儲存血小板非編碼RNA差異表達譜的研究及在臨床輸血中的應(yīng)用*

郭天虹 周煒鑫 黃遠帥

血小板是來源于巨核細胞并在外周血中廣泛存在的細胞碎片。其眾所周知的作用是促進傷口愈合和止血。但近年來，研究表明它們在介導(dǎo)免疫反應(yīng)中也發(fā)揮了重要作用，甚至參與了包括癌癥在內(nèi)的各種病理生理過程[1]。雖然不同于白細胞和其他有核細胞，血小板中所含DNA很少，但它卻具有極其多樣的轉(zhuǎn)錄組，由約9 500個不同的mRNAs和不同類別的非編碼RNAs（noncoding RNAs，ncRNAs）組成[2]。血小板中的ncRNAs主要包括微小RNAs（microRNAs，miRNAs）、長鏈非編碼RNAs（long noncoding RNAs，lncRNAs），以及環(huán)狀RNAs（circular RNAs，circRNAs），它們參與調(diào)節(jié)血小板活化、聚集、內(nèi)吞、細胞骨架重排、免疫等方面，從而影響血小板相關(guān)疾病。與此同時，活化的血小板可通過釋放含有細胞因子及ncRNAs的微囊泡或外泌體向其他靶細胞，如內(nèi)皮細胞、單核細胞、平滑肌細胞等輸出信號，從而調(diào)控這些靶細胞的功能。

儲存血小板作為臨床輸血不可或缺的重要組成，其保存期和血液質(zhì)量仍受到多種因素的影響和限制。其中血小板活化是限制血小板保存期的重要因素。近年來研究表明，血小板ncRNAs在血小板儲存過程中存在著明顯的表達差異，通過生物信息學(xué)挖掘，發(fā)現(xiàn)ncRNAs在調(diào)控血小板活化和介導(dǎo)血小板儲存損傷中發(fā)揮著重要作用。隨著miRNAs在血小板儲存過程中承擔(dān)的角色逐漸被認識，基于miRNAs的血小板mRNAs調(diào)控也被認為是控制血小板活化、避免儲存損傷的重要機制[3]。相比miRNAs，lncRNAs和circRNAs在血小板儲存和輸注方面的研究還很少，同時它們在血小板儲存期間的變化與血小板發(fā)揮正常功能是否有關(guān)仍值得我們進一步關(guān)注。

對血小板如何影響受血者的機體狀態(tài)，研究者們也有新的看法。血小板在活化過程中釋放的細胞外囊泡具有RNA含量豐富、直徑小、傳輸穩(wěn)定的特點，它們更容易穿透血管和生物屏障進入細胞外基質(zhì)[4]。因此，儲存血小板中若含有豐富的細胞外囊泡，則其內(nèi)含物可能通過輸血在受血者體內(nèi)發(fā)揮特有的生理功能或調(diào)控作用。

研究ncRNAs如何參與血小板mRNAs表達的調(diào)控是了解儲存血小板活化與代謝損傷等分子機制的關(guān)鍵，這可能有助于提高體外儲存血小板的質(zhì)量，延長保質(zhì)期，改善輸血患者的預(yù)后[5]，更好地實現(xiàn)精準輸血。

1 儲存血小板ncRNAs種類的組成和來源 血小板除了含有蛋白質(zhì)外，還含有豐富的轉(zhuǎn)錄組。對儲存血小板進行轉(zhuǎn)錄分析表明，血小板中含有多達9 500個不同的mRNAs，以及不同類別的ncRNAs，包括蛋白質(zhì)編碼位點的反義轉(zhuǎn)錄本，microRNAs，lncRNAs以及circRNAs[6]。

大部分血小板ncRNAs來源于巨核細胞（megakaryocyt e，MK），MK類似于神經(jīng)元，可利用RNA結(jié)合蛋白（RNA-binding proteins，RBP）與細胞核中某些新生轉(zhuǎn)錄本結(jié)合成復(fù)合體，從而易位到細胞質(zhì)中，并通過主動運輸機制將這些ncRNA復(fù)合體分選入血小板中，從而形成血小板特異性的轉(zhuǎn)錄本。此外，考慮到血小板與循環(huán)或組織微環(huán)境中其他細胞類型的密切相互作用，可能還存在其他細胞來源[1]。

其中microRNAs/miRNAs/MiR作為一種內(nèi)源性非編碼RNA，大小在19～24核苷酸，可通過識別mRNAs的3'非翻譯區(qū)域的特異性結(jié)合位點發(fā)揮其調(diào)控作用[7]，進而調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)的表達[8]。據(jù)估計，60%以上的人類蛋白編碼基因受miRNAs的調(diào)控[9]。血小板作為無核的細胞，由于不能從頭合成mRNAs，因此mRNAs剪接和miRNAs在調(diào)節(jié)蛋白表達水平方面比在許多其他細胞類型中發(fā)揮更突出的作用。血小板在血栓形成過程中從母巨核細胞繼承了包括miRNAs前體（pre-miRNAs）在內(nèi)的mRNAs庫，由于它們表達premiRNAs加工所需的蛋白質(zhì)（Dicer，Ago2和RNA誘導(dǎo)沉默復(fù)合物），因此它們能夠生成完全成熟的miRNAs。與此同時，在激動劑的作用下，血小板可以通過鈣蛋白酶（calpain）的激活和Dicer的切割作用[10-11]干擾pre-miRNAs的成熟，以改變近四分之一的miRNAs水平[12]。大多數(shù)改變的miRNAs可通過靶向血小板激活相關(guān)的蛋白，如P2Y12受體[8]、整合素信號等參與調(diào)控細胞骨架重排、細胞運動性和免疫在內(nèi)的血小板相關(guān)活動[13]，對血小板功能產(chǎn)生直接影響[14]。目前，微陣列和RNA測序（RNA-Seq）分析在人類血小板中鑒定了多達532種不同的miRNAs[15]。LONDIN等發(fā)現(xiàn)，血小板中除了有相當(dāng)數(shù)量的microRNAs和mRNAs外，還含有其他種類的非編碼RNA，包括長鏈非編碼RNAs（lncRNAs）[16]。

lncRNAs是指沒有編碼蛋白的閱讀框、長度＞200核苷酸的RNA分子。其生物發(fā)生受細胞類型和階段特異性刺激的控制，可來源于真核生物基因組中的多個DNA元件，包括增強子、啟動子和基因間區(qū)域等。涉及末端切割、小核仁RNA以及蛋白質(zhì)復(fù)合帽形成等機制[17]。雖然lncRNAs不具備編碼蛋白的功能，但lncRNAs在發(fā)育和基因表達中發(fā)揮的復(fù)雜精細的調(diào)控功能，參與了轉(zhuǎn)錄激活和抑制等調(diào)控過程。血小板中的lncRNAs含量豐富且在血小板體外活化過程中會發(fā)生動態(tài)變化，變化的lncRNAs可能參與調(diào)節(jié)血小板活化、聚集、內(nèi)吞、肌動蛋白纖維聚集、肌動蛋白骨架等過程[18]。lncRNAs經(jīng)典的作用機制主要包括：①在染色質(zhì)層面調(diào)控基因表達；②順式（cis）調(diào)控機制；③反式（trans）調(diào)控機制；④作為競爭性內(nèi)源RNAs（competing endogenous RNAs，ceRNAs）調(diào)控分子[2]。目前關(guān)于血小板lncRNAs的研究并不多，大部分lncRNAs的功能和分子通路尚未發(fā)掘。

CircRNAs是一類具有共價閉合環(huán)狀結(jié)構(gòu)的ncRNA。它們是由一種被稱為反向剪接的替代剪接機制產(chǎn)生的，在這種機制中，mRNAs前體（pre-mRNAs）下游的5'剪接位點與上游的3'剪接位點結(jié)合在一起形成穩(wěn)定結(jié)構(gòu)[19]。一般來說，環(huán)狀RNAs可以像海綿一樣隔離miRNAs，從而抑制miRNAs的功能，導(dǎo)致靶點基因的上調(diào)[20]。此外，它們還可以作為支架，介導(dǎo)特定酶和底物之間的復(fù)雜形成，并將蛋白質(zhì)聚集到特定的位置[21]。但目前circRNAs在血小板中的功能尚不清楚。

可能是由于環(huán)狀RNAs的穩(wěn)定性和抗降解性強，人類血小板和紅細胞中的circRNAs明顯富集，大約是其他有核細胞的17倍以上[22]。其中PLT-circR4是血小板中含量最豐富且獨有的特異性環(huán)狀RNAs。在血小板激活狀態(tài)下，微囊泡和外泌體可選擇性地攝取和釋放環(huán)狀RNAs，參與供體細胞向受體細胞的信息傳遞[23]。

2 儲存血小板ncRNAs差異表達譜 濃縮血小板（platelet concentrate，PC）作為治療性輸血的主要血液成分之一，需要特殊的存儲。然而，PC即使在良好的儲存條件下，也可能發(fā)生血小板的變性修飾或降解，被稱為儲存損傷[24]。大多數(shù)PC儲存損傷變化與血小板激活有關(guān)，包括暴露于異物表面、外傷、低pH、激動劑（如凝血酶和ADP）、剪切應(yīng)力、導(dǎo)致乳酸積累的厭氧糖酵解等[25-26]。除此之外線粒體功能障礙也可能是導(dǎo)致PC在儲存過程中發(fā)生質(zhì)變的原因[27]。

2.1 儲存血小板中的miRNAs：2015年，二代測序（nextgeneration sequencing，NGS）首次對血庫儲存的血小板濃縮物進行完整的miRNAs測序（miRNome），發(fā)現(xiàn)PC中最豐富的miRNAs逐漸減少。此外，miR-127和miR-320a的表達與血小板存儲時間呈負相關(guān)。這一發(fā)現(xiàn)為識別PC中是否存在功能正常（未激活）的血小板提供了可能[28]。2017年利用生物信息學(xué)分析，Dahiya等發(fā)現(xiàn)了在血小板儲存過程中miR-570-3p水平升高。而線粒體ATP合酶亞基基因（ATP5L）的編碼mRNA是miR-570-3p的潛在靶點，闡明了細胞通過miRNAs調(diào)控mRNAs而使線粒體功能障礙的機制。因此mir-570被提出作為一種可靠的生物標志物，用于測定儲存血小板的質(zhì)量和生存能力[29]。

目前認為儲存血小板中miRNAs的差異表達與不同儲存時間、儲存條件造成的血小板激活有密切關(guān)系。此外，不同的血液處理方式，如血小板去白處理、病原菌滅活處理、輻照等也可能誘使血小板miRNAs產(chǎn)生表達變化[30]。已有研究證實，病原菌滅活處理易誘導(dǎo)血小板活化，降低血小板mRNAs和microRNAs的水平[31]。因此，miRNAs的差異表達可作為評估血小板是否儲存良好的指標。

MUKAI等采用基因測序?qū)Ρ攘瞬煌瑴囟葍Υ鏃l件下（22℃震蕩保存72 h和4℃保存72 h）血小板中miRNAs的差異表達，并通過qPCR驗證證實，與22℃保存的血小板樣品相比，4℃保存的血小板樣品mir-20a-5p、mir-10a-3p、mir-16-2-3p和mir-223-5p的表達水平顯著增加。說明這些miRNAs是潛在的關(guān)鍵調(diào)節(jié)因子，對血小板儲存條件敏感。在特定的儲存條件下，這些miRNAs與血小板質(zhì)量相關(guān)，并可能被用作血小板質(zhì)量的生物標志物[32]。

由于血小板是由巨核細胞的細胞質(zhì)碎裂形成的無核細胞，無法合成新的miRNAs，因此人們預(yù)測，在室溫下保存血小板時，大多數(shù)miRNAs表達水平會隨著時間的推移而下降[28，33]。但PIENIMAEKI-ROEMER等在第0天和第5天從儲存的血小板濃縮物中分離PLT，發(fā)現(xiàn)隨儲存時間延長，衰老血小板殘留的mRNAs種類減少，但會部分轉(zhuǎn)化為miRNAs[34]。同時由于血小板微粒體（microparticles，MPs）的產(chǎn)生，對血小板中的miRNAs選擇性打包，因此血小板中miRNAs的表達量還會進一步受到影響[35]。因此，并不是血小板的儲存時間越長所有miRNAs的表達量就越低。PONTES等人也曾報道，大約有22%的miRNAs的表達水平從第1天到第5天逐漸減少，但在血液采集7天后，它們的表達量將升高，最有可能是由于血小板儲存超期老化后為抑制應(yīng)激蛋白質(zhì)翻譯所做出的響應(yīng)[28]。

為了進一步明確儲存血小板中miRNAs誘導(dǎo)血小板活化的分子機制，DAHIYA等人在2019年將研究對準了ras相關(guān)蛋白1（ras-related protein 1，RAP1），RAP1是血小板中豐富存在的一種小GTPase蛋白，參與激動劑誘導(dǎo)的血小板激活。研究者通過篩選靶向作用于RAP1 3'端非編碼區(qū)的miRNAs（miR-320c，miR-181a，miR-3621，miR-489，miR-4791和miR-4744），并向血小板中轉(zhuǎn)染miR-320c，發(fā)現(xiàn)在體外儲存的血小板中，基于miRNAs的RAP1下調(diào)可抑制血小板的激活[36]。這也是目前發(fā)現(xiàn)的，可能抑制儲存血小板活化的方法之一。

2.2 儲存血小板中的lncRNAs和circRNAs：目前對儲存血小板ncRNAs的研究主要集中在miRNA上，lncRNAs和circRNAs的研究甚少。大部分研究探討的是疾病狀態(tài)下血液循環(huán)中血小板源性lncRNA和circRNAs參與疾病進展的機制，關(guān)于它們參與血小板儲存損傷和輸注效果的研究寥寥無幾。

2018年李楠等通過lncRNAs芯片技術(shù)檢測儲存2、5、8 d機采血小板中l(wèi)ncRNAs和mRNAs表達譜變化，發(fā)現(xiàn)隨著儲存時間的表化，lncRNAs的表達量也發(fā)生明顯變化。差異表達的lncRNAs可能參與血小板激活、血小板聚集、內(nèi)吞、凋亡、肌動蛋白纖維聚集、肌動蛋白骨架的調(diào)節(jié)等生理過程[37]。WEIHUA BIAN等通過高通量測序檢測聯(lián)合熒光原位雜交技術(shù)（fluorescence in situ hybridization，F(xiàn)ISH）驗證，發(fā)現(xiàn)儲存的血小板中含有豐富的lncRNA NEAT1（nuclear paraspeckle assembly transcript 1，GEO ID：200097348），凝血酶處理后的MEG-01（成巨核細胞細胞系）中NEAT1水平升高72%（P＜0.05），敲除NEATI基因可導(dǎo)致凝血酶激活的MEG-01以及血小板樣顆粒黏附功能降低[38]。

嚴育忠等通過對單個供者濃縮血小板進行常規(guī)儲存，并分別在d1、3、5、7、和9對其進行取樣以分析儲存期間血小板circRNAs的差異表達。采用微流體芯片電泳法評估不同保存時間血小板RNA的完整性，并通過高通量測序篩查血小板儲存期間RNA降解相關(guān)的差異表達基因。結(jié)果顯示：circRNAs在血小板儲存期間相對線性RNA比值有增加趨勢，且血小板儲存期間RNA降解具有時間依賴性特征，儲存后期circRNAs占比高[39]。這一研究雖揭示了儲存血小板circRNAs隨時間的變化規(guī)律，但并沒有對circRNAs差異表達與血小板功能之間的關(guān)系做進一步分析。因此，儲存血小板circRNAs是否可作為血小板存儲質(zhì)量的標志物尚不清楚，有待我們進一步研究。

3 儲存血小板ncRNAs在臨床輸血領(lǐng)域的拓展 由于血小板在機體內(nèi)發(fā)揮的功能復(fù)雜，參與的生理過程眾多，目前仍無可以替代其的藥物。因此，在血小板缺乏或功能異常的患者中，仍只有通過輸注血小板挽救他們的生命。但迄今為止，在臨床輸血中，血小板僅能通過獻血者獲取，不可人工制備。此外由于儲存期短，血小板資源極度缺乏，采用現(xiàn)有的保存條件（20～24℃水平振搖）延長儲存時間則易造成細菌污染，而采用冷凍保存（4℃）的方式延長儲存期限則會造成血小板在循環(huán)中的壽命縮短[40]。在體外不可控因素的作用下，長時間儲存的血小板易發(fā)生儲存損傷，這會嚴重影響血小板的質(zhì)量，甚至導(dǎo)致血小板輸注無效[41]。如何有效防止血小板儲存損傷，挖掘儲存損傷相關(guān)的發(fā)生發(fā)展機制一直是研究的重點。

目前提出的一種機制認為：基于miRNAs的血小板mRNAs調(diào)控可能參與血小板儲存損傷的發(fā)生[3]。理由是，由于人類成熟的血小板是無核的，在體外儲存時，血小板為了使自身存活下來，將會繼續(xù)從mRNAs翻譯蛋白質(zhì)以發(fā)揮生理功能和調(diào)節(jié)作用。因此，利用細胞質(zhì)中的轉(zhuǎn)錄后調(diào)節(jié)機制成為了必需，其中一種便是基于miRNAs的mRNAs調(diào)控。成熟血小板從巨核細胞中獲得了許多基因調(diào)控所需成分（如mRNAs、pre-miRNAs、Dicer和Ago2）。儲存條件下的血小板不僅能繼續(xù)將遺傳的mRNAs轉(zhuǎn)化為蛋白質(zhì)，還能將premiRNAs加工成成熟的miRNAs[42]。這些miRNAs在血小板體外儲存時將繼續(xù)發(fā)揮活性作用。缺乏或下調(diào)這些miRNAs將導(dǎo)致指導(dǎo)血小板功能蛋白翻譯的mRNAs水平改變，從而影響儲存血小板的功能。有研究人員發(fā)現(xiàn)，在血小板儲存過程中，依賴于αⅡbβ3-mRNA的整合素合成增加（整合素是一種蛋白，作為纖維蛋白原受體參與血小板聚集），而參與調(diào)控整合素亞單位表達的miRNAs也被證實[43]。這說明儲存血小板的功能依賴于miRNA-mRNA表達調(diào)控機制。

研究miRNAs如何參與血小板mRNAs表達的調(diào)控是了解儲存血小板分子機制的關(guān)鍵，這可能有助于提高體外儲存血小板的質(zhì)量，延長保質(zhì)期，改善輸血患者的預(yù)后[5]。此外，有效的監(jiān)測儲存血小板的質(zhì)量，避免一些超過儲存期但仍可用血小板的浪費也是緩解血小板資源緊缺的辦法之一。目前一些在血小板儲存期間差異表達的miRNAs為評估血小板的可用性提供了更多的選擇。如miRNA-326作為下調(diào)抗凋亡基因Bcl-xL的非編碼RNA，它隨血小板儲存時間增加，證實了血小板在體外的凋亡受miRNAs的調(diào)控，miRNA-326的富集可能代表了血小板存活率的降低[44]，輸注后血小板提升效果不佳。而miR-570由于可以與儲存血小板中線粒體ATP5L的編碼mRNA相互作用。因此，miR-570也可以作為儲存血小板質(zhì)量和生存能力的生物標志物[29]。此外miRNAs-Let-7b和miR-16兩種miRNAs在血小板儲存期間呈明顯上升趨勢，miR-7和miR-145呈下降趨勢[33]，這些miRNAs對儲存時間敏感，可能是評估超期儲存血小板可用性的潛在標志物。

目前血小板在儲存過程中引發(fā)的血小板活化和損傷幾乎都是通過體外功能檢測來評估的，具有局限性。與血小板功能測試不同，血小板相關(guān)miRNAs的特征伴隨血小板的整個生存期，可以更準確地評估儲存血小板的質(zhì)量，并使評估體內(nèi)血小板反應(yīng)性成為可能[45]。因此，發(fā)掘血小板相關(guān)miRNAs的差異表達，對我們了解儲存血小板輸注對受血者產(chǎn)生的潛在影響有很大幫助。

雖然lncRNAs在血小板中的表達水平和功能尚不清楚，但目前已知lncRNAs是巨核細胞發(fā)育和血小板產(chǎn)生的重要調(diào)控因子[17]。與此同時，在巨核細胞中發(fā)現(xiàn)的1 109個候選lncRNAs中，幾乎有一半是未注釋的[46]。這也提示我們，血小板中l(wèi)ncRNAs的功能仍有待深入挖掘。

而circRNAs作為近年來的研究熱點，細胞中的circRNAs主要在轉(zhuǎn)錄后水平（RNA）上對基因表達發(fā)揮調(diào)控作用，其作為ceRNAs，通過與細胞內(nèi)的miRNAs結(jié)合阻斷后者對靶基因的抑制[20]，同樣也是儲存血小板在體外存活時一種不可或缺的轉(zhuǎn)錄后調(diào)控方式。同時由于circRNAs可抵抗核酸外切酶和核糖核酸酶的水解作用，相比線性RNA，circRNAs不易降解退化，可在無核細胞（如紅細胞和血小板）中大量富集。其富集程度可有效反應(yīng)血小板轉(zhuǎn)錄組的退化程度，從而可用于評估儲存血小板的質(zhì)量和活性[19]。

4 細胞外囊泡通過傳遞ncRNAs參與血小板的儲存與輸注 血小板在活化、凋亡和破壞時會釋放出細胞外囊泡（extracellular vesicles，EVs），它包括了外泌體（由內(nèi)小體形成，＜100 nm）和微囊泡（由質(zhì)膜形成，100 nm～1 μm）[47]。外泌體來源于細胞內(nèi)室，直徑不超過100 nm。血小板源性的外泌體（Platelet-exosome，PLT-exo）占血清總外泌體的大約70%，參與了包括炎癥和動脈粥樣化形成在內(nèi)的多種重要病理生理機制[48]。

與從細胞內(nèi)室釋放的外泌體相比，血小板微囊泡（platelet-derived microparticles，PMPs）本質(zhì)上是從細胞質(zhì)膜脫落的血小板細胞質(zhì)泡狀碎片，其表面表達來自其母細胞的抗原，如CD41和CD62p（P選擇素）。根據(jù)其大小可與凋亡小體（＞1 μm）區(qū)分。當(dāng)血小板被激動劑或炎癥刺激激活時，一些microRNAs通過PMPs釋放并傳遞到特定的細胞，在那里它們沉默靶基因，從而影響細胞功能。

由于血小板細胞外囊泡（PLT extracellular vesicles，PEVs）中RNA的含量相比其來源細胞具有更高的豐度，直徑小更易穿透血管進入細胞外基質(zhì)，且可穿越生物屏障，這些特點決定了PEVs發(fā)揮作用的廣泛性[4]。與此同時，PEVs在傳輸過程中保持相對穩(wěn)定[35]，可在體內(nèi)轉(zhuǎn)移到腫瘤細胞中并通過基因表達調(diào)控腫瘤進展[49]。最近的研究表明，血小板中含有miRNAs和miRNAs效應(yīng)蛋白Argonaute 2（Ago2）復(fù)合物，可通過血小板囊泡釋放到循環(huán)中，參與miRNAs到其他血管細胞的水平轉(zhuǎn)移，并調(diào)節(jié)這些受體細胞的基因表達和功能[50-52]。

PIENIMAEKI-ROEMER等的研究顯示，儲存導(dǎo)致的血小板衰老會造成大部分種類的RNA降解，但同時也會伴隨著參與動脈粥樣硬化、炎癥和神經(jīng)變性的miRNAs上調(diào)，這些miRNAs在PEVs中富集并依靠PEVs作為載體在受血者體內(nèi)釋放，參與血管、代謝，特別是神經(jīng)退行性疾病的發(fā)生[34]。一些血小板MPs和內(nèi)容物（包括鞘脂、microRNAs等）具有促炎特性，輸注含有這類PMPs的血小板可能會加重動脈粥樣硬化和/或血小板輸注相關(guān)的急性和慢性血管炎癥[6]，甚至誘發(fā)嚴重的輸血不良反應(yīng)，如輸血相關(guān)急性肺損傷（transfusion-related acute lung injury，TRALI）[53]。由于體外輸注的PMPs在機體中的存活時間、濃度、代謝途徑、相關(guān)通路等未知，因此尚不能確定他們對機體造成的影響。但這可能是我們未來的研究方向。

基于血小板外泌體和微囊泡的研究不僅為評價血小板質(zhì)量提供了新的生物標志物，由于其內(nèi)含物豐富、功能復(fù)雜，也可能是輸血治療的重要手段[2]。在影響癌細胞生物學(xué)的周圍細胞中，血小板被認為是新的參與者，特別是血小板衍生的MVs高度參與了癌癥的發(fā)展[54]。2017年J MICHAEL等發(fā)現(xiàn)PMPs可以滲入人類和小鼠的實體腫瘤，并在體內(nèi)和體外將血小板來源的RNA（包括miRNAs）轉(zhuǎn)移到腫瘤細胞中（MiR-24是轉(zhuǎn)移的主要成分），導(dǎo)致腫瘤細胞凋亡[49]。通過輸注含有MiR-24的PMPs可抑制肺癌和結(jié)腸癌異位腫瘤的生長[49]。這提示我們，基于miRNAs轉(zhuǎn)運機制的PMPs輸注可能是一種新的治療腫瘤的方式。

目前雖無研究報道血小板細胞外囊泡衍生的lncRNAs和circRNAs對血管內(nèi)穩(wěn)態(tài)的影響，但有研究發(fā)現(xiàn)；血小板在體外長時間保存后，其釋放的PEVs中有多個lncRNAs差異表達。通過KEGG分析對lncRNAs進行功能描述發(fā)現(xiàn)差異的lncRNA主要與Wnt以及Rap1、PI3K-Akt等癌癥發(fā)生相關(guān)的信號通路有關(guān)，同時上調(diào)的lncRNA MSTRG.31496.1可通過順式調(diào)控方式作用于血小板活化基因TREML1參與儲存血小板的活化[2]。

而鑒于PEVs中circRNAs的穩(wěn)定性和豐度，它們在血管內(nèi)穩(wěn)態(tài)中發(fā)揮的作用往往超過miRNAs[8，55]。有研究對不同儲存時間PEVs中的miRNAs以及circRNAs的差異基因進行分析后發(fā)現(xiàn)，0 d vs 4 d，0 d vs 8 d，0 d vs 12 d，3個比較組中共有下調(diào)miRNAs 8個，無上調(diào)miRNAs；共有下調(diào)circRNAs 1 052個，上調(diào)circRNAs 1 071個。隨后將差異的miRNAs與circRNAs結(jié)合后進行分析，構(gòu)建的miRNAcircRNA-mRNA網(wǎng)絡(luò)圖顯示，多個circRNAs可能與miR-4732-5p及miR-483-5p結(jié)合，從而阻斷miRNAs對下游靶向癌基因的抑制。這提示儲存PEVs中的circRNAs可能在癌癥進展中發(fā)揮作用[2]。

多種因素，如經(jīng)典的激動劑— 血小板生成素或凝血酶可導(dǎo)致血小板激活，釋放EVs并選擇性攝取血小板內(nèi)的ncRNAs，它們在進入單核細胞、內(nèi)皮細胞、平滑肌等細胞后參與機體靶細胞甚至腫瘤細胞的調(diào)控，這可能是輸血影響機體生理病理過程的重要機制。

5 小結(jié) 隨著生物信息技術(shù)的發(fā)展，由表及里的機制研究和分子互作網(wǎng)絡(luò)逐漸成為研究的重點。通過軟件預(yù)測，可挖掘出相應(yīng)ncRNAs的靶點，將其作為對象進行研究。血小板作為機體的重要細胞，參與了大量疾病的發(fā)生和進展。探討血小板及血小板囊泡/外泌體中ncRNAs的差異表達和相關(guān)信號通路對我們理清思路，發(fā)掘新的生物標志物和疾病靶標有重要意義，同時對指導(dǎo)我們的臨床儲血、精準用血有極大幫助。

利益沖突所有作者均聲明不存在利益沖突