78%乙·撲·滴辛酯乳油高效液相色譜分析方法研究

鄭 楊，李 巖

(黑龍江省植檢植保站，黑龍江 哈爾濱 150090)

1 前言

乙草胺、撲草凈是土壤封閉處理除草劑，可防除玉米、大豆等旱田一年生禾本科和闊葉雜草[1，2]。2，4-滴異辛酯是選擇性苗后莖葉處理觸殺型除草劑，可防治一年生或多年生闊葉雜草，是2，4-滴丁酯的替代產(chǎn)品[3]，與2，4-滴丁酯相比，具有揮發(fā)性小，不易漂移的優(yōu)點(diǎn)，藥害發(fā)生率低，相對(duì)更安全，在生產(chǎn)上有更大的推廣價(jià)值[4]。

78%乙·撲·滴辛酯乳油是黑龍江梅亞種業(yè)有限公司的三元復(fù)配除草劑，封殺相結(jié)合，滅草率大大提高，速效性明顯加強(qiáng)，可防治玉米田中絕大部分的雜草，具有殺草譜更廣、用藥量低的優(yōu)點(diǎn)。

目前國(guó)內(nèi)對(duì)乙草胺、撲草凈和2，4-滴異辛酯的復(fù)配制劑分析方法尚未見(jiàn)報(bào)道。本文采用高效液相色譜法對(duì)乙草胺、撲草凈和2，4-滴異辛酯進(jìn)行定性和定量分析。該方法操作快速、簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確，分離效果好，準(zhǔn)確度和精密度均能達(dá)到定量分析的要求，適用于農(nóng)藥產(chǎn)品含量分析。

2 試驗(yàn)部分

2.1 試劑和溶液 乙腈：色譜純；水：超純水(電阻率18.2 MΩ·cm，25℃)；冰乙酸：分析純；撲草凈：99.6%，乙草胺：99.1%，伯酰胺：99.0%；2，4-滴異辛酯：98.5%；試樣：78%乙·撲·滴辛酯乳油。

2.2 儀器 高效液相色譜儀：Agilent 1260，具有二級(jí)管陣列檢測(cè)器和自動(dòng)進(jìn)樣器，色譜工作站；色譜柱：250mm×4.6mm(i.d)不銹鋼柱，內(nèi)裝Zorbax SB-C18、5μm填充物；過(guò)濾器：濾膜孔徑約0.45um。

2.3 液相色譜操作條件 流動(dòng)相：乙腈：0.3%乙酸水溶液=70：30(V/V)(0～8min)，85：15(V/V)(8～23min)；流量：1.0mL/min；柱溫：30℃；檢測(cè)波長(zhǎng)：236nm；進(jìn)樣體積：5.0μL；保留時(shí)間：伯酰胺約3.6min，撲草凈約4.8min，乙草胺約6.7min，2，4-滴異辛酯約18.8min。

上述液相色譜操作條件，系典型操作參數(shù)，可根據(jù)不同儀器特點(diǎn)，對(duì)給定的操作參數(shù)作適當(dāng)調(diào)整，以期獲得最佳效果。非分析物空白、標(biāo)樣和樣品高效液相色譜圖(圖1、圖2、圖3)。

圖1 非分析物空白高效液相色譜圖

圖2 乙草胺·撲草凈·2，4-滴異辛酯標(biāo)樣高效液相色譜圖

圖3 78%乙·撲·滴辛酯乳油高效液相色譜圖

2.4 測(cè)定步驟

2.4.1 標(biāo)樣溶液的配制 準(zhǔn)確稱取伯酰胺標(biāo)樣10.5mg(精確至0.2mg)，撲草凈標(biāo)樣21.4mg(精確至0.2mg)，分別置于100mL容量瓶中，加入乙腈溶解，超聲10min，恢復(fù)至室溫后用乙腈稀釋至刻度，搖勻備用。稱取乙草胺標(biāo)樣60.7mg(精確至0.2mg)和2，4-滴異辛酯標(biāo)樣24.9mg(精確至0.2mg)，置于100mL容量瓶中，用移液管分別加入上述伯酰胺、撲草凈標(biāo)準(zhǔn)溶液10mL，加入乙腈溶解，超聲10min，恢復(fù)至室溫后用乙腈稀釋至刻度，搖勻，過(guò)濾備用。

2.4.2 試樣溶液的配制 稱取試樣約104.4mg(精確至0.2mg)，置于100mL容量瓶中，加入乙腈溶解，超聲10min，恢復(fù)至室溫后用乙腈稀釋至刻度，搖勻，過(guò)濾備用。

2.4.3 測(cè)定 在上述操作條件下，待儀器基線穩(wěn)定后，連續(xù)注入數(shù)針標(biāo)樣溶液，待各針相對(duì)響應(yīng)值變化≤1.5%時(shí)，按照標(biāo)樣溶液、試樣溶液、試樣溶液、標(biāo)樣溶液的順序進(jìn)樣測(cè)定。

2.4.4 計(jì)算 將測(cè)得的2針試樣溶液及試樣溶液前后2針標(biāo)樣溶液中(伯酰胺、撲草凈、乙草胺、2，4-滴異辛酯)的峰面積值分別進(jìn)行平均，按下式計(jì)算其質(zhì)量分?jǐn)?shù)：

(1)

式中：

A1—標(biāo)樣溶液中(伯酰胺、撲草凈、乙草胺、2，4-滴異辛酯)峰面積的平均值；

A2—試樣溶液中(伯酰胺、撲草凈、乙草胺、2，4-滴異辛酯)峰面積的平均值；

m1—標(biāo)樣的質(zhì)量，g；

m2—試樣的質(zhì)量，g；

P —標(biāo)樣中(伯酰胺、撲草凈、乙草胺、2，4-滴異辛酯)的質(zhì)量分?jǐn)?shù)，%；

X—標(biāo)樣的稀釋倍數(shù)(乙草胺和2，4-滴異辛酯為1，撲草凈和伯酰胺為10)。

3 結(jié)果分析

3.1 色譜條件的選擇 通過(guò)Agilent 1260高效液相色譜儀的光譜數(shù)據(jù)采集功能，獲得撲草凈、乙草胺、2，4-滴異辛酯的紫外吸收?qǐng)D(圖4)。從圖中看到乙草胺、撲草凈、2，4-滴異辛酯的最大吸收分別在220nm、225nm和236nm附近，根據(jù)樣品中各成分含量及出峰時(shí)間，為減少溶劑的干擾，兼顧較大吸收波長(zhǎng)，將檢測(cè)波長(zhǎng)定為236nm。

圖4 乙草胺、撲草凈、2，4-滴異辛酯紫外吸收譜圖

色譜柱選擇常用的反相填料ZORBAX SB-C18柱。依據(jù)乙草胺、撲草凈和2，4-滴異辛酯理化性質(zhì)，選擇乙腈為溶劑溶解樣品，三混制劑成分復(fù)雜，選擇乙腈和酸水為流動(dòng)相，按不同比例在色譜柱上進(jìn)行選擇比較。經(jīng)測(cè)定，當(dāng)流速為1.0mL/min時(shí)，在乙腈：乙酸水溶液=70：30(V/V)條件下，伯酰胺、撲草凈、乙草胺能有效分離，出峰時(shí)間較為合適；2，4-滴異辛酯在乙腈：乙酸水溶液=85：15(V/V)條件下，峰形對(duì)稱，基線平穩(wěn)，分析時(shí)間較短。

3.2 分析方法的線性相關(guān)性試驗(yàn) 稱取撲草凈標(biāo)樣22.8mg(精確至0.2mg)于100mL容量瓶中，用乙腈超聲溶解并稀釋至刻度，靜止備用。稱取乙草胺標(biāo)樣58.6mg(精確至0.2mg)、2，4-滴異辛酯標(biāo)樣26.4mg(精確至0.2mg)置于同一50mL容量瓶中，用移液管加入撲草凈標(biāo)準(zhǔn)溶液10mL，用乙腈超聲溶解并稀釋至刻度，靜止備用。用移液管分別移取上述標(biāo)準(zhǔn)溶液2.0、4.0、6.0、8.0、10.0mL于10mL容量瓶中，用乙腈定容至刻度搖勻后備用。按上述條件進(jìn)行測(cè)定，以進(jìn)樣濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得線性方程為y撲草凈=66 732.81x+3.44，相關(guān)系數(shù)為0.999 92；y乙草胺=2 279.52x+5.24，相關(guān)系數(shù)為0.999 97；y2，4-滴異辛酯=6 401.99x-3.93，相關(guān)系數(shù)為0.999 94。撲草凈、乙草胺、2，4-滴異辛酯的線性相關(guān)性試驗(yàn)結(jié)果(表1)，線性關(guān)系(圖5、圖6、圖7)。

表1 分析方法的線性相關(guān)性試驗(yàn)結(jié)果

圖7 2，4-滴異辛酯線性關(guān)系圖

3.3 方法精密度的測(cè)定 在上述色譜操作條件下對(duì)同一樣品平行測(cè)定5次，撲草凈、乙草胺、2，4-滴異辛酯的標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為0.02、0.09、0.11；變異系數(shù)分別為0.93%、0.17%、0.54%(表2)。

表2 分析方法的精密度試驗(yàn)結(jié)果

3.4 方法準(zhǔn)確度的測(cè)定 按照配方比例要求，將除原藥以外的所有填料助劑混勻，做制劑空白，按照制劑標(biāo)稱值在制劑空白中添加有效成分，合成5個(gè)制劑樣品，在上述色譜操作條件下進(jìn)行分析，測(cè)得撲草凈、乙草胺、2，4-滴異辛酯的平均加標(biāo)回收率分別為為99.56%、99.91%、99.83%(表3)。

表3 分析方法的準(zhǔn)確度試驗(yàn)結(jié)果

3.5 方法特異性 對(duì)樣品組分色譜峰進(jìn)行峰純度試驗(yàn)，通過(guò)工作站軟件計(jì)算匹配度，撲草凈、乙草胺、2，4-滴異辛酯的峰純度因子分別為999.68、999.41、999.84，特異性符合要求。

4 結(jié)論

試驗(yàn)建立了高效液相色譜法檢測(cè)78%乙·撲·滴辛酯乳油中有效成分的分析方法。上述試驗(yàn)結(jié)果表明，乙草胺、撲草凈和2，4-滴異辛酯在測(cè)試濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，方法準(zhǔn)確度和精密度較高，具有簡(jiǎn)便、快速的優(yōu)點(diǎn)，是產(chǎn)品質(zhì)量控制的有效可行的分析方法。