中藥基于外泌體影響腫瘤治療的研究進(jìn)展

任文靜，李朝霞，仇 峰

中藥基于外泌體影響腫瘤治療的研究進(jìn)展

任文靜，李朝霞，仇 峰*

首都醫(yī)科大學(xué)中醫(yī)藥學(xué)院，北京 100069

傳統(tǒng)中藥作為腫瘤現(xiàn)代療法的主流補(bǔ)充和替代療法已被廣泛接受。然而，目前很多有確切抗腫瘤療效的中藥卻無法用對(duì)抗醫(yī)學(xué)的思維明確其藥效物質(zhì)基礎(chǔ)與作用機(jī)制。外泌體作為一種內(nèi)源性物質(zhì)，可參與腫瘤微環(huán)境以及其他組織、器官的相互通訊，也可作為中間媒介物質(zhì)影響腫瘤治療。系統(tǒng)綜述了中藥通過外泌體間接抗腫瘤的作用機(jī)制以及外泌體用作中藥載體拓展抗腫瘤中藥的臨床療效與應(yīng)用，旨在基于外泌體發(fā)掘更多的抗腫瘤中藥藥效成分，進(jìn)一步闡釋中藥抗腫瘤的復(fù)雜機(jī)制，推動(dòng)中醫(yī)藥在腫瘤治療領(lǐng)域的發(fā)展與應(yīng)用。

中藥；活性成分；腫瘤治療；腫瘤微環(huán)境；外泌體；載體

《2022年度癌癥統(tǒng)計(jì)報(bào)告》預(yù)計(jì)：到2022年，美國(guó)將發(fā)生1 918 030例新發(fā)癌癥病例和609 360例癌癥死亡病例[1]。Xia等[2]預(yù)計(jì)，中國(guó)到2022年將發(fā)生大約482萬例新發(fā)癌癥病例和321萬例癌癥死亡病例。臨床實(shí)踐證明手術(shù)、放療、化療等任一單一療法治療腫瘤均難以取得最佳療效，且常帶來明顯的損傷和不良反應(yīng)，所以目前腫瘤治療多以綜合治療為主。臨床數(shù)據(jù)顯示，我國(guó)2/3以上的腫瘤患者采用中西醫(yī)聯(lián)合療法。事實(shí)上，以中醫(yī)手段治療腫瘤的應(yīng)用由來已久，國(guó)醫(yī)大師周岱翰將“虛、瘀、痰、毒”高度概括為惡性腫瘤的4大類病機(jī)，并創(chuàng)造性提出“帶瘤生存”的腫瘤辨治觀。中藥因其多成分、多靶點(diǎn)的特點(diǎn)可以多途徑發(fā)揮抗腫瘤作用。然而，很多有確切抗腫瘤療效的中藥卻在很長(zhǎng)時(shí)間內(nèi)無法用對(duì)抗醫(yī)學(xué)的思維明確其藥效物質(zhì)基礎(chǔ)，這種現(xiàn)象提示中藥除了直接作用于腫瘤病灶外，可能還存在其他途徑發(fā)揮抗腫瘤作用。

1 腫瘤與其微環(huán)境存在復(fù)雜的相互作用

腫瘤微環(huán)境指腫瘤細(xì)胞存在的周圍微環(huán)境，包含免疫T細(xì)胞、腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞、癌癥相關(guān)成纖維細(xì)胞、細(xì)胞外基質(zhì)、分泌因子、血液和淋巴血管網(wǎng)等多種細(xì)胞和組分[3-7]，非常復(fù)雜。腫瘤微環(huán)境的形成有免疫抑制和慢性炎性2個(gè)主要特征。免疫細(xì)胞、基質(zhì)細(xì)胞和惡性細(xì)胞產(chǎn)生的腫瘤微環(huán)境給癌細(xì)胞帶來壓力升高、氧化應(yīng)激、營(yíng)養(yǎng)剝奪和競(jìng)爭(zhēng)、缺氧和免疫監(jiān)視等諸多挑戰(zhàn)[8]。

研究表明，腫瘤微環(huán)境以及其他組織、器官相互通訊的方式之一是外泌體。外泌體通常是指直徑為30～150 nm的胞外囊泡，存在于幾乎所有體液中，且是近年來的研究熱點(diǎn)。據(jù)ExoCarta數(shù)據(jù)庫（http://www.exocarta.org/）統(tǒng)計(jì)，已有超過286個(gè)外泌體研究的41 860個(gè)蛋白質(zhì)和超過7540個(gè)RNA記錄在庫可供查詢借鑒。

2 腫瘤源性外泌體（tumor derived exosomes，TDEs）具有促癌作用

腫瘤的發(fā)生與發(fā)展離不開腫瘤微環(huán)境，外泌體包含蛋白質(zhì)、DNA、微小RNA（microRNA，miRNA）、長(zhǎng)鏈非編碼RNA、信使RNA、腫瘤基因和轉(zhuǎn)錄因子等多種生物活性物質(zhì)，而這些生物活性物質(zhì)的水平與腫瘤的侵襲和腫瘤微環(huán)境有一定關(guān)系。TDEs具有促癌特性，可通過重塑腫瘤微環(huán)境促進(jìn)血管生成，促進(jìn)癌細(xì)胞的遷移、侵襲、轉(zhuǎn)移與耐藥促進(jìn)癌癥發(fā)展。

2.1 外泌體的生物發(fā)生與功能

外泌體的生物發(fā)生有質(zhì)膜和內(nèi)體2種說法，后者的相關(guān)研究較多。外泌體的生物發(fā)生過程如圖1所示，它起源于細(xì)胞的內(nèi)吞作用，先由質(zhì)膜向內(nèi)出芽形成早期內(nèi)體，然后早期內(nèi)體萌發(fā)腔內(nèi)囊泡發(fā)育為晚期內(nèi)體，進(jìn)一步形成多泡體，最終多泡體與自噬體、溶酶體融合而被降解或與質(zhì)膜融合，與質(zhì)膜融合的多泡體所釋放的腔內(nèi)囊泡即為最終形成的外泌體。外泌體可由各種細(xì)胞分泌，其功能取決于來源細(xì)胞。TDEs可以與特定的受體結(jié)合，通過釋放囊泡內(nèi)容物的方式進(jìn)行信息傳遞，其攜帶的各種細(xì)胞因子和蛋白質(zhì)在細(xì)胞與微環(huán)境之間的通訊中起關(guān)鍵作用，為腫瘤細(xì)胞的生存和生長(zhǎng)提供合適的環(huán)境[9]。

圖1 外泌體的生物發(fā)生過程

2.2 TDEs的促癌作用

大量證據(jù)表明，TDEs介導(dǎo)的因子可以通過腫瘤微環(huán)境內(nèi)的細(xì)胞-細(xì)胞通信，促進(jìn)腫瘤的起始、轉(zhuǎn)移和耐藥，包括促進(jìn)腫瘤微環(huán)境重塑、腫瘤血管生成及腫瘤細(xì)胞的遷移、侵襲、轉(zhuǎn)移和耐藥性。

2.2.1 TDEs調(diào)節(jié)腫瘤微環(huán)境重塑 TDEs可通過刺激細(xì)胞外受體信號(hào)通路和破壞細(xì)胞黏附形成來調(diào)節(jié)腫瘤微環(huán)境和細(xì)胞外基質(zhì)[10-13]。在乳腺癌細(xì)胞中，外泌體介導(dǎo)的從轉(zhuǎn)移性乳腺癌細(xì)胞中轉(zhuǎn)移，通過下調(diào)和靶向緊密連接蛋白-1，破壞內(nèi)皮單層的屏障功能[14]，增強(qiáng)血管通透性。外泌體還運(yùn)輸癌蛋白和免疫抑制分子，以破壞宿主免疫系統(tǒng)并有利于腫瘤的微環(huán)境，幫助腫瘤細(xì)胞免疫逃逸[15]。

2.2.2 TDEs促進(jìn)腫瘤血管生成 外泌體通過運(yùn)輸包含血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子、基質(zhì)金屬蛋白酶和miRNA等多種促血管生成的生物分子，參與癌癥進(jìn)展中的血管生成。外泌體通過下調(diào)抑制因子的缺氧誘導(dǎo)因子-1的表達(dá)來促進(jìn)血管生成[16]。正常內(nèi)皮細(xì)胞攝取腫瘤來源的外泌體，可激活內(nèi)皮細(xì)胞中的血管生成信號(hào)通路，并刺激新血管的形成。

2.2.3 TDEs促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的遷移、侵襲、轉(zhuǎn)移與耐藥 乳腺癌細(xì)胞來源的外泌體可以促進(jìn)乳腺癌細(xì)胞增殖、運(yùn)動(dòng)和轉(zhuǎn)移的能力，從而產(chǎn)生增強(qiáng)的致癌表型[17]。Piao等[18]報(bào)道，乳腺癌細(xì)胞來源的外泌體刺激巨噬細(xì)胞極化，為三陰性乳腺癌的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移過程建立了有利條件。在卵巢癌中，攜帶的外泌體可以通過誘導(dǎo)細(xì)胞衰老來促進(jìn)紫杉醇的耐藥性[19]。

3 抗腫瘤中藥通過外泌體間接發(fā)揮抗腫瘤作用

傳統(tǒng)中藥作為腫瘤現(xiàn)代療法的主流補(bǔ)充和替代療法已被廣泛接受。目前證明有抗腫瘤作用的中藥已超過300種，分布十分廣泛，包含數(shù)千種抗腫瘤活性成分。然而許多中藥雖有良好的抗腫瘤作用，但其作用機(jī)制卻不甚明確。且越來越多的研究發(fā)現(xiàn)直接作用機(jī)制難以解釋一些中藥的作用機(jī)制，基于此，越來越多的學(xué)者將目光轉(zhuǎn)移到間接調(diào)控作用。外泌體作為內(nèi)源性物質(zhì)，是一種中間媒介物質(zhì)，亦可用于解釋一些中藥的抗腫瘤作用機(jī)制。外泌體不僅具有促癌特性，還可利用其免疫調(diào)節(jié)、腫瘤微循環(huán)重塑等特性使其成為抗腫瘤治療的有效方式。隨著外泌體相關(guān)研究的興起，已有越來越多的文獻(xiàn)報(bào)道通過外泌體闡釋中藥治療腫瘤的作用機(jī)制。

3.1 中藥活性單體成分的間接抗腫瘤作用機(jī)制

中藥活性單體成分可以通過多種途徑發(fā)揮抗腫瘤作用，如通過影響外泌體的細(xì)胞間通訊作用、腫瘤微環(huán)境調(diào)節(jié)作用、抑制TDEs的分泌和增強(qiáng)耐藥細(xì)胞的藥物敏感性抑制腫瘤的發(fā)生和發(fā)展，通過多個(gè)信號(hào)通路在一定程度上降低腫瘤細(xì)胞的化療耐藥性和減輕其他療法的不良反應(yīng)，而且能以外泌體為載體轉(zhuǎn)移到靶細(xì)胞發(fā)揮抗腫瘤作用。但不同種類的中藥活性成分抗腫瘤作用機(jī)制存在差別。

苷類是由糖或糖衍生物的端基碳原子與另一類非糖物質(zhì)連接形成的化合物。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，中藥苷類活性成分可通過影響外泌體的細(xì)胞間通訊作用和腫瘤微環(huán)境調(diào)節(jié)作用抑制腫瘤細(xì)胞的發(fā)展，也可通過抑制TDEs的分泌抑制腫瘤的形成和轉(zhuǎn)移。毛蕊花苷是一種糖基化苯丙烷化合物，可促進(jìn)膠質(zhì)母細(xì)胞瘤（glioblastoma，GBM）中表達(dá)，并且促進(jìn)通過外泌體傳遞到受體GBM細(xì)胞。通過抑制表皮生長(zhǎng)因子受體（epidermal growth factor receptor，EGFR）/磷脂酰肌醇3-激酶（phosphatidylinositol-3-kinase，PI3K）/蛋白激酶B（protein kinase B，PKB/Akt）信號(hào)通路抑制GBM細(xì)胞增殖、遷移、侵襲和微管形成，并可在體內(nèi)抑制GBM的腫瘤發(fā)生和轉(zhuǎn)移[20]，其作用機(jī)制見圖2。在腫瘤微環(huán)境中，細(xì)胞內(nèi)源性和細(xì)胞外源性線索重新編程膽固醇代謝，從而促進(jìn)腫瘤發(fā)生。臨床前和臨床研究表明，可通過控制膽固醇代謝的途徑來抑制腫瘤生長(zhǎng)、重塑免疫景觀、重振抗腫瘤免疫[21]。白英Thunb.中的白英總甾體生物堿苷類是一類具有重要抗腫瘤活性的甾體生物堿苷類化合物，可通過凝集腫瘤細(xì)胞膜脂質(zhì)膽固醇，從而直接影響腫瘤外泌體的形成，導(dǎo)致其功能的改變，進(jìn)而抑制腫瘤血管生成，抑制肺癌A549細(xì)胞的發(fā)展[22]。此外，茄胺還能顯著抑制乙酰膽堿誘導(dǎo)的人肝癌HepG2細(xì)胞外泌體處理的A549細(xì)胞的增殖[23]。-鼠李糖β常春藤苷是一種從揚(yáng)子鐵線蓮(Lévl. et Vant.) Tamura中分離出來的新型齊墩果型三萜皂苷，已被證明對(duì)多種腫瘤有效。鼠李糖β-常春藤能夠抑制外泌體分泌，且外泌體水平與靶乳腺癌細(xì)胞吸收和內(nèi)化后的細(xì)胞生長(zhǎng)呈正相關(guān)[24]。

PCNA-增殖細(xì)胞核抗原 Bax-B淋巴細(xì)胞瘤-2相關(guān)X蛋白 MMP-9-基質(zhì)金屬蛋白酶-9 N-cadherin-神經(jīng)性鈣黏蛋白

多酚通常是指相對(duì)分子質(zhì)量在600以上并且包含多個(gè)酚羥基結(jié)構(gòu)的化合物，如茶多酚等。多酚主要來源于植物，在自然界中的含量?jī)H次于糖類，與蛋白質(zhì)、脂肪、核酸、糖類等天然化合物一樣，是一類極其重要的化合物。與苷類成分類似，多酚成分亦可通過影響外泌體的細(xì)胞間通訊作用發(fā)揮抗腫瘤作用，除此之外，多酚成分還能以外泌體為載體轉(zhuǎn)移到靶細(xì)胞發(fā)揮抗腫瘤作用。表沒食子兒茶素沒食子酸酯（epigallocatechin gallate，EGCG）是綠茶(L.) O. Ktze干葉中最豐富的多酚成分，占綠茶中總兒茶素的60%～70%。EGCG上調(diào)腫瘤細(xì)胞中的，該基因再通過外泌體轉(zhuǎn)移到腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞，通過抑制腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞浸潤(rùn)和M2極化來抑制腫瘤生長(zhǎng)[25]。姜黃素是一種從姜Rosc.的新鮮根莖中提取的天然多酚，具有抗炎、抗氧化和抗腫瘤的特性。已知姜黃素可以抑制多種致癌基因驅(qū)動(dòng)的細(xì)胞信號(hào)通路，從而減輕或預(yù)防結(jié)腸直腸癌、胰腺癌、乳腺癌、前列腺癌和肺癌等多種不同類型的癌癥。姜黃素還可通過外泌體被遞送到受體胰腺癌細(xì)胞，促進(jìn)細(xì)胞毒性[26]。白藜蘆醇是天然的多酚化合物，具有抗血小板、抗腫瘤、神經(jīng)保護(hù)和抗炎特性。藥物治療前對(duì)白藜蘆醇敏感的人膠質(zhì)瘤U251細(xì)胞釋放的外泌體可以提高抗白藜蘆醇人膠質(zhì)瘤LN428細(xì)胞對(duì)白藜蘆醇的敏感性，U251細(xì)胞可能通過傳遞藥物增敏信號(hào)使LN428細(xì)胞對(duì)白藜蘆醇敏感[27]。

其他中藥活性抗腫瘤成分也是通過影響外泌體的細(xì)胞間通訊作用和腫瘤微環(huán)境調(diào)節(jié)作用抑制腫瘤細(xì)胞的發(fā)展。紫草素是從紫草科植物新疆紫草(Royle) Johnst.或內(nèi)蒙紫草Bunge的干燥根中分離出來的萘醌，通過下調(diào)腫瘤來源的外泌體miR-128來抑制人乳腺癌MCF-7細(xì)胞的增殖，通過抑制外泌體的釋放來抑制MCF-7細(xì)胞的生長(zhǎng)[28]。紫杉醇是二萜生物堿類化合物中非常具有代表性的抗癌活性成分，但長(zhǎng)久使用會(huì)使細(xì)胞產(chǎn)生耐藥性，原因可能是TDEs或基質(zhì)源性外泌體調(diào)節(jié)miRNA而賦予腫瘤細(xì)胞耐藥性[29-31]。

中藥活性成分通過外泌體間接發(fā)揮抗腫瘤作用機(jī)制見表1。

3.2 中藥復(fù)方制劑的間接抗腫瘤作用機(jī)制

中藥復(fù)方的臨床應(yīng)用歷史悠久，目前已有超過10萬首復(fù)方用于臨床。中藥化學(xué)研究證明，1味中藥有若干種化學(xué)成分，包含多味中藥的復(fù)方化學(xué)成分更加復(fù)雜，可以說中藥復(fù)方是天然組合化學(xué)庫，且具有多成分、多作用、多層次、多途徑、多靶點(diǎn)的特點(diǎn)，故而中藥復(fù)方藥效研究是近年來中藥現(xiàn)代研究的難點(diǎn)和熱點(diǎn)。研究發(fā)現(xiàn)相較于中藥活性單體成分，中藥復(fù)方通過外泌體闡述抗腫瘤的作用機(jī)制更為復(fù)雜化、多元化。

中藥復(fù)方通過多途徑同時(shí)影響外泌體細(xì)胞間的通訊作用、調(diào)節(jié)腫瘤微環(huán)境和抗腫瘤血管生成而直接或間接地抑制腫瘤的發(fā)生和發(fā)展。中藥復(fù)方的抗腫瘤作用應(yīng)是各味中藥物質(zhì)基礎(chǔ)相互作用的結(jié)果，但目前研究尚未深入至中藥復(fù)方中單味藥的抗腫瘤作用機(jī)制，僅有部分團(tuán)隊(duì)初步探索了一些中藥方劑的抗腫瘤機(jī)制。Chen等[32]研究發(fā)現(xiàn)大黃?蟲丸通過外泌體抑制了上調(diào)的CC趨化因子配體2（CC chemokine ligand 2，CCL2），顯著降低了肝臟中CCL2及其受體（CC chemokineligand-2 receptor，CCR2）的表達(dá)。CCL2有激活巨噬細(xì)胞招募并將M1/M2范式轉(zhuǎn)移到M2表型的功能。抗纖維化和抑制CCR2可抑制結(jié)直腸癌的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移，說明大黃?蟲丸通過抑制CCL2介導(dǎo)的M2傾斜模式和改善前纖維化微環(huán)境來抑制結(jié)直腸癌的肝轉(zhuǎn)移。李晶晶等[33]實(shí)驗(yàn)證明滋陰化痰方可通過調(diào)控腫瘤細(xì)胞外泌體而抑制胃癌血管新生，進(jìn)而抑制胃癌細(xì)胞的侵襲和遷移。流行病學(xué)研究證實(shí)腫瘤的發(fā)生與炎癥具有明顯的相關(guān)性，因此炎癥的治療對(duì)于腫瘤的發(fā)展至關(guān)重要。Wang等[34]分析比較高尿酸血癥患者葛根芩連湯治療前后外周血單核細(xì)胞中核苷酸結(jié)合寡聚化結(jié)構(gòu)域樣受體家族pyrin結(jié)構(gòu)域蛋白3（nucleotide-binding and oligomerization domain-like receptors family pyrin-domain-containing 3，NLRP3）和尿外泌體蛋白的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)葛根芩連湯下調(diào)了尿酸血癥患者中NLRP3的表達(dá)，為支持葛根芩連湯通過線粒體凋亡信號(hào)通路保護(hù)尿酸介導(dǎo)的腎小管上皮細(xì)胞炎癥的觀點(diǎn)提供證據(jù)。此外，Zha等[35]研究發(fā)現(xiàn)實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦脊髓炎小鼠血清外泌體和的表達(dá)與腦和脊髓組織相似；前者下調(diào)，后者上調(diào)。而補(bǔ)腎益髓方的治療逆轉(zhuǎn)了這一趨勢(shì)，也和各組小鼠中樞神經(jīng)系統(tǒng)組織的差異相一致，進(jìn)一步證實(shí)了補(bǔ)腎益髓方在中樞和外周神經(jīng)系統(tǒng)水平上調(diào)節(jié)miRNA的作用。而miR-124和均與小膠質(zhì)細(xì)胞極化相關(guān)，推測(cè)補(bǔ)腎益髓方對(duì)多發(fā)性硬化癥及其實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦脊髓炎動(dòng)物模型的神經(jīng)保護(hù)作用與促進(jìn)小膠質(zhì)細(xì)胞向M2極化有關(guān)。

表1 中藥活性成分通過外泌體間接發(fā)揮抗腫瘤作用機(jī)制

4 外泌體用作中藥載體

外泌體是具有生物相容性、生物安全性、組織特異性和長(zhǎng)半衰期等優(yōu)點(diǎn)的納米級(jí)小分子，與目前的人工藥物遞送載體相比，其具有能夠穿透血腦屏障、細(xì)胞靶向特性和循環(huán)穩(wěn)定性等顯著優(yōu)勢(shì)，可用作癌癥治療的天然藥物傳遞載體，使中藥更充分地發(fā)揮抗腫瘤療效。He等[36]研究發(fā)現(xiàn)，相較于游離雷公藤甲素，一種裝載雷公藤甲素的外泌體傳遞系統(tǒng)（triptolide-loaded exosomes delivery system，TP-exos）顯著增強(qiáng)了抗卵巢癌作用，并降低了其對(duì)重要器官的毒性。以外泌體為載體還有效解決了雷公藤甲素的不良反應(yīng)問題，為擴(kuò)大其臨床應(yīng)用提供可能。

4.1 作為中藥載體的外泌體的細(xì)胞來源

盡管外泌體來源于幾乎所有細(xì)胞，但并不是所有細(xì)胞分泌的外泌體都適合作為藥物載體。人們已研究樹突狀細(xì)胞、間充質(zhì)干細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、腫瘤細(xì)胞、紅細(xì)胞、T細(xì)胞、自然殺傷細(xì)胞等多種細(xì)胞來源的外泌體作為藥物傳遞載體的潛在應(yīng)用。判斷該來源外泌體是否適合搭載藥物應(yīng)該有嚴(yán)格的考量標(biāo)準(zhǔn)，如大小、表面蛋白、腔內(nèi)組成和產(chǎn)量等因素。樹突狀細(xì)胞、間充質(zhì)干細(xì)胞和巨噬細(xì)胞均被證明可參與機(jī)體的免疫調(diào)節(jié)[37]，此外，樹突狀細(xì)胞的組成和主要組織相容性復(fù)合體的含量容易檢測(cè)以及間充質(zhì)干細(xì)胞來源豐富是以上來源外泌體具有載藥潛力的重要原因。

如上所述，TDEs在調(diào)節(jié)腫瘤發(fā)生發(fā)展方面發(fā)揮雙重作用，既可促進(jìn)腫瘤發(fā)展，又可協(xié)同中藥抑制腫瘤發(fā)展。因此，以TDEs為中心的治療方法，在進(jìn)入臨床領(lǐng)域之前，需要克服其對(duì)腫瘤的促進(jìn)作用，并擴(kuò)大其抗腫瘤潛能。牛奶來源的外泌體由于成本低、生物相容性好、穩(wěn)定性高、腫瘤靶標(biāo)能力好和毒性低可能是一種理想的藥物載體[38]。González-Sarrías等[39]研究發(fā)現(xiàn)牛奶來源的外泌體可以有效保護(hù)姜黃素和白藜蘆醇等多酚類中藥活性成分免受新陳代謝的影響，并且可增強(qiáng)其對(duì)乳腺癌的抗癌活性。

4.2 外泌體的載藥方式

外泌體負(fù)載外源性分子的策略可分為主動(dòng)裝載和被動(dòng)裝載2大類。主動(dòng)裝載包括超聲、擠壓、凍融、電穿孔、皂苷孵育、點(diǎn)擊化學(xué)和抗體結(jié)合等手段，被動(dòng)裝載包括外泌體與游離藥物孵育和供體細(xì)胞與游離藥物孵育。相對(duì)于主動(dòng)裝載，被動(dòng)裝載的操作簡(jiǎn)單，不破壞膜的完整性。主動(dòng)裝載中超聲和擠壓損壞膜的完整性。載藥外泌體的包封率與載藥率和藥物種類、藥物溶劑種類、外泌體來源、載藥方式、處理溫度與時(shí)間等因素有關(guān)。Munagala等[40]將花青素、姜黃素和化療藥物紫杉醇、多西他賽溶液［溶劑為乙醇-乙腈（1∶1）］與牛乳來源外泌體溶液（以PBS為溶劑）以1∶9的比例在室溫（22 ℃）下共孵育，結(jié)果表明，化療藥物和化學(xué)預(yù)防藥物的載藥量隨受試藥物的不同而變化，其范圍介于10%～40%。

綜上，外泌體不僅可以作為中藥間接抗腫瘤的中間媒介物質(zhì)，還可作為抗腫瘤中藥的載體，在中藥發(fā)揮抗腫瘤作用的過程中具有不容忽視的重要作用，見圖3。

圖3 外泌體在中藥抗腫瘤過程中扮演的多重角色

5 結(jié)語與展望

我國(guó)中藥資源豐富，中藥抗腫瘤的臨床應(yīng)用歷史悠久。然而，中藥的物質(zhì)基礎(chǔ)較為復(fù)雜，不同來源中藥的多種藥效物質(zhì)基礎(chǔ)通過復(fù)雜的機(jī)制發(fā)揮抗腫瘤作用，作用機(jī)制不明的問題很大程度上阻礙了中藥的應(yīng)用與發(fā)展。中藥除直接作用于腫瘤相關(guān)靶部位外，還可通過外泌體等媒介間接發(fā)揮抗腫瘤作用。外泌體作為細(xì)胞間通訊的重要媒介在中藥抗腫瘤過程中發(fā)揮重要作用，不僅有利于闡釋中藥抗腫瘤的機(jī)制，還可作為中藥的載體提高中藥的生物利用度、增強(qiáng)抗腫瘤活性和生物安全性。然而，更多的抗腫瘤活性中藥有待發(fā)掘，中藥復(fù)方抗腫瘤的復(fù)雜機(jī)制相關(guān)研究較少，尚不能科學(xué)解釋復(fù)方中各味中藥的配伍作用，且中藥是否同時(shí)通過直接與間接作用抑制腫瘤的發(fā)生發(fā)展猶未可知，中藥在腫瘤治療領(lǐng)域仍有非常大的研究空間，當(dāng)然，由于中藥的成分復(fù)雜、體內(nèi)外次生成分監(jiān)控存在困難和當(dāng)前技術(shù)所限等，上述問題的解決任重而道遠(yuǎn)。

外泌體不僅可以作為一種媒介，在一定程度上證實(shí)中藥抗腫瘤的作用機(jī)制，而且可作為一種天然載體解決中藥溶解性差、生物利用度低等問題，在中藥治療腫瘤領(lǐng)域具有獨(dú)特的不可取代的地位，有望為人類的生命健康事業(yè)做出更大的貢獻(xiàn)。

利益沖突 所有作者均聲明不存在利益沖突

[1] Siegel R L, Miller K D, Fuchs H E,. Cancer statistics, 2022 [J]., 2022, 72(1): 7-33.

[2] Xia C F, Dong X S, Li H,. Cancer statistics in China and United States, 2022: Profiles, trends, and determinants [J]., 2022, 135(5): 584-590.

[3] Kaymak I, Williams K S, Cantor J R,. Immunometabolic interplay in the tumor microenvironment [J]., 2021, 39(1): 28-37.

[4] Guerrero P A, McCarty J H. Integrins in vascular development and pathology [J]., 2018, 81: 129-153.

[5] Duffau H. Mapping the connectome in awake surgery for gliomas: An update [J]., 2017, 61(6): 612-630.

[6] Mota R C, Teller S, Muckenhuber A,. Neoadjuvant therapy remodels the pancreatic cancer microenvironment via depletion of protumorigenic immune cells [J]., 2020, 26(1): 220-231.

[7] Lin R J, Green D L, Shah G L. Therapeutic anticoagulation in patients with primary brain tumors or secondary brain metastasis [J]., 2018, 23(4): 468-473.

[8] Kaplanov I, Carmi Y, Kornetsky R,. Blocking IL-1β reverses the immunosuppression in mouse breast cancer and synergizes with anti-PD-1 for tumor abrogation [J]., 2019,116(4): 1361-1369.

[9] Deng L, Zhang H M, Zhang Y,. An exosome-mimicking membrane hybrid nanoplatform for targeted treatment toward Kras-mutant pancreatic carcinoma [J]., 2021, 9(16): 5599-5611.

[10] Dioufa N, Clark A M, Ma B,. Bi-directional exosome-driven intercommunication between the hepatic niche and cancer cells [J]., 2017, 16(1): 172.

[11] Koumangoye R B, Sakwe A M, Goodwin J S,. Detachment of breast tumor cells induces rapid secretion of exosomes which subsequently mediate cellular adhesion and spreading [J]., 2011, 6(9): e24234.

[12] Mu W, Rana S, Z?ller M. Host matrix modulation by tumor exosomes promotes motility and invasiveness [J]., 2013, 15(8): 875-887.

[13] Luga V, Zhang L, Viloria-Petit A M,. Exosomes mediate stromal mobilization of autocrine Wnt-PCP signaling in breast cancer cell migration [J]., 2012, 151(7): 1542-1556.

[14] Zhou W Y, Fong M Y, Min Y F,. Cancer-secreted miR-105 destroys vascular endothelial barriers to promote metastasis [J]., 2014, 25(4): 501-515.

[15] Yang S J, Che S P Y, Kurywchak P,. Detection of mutant KRAS and TP53 DNA in circulating exosomes from healthy individuals and patients with pancreatic cancer [J]., 2017, 18(3): 158-165.

[16] Da?ler-Plenker J, Küttner V, Egeblad M. Communication in tiny packages: Exosomes as means of tumor-stroma communication [J]., 2020, 1873(2): 188340.

[17] Beeraka N M, Doreswamy S H, Sadhu S P,. The role of exosomes in stemness and neurodegenerative diseases-chemoresistant-cancer therapeutics and phytochemicals [J]., 2020, 21(18): 6818.

[18] Piao Y J, Kim H S, Hwang E H,. Breast cancer cell-derived exosomes and macrophage polarization are associated with lymph node metastasis [J]., 2017, 9(7): 7398-7410.

[19] Weiner-Gorzel K, Dempsey E, Milewska M,. Overexpression of the microRNA miR-433 promotes resistance to paclitaxel through the induction of cellular senescence in ovarian cancer cells [J]., 2015, 4(5): 745-758.

[20] Wang H, Feng J G, Ao F,. Tumor-derived exosomal microRNA-7-5p enhanced by verbascoside inhibits biological behaviors of glioblastomaand[J]., 2020, 20: 569-582.

[21] Huang B L, Song B L, Xu C Q. Cholesterol metabolism in cancer: Mechanisms and therapeutic opportunities [J]., 2020, 2(2): 132-141.

[22] Du X, Wang J N, Sun J,. Steroidal glycoalkaloids frominhibit the pro-angiogenic activity of A549-derived exosomes [J]., 2020, 141: 104481.

[23] Shen K H, Liao A C, Hung J H,. α-Solanine inhibits invasion of human prostate cancer cell by suppressing epithelial-mesenchymal transition and MMPs expression [J]., 2014, 19(8): 11896-11914.

[24] Chen W X, Cheng L, Pan M,.-Rhamnose β-hederin against human breast cancer by reducing tumor-derived exosomes [J]., 2018, 16(4): 5172-5178.

[25] Jang J Y, Lee J K, Jeon Y K,. Exosome derived from epigallocatechin gallate treated breast cancer cells suppresses tumor growth by inhibiting tumor-associated macrophage infiltration and M2 polarization [J]., 2013, 13: 421.

[26] Osterman C J, Lynch J C, Leaf P,. Curcumin modulates pancreatic adenocarcinoma cell-derived exosomal function [J]., 2015, 10(7): e0132845.

[27] Nie J H, Li H, Wu M L,. Differential exosomic proteomic patterns and their influence in resveratrol sensitivities of glioblastoma cells [J]., 2019, 20(1): 191.

[28] Wei Y, Li M Z, Cui S F,. Shikonin inhibits the proliferation of human breast cancer cells by reducing tumor-derived exosomes [J]., 2016, 21(6): 777.

[29] Wang M, Qiu R, Yu S R,. Paclitaxel?resistant gastric cancer MGC?803 cells promote epithelial?to?mesenchymal transition and chemoresistance in paclitaxel?sensitive cells via exosomal delivery of miR?155?5p [J]., 2019, 54(1): 326-338.

[30] Au Yeung C L, Co N N, Tsuruga T,. Exosomal transfer of stroma-derived miR21 confers paclitaxel resistance in ovarian cancer cells through targeting APAF1 [J]., 2016, 7: 11150.

[31] Guo Z H, Guo A Y, Zhou C. Breast cancer stem cell-derived ANXA6-containing exosomes sustain paclitaxel resistance and cancer aggressiveness in breast cancer [J]., 2021, 9: 718721.

[32] Chen C H, Yao X Q, Xu Y H,. Dahuang Zhechong Pill suppresses colorectal cancer liver metastasis via ameliorating exosomal CCL2 primed pre-metastatic niche [J]., 2019, 238: 111878.

[33] 李晶晶, 季青, 劉煊, 等. 滋陰化痰方調(diào)控腫瘤細(xì)胞來源外泌體對(duì)HUVECs管樣分化的影響 [J]. 中醫(yī)學(xué)報(bào), 2021, 36(1): 118-125.

[34] Wang X J, Qi Y D, Guan H C,. Gegen Qinlian Decoction ameliorates hyperuricemia-induced renal tubular injury via blocking the inflammatory signaling pathway [J]., 2021, 12: 665398.

[35] Zha Z, Gao Y F, Ji J,. Bu Shen Yi Sui capsule alleviates neuroinflammation and demyelination by promoting microglia toward M2 polarization, which correlates with changes in miR-124 and miR-155 in experimental autoimmune encephalomyelitis [J]., 2021, 2021: 5521503.

[36] He D, Xu X Y, Li L X,. Functional exosome-mediated delivery of triptolide endowed with targeting properties as chemotherapy carriers for ovarian carcinoma [J]., 2021, 17(3): 426-438.

[37] Yao Y, Fu C M, Zhou L,. DC-derived exosomes for cancer immunotherapy [J]., 2021, 13(15): 3667.

[38] Melnik B C, John S M, Schmitz G. Milk: An exosomal microRNA transmitter promoting thymic regulatory T cell maturation preventing the development of atopy? [J]., 2014, 12: 43.

[39] González-Sarrías A, Iglesias-Aguirre C E, Cortés-Martín A,. Milk-derived exosomes as nanocarriers to deliver curcumin and resveratrol in breast tissue and enhance their anticancer activity [J]., 2022, 23(5): 2860.

[40] Munagala R, Aqil F, Jeyabalan J,. Bovine milk-derived exosomes for drug delivery [J]., 2016, 371(1): 48-61.

Research progress on traditional Chinese medicine affecting tumor therapy based on exosomes

REN Wen-jing, LI Zhao-xia, QIU Feng

School of Traditional Chinese Medicine, Capital Medical University, Beijing 100069, China

Traditional Chinese medicine (TCM) has been widely accepted as the mainstream complementary and alternative therapy of modern cancer therapy. However, the material bases and action mechanisms of many TCM with exact anti-tumor efficacy could not be clearly clarified by using the antagonistic medical thinking till now. As endogenous substances, exosomes not only participate in the communication between tumor microenvironment and other tissues and organs, but also act as an intermediary substance to affect tumor therapy. Mechanisms on indirect anti-tumor action of TCM via exosomes and usage of exosomes as the carriers of TCM to expand the clinical efficacy and application of anti-tumor TCM were mainly reviewed in this paper, in order to explore more effective components and clarify the complex mechanisms of anti-tumor TCM to promote the development of TCM in the field of tumor therapy.

traditional Chinese medicine; active ingredient; tumor therapy; tumor microenvironment; exosome; carrier

R282.710.5

A

0253 - 2670(2022)22 - 7234 - 08

10.7501/j.issn.0253-2670.2022.22.028

2022-06-20

國(guó)家自然科學(xué)基金面上項(xiàng)目（82174062）；國(guó)家自然科學(xué)基金面上項(xiàng)目（81573682）

任文靜（1997—），碩士研究生，研究方向?yàn)橹兴幩巹?dòng)學(xué)。Tel: (010)83911635 E-mail: 122021010565@mail.ccmu.edu.cn

仇 峰，副教授，碩士生導(dǎo)師，博士，研究方向?yàn)橹兴幩巹?dòng)學(xué)。Tel: (010)83911635 E-mail: qiufeng@ccmu.edu.cn

[責(zé)任編輯 崔艷麗]