土茯苓總苷化學(xué)成分研究

湯迎湛，劉菊妍，江振洲，江 濤，彭紅英，張陸勇, 4*

?化學(xué)成分 ?

土茯苓總苷化學(xué)成分研究

湯迎湛1, 2, 3，劉菊妍3，江振洲2，江 濤1，彭紅英1，張陸勇2, 4*

1. 廣州白云山敬修堂藥業(yè)股份有限公司，廣東 廣州 510130 2. 中國(guó)藥科大學(xué) 新藥篩選中心江蘇省藥效研究與評(píng)價(jià)服務(wù)中心，江蘇 南京 210009 3. 廣州醫(yī)藥集團(tuán)有限公司，廣東 廣州 510103 4. 廣東藥科大學(xué) 新藥研發(fā)中心，廣東 廣州 510006

研究土茯苓S總苷的化學(xué)成分。采用硅膠柱色譜、凝膠色譜及半制備液相色譜分離技術(shù)，對(duì)土茯苓總苷化學(xué)成分進(jìn)行了系統(tǒng)的分離純化。結(jié)合分離單體化合物的理化性質(zhì)，通過(guò)MS、NMR和CD等波譜數(shù)據(jù)鑒定其結(jié)構(gòu)。從土茯苓總苷中分離得到25個(gè)化合物，分別鑒定為土茯苓色酮A（1）、花柏色酮（2）、花旗松素（3）、北美圣草素（4）、柚皮素（5）、3′,5′,5,7-四羥基二氫黃酮（6）、高圣草素（7）、6-甲氧基柚皮素（8）、二氫山柰酚（9）、6-甲氧基橙皮素（10）、落新婦苷（11）、異落新婦苷（12）、新落新婦苷（13）、新異落新婦苷（14）、黃杞苷（15）、異黃杞苷（16）、槲皮素（17）、芹菜素（18）、高車(chē)前素（19）、山柰酚（20）、光葉菝葜苷（21）、5,7-二羥基色原酮（22）、兒茶素（23）、表兒茶素（24）和金雞納素Ib（25）?；衔?為新化合物，化合物2和8是首次從菝葜屬植物中分離得到，化合物6～9、19和22為首次從該植物中分離得到。

土茯苓；總苷；土茯苓色酮A；花柏色酮；6-甲氧基柚皮素；二氫山柰酚；高車(chē)前素

土茯苓為百合科植物Roxb.的干燥根狀莖，性味甘、淡、平，歸肝、胃、脾經(jīng)，具有解毒除濕、通利關(guān)節(jié)的功效，用于濕熱淋濁、帶下、癰腫、瘰疬、疥癬、梅毒及汞中毒所致的肢體拘攣、筋骨疼痛等證[1-2]。土茯苓總苷片是由單味中藥土茯苓材開(kāi)發(fā)出來(lái)的選擇性免疫抑制劑，能有效治療類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎（rheumatoid arthritis，RA）[3]。土茯苓總苷片目前已完成治療RA的II期臨床試驗(yàn)研究，試驗(yàn)結(jié)果顯示，低劑量土茯苓總苷片可以有效提高RA初治患者的ACR20（美國(guó)風(fēng)濕病學(xué)會(huì)規(guī)定的觀察指標(biāo)患者達(dá)到20%緩解）達(dá)標(biāo)率，并且減少止痛藥的使用，無(wú)嚴(yán)重不良反應(yīng)。土茯苓總苷的主要活性成分為黃酮苷類(lèi)，其含量大于50%，但是尚未有土茯苓總苷化學(xué)成分的研究報(bào)道。因此，本實(shí)驗(yàn)對(duì)土茯苓總苷進(jìn)行了化學(xué)成分研究，共分離并鑒定了25個(gè)黃酮類(lèi)化合物，其中化合物1為新化合物，命名為()-土茯苓色酮A，其他24個(gè)已知化合物分別鑒定為花柏色酮（sawarachromone，2）、花旗松素（taxifolin，3）、北美圣草素（eriodictyol，4）、柚皮素（naringenin，5）、3′,5′,5,7-四羥基二氫黃酮（3′,5′,5,7-tetrahydroxylflavanone，6）、高圣草素（homoeriodictyol，7）、6-甲氧基柚皮素（6-methoxy-naringenin，8）、二氫山柰酚（dihydrokaempferol，9）、6-甲氧基橙皮素（6-methoxyhesperetin，10）、落新婦苷（astilbin，11）、異落新婦苷（isoastilbin，12）、新落新婦苷（neoastilbin，13）、新異落新婦苷（neoisoastilbin，14）、黃杞苷（engeletin，15）、異黃杞苷（isoengeletin，16）、槲皮素（quercetin，17）、芹菜素（luteolin，18）、高車(chē)前素（hispdulin，19）、山柰酚（kaempferol，20）、光葉菝葜苷（smiglanin，21）、5,7-二羥基色原酮（5,7-dihydroxychromone，22）、兒茶素[(＋)-catechin，23]、表兒茶素 [(?)-epicatechin，24]和金雞納素Ib（cinchonain Ib，25）。其中，化合物2和8是首次從菝葜屬植物中分離得到，化合物6～9、19、22為首次從該植物中分離得到。本研究初步闡明了藥效物質(zhì)基礎(chǔ)，為臨床用藥提供了依據(jù)。

1 儀器與材料

Bruker-600型核磁共振波譜儀（德國(guó)Bruker公司）；Waters Xevo G2-XS QTof型高分辨質(zhì)譜儀（美國(guó)Waters公司）；UV-1780型紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)（日本島津公司）；Agilent 1260型液相色譜儀（美國(guó)Agilent公司）；圓二色光譜儀J-1500（日本分光公司）；制備用色譜柱YMC-Pack ODS-A（250 mm×10.0 mm，5 μm，日本YMC公司）；UV-2450型紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)（日本島津公司）。實(shí)驗(yàn)所有材料：甲醇、乙腈（均為色譜純，美國(guó)費(fèi)希爾公司）；柱色譜硅膠（100～200、200～300目）及薄層色譜硅膠（GF254，青島海洋化工廠）；YMC*GEL ODS-HG（12 nm S-50）（日本YMC公司）；Sephadex LH-20（GE Healthcare Bio-Sciences AB）；石油醚、氯仿、醋酸乙酯、正丁醇、甲醇（分析純，廣州化學(xué)試劑廠）。

藥材由廣州采芝林藥業(yè)有限公司提供（產(chǎn)地廣東，批號(hào)為150916），經(jīng)中國(guó)科學(xué)院華南植物園華南植物鑒定中心葉華谷研究員鑒定為百合科植物土茯苓Roxb.的干燥根狀莖。

2 提取與分離

干燥的土茯苓藥材15.0 kg，用8倍體積75%乙醇水溶液在100 ℃條件下加熱回流提取3次，每次2 h，合并濃縮，用醋酸乙酯萃取，回收醋酸乙酯提取液后干燥得到土茯苓總苷干膏粉（540.0 g），取干燥的土茯苓總苷干膏粉200.0 g經(jīng)硅膠柱色譜，以二氯乙烷-甲醇體系梯度洗脫（1∶0～2∶1），經(jīng)TLC分析合并為5個(gè)部分（Fr. 1～5）。Fr. 1析出沉淀（5.8 g）經(jīng)Sephadex LH-20柱色譜（二氯乙烷-甲醇1∶1）得化合物3（1.5 g）和17（350.6 mg）。Fr. 1母液（2.5 g）先后經(jīng)Sephadex LH-20柱色譜（二氯乙烷-甲醇1∶1）、反相制備高效液相色譜，甲醇-水（45∶60）為流動(dòng)相制備得化合物1（12.3 mg，R= 32.2 min）、2（50.1 mg，R= 48.1 min）和5（223.5 mg，R= 60.6 min）。Fr. 2（3.4 g）先后經(jīng)硅膠柱色譜、Sephadex LH-20柱色譜（二氯乙烷-甲醇1∶1）、反相制備高效液相色譜乙腈-水（18∶82）為流動(dòng)相制備得化合物23（18.5 mg，R= 56.5 min）、24（20.6 mg，R= 70.1 min）、和25（33.2 mg，R= 86.4 min）。Fr. 3（8.4 g）經(jīng)反相柱色譜，甲醇-水（10∶90～90∶10）梯度洗脫，分別得到3個(gè)部分（Fr. 3.1～3.3）。Fr. 3.1（1.2 g）先后經(jīng)Sephadex LH-20柱色譜（甲醇洗脫）、反相制備高效液相色譜，乙腈-水（25∶80）為流動(dòng)相制備得化合物4（7.9 mg，R= 61.6 min）和6（5.1 mg，R= 69.3 min）。Fr. 3.2（1.9 g）先后經(jīng)Sephadex LH-20柱色譜（甲醇洗脫）、反相制備高效液相色譜，乙腈-水（18∶80）為流動(dòng)相制備得化合物7（12.3 mg，R= 63.0 min）和8（8.9 mg，R= 71.5 min）。Fr.3.3（1.5 g）先后經(jīng)Sephadex LH-20柱色譜（甲醇洗脫）、反相制備高效液相色譜，乙腈-水（18∶82）為流動(dòng)相制備得化合物9（5.2 mg，R= 46.1 min）、10（6.7 mg，R= 52.3 min）和19（10.8 mg，R= 68.4 min）。Fr. 4（76.0 g）經(jīng)反相硅膠柱色譜，甲醇-水體系（10∶90～90∶10）梯度洗脫，分別得到3個(gè)部分（Fr. 4.1～4.2）。Fr. 4.1析出沉淀（13.0 g）經(jīng)Sephadex LH-20柱色譜（甲醇洗脫）得化合物11（3.5 g）和16（173.1 mg）。Fr. 4.1母液（22.6 g）先后Sephadex LH-20柱色譜（甲醇洗脫）、反相制備高效液相色譜，甲醇-水（35∶65）為流動(dòng)相制備得化合物12（265.1 mg，R= 36.4 min）、18（32.7 mg，R= 46.7 min）和20（8.1 mg，R= 52.3 min）。Fr.4.2（18.0 g）先后Sephadex LH-20柱色譜（甲醇洗脫）、反相制備高效液相色譜，乙腈-水（20∶80）為流動(dòng)相制備得化合物13（146.2 g，R= 71.3 min）、14（71.0 mg，R= 80.5 min）和15（34.2 mg，R= 96.3 min）。Fr.5（6.4 g）先后經(jīng)硅膠柱色譜、Sephadex LH-20柱色譜（二氯乙烷-甲醇1∶1）、反相制備高效液相色譜乙腈-水（18∶82）為流動(dòng)相制備得化合物19（30.2 mg，R= 82.2 min）、21（12.1 mg，R= 91.0 min）和22（5.3 mg，R= 105.4 min）。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

表1 化合物1的核磁波譜數(shù)據(jù)(600/150 MHz, DMSO-d6)

圖1 化合物1結(jié)構(gòu)及主要的HMBC (H→C) 相關(guān)

圖2 化合物1理論計(jì)算ECD R構(gòu)型(- - - -)與實(shí)驗(yàn)測(cè)定ECD (—)

化合物3：白色粉末；ESI-MS/: 305 [M＋H]+；1H-NMR (600 MHz, DMSO-6): 11.91 (1H, s, 5-OH), 10.83 (1H, s, 7-OH), 9.03 (1H, s, 3′-OH), 8.98 (1H, s, 4′-OH), 6.88 (1H, d,= 1.7 Hz, H-2′), 6.76 (2H, m, H-5′, 6′), 5.91 (1H, d,= 2.1 Hz, H-8), 5.87 (1H, d,= 2.1 Hz, H-6), 5.75 (1H, d,= 6.2 Hz, 3-OH), 4.98 (1H, d,= 11.1 Hz, H-2), 4.50 (1H, dd,= 11.2, 6.2 Hz, H-3)；13C-NMR (150 MHz, DMSO-6):83.5 (C-2), 72.0 (C-3), 198.2 (C-4), 95.5 (C-4a), 163.0 (C-5), 100.9 (C-6), 163.8 (C-7), 96.5 (C-8), 167.5 (C-8a), 128.5 (C-1′), 115.6 (C-2′), 146.2 (C-3′), 145.4 (C-4′), 115.8 (C-5′), 119.8 (C-6′)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)對(duì)比[5]，鑒定化合物3為花旗松素。

化合物4：黃色粉末；ESI-MS/: 289 [M＋H]+；1H-NMR (600 MHz, DMSO-6): 12.15 (1H, s, 5-OH), 10.82 (1H, s, 7-OH), 9.08 (1H, s, 4′-OH), 9.03 (1H, s, 3′-OH), 6.88 (1H, s, H-2′), 6.75 (2H, s, H-5′, 6′), 5.89 (1H, d,= 2.1 Hz, H-6), 5.88 (1H, d,= 2.1 Hz, H-8), 5.38 (1H, dd,= 12.5, 3.1 Hz, H-2), 3.19 (1H, dd,= 17.1, 12.5 Hz, H-3a), 2.68 (1H, dd,= 17.1, 3.2 Hz, H-3b)；13C-NMR (150 MHz, DMSO-6):78.9 (C-2), 42.5 (C-3), 196.8 (C-4), 163.4 (C-5), 95.4 (C-6), 163.9 (C-7), 96.2 (C-8), 167.1 (C-9), 102.3 (C-10), 129.9 (C-1′), 114.8 (C-2′), 146.2 (C-3′), 145.6 (C-4′), 115.8 (C-5′), 118.4 (C-6′)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)對(duì)比[6]，鑒定化合物4為北美圣草素。

化合物5：白色粉末；ESI-MS/: 273 [M＋H]+；1H-NMR (600 MHz, DMSO-6): 12.15 (1H, s, 5-OH), 10.78 (1H, s, 7-OH), 9.58 (1H, s, 4′-OH), 7.32 (2H, d,= 8.6 Hz, H-2′, 6′), 6.79 (2H, d,= 8.6 Hz, H-3′, 5′), 5.88 (2H, brs, H-6, 8), 5.44 (1H, dd,= 12.8, 3.0 Hz, H-2), 3.26 (1H, dd,= 17.1, 12.8 Hz, H-3a), 2.28 (1H, dd,= 17.1, 3.1 Hz, H-3b)；13C- NMR (150 MHz, DMSO-6):78.9 (C-2), 42.4 (C-3), 196.8 (C-4), 95.4 (C-4a), 163.4 (C-5), 102.2 (C-6), 164.0 (C-7), 96.3 (C-8), 167.1 (C-8a), 129.3 (C-1′), 128.8 (C-2′, 6′), 115.6 (C-3′, 5′), 158.2 (C-4′)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)對(duì)比[7]，鑒定化合物5為柚皮素。

化合物6：黃色粉末；ESI-MS/: 289 [M＋H]+；1H-NMR (600 MHz, DMSO-6): 11.89 (1H, s, 5-OH), 9.00 (2H, s, H-3′, 5′), 6.88 (1H, s, H-4′), 6.75 (2H, s, H-2′, 6′), 5.90 (1H, s, H-8), 5.85 (1H, s, H-6), 5.74 (1H, d,= 4.8 Hz, H-2), 4.97 (1H, d,= 11.1 Hz, H-3a), 4.49 (1H, dd,= 11.1, 4.8 Hz, H-3b)；13C-NMR (150 MHz, DMSO-6): 78.5 (C-2), 42.1 (C-3), 196.5 (C-4), 163.0 (C-5), 95.9 (C-6), 95.1 (C-8), 166.7 (C-7), 163.6 (C-9), 101.9 (C-10), 129.6 (C-1′), 114.5 (C-2′), 145.8 (C-3′), 118.1 (C-4′), 115.5 (C-6′), 145.3 (C-5′)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)對(duì)比[8]，鑒定化合物6為3′,5′,5,7-四羥基二氫黃酮。

化合物7：黃色粉末；ESI-MS/: 303 [M＋H]+；1H-NMR (600 MHz, DMSO-6): 12.16 (1H, s, 5-OH), 7.09 (1H, d,= 2.0 Hz, H-2′), 6.90 (1H, dd,= 8.1, 2.0 Hz, H-6′), 6.79 (1H, d,= 8.1 Hz, H-5′), 5.89 (1H, d,= 2.1 Hz, H-6), 5.88 (1H, d,= 2.1 Hz, H-8), 5.43 (1H, dd,= 12.9, 2.9 Hz, H-2), 3.79 (3H, s, 3′-OCH3), 3.32 (1H, dd,= 17.1, 12.9 Hz, H-3b), 2.68 (1H, dd,= 17.1, 3.0 Hz, H-3a)；13C-NMR (150 MHz, DMSO-6):79.2 (C-2), 42.6 (C-3), 196.9 (C-4), 164.0 (C-5), 167.2 (C-7), 95.5 (C-8), 163.4 (C-9), 102.2 (C-10), 129.9 (C-1′), 111.6 (C-2′), 148.0 (C-3′), 147.4 (C-4′), 120.2 (C-6′), 115.6 (C-5′), 96.3 (C-6), 56.2 (3′-OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)對(duì)比[9]，鑒定化合物7為高圣草素。

化合物8：黃色粉末；ESI-MS/: 303 [M＋H]+；1H-NMR (600 MHz, DMSO-6): 12.19 (1H, s, 5-OH), 10.66 (1H, s, 7-OH), 9.57 (1H, s, 4′-OH), 7.30 (2H, d,= 8.6 Hz, H-2′, 6′), 6.79 (2H, d,= 8.5 Hz, H-3′, 5′), 5.96 (1H, s, H-8), 5.41 (1H, dd,= 12.9, 3.0 Hz, H-2), 3.66 (3H, s, 6-OCH3), 3.25 (1H, dd,= 17.1, 12.9 Hz, H-3), 2.68 (1H, dd,= 17.1, 3.0 Hz, H-3)；13C-NMR (150 MHz, DMSO-6): 79.0 (C-2), 42.5 (C-3), 197.6 (C-4), 155.6 (C-5), 129.4 (C-6), 95.5 (C-8), 158.5 (C-7), 160.0 (C-9), 102.3 (C-10), 129.4 (C-1′), 128.8 (C-2′, 6′), 115.6 (C-3′, 5′), 158.2 (C-4′), 60.5 (6-OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)對(duì)比[10]，鑒定化合物8為6-甲氧基柚皮素。

化合物9：黃色粉末；ESI-MS/: 289 [M＋H]+；1H-NMR (600 MHz, DMSO-6): 11.91 (1H, s, 5-OH), 7.31 (2H, d,= 8.4 Hz, H-2′, 6′), 6.79 (2H, d,= 8.4 Hz, H-3′, 5′), 5.91 (1H, d,= 2.1 Hz, H-8), 5.86 (1H, d,= 2.1 Hz, H-6), 5.75 (1H, s, 3-OH), 5.05 (1H, d,= 11.4 Hz, H-2), 4.58 (1H, d,= 11.4 Hz, H-3)；13C-NMR (150 MHz, DMSO-6): 82.9 (C-2), 71.5 (C-3), 197.8 (C-4), 163.4 (C-5), 96.2 (C-6), 167.4 (C-7), 95.2 (C-8), 162.6 (C-9), 100.3 (C-10), 126.7 (C-1'), 129.8 (C-2', 6'), 115.1 (C-3', 5'), 158.2 (C-4')。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)對(duì)比[11]，鑒定化合物9為二氫山柰酚。

化合物10：黃色粉末；ESI-MS/: 333 [M＋H]+；1H-NMR (600 MHz, DMSO-6): 12.19 (1H, s, 5-OH), 9.15 (1H, s, 3′-OH), 7.08 (1H, d,= 2.1 Hz, H-2′), 6.89 (1H, dd,= 8.1, 2.1 Hz, H-5′), 6.79 (1H, d,= 8.1 Hz, H-6′), 5.98 (1H, s, H-8), 5.40 (1H, dd,= 13.0, 3.0 Hz, H-2), 3.78 (3H, s, 4′-OCH3), 3.66 (3H, s, 6-OCH3), 3.29 (1H, dd,= 17.2, 13.0 Hz, H-3b), 2.68 (1H, dd,= 17.2, 3.0 Hz, H-3a)；13C-NMR (150 MHz, DMSO-6):78.7 (C-2), 42.1 (C-3), 197.0 (C-4), 157.6 (C-5), 129.3 (C-6), 157.9 (C-7), 95.0 (C-8), 159.5 (C-9), 101.7 (C-10), 128.9 (C-1′), 111.0 (C-2′), 146.8 (C-3′), 147.4 (C-4′), 115.0 (C-5′), 119.6 (C-6′), 55.6 (4′-OCH3), 59.9 (6-OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)對(duì)比[12]，鑒定化合物10為6-甲氧基橙皮素。

化合物11：白色粉末；ESI-MS/451 [M＋H]+；1H-NMR (600 MHz, methanol-4):6.86 (1H, d,= 2.0 Hz, H-2′), 6.74 (1H, dd,= 8.1, 2.0 Hz, H-6′), 6.71 (1H, d,= 8.1 Hz, H-5′), 5.82 (1H, d,= 2.2 Hz, H-6), 5.80 (1H, d,= 2.1 Hz, H-8), 4.97 (1H, d,= 10.7 Hz, H-2), 4.48 (1H, d,= 10.7 Hz, H-3), 4.15 (1H, m, H-1′′), 3.95 (1H, d,= 1.7 Hz, H-2′′), 3.56 (1H, dd,= 9.6, 3.3 Hz, H-3′′), 3.44 (1H, m, H-4′′), 3.21 (1H, m, H-5′′), 1.09 (3H, d,= 6.2 Hz, H-6′′)；13C-NMR (150 MHz, methanol-4):82.6 (C-2), 77.2 (C-3), 194.6 (C-4), 164.2 (C-5), 96.0 (C-6), 167.2 (C-7), 94.9 (C-8), 162.7 (C-9), 101.1 (C-10), 127.8 (C-1′), 114.9 (C-2′), 145.2 (C-3′), 146.0 (C-4′), 114.1 (C-5′), 119.1 (C-6′), 100.8 (C-1′′), 70.4 (C-2′′), 70.8 (C-3′′), 72.4 (C-4′′), 69.1 (C-5′′), 16.5 (C-6′′)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)對(duì)比[13]，鑒定化合物11為落新婦苷。

化合物12：白色粉末；ESI-MS/: 451 [M＋H]+；1H-NMR (400 MHz, methanol-4): 6.97 (1H, d,= 1.7 Hz, H-2′), 6.86 (1H, dd,= 8.2, 1.7 Hz, H-6′), 6.82 (1H, d,= 8.1 Hz, H-5′), 6.00 (1H, d,=1.9 Hz, H-6), 5.95 (1H, d,=1.9 Hz, H-8), 5.44 (1H, d,= 2.4 Hz, H-2), 4.98 (1H, d,= 1.6 Hz, H-1′′), 4.21 (1H, d,= 2.4 Hz, H-3), 3.70 (1H, dd,= 3.4, 1.6 Hz, H-2′′), 3.47 (1H, dd,= 9.6, 3.4 Hz, H-3′′), 3.23 (1H, t,= 9.6 Hz, H-4′′), 2.50 (1H, m, H-5′′), 0.96 (3H, d,= 6.2 Hz, H-6′′)；13C-NMR (100 MHz, methanol-4): 80.7 (C-2), 74.2 (C-3), 192.9 (C-4), 164.8 (C-5), 96.0 (C-6), 167.4 (C-7), 94.8 (C-8), 163.1 (C-9), 100.4 (C-10), 127.3 (C-1′), 114.9 (C-2′), 144.9 (C-3′), 145.3 (C-4′), 113.8 (C-5′), 118.0 (C-6′), 98.8 (C-1′′), 70.6 (C-2′′), 70.6 (C-3′′), 71.9 (C-4′′), 67.0 (C-5′′), 16.4 (C-6′′)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)對(duì)比[14]，鑒定化合物12為異落新婦苷。

化合物13：白色粉末；ESI-MS/: 451 [M＋H]+；1H-NMR (600 MHz, methanol-4): 6.98 (1H, brs, H-2′), 6.86 (1H, brd,= 8.3 Hz, H-6′), 6.83 (1H, d,= 8.1 Hz, H-5′), 5.94 (1H, s, H-6), 5.92 (1H, s, H-8), 5.06 (1H, brs, H-1′′), 4.89 (1H, d,= 11.3 Hz, H-2), 4.54 (1H, d,= 11.3 Hz, H-3), 3.91 (1H, d,= 3.2 Hz, H-2′′), 3.28 (1H, dd,= 9.6, 3.2 Hz, H-3′′), 3.10 (1H, t,= 9.5 Hz, H-4′′), 2.21 (1H, dq,= 9.6, 6.2 Hz, H-5′′), 0.80 (3H, d,= 6.2 Hz, H-6′′)；13C- NMR (100 MHz, methanol-4): 82.5 (C-2), 77.2 (C-3), 194.6 (C-4), 163.9 (C-5), 96.2 (C-6), 167.1 (C-7), 95.0 (C-8), 162.6 (C-9), 101.1 (C-10), 127.9 (C-1′), 115.1 (C-2′), 145.0 (C-3′), 145.9 (C-4′), 114.3 (C-5′), 119.3 (C-6′), 100.7 (C-1′′), 70.4 (C-2′′), 70.8 (C-3′′), 72.5 (C-4′′), 69.2 (C-5′′), 16.6 (C-6′′)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)對(duì)比[14]，鑒定化合物13為新落新婦苷。

化合物14：白色粉末；ESI-MS/: 451 [M＋H]+；1H-NMR (400 MHz, methanol-4): 6.90 (1H, d,= 1.9 Hz, H-2′), 6.75 (1H, dd,= 8.2, 1.9 Hz, H-6′), 6.70 (1H, d,= 8.1 Hz, H-5′), 5.87 (1H, d,= 2.1 Hz, H-6), 5.83 (1H, d,= 2.1 Hz, H-8), 5.23 (1H, d,= 1.8 Hz, H-2), 4.15 (1H, d,= 1.8 Hz, H-3), 3.97 (1H, d,= 1.7 Hz, H-1′′), 3.56 (1H, dd,= 3.4, 1.7 Hz, H-2′′), 3.40 2H, m , H-3′′, 4′′), 3.17 (1H, t,= 9.6 Hz, H-5′′), 1.04 (3H, d,= 6.2 Hz, H-6′′)；13C-NMR (100 MHz, methanol-4): 180.9 (C-2), 77.0 (C-3), 92.5 (C-4), 164.6 (C-5), 95.9 (C-6), 167.4 (C-7), 94.6 (C-8), 163.1 (C-9), 101.2 (C-10), 127.1 (C-1′), 114.8 (C-2′), 144.9 (C-3′), 145.3 (C-4′), 113.9 (C-5′), 118.1 (C-6′), 100.8 (C-1′′), 70.2 (C-2′′), 70.7 (C-3′′), 72.3 (C-4′′), 69.2 (C-5′′), 16.1 (C-6′′)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)對(duì)比[14]，鑒定化合物14為新異落新婦苷。

化合物15：白色粉末；ESI-MS/: 435 [M＋H]+；1H-NMR (600 MHz, methanol-4): 7.36 (2H, d,= 8.6 Hz, H-2′, 6′), 6.86 (2H, d,= 8.6 Hz, H-3′, 5′), 5.94 (1H, d,= 2.2 Hz, H-8), 5.90 (1H, d,= 2.2 Hz, H-6), 5.11 (1H, d,= 11.0 Hz, H-2), 4.61 (1H, d,= 11.0 Hz, H-3), 4.50 (1H, brs, H-1″), 4.02 (1H, d,= 1.7 Hz, H-4″), 3.70 (1H, dd,= 9.6, 3.3 Hz, H-2″), 3.54 (1H, dd,= 3.3, 1.7 Hz, H-3″), 3.33 (1H, t,= 9.6 Hz, H-5″), 1.21 (3H, d,= 6.2 Hz, H-6″)；13C- NMR (150 MHz, methanol-4): 82.4 (C-2), 77.3 (C-3), 194.6 (C-4), 164.0 (C-5), 96.1 (C-6), 167.1 (C-7), 95.0 (C-8), 162.7 (C-9), 101.1 (C-10), 127.2 (C-1′), 128.7 (C-2′, 6′), 115.1 (C-3′, 5′), 158.0 (C-4′), 100.8 (C-1′′), 70.4 (C-2′′), 70.8 (C-3′′), 72.5 (C-4′′), 69.2 (C-5′′), 16.5 (C-6′′)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)對(duì)比[5]，鑒定化合物15為黃杞苷。

化合物16：白色粉末；ESI-MS/: 435 [M＋H]+；1H-NMR (600 MHz, DMSO-6): 11.77 (1H, s, 5-OH), 9.50 (1H, s, 7-OH), 7.26 (2H, d,= 8.1 Hz, H-2′, 6′), 6.76 (2H, d,= 8.1 Hz, H-3′, 5′), 5.97 (1H, d,= 2.0 Hz, H-8), 5.93 (1H, d,= 2.0 Hz, H-6), 5.61 (1H, d,= 1.9 Hz, H-2), 4.76 (1H, s, H-1″), 4.17 (1H, dd,= 4.1, 1.8 Hz, H-3), 3.30 (1H, m, H-2″), 3.18 (1H, m, H-3″), 3.03 (1H, td,= 9.5, 5.2 Hz, H-4″), 2.32 (1H, m, H-5″), 0.80 (3H, d,= 6.2 Hz, H-6″)；13C-NMR (150 MHz, DMSO-6): 80.5 (C-2), 76.0 (C-3), 193.1 (C-4), 164.36 (C-5), 96.5 (C-6), 167.5 (C-7), 95.4 (C-8), 163.0 (C-9), 101.2 (C-10), 126.3 (C-1′), 128.7 (C-2′, 6′), 115.4 (C-3′, 5′), 157.9 (C-4′), 101.0 (C-1″), 70.4 (C-2″), 70.8 (C-3″), 72.0 (C-4″), 69.6 (C-5″), 17.9 (C-6″)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)對(duì)比[5]，鑒定化合物16為異黃杞苷。

化合物17：黃色粉末；ESI-MS/: 303 [M＋H]+；1H-NMR (600 MHz, DMSO-6): 12.50 (1H, s, 5-OH), 7.68 (1H, d,= 2.2 Hz, H-2′), 7.54 (1H, dd,= 8.5, 2.2 Hz, H-6′), 6.89 (1H, d,= 8.5 Hz, H-5′), 6.41 (1H, d,= 2.1 Hz, H-6), 6.19 (1H, d,= 2.1 Hz, H-8)；13C-NMR (150 MHz, DMSO-6): 147.1 (C-2), 136.0 (C-3), 176.4 (C-4), 161.0 (C-5), 98.7 (C-6), 164.4 (C-7), 93.9 (C-8), 156.4 (C-9), 103.6 (C-10), 122.5 (C-1'), 115.6 (C-2'), 147.3 (C-3'), 145.4 (C-4'), 115.6 (C-5'), 120.3 (C-6')。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)對(duì)比[7]，鑒定化合物17為槲皮素。

化合物18：黃色粉末；ESI-MS/: 271 [M＋H]+；1H-NMR (600 MHz, DMSO-6): 7.75 (2H, d,= 8.7 Hz, H-2′, 6′), 6.86 (2H, d,= 8.7 Hz, H-3′, 5′), 6.53 (1H, s, H-3), 6.18 (1H, s, H-8), 6.04 (1H, s, H-6)；13C-NMR (150 MHz, DMSO-6): 166.3 (C-2), 102.2 (C-3), 182.3 (C-4), 158.2 (C-5), 99.3 (C-6), 164.7 (C-7), 94.0 (C-8), 161.5 (C-9), 103.4 (C-10), 121.8 (C-1'), 128.0 (C-2', 6'), 115.7 (C-3', 5'), 161.4 (C-4')。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)對(duì)比[5]，鑒定化合物18為芹菜素。

化合物19：黃色粉末；ESI-MS/: 317 [M＋H]+；1H-NMR (600 MHz, methanol-4): 7.84 (2H, d,= 8.2 Hz, H-2′, 6′), 6.92 (2H, d,= 8.2 Hz, H-3′, 5′), 6.59 (1H, s, H-3), 6.56 (1H, s, H-8), 3.88 (H, s, 6-OCH3)；13C-NMR (150 MHz, methanol-4): 165.0 (C-2), 102.0 (C-3), 182.9 (C-4), 153.3 (C-5), 131.5 (C-6), 157.4 (C-7), 93.9 (C-8), 152.6 (C-9), 104.4 (C-10), 121.9 (C-1′), 128.1 (C-2′, 6′), 115.6 (C-3′, 5′), 161.4 (C-4′), 59.5 (6-OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)對(duì)比[9]，鑒定化合物19為高車(chē)前素。

化合物20：白色粉末；ESI-MS/: 287 [M＋H]+；1H-NMR (600 MHz, methanol-4): 8.09 (2H, d,= 8.4 Hz, H-2′, 6′), 6.90 (2H, d,= 8.4 Hz, H-3′, 5′), 6.40 (1H, s, H-8), 6.18 (1H, s, H-6)；13C-NMR (150 MHz, methanol-4): 147.0 (C-2), 136.4 (C-3), 176.4 (C-4), 161.1 (C-5), 98.9 (C-6), 165.3 (C-7), 94.0 (C-8), 156.7 (C-9), 103.1 (C-10), 122.2 (C-1'), 129.9 (C-2', 6'), 115.9 (C-3', 5'), 159.6 (C-4')。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)對(duì)比[7]，鑒定化合物20為山柰酚。

化合物21：白色粉末；ESI-MS/: 341 [M＋H]+；1H-NMR (600 MHz, DMSO-6): 12.43 (1H, s, 5-OH), 8.33 (1H, s, H-2), 6.38 (1H, d,= 2.1 Hz, H-6), 6.21 (1H, d,= 2.1 Hz, H-8), 5.23 (1H, d,= 1.7 Hz, H-1′), 3.67～3.29 (4H, m, H-2′～5′), 1.14 (3H, d,= 6.2 Hz, H-6′)；13C-NMR (150 MHz, DMSO-6): 148.5 (C-2), 138.5 (C-3), 177.5 (C-4), 105.2 (C-4a), 162.0 (C-5), 99.3 (C-6), 164.9 (C-7), 94.4 (C-8), 157.7 (C-8a), 101.0 (C-1′), 70.4 (C-2′), 70.7 (C-3′), 72.0 (C-4′), 70.2 (C-5′), 18.3 (C-6′)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)對(duì)比[15]，鑒定化合物21為光葉菝葜苷。

化合物22：白色粉末；ESI-MS/: 179 [M＋H]+；1H-NMR (600 MHz, DMSO-6): 12.70 (1H, s, 5-OH), 8.19 (1H, d,= 6.0 Hz, H-2), 6.37 (1H, d,= 2.1 Hz, H-8), 6.28 (1H, d,= 6.0 Hz, H-3), 6.20 (1H, d,= 2.1 Hz, H-6)；13C-NMR (150 MHz, DMSO-6): 158.0 (C-2), 111.0 (C-3), 181.8 (C-4), 162.1 (C-5), 99.5 (C-6), 164.9 (C-7), 94.4 (C-8), 158.3 (C-9), 105.4 (C-10)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)對(duì)比[16]，鑒定化合物22為5,7-二羥基色原酮。

化合物23：白色結(jié)晶（甲醇）；ESI-MS/: 291 [M＋H]+；1H-NMR (600 MHz, DMSO-6): 9.19 (1H, s, 5-OH), 8.95 (1H, s, 7-OH), 8.87 (1H, s, 3′-OH), 8.82 (1H, s, 4′-OH), 6.72 (1H, d,= 2.0 Hz, H-2′), 6.69 (1H, d,= 8.1 Hz, H-5′), 6.60 (1H, dd,= 8.2, 2.0 Hz, H-6′), 5.89 (1H, d,= 2.3 Hz, H-8), 5.69 (1H, d,= 2.3 Hz, H-6), 4.87 (1H, d,= 5.1 Hz, H-2), 4.48 (1H, d,= 7.4 Hz, H-3), 2.66 (1H, dd,= 16.0, 5.1 Hz, H-4a), 2.35 (1H, dd,= 16.0, 7.4 Hz, H-4b)；13C-NMR (150 MHz, DMSO-6): 80.9 (C-2), 66.2 (C-3), 27.8 (C-4), 156.4 (C-5), 95.0 (C-6), 156.1 (C-7), 93.8 (C-8), 155.3 (C-9), 99.0 (C-10), 130.5 (C-1′), 115.0 (C-2′), 144.8 (C-3′, 4′), 114.4 (C-5′), 118.3 (C-6′)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)對(duì)比[17]，鑒定化合物23為兒茶素。

化合物24：白色結(jié)晶（甲醇）；ESI-MS/: 291 [M＋H]+；1H-NMR (600 MHz, DMSO-6): 9.11 (1H, s, 5-OH), 8.90 (1H, s, 7-OH), 8.80 (1H, s, 3′-OH), 8.71 (1H, s, 4′-OH), 6.90 (1H, d,= 1.8 Hz, H-2′), 6.67 (1H, d,= 8.1 Hz, H-5′), 6.65 (1H, dd,= 8.2, 1.8 Hz, H-6′), 5.90 (1H, d,= 2.3 Hz, H-8), 5.72 (1H, d,= 2.3 Hz, H-6), 4.74 (1H, brs, H-2), 4.66 (1H, d,= 4.5 Hz, 3-OH), 4.01 (1H, brs, H-3), 2.68 (1H, dd,= 16.3, 4.5 Hz, H-4a), 2.48 (1H, dd,= 16.4, 3.6 Hz, H-4b)；13C-NMR (150 MHz, DMSO-6): 78.5 (C-2), 65.4 (C-3), 28.7 (C-4), 157.0 (C-5), 95.5 (C-6), 156.7 (C-7), 94.5 (C-8), 156.2 (C-9), 99.0 (C-10), 131.1 (C-1′), 115.4 (C-2′), 145.0 (C-3′), 144.9 (C-4′), 115.2 (C-5′), 118.4 (C-6′)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)對(duì)比[18]，鑒定化合物24為表兒茶素。

利益沖突 所有作者均聲明不存在利益沖突

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Chemical constituents from total glycosides of S

TANG Ying-zhan1, 2, 3, LIU Ju-yan3, JIANG Zhen-zhou2, JIANG Tao1, PENG Hong-ying1, ZHANG Lu-yong2, 4

1. Guangzhou Baiyunshan Jingxiutang Pharmaceutical Co., Ltd., Guangzhou 510130, China 2. New Drug Screening Center, Jiangsu Center for Pharmacodynamics Research and Evaluation, China Pharmaceutical University, Nanjing 210009, China 3. Guangzhou Pharmaceutical Holdings Co., Ltd., Guangzhou 510103, China 4. Center for Drug Research and Development, Guangdong Pharmaceutical University, Guangzhou 510006, China

To study chemical constituents of total glycosides of Tufuling (Roxb.).The separation and purification of the chemical components of total glucosides ofwas carried out systematically by silica gel column chromatography, gel chromatography and semi-preparative HPLC. The structures were identified by MS, NMR and CD spectral data in combination with the physicochemical properties of the isolated monomeric compounds.Twenty-five compounds were isolated from the total glucosides ofand identified as glabachromone A (1), sawarachromone (2), taxifolin (3), eriodictyol (4), naringenin (5), 3′,5′,5,7-tetrahydroxylflavanone (6), homoeriodictyol (7), 6-methoxynaringenin (8), dihydrokaempferol (9), 6-methoxyhesperetin (10), astilbin (11), isoastilbin (12), neoastilbin (13), neoisoastilbin (14), engeletin (15), isoengeletin (16), quercetin (17), luteolin (18), hispdulin (19), kaempferol (20), smiglanin (21), 5,7-dihydroxychromone (22), (＋)-catechin (23), (?)-epicatechin (24), and cinchonain Ib (25).Compounds 1 is a new compound, compounds 2 and 8 are firstly isolated from the genus, and compound 6, 7, 8, 9, 19 and 22 are obtained from this plant for the first time.

Roxb.; total glycosides; glabachromone A; sawarachromone; 6-methoxynaringenin; dihydrokaempferol;hispdulin

R284.1

A

0253 - 2670(2022)22 - 6977 - 08

10.7501/j.issn.0253-2670.2022.22.001

2022-09-22

廣州市創(chuàng)新平臺(tái)建設(shè)計(jì)劃實(shí)驗(yàn)室建設(shè)專(zhuān)題項(xiàng)目（201805010006）

湯迎湛，男，博士，研究方向?yàn)橹兴幮卵邪l(fā)。E-mail: tang1986gd@163.com

張陸勇，男，教授，博士生導(dǎo)師，研究方向?yàn)榉肿铀幚韺W(xué)與毒代動(dòng)力學(xué)。E-mail: lyzhang@cpu.edu.cn

[責(zé)任編輯 王文倩]