高效液相色譜法檢測(cè)貢梨中甲基硫菌靈 及其代謝物多菌靈殘留量

◎ 黃丹萍，熊曉輝，陳 斌，黃 宙

（1.國(guó)家輕工業(yè)食品質(zhì)量監(jiān)督檢測(cè)南京站，江蘇 南京 210009；2.南京工業(yè)大學(xué) 食品與輕工學(xué)院，江蘇 南京 210009）

隨著科技的進(jìn)步和人們生活水平的日益提高，社會(huì)對(duì)分析研究的需求不斷上升，分析檢測(cè)的靈敏度和速度一直是研究者們追求的目標(biāo)。液相色譜法被廣泛用于食品安全質(zhì)量控制，因此建立一種高靈敏度、快速、多組分和高通量的農(nóng)藥殘留定性定量檢測(cè)技術(shù)是非常必要的[1-4]。高效液相色譜法以其良好的分離效果深受檢測(cè)人員的偏愛(ài)，在熟悉常規(guī)檢測(cè)流程的同時(shí)也應(yīng)努力尋找更加完善的實(shí)驗(yàn)方法，并充分掌握與利用這一技術(shù)，進(jìn)而為食品質(zhì)量安全檢測(cè)提供高效、快速、簡(jiǎn)便的技術(shù)支持[5-7]。本研究基于實(shí)驗(yàn)以及數(shù)據(jù)分析，探索一種貢梨中甲基硫菌靈及其代謝物多菌靈農(nóng)藥殘留的測(cè)定分析方法。

1 材料與方法

1.1 材料

貢梨，超市采購(gòu)。

1.2 試劑與儀器設(shè)備

乙腈、甲醇，西格瑪奧德里奇（上海）貿(mào)易有限公司；PSA粉、無(wú)水硫酸鎂、氯化鈉，西隴科學(xué)股份有限公司；甲酸，天津市致遠(yuǎn)化學(xué)試劑有限公司；乙酸，天津市致遠(yuǎn)化學(xué)試劑有限公司；活性炭粉，天津市北晨方正試劑場(chǎng)；甲基硫菌靈[編號(hào)GBW（E）082389]、多菌靈[編號(hào)GBW（E）081407]，上海安譜。

液相色譜儀，Waters沃特世科技有限公司；離心機(jī)，上海安亭科學(xué)儀器廠；分析天平，賽多利斯科學(xué)儀器（北京）有限公司；渦旋振蕩器，海門(mén)市其林貝爾儀器制造有限公司；氮吹儀，上海安譜科學(xué)儀器有限公司；0.22 μm微孔濾膜，上海安譜實(shí)驗(yàn)科技股份有限公司；2 mL一次性醫(yī)用滅菌注射器，常州市康復(fù)萊醫(yī)療用品有限公司；50 mL離心管，上海安譜實(shí)驗(yàn)科技股份有限公司；1.5 mL進(jìn)樣小瓶，上海安譜實(shí)驗(yàn)科技股份有限公司。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 溶液配制

（1）甲基硫菌靈和多菌靈混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液 （100 mg·L-1）配制。準(zhǔn)確稱(chēng)量甲基硫菌靈和多菌靈標(biāo)準(zhǔn)品各10 mg，用乙腈溶解并稀釋至100 mL，振蕩搖勻，制備成質(zhì)量濃度為100 mg·L-1的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液。

（2）甲基硫菌靈和多菌靈混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液 （10 mg·L-1）配制。吸取1 mL濃度為100 mg·L-1的甲基硫菌靈和多菌靈混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液，用乙腈稀釋至100 mL，制備成10 mg·L-1的甲基硫菌靈和多菌靈混合標(biāo)準(zhǔn)工作液。

（3）混合基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)工作溶液（1 mg·L-1）配制。吸取甲基硫菌靈和多菌靈標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，以乙腈為稀釋液，配 制成質(zhì)量濃度為0.2 μg·kg-1、0.5 μg·kg-1、 1.0 μg·kg-1、10.0 μg·kg-1、20.0 μg·kg-1和50.0 μg·kg-1的混合基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。

（4）甲基硫菌靈和多菌靈混合標(biāo)準(zhǔn)使用溶液 （10 μg·L-1）配制。吸取1 mL濃度為1 mg·L-1的甲基硫菌靈和多菌靈混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液，用乙腈稀釋至100 mL。

1.3.2 樣品前處理

（1）試樣制備。將樣品每個(gè)個(gè)體按中軸線(xiàn)分成四等分，取相對(duì)的兩份，放入勻漿機(jī)中制成勻漿，無(wú)需去皮。制成勻漿后的樣品，放入已貼有樣品標(biāo)簽的容器中，待測(cè)。

（2）提取。準(zhǔn)確稱(chēng)取試樣5 g，置于50 mL離心管中，加20 mL水，使用超聲儀加熱提取20 min，置室溫冷卻5 min后，再加入10 mL 1%冰乙酸-乙腈試劑，渦旋2 min，然后在樣品溶液中加入1 g氯化鈉和4 g無(wú)水硫酸鎂，渦旋2 min，以10 000 r·min-1離心 5 min，靜置，上清液等待凈化。

（3）凈化。使用移液槍準(zhǔn)確吸取1 mL上清液，轉(zhuǎn)移到裝有55 mg PSA粉末、55 mg C18粉末的2 mL聚丙烯離心管中，渦旋均質(zhì)1 min，以10 000 r·min-1的速度離心5 min，然后用無(wú)菌注射器吸取上清液 0.5 mL，過(guò)微孔濾膜（0.22 μm），用于上機(jī)測(cè)定。

1.3.3 液相色譜參數(shù)條件

聚苯乙烯柱：C18，7.8×100 mm，10 μm；流動(dòng)相：甲醇∶水（體積比）=7∶3；進(jìn)樣量：10 μL；柱溫：35 ℃；流速：0.4 mL·min-1；梯度洗脫。

2 結(jié)果與分析

2.1 方法優(yōu)化

2.1.1 液相色譜條件的優(yōu)化

轉(zhuǎn)移2 mL甲基硫菌靈和多菌靈混合標(biāo)準(zhǔn)使用溶液于進(jìn)樣小瓶中，通過(guò)液相色譜儀檢測(cè)，結(jié)果見(jiàn)表1，流動(dòng)相及梯度洗脫條件見(jiàn)表2。

表1 多反應(yīng)檢測(cè)條件表

表2 流動(dòng)相及梯度洗脫條件表

2.1.2 提取溶劑的優(yōu)化

乙腈較丙酮和甲醇提取效率更好，適當(dāng)加入乙酸后的提取效率更高，因此本實(shí)驗(yàn)選擇超純水和1%冰乙酸-乙腈作為本次提取溶劑。

2.1.3 提取溶劑用量的優(yōu)化

分 別 用5 mL、10 mL、20 mL、30 mL和40 mL的1%冰乙酸-乙腈提取經(jīng)過(guò)超純水初步處理的含一定量標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的貢梨樣品，測(cè)定其回收率。結(jié)果表明，提取液體積為5 mL時(shí)，回收率為54.5%～83.2%；提取液體積為10 mL時(shí)，回收率為72.6%～94.1%；提取液體積為20 mL時(shí)，回收率為73.1%～99.7%；提取液體積為30 mL時(shí)，回收率為74.8%～99.9%；提取液體積為40 mL時(shí)，回收率為75.2%～101.6%。綜合效率和節(jié)約試劑兩方面考慮，選用提取溶劑用量 為10 mL。

2.2 方法的線(xiàn)性范圍、檢出限和定量限

甲基硫菌靈和多菌靈在濃度0.2～50.0 μg·kg-1呈良 好的線(xiàn)性關(guān)系，甲基硫菌靈線(xiàn)性方程為Y=-8 150+27 000X， 相關(guān)系數(shù)R2=0.999 8；多菌靈線(xiàn)性方程為Y=3 970+34 400X， 相關(guān)系數(shù)R2=0.999 9。采用低濃度標(biāo)準(zhǔn)品加入法，甲基硫菌靈加標(biāo)后樣品含量為0.1 mg·kg-1，對(duì)應(yīng)的信噪比為693，計(jì)算得到檢出限為0.000 4 mg·kg-1，定量限為0.001 4 mg·kg-1。

2.3 回收率及精密度實(shí)驗(yàn)

實(shí)驗(yàn)選擇加標(biāo)濃度為100 μg·kg-1、500 μg·kg-1、 2 200 μg·kg-1的甲基硫菌靈標(biāo)準(zhǔn)品，測(cè)定貢梨樣品中甲基硫菌靈回收率；另選擇加標(biāo)濃度為26 μg·kg-1、 500 μg·kg-1、2 000 μg·kg-1的多菌靈標(biāo)準(zhǔn)品，測(cè)定貢梨樣品中的多菌靈回收率。甲基硫菌靈以及多菌靈的回收率的測(cè)定結(jié)果分別見(jiàn)表3、表4。由表3、表4可知，甲基硫菌靈以及多菌靈的回收率分別為90.5%～103.4%和92.0%～101.6%。甲基硫菌靈的平均回收率為93.3%～100.2%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.8%～2.4%；多菌靈的平均回收率為94.5%～99.1%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.9%～2.9%。甲基硫菌靈和多菌靈的平均回收率和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差均達(dá)到國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)。

表3 甲基硫菌靈回收率測(cè)定結(jié)果和精密度結(jié)果表（n=6）

表4 多菌靈回收率測(cè)定結(jié)果和精密度結(jié)果表（n=6）

3 結(jié)論

本文確定以1%冰乙酸-乙腈為提取劑，氯化鈉和無(wú)水硫酸鎂輔助水相和有機(jī)相分離，使用QuEChERs的方法（C18粉末、PSA粉末、無(wú)水硫酸鎂混合）凈化上清液，外標(biāo)法定量，借助高效液相色譜儀對(duì)樣品中甲基硫菌靈及其代謝物多菌靈農(nóng)藥殘留量進(jìn)行研究。結(jié)果表明，甲基硫菌靈及其代謝物多菌靈的線(xiàn)性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)、檢出限范圍、定量限范圍、平均回收率和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差均達(dá)到了GB/T 27404—2008的要求。按照本研究方法，實(shí)際檢測(cè)樣品的甲基硫菌靈及其代謝物多菌靈農(nóng)藥殘留量檢出率和超標(biāo)率為0，說(shuō)明甲基硫菌靈及其代謝物多菌靈在貢梨中的使用是安全的。