蛋白質(zhì)組學(xué)在宮頸癌研究中的應(yīng)用進(jìn)展

伍會(huì)琴,劉輝

癌癥是危害人類健康的主要原因之一，已經(jīng)發(fā)展成為全球性的公共衛(wèi)生問(wèn)題。宮頸癌是全球第四大常見(jiàn)的女性惡性腫瘤[1]，對(duì)女性健康構(gòu)成嚴(yán)重威脅。在發(fā)展中國(guó)家，宮頸癌是導(dǎo)致女性癌癥死亡的第二大原因[2]。因此，揭示宮頸癌的發(fā)病機(jī)制、尋找新的治療靶點(diǎn)、探索宮頸癌特異性的生物標(biāo)志物，儼然成為了當(dāng)下最為迫切的問(wèn)題。目前，巴氏涂片和病毒DNA分析等診斷方法以及人乳頭瘤病毒 (human papilloma virus,HPV) 疫苗的應(yīng)用，對(duì)于降低宮頸癌的發(fā)病率做出了巨大的貢獻(xiàn)。然而，宮頸癌的治療與診斷仍是巨大的挑戰(zhàn)。

蛋白質(zhì)組學(xué)以一個(gè)基因組、細(xì)胞或完整生物所包含的一整套蛋白質(zhì)為研究對(duì)象，研究生物體內(nèi)蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)、功能，并對(duì)其進(jìn)行定性定量分析。這一概念由Wilkins等[3]在1995年提出，被認(rèn)為是后基因組時(shí)代的關(guān)鍵技術(shù)之一。近年來(lái)，蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)逐漸成為解決有關(guān)醫(yī)學(xué)或分子生物學(xué)研究等問(wèn)題的強(qiáng)有力工具，已經(jīng)廣泛地應(yīng)用于對(duì)宮頸癌的研究中，尤其是在宮頸癌相關(guān)生物標(biāo)志物的篩選中，發(fā)揮著不可替代的作用[2,4]。同時(shí)，也為探索宮頸癌的發(fā)病機(jī)制及靶向藥物的研究提供了新的方法與途徑。本文概括并總結(jié)了蛋白質(zhì)組學(xué)及其相關(guān)技術(shù)在宮頸癌研究中的應(yīng)用與進(jìn)展，對(duì)其涉及到的分析技術(shù)和方法進(jìn)行匯總，旨在為宮頸癌的診斷及治療提供參考。

1 定量蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)

1.1 二維凝膠電脈

二維凝膠電泳(two-dimensional gel electrophoresis,2-DE)由Smithies和Poulik[5]在1956年提出。它是基于兩種電泳過(guò)程的集合，借助梯度pH膠和聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)完成對(duì)蛋白質(zhì)的雙向分離，從而在蛋白質(zhì)混合物的分離中獲得更高的分辨率[5]。2-DE的凝膠根據(jù)蛋白質(zhì)在分子量以及等電點(diǎn)上的差異分離蛋白質(zhì)，在單次實(shí)驗(yàn)中即可實(shí)現(xiàn)對(duì)4 000～5 000種蛋白質(zhì)的分離，從而實(shí)現(xiàn)大規(guī)模的蛋白質(zhì)分析[6-7]。該技術(shù)的主要優(yōu)勢(shì)在于促進(jìn)蛋白質(zhì)圖譜的可視化，這有助于和其他蛋白質(zhì)圖譜直接進(jìn)行比較。

使用2-DE的蛋白質(zhì)組學(xué)研究已經(jīng)應(yīng)用于分析宮頸癌等惡性腫瘤。Guo等[8]采用2-DE聯(lián)合基質(zhì)輔助激光解析/電離飛行時(shí)間串聯(lián)質(zhì)譜(MALDI-TOF-MS)的方法篩選鱗狀宮頸癌(squamous cervical cancer，SCC)的化療敏感性生物標(biāo)志物，發(fā)現(xiàn)Hsp70可能是預(yù)測(cè)鱗狀宮頸癌患者化療療效的潛在生物標(biāo)志物。Jin等[9]使用蛋白質(zhì)組學(xué)方法與2-DE結(jié)合質(zhì)譜法探索Mycoepoxydiene(MED)的細(xì)胞靶標(biāo)并分析MED在HeLa細(xì)胞中的抗腫瘤活性分子機(jī)制，發(fā)現(xiàn)MED可以顯著下調(diào)糖酵解和磷酸戊糖途徑中丙糖磷酸異構(gòu)酶 (triose phosphate isomerase，TPI) 和 6-磷酸葡萄糖酸內(nèi)酯酶 (6-phosphogluconolactonase，PGLS)的表達(dá)水平，進(jìn)而抑制糖酵解和磷酸戊糖途徑，并抑制HeLa細(xì)胞的生長(zhǎng)。二維差異凝膠電泳(two-dimensional difference gel electrophoresis，2D-DIGE)是2-DE的一種改進(jìn)形式。與傳統(tǒng)的2-DE相比，基于2D-DIGE的定量蛋白質(zhì)組學(xué)利用熒光染料(Cy3和Cy5)對(duì)蛋白質(zhì)樣品進(jìn)行預(yù)標(biāo)記，具有更高的靈敏度、準(zhǔn)確度和重現(xiàn)性等優(yōu)勢(shì)。Serafín-Higuera等[10]使用2D-DIGE分析了正常宮頸細(xì)胞和感染HPV16的宮頸癌細(xì)胞之間的差異蛋白，與正常的宮頸細(xì)胞相比，感染了HPV16的宮頸癌細(xì)胞中，Mimecan、主動(dòng)脈平滑肌肌動(dòng)蛋白和 Lumican的表達(dá)水平增加，角蛋白、II 型細(xì)胞骨架 5、Peroxiredoxin-1和14-3-3蛋白 sigma的表達(dá)水平下降，這些蛋白可以作為識(shí)別宮頸癌的生物標(biāo)志物。

1.2 非標(biāo)記定量蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)

非標(biāo)記定量蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)(label-free quantitative proteomics，LFQP)主要應(yīng)用于對(duì)蛋白質(zhì)的肽段進(jìn)行定量分析。肽段的定量是基于對(duì)不同生物樣品中提取的肽段質(zhì)譜峰強(qiáng)度的比較(基于強(qiáng)度的定量)，或者基于對(duì)同一肽段獲得的串聯(lián)質(zhì)譜檢測(cè)次數(shù)(光譜計(jì)數(shù)方法)來(lái)代表肽段在混合物中的相對(duì)豐度，可以在復(fù)雜樣本中實(shí)現(xiàn)對(duì)目的蛋白的鑒定與分析，適用于大規(guī)模的生物樣品研究。同時(shí)，其憑借低成本、樣本制備簡(jiǎn)單等特點(diǎn)，廣泛應(yīng)用于對(duì)蛋白質(zhì)及生物標(biāo)志物的篩選。

Hao等[11]采用非標(biāo)記定量蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)分析了來(lái)自C-33A、Caski和SiHa 宮頸癌細(xì)胞系的分泌蛋白，并使用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)和液相色譜平行反應(yīng)監(jiān)測(cè)/質(zhì)譜(liquid chromatography parallel reaction monitoring/mass spectrometry， LC-PRM/MS)等進(jìn)行了相對(duì)與絕對(duì)定量驗(yàn)證，結(jié)果顯示FBLN1和ANT3可以作為宮頸癌和HPV感染的血清蛋白標(biāo)志物，也為相關(guān)ELISA試劑盒的開(kāi)發(fā)提供參考。此外，非標(biāo)記定量蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)也適用于宮頸癌相關(guān)蛋白翻譯后修飾的分析。Zhang等[12]對(duì)3例宮頸鱗狀細(xì)胞癌患者的原發(fā)癌組織和相應(yīng)的鄰近正常組織進(jìn)行了基于質(zhì)譜(MS)的定量乙酰蛋白質(zhì)組學(xué)分析，并采用免疫沉淀(immunoprecipitation，IP)及蛋白質(zhì)印跡(western blot，WB)方法進(jìn)行驗(yàn)證，以探討蛋白質(zhì)的乙酰化在宮頸癌發(fā)生過(guò)程中的作用。研究發(fā)現(xiàn)與鄰近的正常組織相比，宮頸癌組織中的CREBBP和p300 被上乙?；f(shuō)明了組蛋白乙?；趯m頸癌進(jìn)程中發(fā)揮著重要作用。近年來(lái)，由于生物信息學(xué)分析技術(shù)的不斷發(fā)展，基于非標(biāo)記定量的蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)也經(jīng)常和生物信息學(xué)分析結(jié)合起來(lái)，實(shí)現(xiàn)對(duì)宮頸癌相關(guān)蛋白以及生物標(biāo)志物的篩選。Starodubtseva等[13]基于液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜(LC-MS/MS)的方法對(duì)宮頸腫瘤轉(zhuǎn)化不同階段的宮頸陰道液(cervicovaginal fluid，CVF)蛋白質(zhì)組進(jìn)行篩選，通過(guò)繪制Venn圖、熱圖、火山圖等生物信息學(xué)分析手段，對(duì)篩選出的蛋白進(jìn)行分析，并借助PLS-DA方法建立統(tǒng)計(jì)模型，對(duì)獲得的CVF蛋白質(zhì)組學(xué)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，該模型的敏感性為77%，特異性為94%，證明了CVF蛋白質(zhì)組可以用來(lái)反映宮頸上皮腫瘤的進(jìn)程。

1.3 標(biāo)記定量蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)

標(biāo)記定量蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)(labeled quantitative proteomics，LQP) 通過(guò)使用穩(wěn)定同位素對(duì)蛋白質(zhì)或肽段進(jìn)行標(biāo)記并實(shí)現(xiàn)蛋白質(zhì)定量。經(jīng)過(guò)穩(wěn)定同位素標(biāo)記后的蛋白質(zhì)或肽段與原來(lái)相比，除了在質(zhì)量上有差異，其基本的化學(xué)性質(zhì)并沒(méi)有發(fā)生改變，通過(guò)識(shí)別肽段的質(zhì)量差，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)目的肽段及目的蛋白的篩選及定量。標(biāo)記定量根據(jù)標(biāo)記方式的不同，可以分為體內(nèi)標(biāo)記和體外標(biāo)記，體外標(biāo)記又分為化學(xué)標(biāo)記和酶促標(biāo)記。

細(xì)胞培養(yǎng)穩(wěn)定同位素標(biāo)記(stable isotope labeling by amino acids in cell culture，SILAC)是一種在蛋白質(zhì)合成過(guò)程中將含有“輕”或“重”同位素標(biāo)記的氨基酸(精氨酸或賴氨酸)摻入到細(xì)胞蛋白質(zhì)組中，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)全細(xì)胞蛋白質(zhì)進(jìn)行標(biāo)記的一種高通量定量蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)，由Ong等[14]在2002年提出。該技術(shù)自面世以來(lái)，受到廣泛關(guān)注。該技術(shù)的主要優(yōu)勢(shì)在于含有同位素標(biāo)記的氨基酸摻入后，差異標(biāo)記的樣品在細(xì)胞裂解后立即與之混合，可以最大限度地減少處理樣品所造成的定量誤差[15]。于此同時(shí)，SILAC是一種簡(jiǎn)單、廉價(jià)且準(zhǔn)確的手段，可用作任何細(xì)胞培養(yǎng)系統(tǒng)中的定量蛋白質(zhì)組學(xué)研究，是研究蛋白質(zhì)表達(dá)、細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和蛋白質(zhì)翻譯后修飾的重要技術(shù)[16]。Zhang等[16]采用SILAC的方法評(píng)估了Zeylenone (Zey)誘導(dǎo)的HeLa細(xì)胞蛋白質(zhì)組的變化，結(jié)合質(zhì)譜分析并采用qPCR進(jìn)一步驗(yàn)證，發(fā)現(xiàn)Zey通過(guò)影響B(tài)cl-2和14-3-3蛋白家族之間的相互作用以及對(duì)HSP70和RP家族蛋白的抑制來(lái)誘導(dǎo)HeLa細(xì)胞凋亡，該研究對(duì)于發(fā)現(xiàn)宮頸癌潛在的抗癌靶標(biāo)具有重要意義。Yang等[17]使用表達(dá)人乳頭瘤病毒(HPV16)的永生化人角質(zhì)形成細(xì)胞,通過(guò)向培養(yǎng)的人角質(zhì)形成細(xì)胞(正?？谇唤琴|(zhì)形成細(xì)胞，NOKs)培養(yǎng)基中加入了標(biāo)記的精氨酸與賴氨酸，以評(píng)估癌基因表達(dá)對(duì)宿主細(xì)胞的影響。借助RNA-Seq分析以及生物信息學(xué)分析等方法驗(yàn)證了先前研究中已被證明受HPV影響的基因，包括上調(diào)基因IL1A、UCHL1、TYMS、EGFR、TP63和PCNA以及下調(diào)基因STAT1、FN1和ISG15。對(duì)于在SILAC技術(shù)中存在的精氨酸轉(zhuǎn)化為脯氨酸的問(wèn)題，在Taga等[18]的研究中，通過(guò)向培養(yǎng)基中添加200～300 mg/L的脯氨酸即可有效抑制這種轉(zhuǎn)化并降低實(shí)驗(yàn)誤差。同時(shí)，Super-SILAC 技術(shù)[19]的應(yīng)用，也打破了SILAC只能應(yīng)用于活細(xì)胞研究的限制，為SILAC技術(shù)的發(fā)展與應(yīng)用開(kāi)拓了新的方向。

同位素標(biāo)記相對(duì)和絕對(duì)定量技術(shù)(isobaric tags for relative and absolute quantification，iTRAQ)由Ross等[20]在2004年提出，這是一種基于串聯(lián)質(zhì)譜的多重蛋白標(biāo)記技術(shù)。利用多種iTRAQ試劑標(biāo)記肽段氨基末端或賴氨酸側(cè)鏈基團(tuán)，并使用串聯(lián)質(zhì)譜進(jìn)行分析，最多可同時(shí)對(duì)八組樣品的蛋白進(jìn)行定量分析和比較，是一種具有高通量、高穩(wěn)定性和廣泛適用性的分析方法。與非標(biāo)記定量蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)相比，該技術(shù)在統(tǒng)計(jì)學(xué)分析以及定量分析上具有更加明顯的優(yōu)勢(shì)[21]。串聯(lián)質(zhì)譜標(biāo)簽法(tandem mass tag，TMT)與iTRAQ原理類似，由Thompson等[22]提出，采用等壓標(biāo)記的方法對(duì)胰蛋白酶消化的肽段進(jìn)行化學(xué)標(biāo)記，該化學(xué)標(biāo)簽會(huì)產(chǎn)生不同的報(bào)告離子(報(bào)告基團(tuán)、平衡基團(tuán)、反應(yīng)基團(tuán))，不同的報(bào)告離子會(huì)表現(xiàn)出不同樣式的質(zhì)譜峰，對(duì)比質(zhì)譜峰的信號(hào)強(qiáng)度和峰面積，即可得出同一肽段在不同樣品之間的含量。

迄今為止，使用化學(xué)標(biāo)記法(例如iTRAQ和TMT)進(jìn)行同位素標(biāo)記的技術(shù)已經(jīng)廣泛應(yīng)用于蛋白質(zhì)組學(xué)研究，通過(guò)使用化學(xué)標(biāo)記法成功地發(fā)現(xiàn)了許多潛在的癌癥生物標(biāo)志物以及治療靶標(biāo)。為研究宮頸癌組織中蛋白質(zhì)組學(xué)的復(fù)雜性并尋找疾病相關(guān)的生物標(biāo)志物和治療靶點(diǎn)提供了有效的方法。

He等[23]對(duì)正常的SiHa細(xì)胞和用紫杉醇(Paclitaxel)和卡鉑(Carboplatin)處理14 d的SiHa細(xì)胞進(jìn)行了基于iTRAQ技術(shù)的定量蛋白質(zhì)組學(xué)分析，探討抗腫瘤藥物耐藥機(jī)制的相關(guān)蛋白，GO和KEGG分析用于識(shí)別相關(guān)過(guò)程和差異表達(dá)的蛋白質(zhì)。與對(duì)照細(xì)胞相比，APOA1在抗紫杉醇和卡鉑處理的SiHa細(xì)胞中均過(guò)表達(dá)。免疫組織化學(xué)結(jié)果顯示APOA1在紫杉醇和卡鉑耐藥的宮頸鱗狀細(xì)胞癌中高度表達(dá)。因此，APOA1蛋白可以作為監(jiān)測(cè)和預(yù)測(cè)紫杉醇和卡鉑耐藥水平的潛在標(biāo)志物，并且，iTRAQ技術(shù)是一種在蛋白質(zhì)水平上研究影響耐藥性因素的有效方法。Xia等[24]通過(guò)將平行反應(yīng)監(jiān)測(cè)(parallel reaction monitoring，PRM)分析和 iTRAQ技術(shù)相結(jié)合，分析了Astragaloside IV (AS-IV) 處理的宮頸癌細(xì)胞中差異蛋白的表達(dá)和AS-IV抑制宮頸癌細(xì)胞侵襲的分子機(jī)制。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，共有32種差異表達(dá)蛋白，其中16種表達(dá)增加，另外16種表達(dá)減少。經(jīng)過(guò)GO與PPI分析，發(fā)現(xiàn) AS-IV上調(diào)Atg12并通過(guò)DCP1A和TMSB4X誘導(dǎo)癌細(xì)胞自噬，抑制宮頸癌侵襲。其中DCP1A和TMSB4X在自噬過(guò)程中可作為AS-I的靶標(biāo)，也可作為用于宮頸癌治療的抗癌化合物篩選的靶標(biāo)。同時(shí)，PRM與iTRAQ的組合可用于大分子目標(biāo)化合物的鑒定，也可被視為篩選用于治療宮頸癌的抗癌化合物的新技術(shù)。Han等[25]對(duì)正常宮頸組織(N)、高級(jí)鱗狀上皮內(nèi)病變組織(HSIL)和宮頸癌組織(CC)進(jìn)行了基于iTRAQ技術(shù)的差異蛋白分析，在宮頸癌樣本中鑒定了72 種差異表達(dá)的蛋白質(zhì)，其中，以核酸結(jié)合蛋白為主。HMGB2蛋白在宮頸癌樣本中呈現(xiàn)出明顯的上調(diào)，且其上調(diào)與原發(fā)腫瘤大小、浸潤(rùn)深度和FIGO分期有關(guān)，并參與腫瘤的進(jìn)展。最終結(jié)果表明，HMGB2可能促進(jìn)宮頸癌的進(jìn)展，宮頸癌組織中HMGB2的存在可能是宮頸癌疾病的生物標(biāo)志物和預(yù)后指標(biāo)。Grassett等[26]通過(guò)TMT分析了五氟苯基(pentafluorophenyl,PFP)作為高pH反相色譜(high pH reversed phase，Hi-pH RP)和強(qiáng)陽(yáng)離子交換(strong cation exchange，SCX)的替代品，對(duì)在從人宮頸癌 (HeLa)細(xì)胞中分離的肽和磷酸肽進(jìn)行預(yù)分餾的性能，結(jié)果顯示，復(fù)雜肽和磷酸肽樣品的離線PFP分餾減少了樣品處理和處理時(shí)間，并降低樣品復(fù)雜性。

同位素親和標(biāo)簽技術(shù)(isotope-coded affinity tags，ICAT)由Gygi等[27]提出。通過(guò)使用生物素化的碘乙酰胺衍生物對(duì)蛋白質(zhì)中的半胱氨酸巰基進(jìn)行標(biāo)記，并使用胰蛋白酶對(duì)蛋白質(zhì)進(jìn)行酶解。隨后，采用親和層析法將標(biāo)記肽段與未標(biāo)記肽段分離，最后進(jìn)行質(zhì)譜分析與鑒定[28]。該方法允許從復(fù)雜的樣品混合物中分離含半胱氨酸的肽，從而大大減少引入質(zhì)譜儀的肽段數(shù)量。Zhang等[29]使用氧化同位素編碼親和標(biāo)簽(oxidative isotope-coded affinity tags，OxICAT)分析HPV感染的宮頸癌細(xì)胞中蛋白質(zhì)的整體氧化還原狀態(tài)，以確定基因治療的潛在目標(biāo)。 研究發(fā)現(xiàn)電壓依賴性陰離子通道1(voltage-dependent anion channel1，VDAC1)在HPV陽(yáng)性宮頸癌細(xì)胞中被高度氧化，VDAC1與HPV16 E7相互作用促進(jìn)宮頸癌發(fā)展。因此針對(duì)VDAC1的研究可能是治療宮頸癌的潛在策略。

目前質(zhì)譜定量技術(shù)主要采取數(shù)據(jù)依賴采集(data dependent analysis，DDA)和數(shù)據(jù)非依賴采集(data independent analysis，DIA)兩種方法，傳統(tǒng)的DDA在一次掃描循環(huán)中，對(duì)母離子碎裂產(chǎn)生的子離子進(jìn)行分析，然而實(shí)際情況更傾向于選擇肽段樣品中的高豐度肽段，這會(huì)導(dǎo)致低豐度肽段的信息丟失。DIA的出現(xiàn)解決了這一問(wèn)題，根據(jù)其分析原理，DIA可以將整個(gè)質(zhì)譜分析掃描窗口分為若干個(gè)小窗口，在一次掃描循環(huán)中對(duì)所有母離子進(jìn)行碎裂，并記錄全部子離子的信息，并且不需要指定目標(biāo)肽段且掃描點(diǎn)數(shù)均勻，利用譜圖庫(kù)即可完成定量離子篩選與確認(rèn)，具備極佳的重復(fù)性[30]。DIA可以對(duì)所有離子碎片進(jìn)行無(wú)差別的分析而不受限于目的肽段本身，適用于大規(guī)模的蛋白定量分析。如今基于DIA技術(shù)的SWATH(sequential window acquisition of all theoretical spectra)方法已被應(yīng)用到宮頸癌的研究中。Shen等[31]使用SWATH-MS技術(shù)對(duì)miR-26a敲除的HeLa細(xì)胞中蛋白質(zhì)表達(dá)變化進(jìn)行了分析，并創(chuàng)建了HeLa細(xì)胞中miR-26a靶向轉(zhuǎn)錄物的清單。結(jié)果顯示，NUF2、CDK6和USP47作為HeLa細(xì)胞中miR-26a的靶標(biāo)。此外，首次發(fā)現(xiàn) MYPN、DNAJC9和 PPA1 作為 mi-RNA 靶標(biāo)，這6個(gè)基因的表達(dá)在miR-26a過(guò)表達(dá)系中均受到抑制。

2 定性蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)

鳥(niǎo)槍法(shotgun)是一種對(duì)蛋白質(zhì)進(jìn)行全譜分析的技術(shù)，其基本方法是先使用酶消化混合物中的蛋白質(zhì)，然后通過(guò)液相色譜法(LC)分離得到肽段，并使用串聯(lián)質(zhì)譜法(MS/MS)鑒定肽段，在肽段水平實(shí)現(xiàn)對(duì)蛋白質(zhì)的分析與鑒定，適用于各種蛋白質(zhì)混合物，如血清、組織、各種體液以及尿液等，是一種高通量的蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)[32-33]。鳥(niǎo)槍法宏基因組DNA測(cè)序?yàn)榱私飧鞣N生物的系統(tǒng)發(fā)育、生物多樣性、代謝能力和功能多樣性提供了有效的手段。Kwon等[34]采用鳥(niǎo)槍法宏基因組測(cè)序的方法，研究宮頸癌發(fā)生時(shí)宮頸微生物組的組成和功能變化。與對(duì)照組相比，宮頸癌患者宮頸微生物群以嗜堿菌屬(Alkaliphilus)、假熱菌屬(Pseudothermotoga)和沃爾巴克氏菌屬(Wolbachia)為主。宮頸上皮內(nèi)瘤變 (cervical intraepithelial neoplasia，CIN) 患者的宮頸微生物中三分之二為乳桿菌(Lactobacillus)、葡萄球菌(Staphylococcus)和內(nèi)膜念珠菌(Candidatus Endolissoclinum)。正常組宮頸微生物富含假交替單胞菌屬(Pseudoalteromonas)和嗜冷菌屬(Psychrobacter)。結(jié)果表明，宮頸病變患者和正常受試者的宮頸微生物群落組成及其宏基因組學(xué)特征存在差異。Yang等[35]的研究也同樣證明了HPV16陽(yáng)性女性陰道微生物組的組成發(fā)生了改變，例如乳酸桿菌減少和加德納菌增加，包括其他機(jī)會(huì)性病原體，這表明伴隨 HPV 感染的陰道微生物群失調(diào)很有可能導(dǎo)致HPV持續(xù)感染，甚至加速病變的進(jìn)展。

3 結(jié)語(yǔ)

迄今為止，雖然對(duì)于宮頸癌的診斷和治療已經(jīng)取得了重大進(jìn)展，如巴氏細(xì)胞學(xué) (Pap)、陰道鏡檢查、醋酸肉眼檢查 (visual inspection with acetic acid，VIA) 和組織病理學(xué)檢查，聚合酶鏈反應(yīng)(polymerase chain reaction，PCR)、測(cè)序以及放療、化療、手術(shù)、免疫治療和靶向治療等治療方法，宮頸癌仍是影響全人類健康及生存的主要疾病之一，尤其是在發(fā)展中國(guó)家[36-38]。與此同時(shí)，蛋白質(zhì)組學(xué)及其相關(guān)領(lǐng)域的研究取得了顯著的進(jìn)步，各種分析技術(shù)不斷完善，高通量、高靈敏性、高穩(wěn)定性的定量方法與定量策略也在不斷更新，使我們對(duì)于蛋白質(zhì)的組成、功能和表達(dá)有了更加深刻的認(rèn)知。通過(guò)一系列的蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)，我們可以對(duì)宮頸癌相關(guān)蛋白進(jìn)行詳細(xì)地分析和鑒定。同時(shí)，宮頸癌生物標(biāo)志物的發(fā)現(xiàn)，可以增加早期診斷和良好預(yù)后的機(jī)會(huì)，基于這些生物標(biāo)志物，也可以開(kāi)發(fā)新的有效療法。 未來(lái)，隨著蛋白質(zhì)組學(xué)方法策略的不斷改進(jìn)和新技術(shù)的引入，蛋白質(zhì)組學(xué)在宮頸癌的診斷和治療中將會(huì)發(fā)揮越來(lái)越重要的作用。