雪蓮果浸膏對(duì)高脂模型大鼠腸道脂質(zhì)吸收的影響及機(jī)制*

孫見飛， 龔順航， 姚龍鳳， 殷文鳳， 章先旭， 劉俊奇， 李蓉， 吳遵秋

(貴州醫(yī)科大學(xué) 基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院， 化學(xué)與生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)室， 貴州 貴陽(yáng) 550025)

代謝綜合征主要包括高血壓、高血糖和血脂異常等一些臨床綜合征[1-2]，會(huì)顯著增加心血管事件的風(fēng)險(xiǎn)。近年來，代謝綜合征的發(fā)病率逐年遞增，高脂血癥已成為危害人們健康的重要因素[3-4]。目前，治療高脂血癥的臨床藥物主要是他汀類和貝特類，這類藥物雖然具有降脂作用，但是其不良反應(yīng)也不可忽視[5-6]，因此新型降脂藥物的研發(fā)越來越備受關(guān)注，尋求能實(shí)現(xiàn)“以食代藥”的產(chǎn)品也成為近年來研究的新熱點(diǎn)。有研究發(fā)現(xiàn)，雪蓮果具有抗氧化、抑菌、抗動(dòng)脈粥樣硬化、降血脂及降血壓等作用[7-8]，在我國(guó)雪蓮果更多是作為水果食用，對(duì)其藥理學(xué)活性的研究甚少[7-8]。本研究通過網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)對(duì)雪蓮果活性成分-高脂血癥靶點(diǎn)-網(wǎng)絡(luò)通路進(jìn)行初步預(yù)測(cè)，采用不同濃度雪蓮果浸膏對(duì)高脂模型大鼠灌胃，探討雪蓮果浸膏對(duì)高脂模型大鼠腸道脂質(zhì)吸收的分子機(jī)制，為雪蓮果實(shí)現(xiàn)“以食代藥”的研發(fā)提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 研究材料

1.1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及藥物 80只7周齡SD(Sprague Dawley)大鼠由貴州醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，合格證編號(hào) SYXF(黔)2018-0001，雌雄各半，潔凈級(jí)，體質(zhì)量180～220 g。高脂高糖飼料購(gòu)自重慶騰鑫生物科技有限公司，其主要成分為普通飼料(72.8%)、豬油(15%)、蔗糖(10%)、膽固醇(2%)及三號(hào)膽鹽(0.2%)；雪蓮果購(gòu)自貴陽(yáng)市水果市場(chǎng)，奧利司他購(gòu)自貴陽(yáng)凱信生物工程有限公司。

1.1.2主要儀器及試劑 總甘油三酯(triglyceride, TG)、總膽固醇(total cholesterol, TC)試劑盒由深圳子科生物科技有限公司提供，大鼠低密度脂蛋白膽固醇(low-density lipoprotein cholesterol, LDL-C)和高密度脂蛋白膽固醇(high density liptein cholesterol, HDL-C)試劑盒均購(gòu)買于安徽巧伊生物科技有限公司；超敏ECL化學(xué)發(fā)光試劑盒購(gòu)自碧云天生物技術(shù)有限公司；ABI StepOnePlusTM實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀(美國(guó)Thermo Fisher公司)、AceQ qPCR SYBR Green Master Mix購(gòu)自南京諾唯贊生物科技股份有限公司，Trizol購(gòu)自美國(guó)Invitrogen公司，PrimeScriptRT reagent Kit with gDNA Eraser(Perfect Real Time)購(gòu)自寶日醫(yī)生物技術(shù)(北京)有限公司；全功能酶標(biāo)儀(美國(guó)伯樂公司)、4 ℃低溫高速離心機(jī)(美國(guó)Thermo Fisher公司)、凝膠成像系統(tǒng)(美國(guó)Synoptics公司)、ABI StepOnePlusTM實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀(美國(guó)Thermo Fisher公司)。

1.2 研究方法

1.2.1雪蓮果有效成分和靶基因的預(yù)測(cè) 雪蓮果化學(xué)成分由文本挖掘法獲取(Demeshko OV, 2018;Silva MFGD, 2017;袁曉艷, 2017;Yan X, 1999; Simonovska B, 2003)，將結(jié)果輸入TCMSP數(shù)據(jù)庫(kù)(traditional chinese medicine systems pharmacology database and analysis platform，TCMSP，http://www.tcmspw.com/tcmsp.php)以化合物吸收、分布、代謝、排泄(ADME)參數(shù)進(jìn)行篩選，以生物利用度(oralbioavailability,OB)>30%、且類藥性(drug-likeness, DL)>0.16為篩選標(biāo)準(zhǔn)，所得即為雪蓮果的有效成分。利用PubCHEM數(shù)據(jù)庫(kù)(PubChem，https://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/)獲取活性成分SMILES結(jié)構(gòu)式，輸入Swiss Target Prediction數(shù)據(jù)庫(kù)(swiss target prediction，http://www.swiss target prediction.ch/)預(yù)測(cè)其潛在靶基因，并與TCMSP數(shù)據(jù)庫(kù)中的成分靶基因進(jìn)行整合，所得即為雪蓮果的靶基因。

1.2.2高脂血癥相關(guān)基因及治療靶點(diǎn)的預(yù)測(cè) 在OMIM(online mendelian inheritance in man，https://omim.org/)、Genecards(genecards: the human gene database，https://www.genecards.org/)、DisGeNET(disgenet- a database of gene-disease associations，https://www.disgenet.org/)數(shù)據(jù)庫(kù)檢索高脂血癥(hyperlipoidemia)的疾病靶點(diǎn)，對(duì)3個(gè)數(shù)據(jù)庫(kù)的結(jié)果進(jìn)行整合，獲得高脂血癥相關(guān)基因；將雪蓮果靶基因與疾病相關(guān)基因取交集，即為雪蓮果干預(yù)高脂血癥的治療靶點(diǎn)。

1.2.3蛋白相互作用及MCODE分析 將治療靶點(diǎn)輸入STRING數(shù)據(jù)庫(kù)(STRING，https://string-db.org/)進(jìn)行蛋白互作分析，設(shè)置“Minimum required interaction score”為 0.4，利用R語(yǔ)言依據(jù)靶點(diǎn)相互作用數(shù)量對(duì)其進(jìn)行排序，將結(jié)果導(dǎo)入cytoscape 3.8.0作圖。使用MCODE插件對(duì)其進(jìn)行核心模塊分析，設(shè)置參數(shù)Degree Cutoff=1、Node Score Cutoff=0.2、K-Core=2。

1.2.4富集分析 利用R語(yǔ)言基于KEGG與GO的注釋對(duì)治療靶點(diǎn)進(jìn)行富集分析，其中GO富集分析包含分子功能(molecular function，MF)、生物過程(biological process，BP)和細(xì)胞組成(cellular component，CC)3個(gè)層面，并對(duì)KEGG富集分析結(jié)果利用cytoscape 3.8.0軟件繪制“成分-靶點(diǎn)-通路“圖。

1.2.5動(dòng)物分組及高脂模型的建立 將80只SD大鼠隨機(jī)為空白組(20只)和高脂模型組(60只)，空白組用基礎(chǔ)飼料喂養(yǎng)，高脂模型組用高脂高糖飼料飼養(yǎng)；8周后，分別在空白組和高脂模型組隨機(jī)取10只麻醉、主動(dòng)脈取血后處死，3 000 r/min離心分離血清檢測(cè)TG、TC含量，模型組大鼠TG、TC含量較空白組增高時(shí)，提示造模成功；50只高脂模型大鼠再均分為模型組、陽(yáng)性對(duì)照組及雪蓮果浸膏(高、中、低)組，每組10只。

1.2.6雪蓮果浸膏的制備 取新鮮雪蓮果2.5 kg，清水沖洗干凈后切片、漂洗0.5 h，于電磁爐上連續(xù)浸提4 h，收集并過濾浸提液并蒸發(fā)濃縮，最后分裝、滅菌，4℃存儲(chǔ)，用后續(xù)研究。

1.2.7給藥方案 結(jié)束造模后的第2天開始通過灌胃途徑進(jìn)行給藥，雪蓮果浸膏高、中、低劑量組大鼠分別取5、2.5及1.25 mg/g雪蓮果浸膏(按生藥量計(jì))[9]，加蒸餾水稀釋至4.5 mL進(jìn)行灌胃，陽(yáng)性對(duì)照組以?shī)W利司他0.03 mg/g(4.5 mL)的劑量進(jìn)行灌胃[10]，空白組和模型組直接用4.5 mL的生理鹽水灌胃，均連續(xù)給藥8周。

1.3 觀察指標(biāo)

1.3.1酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法(ELISA)血清中TG、TC、LDL-C及HDL-C的含量 各組大鼠麻醉后心臟采血，3 000 r/min離心分離血清采用酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法(ELISA)測(cè)定各組大鼠血清TG、TC、LDL-C及HDL-C含量。

（1）重復(fù)發(fā)表的文獻(xiàn)；（2）非臨床隨機(jī)對(duì)照研究（如動(dòng)物實(shí)驗(yàn)、綜述、個(gè)案報(bào)道或單臂臨床試驗(yàn)等），或半隨機(jī)對(duì)照試驗(yàn)；（3）非藥物試驗(yàn)（如認(rèn)知行為療法、催眠療法及飲食干預(yù)等）；（4）試驗(yàn)設(shè)計(jì)有明顯錯(cuò)誤或無法提取信息的文獻(xiàn)。

1.3.2實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR檢測(cè)胰脂肪酶、輔脂酶 mRNA表達(dá) 給藥結(jié)束后的第2天，各組大鼠麻醉處死后，用Trizol法提取大鼠胰腺組織的總RNA，逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA。胰脂肪酶、輔脂酶和內(nèi)參照GAPDH的引物序列如表1所示。按照試劑盒的說明書進(jìn)行qPCR反應(yīng)，擴(kuò)增條件為：95 ℃ 預(yù)變性5 min， 95 ℃ 10 s、60 ℃ 30 s，共進(jìn)行40循環(huán)；95 ℃ 15 s，60 ℃ 60 s，95 ℃ 15 s，進(jìn)行溶解曲線分析。

表1 各基因的引物序列

1.3.3Western blot 測(cè)定胰腺組織中胰脂肪酶、輔脂酶的蛋白水平 給藥結(jié)束后的第2天，各組大鼠麻醉處死后，取20 mg胰腺組織于200 μL組織裂解液中提取總蛋白，BCA定量法測(cè)定蛋白濃度，配置好分離膠和聚集膠后，用5×十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠(SDS-PAGE)樣品緩沖液按1 ∶4稀釋樣品，95 ℃加熱變性5 min，取20 μL上樣，電泳分離目的蛋白，轉(zhuǎn)聚偏二氟乙烯膜(polyvinylidenef uoride，PVDF)，5%的TBST脫脂奶粉封閉，加入一抗，4 ℃孵育過夜，洗膜3次，辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)記二抗，室溫振搖60 min。ECL顯色，計(jì)算胰脂肪酶、輔脂酶的相對(duì)表達(dá)量。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

2 結(jié)果

2.1 網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)

2.1.1雪蓮果的活性成分和靶點(diǎn)分析 如表2所示，雪蓮果(yacon)化學(xué)成分由文本挖掘法獲取，利用TCMSP數(shù)據(jù)庫(kù)篩選ADME參數(shù)，其中23個(gè)成分被數(shù)據(jù)庫(kù)錄入，共5個(gè)化合物符合OB>30%、且DL>0.16標(biāo)準(zhǔn)，可以認(rèn)為是雪蓮果的活性成分。結(jié)合Swiss Target Prediction在線工具和TCMSP數(shù)據(jù)庫(kù)據(jù)測(cè)的雪蓮果5個(gè)活性成分的靶基因，其中yacon1包含105個(gè)、yacon2包含107個(gè)、yacon3包含109個(gè)、yacon4包含60個(gè)、yacon5包含34個(gè)。

表2 雪蓮果的活性成分及相關(guān)信息

2.1.2高脂血癥靶點(diǎn)收集與交集靶點(diǎn) 如表3所示，整合OMIM、Genecards、DisGeNET數(shù)據(jù)庫(kù)預(yù)測(cè)的高脂血癥疾病相關(guān)基因，共獲得262個(gè)高脂血癥相關(guān)基因。將雪蓮果靶基因與疾病相關(guān)基因取交集共計(jì)獲得34個(gè)共同基因，即為雪蓮果干預(yù)高脂血癥的靶點(diǎn)。

表3 不同數(shù)據(jù)庫(kù)來源的高脂血癥相關(guān)基因

續(xù)表

2.1.3蛋白質(zhì)相互作用分析及MCODE分析 將34個(gè)交集靶點(diǎn)輸入STRING數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行蛋白互作分析,互作關(guān)系如圖1A所示，節(jié)點(diǎn)顏色越深靶點(diǎn)相互作用數(shù)量越多，圖1B展示了前10位靶點(diǎn)的相互作用數(shù)量及其排序；MCODE分析發(fā)現(xiàn)有3個(gè)核心作用模塊，如圖1C所示。由APOA1、HMGCR、CYP2C9、CYP2C19、ALOX5及PPARG組成的模塊具有最高的評(píng)分，各元素間相互作用緊密，各模塊參數(shù)如表4所示。

注：A為交集基因蛋白互作PPI網(wǎng)絡(luò)圖，B為前10位靶點(diǎn)的相互作用數(shù)量及其排序，C為交集蛋白組成的三核心模塊。

表4 核心模塊參數(shù)

2.1.4富集分析 基于KEGG與GO的注釋進(jìn)行富集分析，結(jié)果如圖2A、2B所示，其中GO富集分析包含BP、CC、MF三個(gè)層面。KEGG富集分析中，膽固醇代謝(cholesterol metabolism)、PPAR信號(hào)通路(PPAR signaling pathway)以及脂肪的消化和吸收(fat digestion and absorption)等信號(hào)通路被顯著富集；在GO富集分析中脂質(zhì)分解代謝(lipid catabolic process)、類固醇分解代謝(steroid metabolic process)以及脂質(zhì)分解代謝調(diào)控(regulation of lipid metabolic process)等生物過程，膽固醇轉(zhuǎn)移活性(cholesterol transfer activity)、羧酸酯水解酶活性(carboxylic ester hydrolase activity)以及甾醇轉(zhuǎn)移活性(sterol transfer activity)等分子功能被顯著富集，據(jù)此推測(cè)，脂質(zhì)、類固醇和膽固醇代謝可能是雪蓮果治療高脂血癥的重要機(jī)制。為進(jìn)一步確定雪蓮果治療高脂血癥的主要分子機(jī)制，進(jìn)行了“成分-靶點(diǎn)-通路”分析(圖2C)，結(jié)果顯示，膽汁轉(zhuǎn)換脂肪酶、載脂蛋白A(APOA)及載脂蛋白B(APOB)參與了上述的脂質(zhì)、類固醇和膽固醇代謝過程。膽汁轉(zhuǎn)換脂肪酶即胰脂酶，包括胰脂肪酶和輔脂酶兩種，因此推測(cè)胰脂肪酶和輔脂酶可能直接參與了脂質(zhì)代謝的過程，在后續(xù)的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中，將重點(diǎn)探討胰脂肪酶和輔脂酶的變化，及其對(duì)脂質(zhì)代謝的影響。

注：A為KEGG富集分析結(jié)果，B為GO富集分析結(jié)果，C為成分-靶點(diǎn)-通路網(wǎng)絡(luò)。

2.2 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)

表5 雪蓮果浸膏對(duì)大鼠體質(zhì)量的影響

2.2.2血清TC、TG、LDL-C及HDL-C含量 造模第8周時(shí)，與空白組比較，高脂模型組大鼠血清中TG和TC含量明顯較高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，證明大鼠高脂模型已成功建立(表6)。進(jìn)一步對(duì)各組大鼠的血脂進(jìn)行測(cè)定結(jié)果發(fā)現(xiàn)，造模第16周時(shí)，與空白組比較，模型組大鼠血清中TG、TC、LDL-C及HDL-C含量增高(P<0.05)；與模型組比較，雪蓮果浸膏高劑量組和陽(yáng)性對(duì)照組的血清中TG、TC、LDL-C及HDL-C含量有明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表7。

表6 造模第8周時(shí)各組大鼠血清TG和TC水平

表7 雪蓮果浸膏對(duì)各組大鼠血脂TG, TC, LDL-C 和 HDL-C的影響

2.2.3大鼠胰腺組織中胰脂肪酶和輔脂酶 mRNA表達(dá) 結(jié)果顯示，與空白組相比，模型組的胰脂肪酶、輔脂酶 mRNA表達(dá)升高；在雪蓮果浸膏和陽(yáng)性藥物的治療下，雪蓮果高劑量組、中劑量組和陽(yáng)性對(duì)照組的胰脂肪酶、輔脂酶 mRNA表達(dá)較模型組有所降低(P<0.05)，且雪蓮果高劑量組和陽(yáng)性對(duì)照組相比于雪蓮果中劑量組，降低效果更加顯著。見圖3。

注： (1)與空白組比較，P<0.05；(2)與模型組比較，P<0.05。

2.2.4大鼠胰腺組織胰脂肪酶、輔脂酶蛋白表達(dá) 結(jié)果顯示，與空白組相比，模型組的胰脂肪酶和輔脂酶蛋白表達(dá)升高(P<0.05)；在雪蓮果浸膏和陽(yáng)性藥物的治療下，雪蓮果高、中劑量組和陽(yáng)性對(duì)照組的胰脂肪酶、輔脂酶蛋白表達(dá)相比于模型組有所降低(P<0.05)，見圖4。提示雪蓮浸膏對(duì)較好的降脂作用。

注： (1)與空白組比較，P<0.05；(2)與模型組比較，P<0.05。

3 討論

目前，人們對(duì)高脂血癥藥物的研發(fā)，主要從調(diào)控外源性脂質(zhì)吸收、內(nèi)源性脂質(zhì)合成與膽汁酸重吸收、血漿脂蛋白代謝以及脂質(zhì)代謝等方面進(jìn)行[11-13]。本文基于KEGG與GO的注釋進(jìn)行富集分析，其中GO富集分析包含BP、CC、MF三個(gè)層面。KEGG富集分析中，膽固醇代謝、PPAR信號(hào)通路以及脂肪的消化和吸收等信號(hào)通路被顯著富集；在GO富集分析中脂質(zhì)分解代謝、類固醇分解代謝以及脂質(zhì)分解代謝調(diào)控等生物過程，膽固醇轉(zhuǎn)移活性、羧酸酯水解酶活性以及甾醇轉(zhuǎn)移活性等分子功能被顯著富集，據(jù)此推測(cè)，脂質(zhì)、類固醇和膽固醇代謝可能是雪蓮果治療高脂血癥的重要機(jī)制。膽汁轉(zhuǎn)換脂肪酶、載脂蛋白A以及載脂蛋白B等參與了上述過程。膽汁轉(zhuǎn)換脂肪酶即胰脂酶(lipase)，包括胰脂肪酶、輔脂酶，在外源性脂質(zhì)吸收過程中胰脂肪酶、輔脂酶起著關(guān)鍵的作用，其能夠影響 PLA2G7, PLA2G1B等靶點(diǎn)參與體內(nèi)脂質(zhì)吸收和調(diào)節(jié)體內(nèi)膽固醇的代謝，進(jìn)而影響高脂血癥的發(fā)生發(fā)展，可能作為關(guān)鍵靶點(diǎn)發(fā)揮抗高脂血癥的作用，故本實(shí)驗(yàn)從胰脂肪酶、輔脂酶出發(fā)，探究雪蓮果浸膏影響大鼠脂質(zhì)吸收的生物化學(xué)機(jī)制。

胰脂肪酶是一種脂肪代謝的重要酶類，于胰腺合成，可水解百分之五十到百分之七十的食物脂肪[14]。小腸表面張力升高，使胰脂肪酶不能與微團(tuán)內(nèi)的三酰甘油接觸，此外，在水油界面，胰脂肪酶易變性失活[15]。輔脂酶在胰腺腺泡合成，只有輔脂酶才能使胰脂肪酶固定于微團(tuán)的水油面上，并可防止其變性，增加其活性，促進(jìn)脂肪水解[16]。因此，輔脂酶是胰脂肪酶作用的必需因子[17]。本實(shí)驗(yàn)中的奧利司他是一種在臨床上比較認(rèn)可的減肥藥，具有非常高的安全性，它主要是特異性的胃腸道脂肪酶抑制劑，能夠阻斷人體對(duì)脂肪的吸收，因此采用其作為在本實(shí)驗(yàn)中作為陽(yáng)性對(duì)照組。

雪蓮果(smallanthus sonchifolius)，俗名yacon，又稱亞貢、亞龍果，盛產(chǎn)于貴州，是一種低熱食品和藥食同源型水果，富含多種人體必須氨基酸、礦物質(zhì)和可溶性的纖維。研究發(fā)現(xiàn)，雪蓮果除了可藥用外，還具有多種功效，如降血脂、降血糖、護(hù)肝、抑菌、抗氧化等[18-19]。朱振元等[20]發(fā)現(xiàn)雪蓮果中糖類成分對(duì)高脂飲食所致小鼠血脂升高有明顯抑制作用，能有效預(yù)防高血脂癥。聶蘭等[21]發(fā)現(xiàn)一定劑量的雪蓮果汁能上調(diào)大鼠肝臟組織中 AMPK mRNA 和蛋白質(zhì)表達(dá)，下調(diào) ACC mRNA和蛋白質(zhì)表達(dá)，從而抑制脂肪酸合成，同時(shí)加速脂肪酸氧化，達(dá)到降脂作用。但目前為止對(duì)于雪蓮果如何糾正血脂異常的具體作用機(jī)制仍沒有明確的結(jié)論,待進(jìn)一步研究考證。

本研究結(jié)果顯示，各組大鼠體重增減量之間雖存在變化，但是其差異不具備統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，說明雪蓮果浸膏對(duì)大鼠體重影響不顯著；血清學(xué)層面，雪蓮果浸膏干預(yù)后，高、中劑量的雪蓮果浸膏能顯著降低大鼠血清中TG、TC和LDL-C水平，中劑量組對(duì)HDL-C的升高效果則更好；蛋白和基因?qū)用?，雪蓮果浸膏高、中劑量組大鼠胰脂肪酶、輔脂酶的蛋白和mRNA的表達(dá)水平較陰性對(duì)照組均降低，與陽(yáng)性藥物奧利司他作用效果趨勢(shì)基本一致，表明雪蓮果浸膏能抑制胰脂肪酶蛋白的表達(dá)及基因的轉(zhuǎn)錄，從而達(dá)到有效降脂作用。

根據(jù)預(yù)測(cè)和實(shí)驗(yàn)結(jié)果，推測(cè)雪蓮果浸膏治療高脂血癥的可能作用機(jī)制為直接或間接調(diào)節(jié)影響脂肪代謝的關(guān)鍵靶點(diǎn)，減少腸道脂質(zhì)吸收，調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝平衡，從而減少內(nèi)臟脂肪沉積，且結(jié)果表明其降脂效果呈現(xiàn)一定的劑量依賴性，可能的作用途徑為：在一定劑量下，雪蓮果浸膏可通過抑制胰脂肪酶、輔脂酶的基因轉(zhuǎn)錄，從而抑制大鼠胰腺中的胰脂肪酶、輔脂酶的蛋白合成，直接導(dǎo)致從胰腺進(jìn)入腸道的胰脂肪酶、輔脂酶含量減少，無法促進(jìn)脂肪(主要是甘油三酯)及其分解代謝產(chǎn)物(游離脂肪酸和單?；视?的消化吸收，從而減少了大鼠腸道對(duì)小分子脂質(zhì)的吸收，對(duì)脂肪的合成、轉(zhuǎn)運(yùn)起到一定的抑制作用。Papapanagiotou等[22]研究發(fā)現(xiàn)，高脂血癥除了涉及脂質(zhì)代謝紊亂外，其發(fā)生發(fā)展以及并發(fā)癥常伴有炎癥和內(nèi)皮功能障礙；Mylonis 等[23]研究發(fā)現(xiàn)，缺氧也可以增強(qiáng)脂肪的生成過程，主要是因?yàn)樯婕爸舅?FA)攝取、合成和儲(chǔ)存等過程；研究表明，PI3K/Akt 與 FoxO信號(hào)通路也協(xié)同作用于糖脂代謝，其中 PI3K-Akt 信號(hào)通路可調(diào)節(jié)葡萄糖穩(wěn)態(tài)，脂質(zhì)代謝等過程，F(xiàn)oxO亞家族可通過介導(dǎo)胰島素或類胰島素生長(zhǎng)因子對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)分化、氧化應(yīng)激、自噬及衰老起到抑制作用[24]；另外，雖然朱振元等[20]研究發(fā)現(xiàn)雪蓮果多糖成分能抑制糖尿病小鼠餐后血糖升高和顯著增強(qiáng)糖尿病小鼠葡萄糖的負(fù)荷糖耐量，并具有一定預(yù)防高脂血癥的效果，但是其能否通過抑制炎癥因子來發(fā)揮抗動(dòng)脈粥樣硬化等慢性病，能否通過緩解胰島素抵抗來達(dá)到降低血糖的目的，還有待進(jìn)一步驗(yàn)證。

綜上所述，本研究利用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方法挖掘雪蓮果治療高脂血癥的活性成分，通過網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建及通路富集闡述了活性成分與作用靶點(diǎn)和通路之間的聯(lián)系，雪蓮果有效成分能通過影響脂質(zhì)、類固醇和膽固醇代謝等過程，調(diào)節(jié)PPAR、脂肪的消化吸收等信號(hào)通路延緩高脂血癥的發(fā)生發(fā)展。同時(shí)，本研究揭示了雪蓮果浸膏治療高血脂癥的潛在分子機(jī)制，證實(shí)了網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)預(yù)測(cè)結(jié)果，雪蓮果浸膏通過作用于胰脂肪酶和輔脂酶關(guān)鍵靶點(diǎn)，影響腸道的脂質(zhì)吸收過程從而發(fā)揮降脂作用，而此分析結(jié)果與目前臨床治療脂代謝異常的其他藥物較為一致，奧利司他是一種非全身作用的特異性胃腸道脂肪酶抑制劑，主要通過作用于胃腸系統(tǒng)的胃脂肪酶和胰脂肪酶的活性絲氨酸部位形成共價(jià)鍵，導(dǎo)致脂肪酶失活，從而抑制甘油三酯水解為可吸收的游離脂肪酸和單?；视蚚25]，這與本項(xiàng)目雪蓮果的腸道作用機(jī)制相一致，而雪蓮果究竟是否能通過提高胰高血糖素、胰島素降解酶含量促進(jìn)糖脂代謝過程，還有待進(jìn)一步驗(yàn)證。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果不僅揭示了雪蓮果通過多成分、多靶點(diǎn)、多途徑整體調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝的特點(diǎn)，也為進(jìn)一步深入探討其降脂作用機(jī)制奠定了基礎(chǔ)，還為其是否能通過抗氧化、降血糖、抗動(dòng)脈粥樣硬化等與高脂血癥密切相關(guān)的作用機(jī)制提供了指導(dǎo)方向，為該方臨床應(yīng)用及深入研究提供了理論依據(jù)。