出血點(diǎn),死亡率可達(dá)50%,瀕死時有呼吸加快、橫臥、肌肉震顫、流汗等癥狀[30].病程發(fā)展慢,部分病例可恢復(fù),多見于免疫接種后被感染的馬[28，30].

（3）肺型.小頭癥（Dunkop）,為最急性型或急性型,精神沉郁,體溫升高,40～42 ℃,咳嗽（痙攣性）,頭頸部出汗較多,嚴(yán)重時呼吸困難,流淚,心跳加快,結(jié)膜發(fā)紺,鼻孔擴(kuò)張,流大量泡沫樣鼻液,經(jīng)5～7 d 死亡,死亡率高達(dá)95%,少數(shù)能恢復(fù),但愈后不良,多見于新疫區(qū)和流行初期[19,28-30,37].

（4）混合型.最常見,為亞急性型,呈肺型與心型兩種癥狀,發(fā)熱后3～7 d 內(nèi)死亡,死亡率可達(dá)70%[19].

2.3 病理變化診斷

非洲馬瘟的病理變化主要呈現(xiàn)在呼吸系統(tǒng)和循環(huán)系統(tǒng)[19,38].

（1）心型.多處部位（如筋膜下、皮下、肌內(nèi)組織和淋巴結(jié)）出現(xiàn)水腫（有黃色凝膠樣液體）,肌肉外觀呈茶褐色,同時有出血,心肌變性,心臟內(nèi)外膜上呈現(xiàn)點(diǎn)狀淤血、出血,心包積液（黃色或紅褐色液體）,胃部有炎性出血,肝脾腫大,肝臟有脂肪變性,并有充血,外觀呈暗褐色,脾臟有較多出血點(diǎn),盲腸和結(jié)腸漿膜表面有出血點(diǎn)和/或發(fā)紺.受損和末受損部分之間有明顯分界線[38-39].

（2）肺型.肺呈粉紅色或紅色,支氣管中有大量白色泡沫,肺小葉間水腫,肺間質(zhì)和胸膜下積液（黃色凝膠狀滲出液）,腹部積液（黃色透明液體）,胃部粘膜充血、水腫,胸部淋巴結(jié)水腫,心包有點(diǎn)狀淤血,腸系膜、腹膜、盲腸和結(jié)腸漿膜有出血點(diǎn)[30，39].

（3）混合型.與心型和肺型所發(fā)生的損傷基本一致[19].

2.4 病原學(xué)診斷

病原分離鑒定是疫病診斷最為經(jīng)典的方法.應(yīng)在抗體產(chǎn)生之前使用細(xì)胞培養(yǎng)或接種乳鼠進(jìn)行病毒的分離鑒定[40].分離出的病毒可用免疫學(xué)方法或分子生物學(xué)方法進(jìn)行鑒定.血液（發(fā)熱期有病毒血癥）、脾、肺、淋巴結(jié)和唾液腺等可作為病毒分離的樣本.組織處理液、抗凝血或洗滌的紅細(xì)胞接種到VERO細(xì)胞或BHK21 細(xì)胞,3～7 d 可見細(xì)胞病變（CPE）,初次分離未曾發(fā)現(xiàn)CPE,需盲傳3 代,或熒光抗體染色進(jìn)行檢查.也可用1～3 d 齡乳鼠腦內(nèi)接種或雞胚靜脈接種[25，28].乳鼠腦內(nèi)接種是初次分離AHSV 的首選方法.若有神經(jīng)癥狀,則需乳鼠腦內(nèi)繼代接種.倉鼠腎細(xì)胞、馬腎細(xì)胞、雞胚細(xì)胞、蚊子C6/36 細(xì)胞、庫蠓KC細(xì)胞、猴腎細(xì)胞（MS）等也可用于AHSV 的分離.

AHSV 的分離鑒定費(fèi)時費(fèi)力,不能快速做出診斷,不利于及時采取應(yīng)對措施,且需要較高等級的生物安全實驗室,同時需要敏感的宿主或細(xì)胞,易受采集樣本和抗體的干擾[41-42].因此,在診斷早期,可不進(jìn)行病毒分離,而采用其他方法進(jìn)行診斷.

2.5 免疫學(xué)診斷

免疫學(xué)診斷主要是通過確定病原抗原或血清抗體的存在來證實感染或曾經(jīng)感染.因抗體出現(xiàn)時間的差異,在疾病發(fā)展的不同階段應(yīng)選擇不同方法.

2.5.1 酶聯(lián)免疫吸附分析（ELISA） ELISA 方法具有特異、敏感、重復(fù)性好、易操作等優(yōu)點(diǎn).多數(shù)研究均基于VP7 蛋白建立了檢測AHSV 抗原或抗體的ELISA 方法[19,43].鄭小龍等[44]基于AHSV VP7 蛋白建立了IgM捕獲ELISA（MAC-ELISA）方法,特異性高,僅能檢出AHSV 陽性血清,與其他病毒陽性血清無交叉反應(yīng);穩(wěn)定性好,批內(nèi)和批間的變異系數(shù)均低于10%,但與進(jìn)口試劑盒相比,還可能存在假陰性的問題.潘佳亮等[45]基于原核表達(dá)的VP7 蛋白建立的間接ELISA 方法可用于AHSV 抗體的檢測,特異性和靈敏性均為良好,且與標(biāo)準(zhǔn)競爭ELISA 試劑盒的符合率達(dá)100%.曹琛福等[46]利用表達(dá)VP7 蛋白的昆蟲細(xì)胞裂解液作為包被液成功建立了檢測AHSV 抗體的間接ELISA 方法,具有較好的特異性.

2.5.2 瓊脂免疫擴(kuò)散試驗（AGID）瓊脂免疫擴(kuò)散試驗的敏感性低[47].我國有行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)《非洲馬瘟瓊脂免疫擴(kuò)散試驗操作規(guī)程》（SN/T 1692.1-2006）.

2.5.3 病毒中和（VN）試驗和血球凝集抑制（HI）試驗VN 試驗和HI 試驗是AHSV 血清型鑒定的常用方法[19].VN 試驗具有型特異性,可確定AHSV 的血清型,但待檢樣本必須用9 種血清型的AHSV 抗原/抗體進(jìn)行測定,才能確定感染毒株的血清型,且在5～7 d 內(nèi)不一定能獲得結(jié)果[25].VN 試驗繁瑣,費(fèi)時費(fèi)力,且需要標(biāo)準(zhǔn)毒株、特定型別血清和細(xì)胞[46],多數(shù)實驗室難以滿足這些條件,因此,VN 試驗已很少被采用[42].我國有行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)《非洲馬瘟血球凝集和血球凝集抑制試驗操作規(guī)程》（SN/T 1692.2-2006）.HI 試驗比VN試驗簡單,但仍需要標(biāo)準(zhǔn)血清型的抗原和抗體.感染前期,體內(nèi)抗體水平低,不適宜進(jìn)行VN 試驗和HI 試驗,但在感染中期和感染后期,VN 試驗和HI 試驗可用于AHSV 的血清學(xué)調(diào)查.在應(yīng)用VN 試驗和HI 試驗時,應(yīng)注意可能存在多種血清型AHSV 混合感染的情況,采集樣本時應(yīng)至少間隔2 周以上[18],應(yīng)用9 種血清型的AHSV 抗原/抗體進(jìn)行測試.

2.5.4 補(bǔ)體結(jié)合（CF）試驗 我國有行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)《非洲馬瘟補(bǔ)體結(jié)合試驗操作規(guī)程》（SN/T1692.3-2006）.CF 試驗用的補(bǔ)體結(jié)合反應(yīng)抗體是群特異性的,可與AHSV 的9 種補(bǔ)體抗原進(jìn)行反應(yīng),因而可用滅活（60℃30 min）的馬屬動物血清進(jìn)行CF 試驗來診斷非洲馬瘟[30,48].雖然過去使用較廣,但是CF 試驗相對繁瑣,耗時長,不適于大批量檢測.

2.6 分子生物學(xué)診斷

目前,大多數(shù)實驗室主要采用分子生物學(xué)方法檢測病原的核酸來診斷疫病,檢測AHSV 核酸所用引物常根據(jù)L2、L3、M5、S7、S8 和S10 等基因設(shè)計[19].

2.6.1 聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）相關(guān)技術(shù) 反轉(zhuǎn)錄PCR（RT-PCR）方法檢出率高、特異性強(qiáng)、快速、便捷,是OIE 推薦的檢測AHSV 的方法.趙文華等[49]基于AHSV L2 片段設(shè)計了型特異性引物,利用RT-PCR 及測序方法可對9 個血清型的AHSV 進(jìn)行分型.趙文華等[50]根據(jù)AHSV S7 片段設(shè)計了2 對引物,建立了檢測AHSV 的群特異性RT-PCR 方法,可檢測出6 個血清型（2、3、4、7、8 和9）的AHSV,同時能區(qū)別同屬的藍(lán)舌病病毒和鹿出血熱病毒.趙文華等[51]建立了檢測AHSV 熒光定量RT-PCR 方法,H2 探針及其配套引物可特異性檢測出7 個血清型（1、3、4、6、7、8、9）的AHSV,而MGB 探針及其配套引物可特異性檢測出2個血清型（2、5）的AHSV,該方法可對9 個血清型的AHSV 進(jìn)行定量檢測和快速診斷.此方法將為非洲馬瘟爆發(fā)后疫苗早期選擇和疫情控制具有重要作用.趙文華等[52]根據(jù)AHSV VP7 蛋白基因ORF（開放閱讀框）全長序列設(shè)計了一對引物,建立了一種“三步法”實時熒光定量RT-PCR 方法,可對9 個血清型的AHSV RNA 擴(kuò)增,特異性強(qiáng)（檢不出藍(lán)舌病病毒和鹿出血癥病毒的核酸）,靈敏度高（100 拷貝/μL）.高志強(qiáng)等[41]基于VP7 蛋白和NS2 蛋白的基因建立了檢測AHSV 的雙重TaqMan 熒光定量RT-PCR 方法,其特異性強(qiáng)（檢不出馬流感病毒、馬流產(chǎn)沙門菌、馬鏈球菌獸疫亞種、東部馬腦脊髓炎病毒和西部馬腦脊髓炎病毒的核酸）,靈敏度高（是常規(guī)RT-PCR 方法的10 倍）,同時雙基因檢測可防止漏檢.格日勒圖等[53]建立的一種TaqMan 熒光定量PCR 方法可同時檢測非洲豬瘟病毒、AHSV 及西尼羅病毒（WNV）,靈敏度高（10 拷貝/μL）,特異性好（檢不出牛呼吸道合胞體病毒、牛冠狀病毒和牛傳染性鼻氣管炎病毒的核酸）,穩(wěn)定性好（在4 ℃、37 ℃和室溫條件下放置6 個月后依然穩(wěn)定）.

2.6.2 芯片技術(shù) 芯片技術(shù)是一種快速檢測病原的方法.趙胤澤等[54]建立的基因芯片檢測技術(shù)可同時檢測和鑒別AHSV、WNV 和馬冠狀病毒,將檢測時間由1～2 周縮短至7 h 內(nèi),檢測體系具有很好的重復(fù)性,芯片批間差異輕微.該方法具有快速、準(zhǔn)確和靈敏的特點(diǎn),可用于出入境檢疫中大規(guī)?？焖俸Y查.

2.6.3 環(huán)介導(dǎo)等溫擴(kuò)增（LAMP）技術(shù) LAMP 技術(shù)是近年來發(fā)展較快的一種便捷、易操作、可視化、快速的病原檢測方法.姜睿姣等[9]基于AHSV VP7 蛋白的基因建立的反轉(zhuǎn)錄LAMP（RT-LAMP）方法在63 ℃反應(yīng)45 min 后即可進(jìn)行可視化檢測,靈敏性是RT-PCR 的1000 倍,且具有速度快、結(jié)果特異、操作方便、設(shè)備簡易等特點(diǎn),適合于現(xiàn)場快速檢測.李富祥等[55]根據(jù)VP7 蛋白的基因設(shè)計了2 對特異性引物,優(yōu)化AHSV 的可視化RT-LAMP 檢測方法,可檢測9 個血清型的AHSV,具有特異性強(qiáng)（檢不出馬流感病毒、馬傳染性貧血病毒、馬動脈炎病毒和藍(lán)舌病病毒）、敏感性高（普通RT-PCR 的1000 倍）、簡便（62 ℃,可現(xiàn)場檢測）、快速（1 h）等特點(diǎn).

2.6.4 斑點(diǎn)雜交試驗 編碼結(jié)構(gòu)蛋白VP3（L3）和非結(jié)構(gòu)蛋白NS1（M5）與NS2（S8）的基因可能是雜交試驗中最好的候選序列,Northern 斑點(diǎn)雜交試驗證實,源自AHSV 基因L3、M5 和S8 的探針有強(qiáng)烈的血清型交叉反應(yīng);源自M5 基因的探針對其他環(huán)狀病毒雜交時則缺乏反應(yīng),這些Northern 斑點(diǎn)雜交技術(shù)具有明顯的血清型特異性,但直接用于臨床樣品時則缺乏敏感性[25].

3 非洲馬瘟的防治

預(yù)防和控制非洲馬瘟需要從多個方面入手,并執(zhí)行嚴(yán)格的相關(guān)措施.例如,為防止非洲馬瘟傳入,美國對進(jìn)口馬屬動物實施60 d 強(qiáng)制檢疫、血清學(xué)檢測、保留種毒、改善庫存疫苗等措施.在疫情發(fā)生后,西班牙曾采取撲殺病馬、普遍接種疫苗、消滅傳播媒介和限制馬的流動等措施.但是,西班牙的經(jīng)驗證明徹底根除非洲馬瘟非常困難[56].因此,平時應(yīng)嚴(yán)格做好非洲馬瘟的預(yù)防工作,發(fā)生疫情后應(yīng)及時采取措施進(jìn)行控制和治療.

3.1 非洲馬瘟的預(yù)防

3.1.1 控制傳播媒介 控制和消滅非洲馬瘟的傳播媒介非常重要,但不可能完全消滅傳播媒介.因此,應(yīng)盡可能減少帶毒媒介昆蟲叮咬易感動物的機(jī)會[39].使用消毒劑和殺蟲劑消殺環(huán)境中的庫蠓、伊蚊等媒介昆蟲.在馬匹安定而吸血昆蟲最活躍的夜間進(jìn)行殺蟲、驅(qū)蟲[56].廄舍門窗裝置鐵紗窗,使用驅(qū)蟲劑如避蚊胺、檸檬桉樹油、苦楝油、香茅油等也能減少傳播的機(jī)會.保持畜舍干燥,清理媒介昆蟲孳生地,減少媒介滋生,從源頭清除和控制媒介[33,57].要降低馬匹被媒介昆蟲叮咬的機(jī)率,在媒介昆蟲活動較為活躍時段（如黃昏、夜間）可將易感馬匹控制在圈舍內(nèi)[39],同時不在媒介昆蟲聚集區(qū)放牧.

3.1.2 疫苗免疫 疫苗免疫是防控非洲馬瘟最有效的方法[58].OIE 認(rèn)可的非洲馬瘟無疫國/區(qū)境內(nèi)馬匹不能系統(tǒng)性接種非洲馬瘟疫苗,但在非洲馬瘟流行區(qū)域還應(yīng)進(jìn)行疫苗接種[33].預(yù)防非洲馬瘟的疫苗包括弱毒疫苗、滅活疫苗和新型疫苗.無疫情國家及地區(qū)禁止使用非洲馬瘟弱毒疫苗,以防控為主[30].

非洲馬瘟的滅活疫苗沒有嚴(yán)重的副作用,不會發(fā)生毒力返強(qiáng)現(xiàn)象,相對安全[58].組織毒滅活苗一般只在個別地區(qū)作緊急預(yù)防接種,細(xì)胞毒滅活苗效果好[18].一種非洲馬瘟鋁膠佐劑福爾馬林滅活苗“Equipest”安全有效,對驢也有較好的保護(hù)作用,但在歐洲清除非洲馬瘟后就停止了生產(chǎn)[58].用二乙烯亞胺作滅活劑制備的2 價（4 型與9 型）非洲馬瘟病毒油乳劑滅活苗已經(jīng)商品化[58].因成本高、接種程序復(fù)雜,多數(shù)非洲馬瘟滅活疫苗已停用[26].

全球防控非洲馬瘟仍以弱毒疫苗為主[58].非洲馬瘟的弱毒疫苗多是以經(jīng)乳鼠腦和猴腎細(xì)胞連續(xù)培養(yǎng)的弱毒制備的,按血清型制成的單價苗或多價苗[56].應(yīng)用多價弱毒苗可使非洲馬瘟的發(fā)生頻率和危害程度大大降低[18].南非使用的一種弱毒疫苗由兩種疫苗構(gòu)成,疫苗I（含血清型1、3、4）用于首免,疫苗II（含血清型2、6、7、8）用于首免3 周后的二免[58].AHSV 血清型5 在對某些動物免疫時發(fā)生了嚴(yán)重的副反應(yīng)（嚴(yán)重時死亡）,已經(jīng)停用;而AHSV 血清型9 的單價弱毒疫苗在撒哈拉以南之外的地區(qū)使用較多[58].雖然非洲馬瘟的多價弱毒疫苗能誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生較為穩(wěn)定的免疫力,但是嚴(yán)重的副作用卻時常出現(xiàn)[26].

AHSV 的滅活疫苗和弱毒疫苗免疫后不能從血清學(xué)上鑒別是疫苗接種誘導(dǎo)的免疫還是自然感染誘導(dǎo)產(chǎn)生的免疫,從而導(dǎo)致不必要的撲殺[18].因此,開發(fā)非洲馬瘟的DIVA（區(qū)分感染和免疫的動物）疫苗非常必要.非洲馬瘟的亞單位疫苗、活載體疫苗、部分缺失的病毒樣顆粒疫苗和通過反向遺傳技術(shù)構(gòu)建的基因缺失疫苗具有DIVA 功能[18],將是非洲馬瘟疫苗的發(fā)展趨勢,在此基礎(chǔ)上將同步建立對應(yīng)的血清學(xué)檢測方法,對疫區(qū)實施非洲馬瘟的消除計劃將具有重要促進(jìn)作用[58].以VP2、VP5、VP7 蛋白為基礎(chǔ)組分的AHSV 核酸疫苗、亞單位疫苗和活載體疫苗等一系列新型疫苗的研發(fā)取得了較大進(jìn)步,免疫效果良好[19,26].VP2 是一種潛在的亞單位疫苗免疫原[19].Roy 等[59]將血清4 型AHSV VP2 蛋白（桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)）制備成亞單位疫苗,免疫后再進(jìn)行人工感染試驗,結(jié)果表明VP2 蛋白（5μg）即可提供完全的免疫保護(hù).另外,還有其他類型疫苗研究的報道,如表達(dá)VP2 蛋白的痘病毒活載體疫苗和DNA 疫苗,但DNA 疫苗的免疫效果不太理想[18].

3.1.3 加強(qiáng)監(jiān)測,認(rèn)真檢疫 加大相關(guān)動物樣品和媒介樣品的采集力度,認(rèn)真做好病原檢測,早發(fā)現(xiàn),早報告,及時處理.高度警惕國外傳入風(fēng)險,加強(qiáng)邊境防控和口岸檢疫,加大野生馬屬動物巡查和打擊走私的力度[30].為防止非洲馬瘟傳入,禁止從發(fā)病國/區(qū)輸入馬屬動物及其相關(guān)產(chǎn)品,同時提升非洲馬瘟監(jiān)測能力,做好相關(guān)準(zhǔn)備工作[60].對從無疫國/區(qū)引進(jìn)的動物應(yīng)進(jìn)行嚴(yán)格控制,對從（曾）暴發(fā)區(qū)/感染區(qū)引進(jìn)的動物,應(yīng)嚴(yán)格隔離檢疫,限制動物移動.建立芯片或馬護(hù)照等可追溯系統(tǒng)[33],有利于疫情流行病學(xué)調(diào)查和疫情控制.

3.1.4 加大宣傳培訓(xùn),儲備人員和物資,提升應(yīng)急反應(yīng)能力 加大對相關(guān)人員（養(yǎng)殖業(yè)者、畜牧獸醫(yī)人員、基層防疫檢疫人員、官員等）關(guān)于非洲馬瘟防控知識的宣傳培訓(xùn)力度,提升對非洲馬瘟的預(yù)警水平,強(qiáng)化早期識別、及時報告、快速處置的能力[19].同時做好非洲馬瘟疫情的防控演練,查漏補(bǔ)缺.

加強(qiáng)疾病快速準(zhǔn)確診斷、病原快速準(zhǔn)確檢測、應(yīng)急疫苗快速高效制備等相關(guān)應(yīng)急技術(shù)的研究、開發(fā)與儲備,組織相關(guān)資質(zhì)企業(yè)對應(yīng)急疫苗、診斷試劑、消毒防護(hù)物資等進(jìn)行生產(chǎn)與儲備[30].

3.2 非洲馬瘟的治療

當(dāng)發(fā)現(xiàn)非洲馬瘟疑似病例時,應(yīng)按照法律法規(guī)的規(guī)定,及時報告,采取緊急控制和撲滅等強(qiáng)制性措施,同時采集樣本進(jìn)行病原檢測.如確定病原,應(yīng)立即撲殺患病馬群,按照規(guī)定將尸體深埋或焚毀[18].

條件充分時,可對輕微病馬進(jìn)行治療.但針對非洲馬瘟沒有特異性療法,僅是支持療法.加強(qiáng)飼養(yǎng)管理,認(rèn)真護(hù)理患病動物,保障優(yōu)良飼料和清潔飲水,給予充分休息,減少使役,對癥用藥以輔助治療,如用非甾體抗炎藥緩解疼痛、發(fā)熱,用糖皮質(zhì)激素穩(wěn)定細(xì)胞膜、保持血管膜的完整性,使用抗生素預(yù)防細(xì)菌性繼發(fā)感染[18,39].治療時,應(yīng)嚴(yán)格隔離、限制運(yùn)動[33].

我國從未發(fā)生過非洲馬瘟.因此,當(dāng)確診后,不建議治療,應(yīng)直接撲殺處理.

4 展望

雖然我國是OIE 認(rèn)可的非洲馬瘟無疫國,但必須吸收2018 年非洲豬瘟的慘痛教訓(xùn).因此,我們應(yīng)時刻關(guān)注國外非洲馬瘟疫情形勢,及時溝通,開展交流與合作,做好相關(guān)疫苗研發(fā)、診斷和檢測等相關(guān)防控技術(shù)的儲備,加強(qiáng)口岸檢疫,加大邊境地區(qū)相關(guān)動物非洲馬瘟流行病學(xué)調(diào)查和媒介昆蟲驅(qū)殺等工作力度,將非洲馬瘟拒之于國門之外.當(dāng)發(fā)生非洲馬瘟后,啟動應(yīng)急方案,同時對未感染動物進(jìn)行緊急免疫接種,由官方獸醫(yī)決定疫苗針對的血清型. 建議在國外外來動物疫病流行國家或地區(qū)單獨(dú)或合作設(shè)立實驗室進(jìn)行相關(guān)外來動物疫病的研究,可豐富我國針對外來動物疫病的防控技術(shù),提升針對外來動物疫病的應(yīng)急反應(yīng)能力,從而有利于我國外來動物疫病的防控,進(jìn)而保護(hù)國內(nèi)動物養(yǎng)殖業(yè)健康發(fā)展.