氟苯尼考藥動學及殘留檢測研究進展

李紅嬋，段 凱，汪聰勇，徐美芳*

(1.河南省獸藥飼料監(jiān)察所，河南鄭州 450008；2.河南省鼎元種牛育種有限公司，河南鄭州 450046)

氟苯尼考(florfenicol，F(xiàn)FC)是20世紀80年代后期成功研制的一種新的動物專用酰胺醇類的廣譜抗菌藥，是甲砜霉素的單氟衍生物。1990年在日本和韓國上市，至今已在亞洲、美洲、歐洲的多個國家上市，治療魚、豬、牛、羊、雞等動物的細菌性疾病，尤其對呼吸道系統(tǒng)感染和腸道感染療效顯著[1-7]。我國于1999年批準上市，現(xiàn)已批準FFC子宮注入劑、FFC可溶性粉、FFC注射液、FFC粉、FFC溶液、FFC預混劑、FFC膠囊7種劑型在動物上使用。

1 抗菌作用

氟苯尼考作用機理和抗菌譜與甲砜霉素、氯霉素相同，但抗菌活性比氯霉素和甲礬霉素強，均對動物體內(nèi)細菌的70S核糖體和50S亞基結(jié)合起到抑制作用，使肽?；D(zhuǎn)移酶受到抑制，從而抑使蛋白質(zhì)合成受到干擾[8]。甲砜霉素和氯霉素的耐藥菌株通常會產(chǎn)生隨質(zhì)粒傳播的乙酰轉(zhuǎn)移酶，該酶能夠使甲砜霉素和氯霉素結(jié)構(gòu)中C-3位上的-OH發(fā)生乙?；磻?，失去藥理活性。而氟苯尼考則因C-3的-OH被-F取代，不會受乙酰轉(zhuǎn)移酶的破壞，因此氟苯尼考不會產(chǎn)生類似氯霉素、甲砜霉素由質(zhì)粒介導所產(chǎn)生的耐藥性，仍對氯霉素、甲砜霉素耐藥菌株敏感。

氟苯尼考對多種革蘭氏陽性菌和陰性菌有效，對支原體也有殺菌作用，其中革蘭氏陽性菌包括炭疽桿菌、鏈球菌、棒狀桿菌、肺炎球菌、葡萄球菌等，革蘭氏陰性菌包括傷寒桿菌、副傷寒桿菌、大腸埃希菌、沙門菌、布魯氏菌、巴氏桿菌等。主要用于敏感菌所致的豬、雞、魚的細菌性疾病，如溶血性巴氏桿菌、多殺性巴氏桿菌和豬胸膜肺炎放線桿菌引起的牛、豬呼吸系統(tǒng)疾病。沙門氏菌引起的傷寒和副傷寒，雞霍亂、雞白痢、大腸埃希菌病等；魚類巴氏桿菌、弧菌、金黃色葡萄球菌、嗜水單胞菌、腸炎菌等引起的魚類細菌性敗血癥、腸炎、赤皮病等[1-7]。

2 藥動學

氟苯尼考根據(jù)推薦劑量使用時無毒副作用，能夠有效改善氯霉素等藥物引起的再生障礙貧血的危險及其他毒性，但有一定的胚胎毒性。因此，禁止妊娠期的動物使用。除此以外，該藥物不可與紅霉素、氟喹諾酮類、磺胺嘧啶等藥物混合使用[9-13]。在不同動物體內(nèi)的藥動學研究如下：

2.1 豬體內(nèi)藥動學研究Chang等[14]分別給豬肌注2 mg/kg 10%氟苯尼考粉和1%氟苯尼考粉后，其藥動學特征：Cmax分別為(641.97±117.94)和(726.05±211.77)ng/mL，Tmax分別為(2.14±1.35)和(2.50 ±1.50)h，t1/2分別為(4.99±3.30)和(4.07±1.71)h，MRT分別為(7.76±2.89)和(7.91±1.98)h，AUC0→t分別為(6.67±2.79)和(7.29±1.75) (μg·h)/mL。

2.2 牛體內(nèi)藥動學研究Varma等[15]通過給牛分別靜脈注射和內(nèi)服22 mg/kg的氟苯尼考后發(fā)現(xiàn)，禁食12 h后給藥比飼喂后5 min給藥生物利用度高，達峰濃度和藥時曲線下面積大。靜脈給藥后，t1/2為171.9 min，CL為2.85 mL/(kg·min)，V為0.78 mL/kg，AUC0→t為7 573.92 (μg·min)/mL；禁食12 h后內(nèi)服給藥，Tmax為(149.37±43.32)min，Cmax為(11.32±4.04)μg/mL，AUC0→t為6 338.18 (μg·min)/mL，F(xiàn)為0.88；飼喂后5 min給藥，Tmax為(201.84±41.72)min，Cmax為(9.41±1.05)μg/mL，AUC0→t為4 345.77 (μg·min)/mL，F(xiàn)為0.65。

2.3 羊體內(nèi)藥動學研究Verma等[16]給山羊分別靜注和肌注20 mg/kg的氟苯尼考后發(fā)現(xiàn)，靜注給藥后，t1/2為(36.79±6.27)min，AUC0→t為141 561.2 (μg·min)/mL，CL為(14.21±0.59)mL/(kg·min)，V為(14 455±1 375) mL/kg；肌注給藥后：t1/2為(39.24±8.24)min，Tmax為(30.0±0.0)min，Cmax為(3.07±0.11)μg/mL，AUC0→t為(1 238.0±42.3)(mg·min)/mL，F(xiàn)為(87.64±1.79)%。

2.4 犬體內(nèi)藥動學研究Park等[17]給犬分別靜注和內(nèi)服20 mg/kg的氟苯尼考，靜注給藥后，CL為(1.03±0.49)L/(kg·h)，V為(1.45±0.82)L/kg，t1/2為(1.11±0.94)h；內(nèi)服給藥后，t1/2為(1.24±0.64)h，Tmax為(0.94±0.43)h，Cmax為(6.18±1.07)μg/mL，F(xiàn)為(95.43±11.60)%。

2.5 雞體內(nèi)藥動學研究Abu-Basha等[18]分別給雞內(nèi)服2種氟苯尼考20 mg/kg內(nèi)服溶液，具體藥動學特征：Cmax分別為(9.02±0.68)和(9.20±0.77)μg/mL，Tmax分別為(1.02 ±0.13)和(1.05 ±0.30)h，t1/2分別為(1.41±0.06)和(1.35±0.05)h，AUC0→t分別為(26.45 ±1.33)和(26.06 ±1.20)(μg·h)/mL，AUC0→∞分別為(26.61±1.33)和(26.26±1.21)(μg·h)/mL，AUMC分別為(71.78±4.65)和(69.98±8.80)(μg·h)/mL，MRT分別為(2.72±0.18)和(2.62±0.27)h，CL/F分別為(12.82±0.63)和(12.96±0.60)mL/(kg·min)，Vd/F分別為(1.55±0.08)和(1.51±0.08)L/kg。

2.6 鴨體內(nèi)藥動學研究孫婷婷[19]給鴨分別單劑量靜脈注射和內(nèi)服30 mg/kg FFC后，其中靜注符合無吸收二室開放模型，t1/2α為(0.066±0.035)h，V為(1.105±0.194)L/kg，t1/2β為(0.701±0.058)h，CL為(1.684±0.032)L/(kg·h)；內(nèi)服符合一級吸收一室開放模型，Cmax為(7.491±0.130)μg/mL，Tmax為(0.499±0.011)h，t1/2α為(0.161±0.009)h，t1/2β為(0.967±0.054)h，CL/F(s)為(2.009±0.060)L/(kg·h)。

2.7 魚體內(nèi)藥動學研究黃郁蔥等[20]分別以10 mg/kg單劑量腹注和口灌氟苯尼考原料給藥健康紅笛鯛，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，腹注給藥在紅笛鯛體內(nèi)的吸收快于口灌給藥，在血漿和肝臟中的消除快于口灌給藥，在肌肉和腎臟中的消除則慢于口灌給藥。具體藥動學特征如下：腹注給藥后血漿、肝臟、腎臟和肌肉的Cmax分別為10.62 μg/mL，8.36、22.57和4.76 μg/g，Tmax分別為1.2、1.0、1.0和6.0 h，t1/2分別為29.76、17.84、17.23和19.48 h；口灌給藥后血漿、肝臟、腎臟和肌肉的Cmax分別為2.35 μg/mL，1.45、4.06和1.73 μg/g，Tmax分別為2.69、1.50、1.50和4.00 h，t1/2分別為40.59、12.29、37.78和47.34 h。

氟苯尼考內(nèi)服、肌注吸收較快，半衰期長，在體內(nèi)能維持較長時間的有效血藥濃度，給藥后在動物體內(nèi)呈全身性分布，在動物腎和肺組織中的濃度較高，血液和肌肉中藥物治療濃度相近，存在著血腦屏障，腦中藥物濃度相對較低，因此可用于防治畜禽呼吸道和泌尿道感染[9]。

3 殘留檢測

我國、歐盟及美國均規(guī)定了動物組織中氟苯尼考的最大殘留限量，具體見表1。

表1 氟苯尼考在組織中的最大殘留限量

從表1中可以看出，我國和歐盟限量規(guī)定一致，和美國規(guī)定略有差異。我國規(guī)定了19種組織中的殘留限量，美國僅規(guī)定了牛肝臟、牛肌肉、豬肝臟、豬肌肉、鯰魚肉及淡水養(yǎng)殖的魚(鯰魚除外)和鮭魚的皮、肉6種組織中的殘留限量，限量值除魚組織中和我國規(guī)定一致，其余均寬于我國規(guī)定。我國和歐盟均規(guī)定殘留標志殘留物為氟苯尼考與氟苯尼考胺之和，而美國規(guī)定殘留標志物為氟苯尼考胺。研究報道[24]，雞內(nèi)服碳標記氟苯尼考20 mg/kg，每天2次，每次間隔12 h，連續(xù)3 d后，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，第1天和第7天排泄總放射性物質(zhì)分別為93.7%和98.2%。在第7天排泄物中，氟苯尼考占42%，氟苯尼考胺占25%，氟苯尼考氧肟酸占5%和氟苯尼考醇占10%，其余3種未知化合物占很小百分比。

國內(nèi)外常用的檢測方法有液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法(LC-MS/MS)、高效液相色譜法(HPLC)、氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法(GC-MS)、氣相色譜法(GC)、酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)、膠體金免疫測定法(GIA)等。

3.1 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法(LC-MS/MS)液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法特異性強、靈敏度高、抗干擾能力強，是最常見的方法。我國現(xiàn)有GB 31658.5—2021《食品安全國家標準 動物性食品中氟苯尼考及氟苯尼考胺殘留量的測定 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法》、GB/T 22959—2008《河豚魚、鰻魚和烤鰻中氯霉素、甲砜霉素和氟苯尼考殘留量的測定 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法》、GB/T 20756—2006《可食動物肌肉、肝臟和水產(chǎn)品中氯霉素、甲砜霉素和氟苯尼考殘留量的測定 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法》和SN/T 1865—2016《出口動物源食品中甲砜霉素、氟甲砜霉素和氟苯尼考胺殘留量的測定 液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜法》4個標準關(guān)于氟苯尼考在動物源性食品中殘留檢測的液質(zhì)法，可滿足氟苯尼考在動物源性食品的殘留檢測，為我國食品質(zhì)量安全把控。

3.2 高效液相色譜法(HPLC)高效液相色譜法具有分離效率高、重現(xiàn)性好、線性范圍寬、應用范圍廣的特點，主要用于高濃度的檢測。李濤等[25]用HPLC-UV法測豬肉、牛肉、羊肉、鴨肉和雞肉中的氟苯尼考含量，色譜柱為C18柱，流動相為甲醇-水(40∶60)，柱溫為40 ℃，流速為0.2 mL/min，檢測波長為224 nm。樣品經(jīng)乙腈提取，40 ℃氮氣吹干，用2 mL水復溶，正己烷除脂凈化，供高效液相色譜儀分析，在10～500 ng/mL范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系，檢出限為10 μg/kg，定量限30 μg/kg。Yang等[26]用HPLC-FLD法測鯽魚血漿中FF和FFA的含量，色譜柱為C18柱，流動相為35%乙腈和65%磷酸二氫鈉(0.01 mol/L，含0.005 mol/L十二烷基硫酸鈉和0.1%三乙胺，用85%磷酸調(diào)pH至4.8)，柱溫為30 ℃，流速為1 mL/min，激發(fā)波長為224 nm，發(fā)射波長為290 nm。0.5 mL血漿樣品用3.0 mL乙酸乙酯∶乙腈∶氫氧化銨(49∶49∶2)提取，40 ℃氮氣吹干，用0.5 mL流動相復溶后，用3 mL己烷除酯，然后上機檢測。該方法在0.05～5.00 μg/mL范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系，檢出限為0.02 μg/mL，定量限0.05 μg/mL。

3.3 氣相色譜法(GC)和氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法(GC-MS)氟苯尼考采用氣相色譜法(GC)或氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法(GC-MS)時，因為含有亞氨基、硫?；葮O性較強的基團，不易揮發(fā)，因此在分析前，必須先對這些基團進行硅烷化或者酰化，生成熱穩(wěn)定和易揮發(fā)的衍生物，且衍生化反應過程中要避免水分，因為操作復雜，所以應用較少。楊秋紅等[27]用GC法測定水產(chǎn)品中氟苯尼考和氟苯尼考胺的含量，樣品經(jīng)98∶2的乙酸乙酯和氨水提取后，MCA固相萃取柱凈化，N，O-雙三甲基硅烷三氟乙酰胺(BSTFA)衍生，然后上機檢測，該方法在15～100 μg/L范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系，檢出限為1 μg/kg，定量限3 μg/kg。張麗萍等[28]用GC-MS法測定豬、雞可食性組織中氟苯尼考和氟苯尼考胺的含量，樣品經(jīng)2%氨化乙酸乙酯溶液提取，PEP-2固相萃取柱凈化，BSTFA衍生，該方法在5～5 000 μg/L范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系，檢出限為5 μg/kg，定量限10 μg/kg。

3.4 酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)酶聯(lián)免疫吸附法樣本前處理簡單，定量準確，檢測速度快，靈敏度高，特異性強，適用于大批樣本快速檢測。李然等[29]建立了ELISA法對氟苯尼考的半數(shù)抑制濃度(IC50)為1.32 ng/mL，線性檢測范圍為0.31～5.61 ng/mL，檢出限為0.12 ng/mL，與氯霉素等多種類似物均無交叉反應，動物組織及尿樣中氟苯尼考的添加回收率在77.2%～116.0%，適用于豬尿、牛尿、雞肉、豬肉、牛肉中氟苯尼考的快速篩查檢測。區(qū)兌鵬等[30]建立了間接酶聯(lián)免疫法同時檢測大黃魚、鯽魚、貽貝水產(chǎn)品中4種硝基呋喃類代謝物、氯霉素和氟苯尼考藥物殘留量的方法，氟苯尼考線性檢測范圍為0.20～8.10 ng/mL，檢出限為0.20 ng/mL。樣品需用鹽酸進行消化，再由乙酸乙酯提取，用酶聯(lián)免疫試劑盒進行檢測。

3.5 膠體金免疫測定法(GIA)膠體金免疫測定法是20世紀90年代初期建立的一種免疫學分析方法，以膠體金為標記物，能通過肉眼判斷檢測結(jié)果，對樣本需求量少，檢測精度高，不易受外界干擾，具有直觀簡單、快速方便的特點，常用于定性分析，但定量效果較差[31]。易揚[32]建立了豬肉中氟苯尼考的膠體金免疫層析試紙條的檢測方法，線性范圍為4～200 μg/L，檢出限為2.18 μg/L，IC50為9.795 μg/L，回收率99%～113%。朱愛榮[33]建立了肉食品中氟苯尼考殘留快速檢測膠體金試紙條，檢測靈敏度為1.0 μg/mL，與氟霉素、甲砜霉素和喹乙醇等抗生素無交叉反應，在4 ℃干燥的條件下可至少存放6個月。

4 結(jié)語

氟苯尼考自1990年上市以來，為保障畜牧業(yè)的健康發(fā)展做出了重要貢獻，具有給藥后在動物體內(nèi)吸收較快、殺菌作用強、抗菌譜廣、不易產(chǎn)生耐藥性、半衰期長等優(yōu)點，因此廣泛應用于豬、牛、羊、犬、雞、鴨、魚等動物。與此同時，氟苯尼考的耐藥性情況和動物性食品中的殘留問題日益嚴重，目前關(guān)于氟苯尼考在組織的殘留檢測方法有液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法、高效液相色譜法、氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法、氣相色譜法、酶聯(lián)免疫吸附法和膠體金免疫測定法等6種，可以為動物性食品安全提供技術(shù)支撐。綜上所述，必須規(guī)范氟苯尼考在養(yǎng)殖業(yè)的合理使用，加強殘留檢測力度。