中醫(yī)實(shí)熱證巴馬小型豬視網(wǎng)膜血管血氧飽和度的特征 *

趙麗峰 肖建強(qiáng) 路雪婧

(1.榆林市中醫(yī)醫(yī)院,陜西 榆林 719000；2.成都中醫(yī)藥大學(xué),四川 成都 610072)

中醫(yī)證型是中醫(yī)特有的一種名稱。證，既證候，是指疾病發(fā)展過程中某一階段的病理屬性的概括，許多不同的病有相同的證候和病理機(jī)理。視網(wǎng)膜血管狀態(tài)是眼科疾病臨床診斷和治療的重要依據(jù)[1]，同時(shí)視網(wǎng)膜是全身唯一可在活體觀察血管和神經(jīng)組織處[2]，是了解疾病的重要窗口，臨床中許多疾病與視網(wǎng)膜血管中氧飽和度有著密切關(guān)系，如糖尿病視網(wǎng)膜病變[3]、青光眼[4]、視網(wǎng)膜分支血管阻塞[5]、視網(wǎng)膜色素變性[6]、視網(wǎng)膜血管變化和高血壓及其他心血管疾病之間存在必然聯(lián)系[7]。本文將中醫(yī)實(shí)熱證候模型與眼底視網(wǎng)膜血管血氧飽和度聯(lián)系起來，是將中醫(yī)證候模型與現(xiàn)代醫(yī)學(xué)緊密結(jié)合的一次創(chuàng)新，通過探討中醫(yī)證候模型與視網(wǎng)膜血管血氧飽和度之間的關(guān)系，以期為中醫(yī)證候理論體系研究提供全新的思路和現(xiàn)代化檢測手段。

1 儀器與材料

1.1儀器 Oxymap視網(wǎng)膜血氧測量儀(冰島·雷克雅維克)。

1.2試藥 硫酸阿托品注射液(批準(zhǔn)文號:H3102-1172，上海禾豐制藥有限公司)；細(xì)菌內(nèi)毒素(批號：15060-0200707,中國藥品生物制品檢定所)；戊巴比妥鈉(批號：9902-381,上海哈靈生物有限公司)；復(fù)方托吡卡胺滴眼液(批準(zhǔn)文號:J2011-0007，參天制藥有限公司)；鹽酸丙美卡因滴眼液(批準(zhǔn)文號:H2010-3352,s.a.ALCON-COUVREUR n.v公司)。

1.3實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 健康普通級巴馬小型豬12頭，月齡：2月，體重4～7 kg，平均體重5.5 kg，雌雄各半，雙眼外觀正常，無外眼疾病，直接對光反射、間接觀光反射均存在。由成都達(dá)碩實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司提供(合格證書編號：0012-825)。

2 方法與結(jié)果

2.1實(shí)驗(yàn)分組與給藥方法 將12只巴馬小型豬用苦味酸編號，雄性豬隨機(jī)編號為1、3、5、7、9、11，雌性豬隨機(jī)編號為2、4、6、8、10、12，將1～6號分為正常組，7～12號分為實(shí)熱證模型組，兩組正常喂養(yǎng)7 d(每天定時(shí)檢測心率、呼吸、肛溫、體重)，于第7 d進(jìn)行圖像采集，1～12號小型豬在全麻下(腹腔注射3%戊巴比妥鈉，40 mg·kg-1，麻醉前12 h禁飲食，不禁水)采集眼底血氧照片和眼底彩照，隨后采集血液樣本(豬前腔血管采血)送檢，于第10 d正常檢測兩組小型豬基礎(chǔ)指標(biāo)后，實(shí)熱組給予1 mg·kg-1的內(nèi)毒素(50%的濃度)行右后腿根部外側(cè)肌注1次[8]，注射內(nèi)毒素15 min后開始檢測肛溫，15 min/次，30 min后肌注阿托品注射液(0.2 mg)，50 min后1～12號豬腹腔注射戊巴比妥鈉(3%戊巴比妥鈉，mg·kg-1，麻醉前12 h禁飲食，不禁水)，待動(dòng)物麻醉后運(yùn)用血氧監(jiān)測儀(Oxymap)采集眼底視網(wǎng)膜圖片和眼底彩色照片，視網(wǎng)膜血氧數(shù)值應(yīng)用血氧監(jiān)測儀(Oxymap)配套軟件計(jì)算分析。眼底圖像采集結(jié)束后，立即采集血液樣本，檢測甲狀腺激素T3(三碘甲狀腺原氨酸)、T4(四碘甲狀腺原氨酸)、C3(補(bǔ)體3)、C4(補(bǔ)體4)、IgG(免疫球蛋白G)、IgM(免疫球蛋白M)、HCT(血細(xì)胞壓積)、WBC(白細(xì)胞計(jì)數(shù))、RBC(紅細(xì)胞計(jì)數(shù))。

3 結(jié)果與結(jié)論

3.1實(shí)熱證模型驗(yàn)證

3.1.1心率、呼吸頻率、肛溫比較 實(shí)驗(yàn)過程中，3號和5號小型豬無明顯誘因生病而脫失，正常組剩余4只小型豬，實(shí)熱組剩余6只小型豬。實(shí)熱模型組造模后心率、呼吸頻率、肛溫與造模前比較，如表1，實(shí)熱模型組造模后，心率、呼吸頻率高于造模前(P<0.01)，實(shí)熱模型組造模后肛溫高于造模前(P<0.05)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

表1 實(shí)熱模型組造模前后心率、呼吸頻率、肛溫值比較

3.1.2血液檢測指標(biāo)比較 甲狀腺激素T3(三碘甲狀腺原氨酸)、T4(四碘甲狀腺原氨酸)、補(bǔ)體C3、補(bǔ)體C4、免疫球蛋白IgG、IgM、血細(xì)胞壓積HCT、白細(xì)胞計(jì)數(shù)WBC、紅細(xì)胞計(jì)數(shù)RBC比較，結(jié)果如表2、表3，實(shí)熱組造模后，甲狀腺激素T3較造模前降低(P<0.05)；補(bǔ)體C3、C4較造模前升高(P<0.01)；血細(xì)胞壓積HCT較造模前降低(P<0.01)；白細(xì)胞計(jì)數(shù)WBC較造模前升高(P<0.05)；T4(四碘甲狀腺原氨酸)、免疫球蛋白IgG、IgM、紅細(xì)胞計(jì)數(shù)RBC造模前后無明顯變化(P>0.05)。

表2 實(shí)熱證模型組造模前后T3、T4、C3、C4比較

表3 實(shí)熱證模型組造模前后IgG、IgM、HCT、WBC、RBC比較

3.2眼底視網(wǎng)膜血管血氧飽和度變化 應(yīng)用OxymapT1視網(wǎng)膜血氧儀及配套血樣飽和度計(jì)算軟件進(jìn)行計(jì)算，選取拍攝清晰的眼底照片(圖1、圖2)進(jìn)行分析，以視盤中心為圓心，直徑為494的像素畫第一個(gè)圓，兩倍第一個(gè)圓直徑畫第二個(gè)圓，分析研究兩個(gè)圓之間血管血氧飽和度(圖3、圖4)。動(dòng)脈細(xì)一般不分支，直接讀取血氧數(shù)值，靜脈粗，會(huì)分為兩支，故將靜脈兩支取平均值作為該支靜脈血管血氧數(shù)值。

圖1 圖2

圖3 圖4

實(shí)驗(yàn)中，對小型豬每只眼睛的3根大靜脈(顳側(cè)2根，分為顳上和顳下支，鼻側(cè)1根)及伴行的3根大動(dòng)脈血氧值進(jìn)行分析比較。正常組與實(shí)熱模型組造模前靜脈血氧飽和度(SvO2)、動(dòng)脈血氧飽和度(SaO2)、動(dòng)靜脈血氧飽和度差值(SaO2-SvO2)、動(dòng)靜脈血氧飽和度比值(SaO2/SvO2)進(jìn)行比較，如表4，造模前，兩組SvO2、SaO2、SaO2-SvO2、SaO2/SvO2四項(xiàng)(P>0.05)，2組數(shù)據(jù)造模前沒有差別。實(shí)熱模型組造模前后SvO2、SaO2、SaO2-SvO2、SaO2/SvO2進(jìn)行比較，如表5，實(shí)熱模型組造模后，SaO2/SvO2高于造模前，(P<0.05)，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，SvO2、SaO2、SaO2-SvO2與造模前無明顯變化(P>0.05)，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

表4 正常組與實(shí)熱組造模前血氧飽和度比較

表5 實(shí)熱組造模前后血氧飽和度比較

正常組造模前后SvO2變化、SaO2變化、SaO2-SvO2變化、SaO2/SvO2變化與實(shí)熱模型組造模前后變化比較如表6，實(shí)熱模型組造模前后SaO2變化、SaO2-SvO2變化、SaO2/SvO2變化均高于正常組(P<0.05)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；實(shí)熱模型組造模前后SvO2變化和正常組無差異(P>0.05)，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

表6 實(shí)熱組造模前后變化與正常組造模前后血氧飽和度變化比較

3.3結(jié)論 通過對小型豬實(shí)熱證模型組與正常組眼底視網(wǎng)膜血管血氧飽和度統(tǒng)計(jì)分析發(fā)現(xiàn)，實(shí)熱證模型組建立后，SaO2/SvO2升高；實(shí)熱證模型組造模前后SaO2變化、SaO2-SvO2變化、SaO2/SvO2變化均高于正常組。

4 討論

辨證論治是中醫(yī)的特征[9]，中醫(yī)證候動(dòng)物模型的建立對于中醫(yī)藥研究及評價(jià)具有重大意義[10]。中醫(yī)實(shí)熱證為八綱辨證中重要證型之一，《素問·陰陽應(yīng)象大論》曰：“水火者，陰陽之征兆也?！薄毒霸廊珪髦忆洝分刑岬健昂疅嵴?，陰陽之化也”，《類經(jīng)·疾病類》說：“水火失其和，則為寒熱?！彼詫?shí)熱證表現(xiàn)為臟腑陽氣亢盛，導(dǎo)致機(jī)體機(jī)能亢進(jìn)所表現(xiàn)的一派熱像。近些年來，現(xiàn)代中醫(yī)學(xué)者們運(yùn)用現(xiàn)代醫(yī)學(xué)及統(tǒng)計(jì)學(xué)等多領(lǐng)域多學(xué)科對熱證的本質(zhì)進(jìn)行了相關(guān)探索，主要從藥理實(shí)驗(yàn)[11]、腎上腺激素以及其代謝產(chǎn)物[12]、血液系統(tǒng)及內(nèi)分泌系統(tǒng)[13]、神經(jīng)電生理[14]、細(xì)胞顯微結(jié)構(gòu)、經(jīng)絡(luò)腧穴[15]、炎性因子[16]，細(xì)胞信號通道傳導(dǎo)[17]等方面進(jìn)行多角度、多靶點(diǎn)研究及評價(jià)，旨在將中醫(yī)證候形成一種可以用計(jì)算機(jī)進(jìn)行分層統(tǒng)計(jì)診療模式及標(biāo)準(zhǔn)化證候診斷體系[18]。復(fù)制中醫(yī)實(shí)熱證候動(dòng)物模型方法較多，本文采用內(nèi)毒素肌肉注射模擬發(fā)生熱性病的病因[19]成功建立了巴馬小型豬實(shí)熱證候模型，模型建立以后，氣息粗大，呼吸急促，反應(yīng)較激烈，飲水次數(shù)增加，小便量少，顏黃，體溫升高，心率加快，完全符合中醫(yī)中“陽氣亢盛”證候表現(xiàn)，即壯熱、大汗、大渴、脈洪大等體征。徐志偉等[20]通過運(yùn)用放射免疫法測定大鼠血清T3、T4濃度，發(fā)現(xiàn)實(shí)熱證大鼠血清T3、T4水平變化與正常對照組比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，但通過電鏡技術(shù)發(fā)現(xiàn)甲狀腺濾泡上皮細(xì)胞略呈增生性變化，說明高熱狀態(tài)下甲狀腺的功能有所加強(qiáng)，此實(shí)驗(yàn)結(jié)果與徐志偉等的研究結(jié)果不盡一致，造模后甲狀腺激素T3水平降低，而甲狀腺激素T4水平造模前后無明顯變化，提示機(jī)體在短暫發(fā)熱狀態(tài)下處于應(yīng)急狀態(tài)。造模后補(bǔ)體C3、C4水平增高，在熱性疾病發(fā)展過程中，機(jī)體免疫系統(tǒng)處于激活狀態(tài)；機(jī)體處于高熱時(shí)血流加快，血液中HCT降低、外源性致熱源進(jìn)入體內(nèi)，在趨化因子刺激作用下導(dǎo)致外周血液中WBC計(jì)數(shù)升高。內(nèi)毒素誘導(dǎo)的實(shí)熱證巴馬小型豬模型，該模型穩(wěn)定性高，便于復(fù)制，同時(shí)小型豬眼底視網(wǎng)膜與人類較接近，是研究眼底病模型的理想選擇。

隨著視網(wǎng)膜血管測定技術(shù)的不斷發(fā)展，無創(chuàng)、非侵入式、直接測量手段成為主流，視網(wǎng)膜血管狀態(tài)是全身唯一可以直接觀察的微循環(huán)，通過觀察眼底血管狀態(tài)可以了解眼局部及全身微循環(huán)的疾病[21]，視網(wǎng)膜血管血氧的飽和度的變化和許多疾病息息相關(guān)。近年來，越來越多的學(xué)者采用現(xiàn)代技術(shù)與中醫(yī)辨證的量化結(jié)合起來,構(gòu)建中醫(yī)證候模型,實(shí)現(xiàn)中醫(yī)證候多維化、定量化分析[22-25]，本文應(yīng)用內(nèi)毒素肌肉注射誘導(dǎo)實(shí)熱證動(dòng)物模型,將中醫(yī)經(jīng)典證候模型與現(xiàn)代化無創(chuàng)視網(wǎng)膜血氧檢測技術(shù)相結(jié)合,通過探討兩者之間的關(guān)系，以期為中醫(yī)證候理論體系研究提供全新的思路和客觀、準(zhǔn)確、無創(chuàng)的現(xiàn)代化檢測手段。本研究在成功建立實(shí)熱證模型的基礎(chǔ)上，來探索實(shí)熱證模型與視網(wǎng)膜血氧飽和度之間的關(guān)系。研究發(fā)現(xiàn)，實(shí)熱證模型組造模后SaO2/SvO2高于造模前，實(shí)熱證模型組造模前后SaO2變化、SaO2-SvO2變化、SaO2/SvO2變化均高于正常組(P<0.05)，提示機(jī)體處于發(fā)熱狀態(tài)下，視網(wǎng)膜耗氧量增加，代謝加快。視網(wǎng)膜是人體中對氧需求量最高的組織，血液中氧濃度的降低易致視網(wǎng)膜組織處于缺氧狀態(tài)。缺氧的可能機(jī)制為全身血液流速加快，攜氧能力下降，同時(shí)體溫的升高，加速視網(wǎng)膜局部的氧化代謝。

小型豬是研究眼底視網(wǎng)膜血管的理想模型，該模型穩(wěn)定性高、眼底視網(wǎng)膜與人類較接近，然而，本研究仍然存在不足之處，如樣本量較少，未進(jìn)行重復(fù)實(shí)驗(yàn)等，希望未來有更多研究者來探索中醫(yī)證候模型與視網(wǎng)膜血氧飽和度之間的關(guān)系,以期建立更全面的基于視網(wǎng)膜血氧信息的客觀化、量化的中醫(yī)證候理論體系。