CFS大鼠模型的建立與評(píng)價(jià)*

馬菲，張小凡，李華南,3△

（1.天津市中醫(yī)藥研究院附屬醫(yī)院，天津 300120；2.天津中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院，天津 300193；3.國(guó)家中醫(yī)藥管理局推拿手法生物效應(yīng)三級(jí)實(shí)驗(yàn)室，天津 300193）

慢性疲勞綜合征作為一種臨床常見(jiàn)疾病，患者常表現(xiàn)出不可名狀的心理與生理性疲勞。除疲勞的主要癥狀外，患者還伴隨有記憶力下降或注意力不集中、咽喉腫痛、淋巴結(jié)大、肌肉酸痛、無(wú)紅腫的多關(guān)節(jié)疼痛、其他形式的頭痛、不能解乏的睡眠等。該病多發(fā)生于35～50歲之間的上班族，且女性發(fā)病率高于男性，給患者及家庭帶來(lái)了巨大的危害，學(xué)界一直在尋求有效的治療方案。近年來(lái)，中醫(yī)藥在該病的治療上取得了一定進(jìn)展，特別是推拿療法的干預(yù)，使得患者的疾病得到了緩解與恢復(fù)。但限于其發(fā)病機(jī)制尚未明確，無(wú)法從病理實(shí)質(zhì)上闡釋其作用途徑與干預(yù)機(jī)制；加之，CFS在臨床上尚無(wú)特異性檢測(cè)方法及診斷指標(biāo)，其診斷主要依賴于醫(yī)生對(duì)于患者臨床表現(xiàn)的判斷[1]。因此，建立CFS動(dòng)物模型，探究其相關(guān)標(biāo)志物的特異性檢測(cè)能夠?yàn)榕R床上針對(duì)CFS研究提供基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)及技術(shù)支撐[2]。

目前，多數(shù)學(xué)者認(rèn)為慢性疲勞綜合征的發(fā)生是機(jī)體面對(duì)應(yīng)激時(shí)產(chǎn)生的慢性反應(yīng)。應(yīng)激作為一種非特異性全身反應(yīng)，在機(jī)體遇到各種緊張性刺激物時(shí)所產(chǎn)生的交感神經(jīng)-腎上腺髓質(zhì)和下丘腦-垂體-腎上腺皮質(zhì)系統(tǒng)興奮反應(yīng)的一種生理和心理反應(yīng)。適度的應(yīng)激能夠提高機(jī)體對(duì)于外界刺激的適應(yīng)能力，維持細(xì)胞內(nèi)外環(huán)境穩(wěn)態(tài)；而過(guò)度的應(yīng)激則會(huì)產(chǎn)生負(fù)面效應(yīng)，引起人體的應(yīng)激性相關(guān)疾病，CFS正屬于此列[3]。因此，基于以上考慮，學(xué)界逐漸在探索通過(guò)慢性應(yīng)激刺激法來(lái)使得實(shí)驗(yàn)動(dòng)物產(chǎn)生一定的CFS疾病特征，達(dá)到建立CFS動(dòng)物模型的目的。

CFS動(dòng)物模型主要分為單一和復(fù)合應(yīng)激模型兩種類型，兩種應(yīng)激模型的區(qū)別在于應(yīng)激的手段、刺激頻次、種類各有不同，但主要均通過(guò)建立孤獨(dú)、挫敗、恐懼環(huán)境及禁食水等多種模式、多種形式來(lái)建立動(dòng)物心理及生理應(yīng)激模型。研究過(guò)程中，可以根據(jù)實(shí)驗(yàn)所需的動(dòng)物選用不同應(yīng)激反應(yīng)類型以建立相應(yīng)的動(dòng)物模型[4]。這樣能夠更好地建立動(dòng)物模型，了解各種干預(yù)手段，特別是中醫(yī)藥手段干預(yù)的效應(yīng)途徑，為臨床與科學(xué)研究提供支持。

1 生理疲勞為主造模

1.1 游泳法

游泳法是最常用的疲勞造模方法，其具有易操作、可重復(fù)等優(yōu)勢(shì)，得到許多學(xué)者的認(rèn)可。其中，短時(shí)間冷水游泳法為達(dá)到軀體疲勞的刺激，將大鼠每日隨機(jī)時(shí)間在10℃的冷水中進(jìn)行游泳運(yùn)動(dòng)，每次6～10min，通過(guò)體力消耗刺激、寒冷刺激、強(qiáng)制性精神刺激等多種應(yīng)急因素對(duì)大鼠進(jìn)行應(yīng)激性刺激[5]；同時(shí)，為避免大鼠在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中對(duì)特定時(shí)間、頻率、強(qiáng)度的應(yīng)激刺激產(chǎn)生適應(yīng)性反應(yīng)，實(shí)驗(yàn)在每天的隨機(jī)時(shí)間開(kāi)始，并隨機(jī)改變?cè)炷r(shí)間。長(zhǎng)時(shí)間常溫游泳法主要為強(qiáng)迫大鼠游泳1次/日、25min/次、水溫22±2℃，連續(xù)游泳28天[6]；也有方法是讓大鼠一直在4℃的冷水中游泳30min[7]，將寒冷刺激及力竭游泳刺激強(qiáng)度均大大提高，但同時(shí)由于大鼠長(zhǎng)期處于低溫環(huán)境和體力不支的狀態(tài)下，增加了動(dòng)物造模的死亡率。上述造模實(shí)驗(yàn)的時(shí)間不一，大致在7～21天不等。國(guó)外部分研究[8-10]建立了短時(shí)間常溫游泳法：強(qiáng)制大鼠在水池（25cm×12cm×25cm）中游泳6min，水深15cm，水溫22±3℃，連續(xù)7天進(jìn)行大鼠游泳造模。大鼠在下水初期體力充沛，隨著游泳時(shí)間的增加，體力降低，會(huì)在水面漂浮，即四肢無(wú)游泳動(dòng)作，頭部浮出水面。實(shí)驗(yàn)人員在記錄大鼠游泳期間出現(xiàn)不游動(dòng)的總時(shí)間，來(lái)判斷疲勞造模是否成功。大鼠在水下不動(dòng)時(shí)間的狀態(tài)被認(rèn)為與CFS特征相似。另外，還有負(fù)重力竭游泳：通過(guò)進(jìn)行慢性負(fù)重力竭游泳法建立CFS大鼠模型：強(qiáng)制大鼠在水桶（深50cm）內(nèi)進(jìn)行其體質(zhì)量5%的負(fù)重力竭游泳實(shí)驗(yàn)，水溫30±2℃，1次/日，共游泳21天[11]。實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，當(dāng)大鼠由于疲勞而不做游泳運(yùn)動(dòng)時(shí)，用木棍驅(qū)使其繼續(xù)游泳，直至大鼠游泳動(dòng)作明顯不協(xié)調(diào)，且沉入水下10s而不能上浮作為達(dá)到力竭的標(biāo)準(zhǔn)。

近年來(lái)，針對(duì)CFS造模的方法多采用強(qiáng)制冷水游泳，其中包含了溫度、體力、精神等方面的刺激源。由于引起慢性疲勞的因素并非單一方面的生理因素，同時(shí)包括心理疲勞等也在起作用。因此，強(qiáng)制冷水游泳法不僅在軀體因素上進(jìn)行體能消耗的刺激，也在強(qiáng)迫游泳活動(dòng)中對(duì)動(dòng)物施加了心理刺激。祖國(guó)醫(yī)學(xué)認(rèn)為，過(guò)勞是引起疲勞的一個(gè)重要原因。強(qiáng)迫游泳造模法正是應(yīng)用這一醫(yī)學(xué)理論，通過(guò)對(duì)大鼠施加長(zhǎng)達(dá)數(shù)天的強(qiáng)制游泳運(yùn)動(dòng)，消耗大鼠體力，引起其四肢的倦怠、筋骨疲累。由于四肢過(guò)勞倦怠會(huì)影響大鼠脾胃消化功能，引起動(dòng)物納食減弱，氣血生化減少，大鼠機(jī)能下降又進(jìn)一步引起疲勞。而強(qiáng)制冷水刺激作為一種有害的精神刺激因素，既可引起動(dòng)物的七情變動(dòng)，也會(huì)引起運(yùn)動(dòng)疲勞，后文提到的跑臺(tái)同樣也是久行所傷。因此，強(qiáng)制冷水游泳法誘導(dǎo)的CFS模型能夠更加趨向于真實(shí)情況下引起的慢性疲勞。

1.2 跑臺(tái)法

跑臺(tái)法是一種運(yùn)動(dòng)性疲勞造模法。史麗萍等[12]創(chuàng)建了一種造模法，具體方法為：將實(shí)驗(yàn)動(dòng)物適應(yīng)性飼養(yǎng)1周，正式實(shí)驗(yàn)2天前，各小鼠每天進(jìn)行5～10min的跑臺(tái)訓(xùn)練，速度為0.17m/s，以熟悉跑臺(tái)。正式實(shí)驗(yàn)開(kāi)始，各組動(dòng)物跑臺(tái)速度均為0.37m/s，過(guò)程中不斷采用聲觸刺激，建立小鼠力竭性運(yùn)動(dòng)疲勞模型。

2 心理疲勞為主造模

2.1 單因素刺激

2.1.1 慢性束縛 對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物進(jìn)行慢性應(yīng)激性束縛實(shí)驗(yàn)是一種非常經(jīng)典且可操作性極強(qiáng)的應(yīng)激造模方法[13]，也是建立疲勞型亞健康大鼠模型的常用造模方法，其操作簡(jiǎn)單，對(duì)于實(shí)驗(yàn)室的儀器要求低，可重復(fù)性強(qiáng)，可以高度模擬臨床慢性疲勞綜合征和疲勞型亞健康特征。該方法的主要原理主要是利用嚙齒類動(dòng)物喜愛(ài)鉆洞的習(xí)性，將動(dòng)物束縛在狹小空間內(nèi)，并限制其活動(dòng)，保證其正常呼吸。也有研究報(bào)道[14]，為避免實(shí)驗(yàn)動(dòng)物在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中對(duì)實(shí)驗(yàn)規(guī)律產(chǎn)生適應(yīng)性反應(yīng)，因此每天的造模實(shí)驗(yàn)時(shí)間可不固定，可在此實(shí)驗(yàn)后每3天逐漸增加束縛時(shí)間，分別為1h、1.5h、2h、2.5h。慢性束縛實(shí)驗(yàn)主要通過(guò)限制動(dòng)物軀體活動(dòng)及逐漸增加的應(yīng)激強(qiáng)度，使動(dòng)物產(chǎn)生煩躁、掙扎、憤怒、絕望等一系列負(fù)性情緒，導(dǎo)致大鼠軀體及精神疲勞的發(fā)生，高度模擬CFS發(fā)病的社會(huì)心理因素。通過(guò)慢性束縛實(shí)驗(yàn)，動(dòng)物大腦中海馬結(jié)構(gòu)的氨基酸遞質(zhì)的含量發(fā)生改變，導(dǎo)致中樞抑制占據(jù)優(yōu)勢(shì)地位，引起動(dòng)物的疲勞、記憶力下降、抑郁[15]。亦有其他學(xué)者對(duì)束縛工具、時(shí)間等進(jìn)行了一些改良，如隨機(jī)選擇束縛實(shí)驗(yàn)開(kāi)始時(shí)間、自制玻璃材質(zhì)的束縛管（束縛過(guò)程中不會(huì)產(chǎn)生額外的軀體傷害），以便更好地模擬產(chǎn)生心理疲勞效果[16-17]。

2.1.2 電刺激法 目前，除了慢性束縛，應(yīng)用較多的是通過(guò)電刺激建立應(yīng)激性疲勞狀態(tài)模型，主要包括正常狀態(tài)下電脈沖刺激和進(jìn)食過(guò)程中給予電刺激兩種方法。有研究[18]給予大鼠波寬2ms的電脈沖，刺激電流強(qiáng)度為1mA，每天刺激15次，每次間隔20s。電刺激足底法：張俊慧等[19]通過(guò)將鹽水浸濕動(dòng)物足底關(guān)節(jié)并固定電療帶，連接電針，頻率10Hz，強(qiáng)度1.5V，每次刺激10min，每天2次，共2周。進(jìn)食電刺激法：主要是在大鼠進(jìn)食時(shí)，使用電路板電刺激[20]。

2.1.3 夾尾刺激法 夾尾應(yīng)激法是通過(guò)對(duì)雄鼠進(jìn)行激怒刺激，造成其心理疲勞，具體操作方法為：每日下午用包裹紗布的止血鉗夾住大鼠尾部，刺激其與其他大鼠進(jìn)行廝打，用以模仿人類在競(jìng)爭(zhēng)壓力的社會(huì)環(huán)境下的應(yīng)激狀態(tài)。該刺激每次持續(xù)刺激2h，連續(xù)刺激21天[7]。實(shí)驗(yàn)時(shí)應(yīng)避免尾部出現(xiàn)傷口、出血現(xiàn)象。

2.1.4 其他 除上述方法外，還有睡眠剝奪法：實(shí)驗(yàn)動(dòng)物每日進(jìn)行睡眠剝奪20h，持續(xù)13天[21]。腎上腺皮質(zhì)激素應(yīng)用-停藥法[22-24]：用醋酸氫化可的松注射液予以大鼠肌內(nèi)注射，起始劑量為24.4～62.5mg/kg，用藥期為3～14天，停藥期為3～13天；或醋酸可的松注射液肌內(nèi)注射，劑量為13.9～27.8mg/kg，用藥期為7～17天，停藥期為2～7天；以及懸吊法等造模方法，但相對(duì)應(yīng)用較少。

2.2 復(fù)合因素刺激

韓娟[25]通過(guò)旋轉(zhuǎn)、限制、擁擠三種方法對(duì)大鼠進(jìn)行刺激模擬心理應(yīng)激。旋轉(zhuǎn)實(shí)驗(yàn)：將老式唱片機(jī)調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)速至45次/min，每日隨機(jī)選擇開(kāi)始時(shí)間給予大鼠旋轉(zhuǎn)刺激，為避免動(dòng)物發(fā)生適應(yīng)性反應(yīng)，將實(shí)驗(yàn)次數(shù)設(shè)定為第1周1次/天，第2周2次/天，第3周1次/天，15min/次。限制實(shí)驗(yàn)：將模型組大鼠放入狹小空間，使得大鼠活動(dòng)受限（大鼠不能轉(zhuǎn)身），又要保證大鼠不能受到擠壓，實(shí)驗(yàn)環(huán)境昏暗，每晚一次，第1周60min/次，第2周120min/次，第3周180min/次。擁擠實(shí)驗(yàn)：主要是將倍數(shù)的大鼠關(guān)入標(biāo)準(zhǔn)大鼠籠，造成擁擠應(yīng)激。

3 身心疲勞造模（多重應(yīng)激因素）

3.1 力竭游泳+剝奪睡眠

趙麗[26]采用睡眠剝奪聯(lián)合力竭游泳法建立慢性疲勞大鼠模型，以造成模型大鼠的心理與生理疲勞。睡眠剝奪時(shí)間為20h：實(shí)驗(yàn)于每日固定時(shí)間將動(dòng)物置于盒子內(nèi)，并向內(nèi)注入清水，剛沒(méi)過(guò)大鼠四肢（高2cm）。使大鼠能夠自由進(jìn)食飲水，但卻無(wú)法入睡，于次日將動(dòng)物放入塑料游泳池（水深50cm）25±1℃進(jìn)行一次力竭游泳實(shí)驗(yàn)，頭部沒(méi)入水中10s而未見(jiàn)浮出水面視為力竭，期間保證動(dòng)物不被溺死，此聯(lián)合刺激持續(xù)3周。

3.2 冷水游泳+束縛應(yīng)激

張文靜[27]采取冷水游泳聯(lián)合軀體束縛建立大鼠應(yīng)激模型，每日上午將大鼠置于自制的水桶（高90cm、直徑60cm）內(nèi)進(jìn)行強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)，水深40～45cm，溫度15±2℃，觀察大鼠，當(dāng)動(dòng)物出現(xiàn)力竭而沉入水中時(shí)及時(shí)救出；下午進(jìn)行大鼠軀體束縛實(shí)驗(yàn)，將大鼠放入自制的束縛筒內(nèi)，束縛時(shí)間1h，上述兩種應(yīng)激實(shí)驗(yàn)連續(xù)進(jìn)行21天。楊啟昭[28]則采用單日進(jìn)行束縛實(shí)驗(yàn)，雙日進(jìn)行冷水游泳實(shí)驗(yàn)，兩種刺激持續(xù)交替進(jìn)行14天，與上述研究略有區(qū)分。

3.3 冷水游泳+夾尾

陳傳偉[29]通過(guò)強(qiáng)迫冷水游泳聯(lián)合夾尾巴共同刺激建立動(dòng)物疲勞模型。開(kāi)始造模后,模型組大鼠在單數(shù)日期進(jìn)行冷水有用實(shí)驗(yàn)，雙數(shù)日期進(jìn)行夾尾實(shí)驗(yàn)（每次3min），每日進(jìn)行軀體束縛實(shí)驗(yàn)（束縛時(shí)間為20min），連續(xù)21天給予上述刺激。

3.4 束縛+力竭游泳+夾尾刺激

王娜娜[30]、葉雙雙[31]等的方法是將大鼠置于束縛筒中，每3天增加束縛時(shí)間，連續(xù)束縛21天。在束縛實(shí)驗(yàn)期間交替聯(lián)合給予力竭游泳實(shí)驗(yàn)和夾尾實(shí)驗(yàn)進(jìn)行刺激，單日采用夾尾激惹刺激，夾尾實(shí)驗(yàn)的具體操作方法為：用夾子夾住大鼠尾部距離根部1～2cm的位置，以大鼠耐受且不脫落為標(biāo)準(zhǔn)。雙日采用力竭游泳，將大鼠置于游泳池（深45cm）內(nèi)，溫度20±2℃，實(shí)驗(yàn)過(guò)程中記錄大鼠自游泳開(kāi)始至力竭狀態(tài)的時(shí)間，力竭以大鼠頭部下沉至水面下3s且未能自主回到水面且游泳動(dòng)作異常為標(biāo)準(zhǔn)，每日實(shí)驗(yàn)的時(shí)間均不同。

3.5 睡眠紊亂+力竭游泳+慢性束縛刺激

金小千[32]采用睡眠剝奪、力竭游泳聯(lián)合軀體束縛實(shí)驗(yàn)建立大鼠CFS模型。睡眠剝奪實(shí)驗(yàn)每日進(jìn)行20h，于每日中午12:00開(kāi)始。首先將飼養(yǎng)籠中的墊料清除，然后將籠內(nèi)注入清水，水深以剛沒(méi)過(guò)大鼠頭部與四肢為標(biāo)準(zhǔn)，使大鼠無(wú)法進(jìn)行正常睡眠，次日早8:00將大鼠取出。然后進(jìn)行大鼠負(fù)重游泳實(shí)驗(yàn)，負(fù)重重量為大鼠體質(zhì)量的5%，游泳環(huán)境水深35cm、水溫21℃，5%負(fù)重游泳10天后，更換10%負(fù)重游泳，每次游泳時(shí)間20～25min，發(fā)現(xiàn)大鼠力竭后將大鼠救出。之后再繼續(xù)使用束縛袋進(jìn)行軀體束縛實(shí)驗(yàn)，使用鐵絲將袋口扎緊，靜置與實(shí)驗(yàn)室地面2h，連續(xù)進(jìn)行21天。

3.6 束縛+睡眠紊亂+擁擠+跑臺(tái)

張楊[33]通過(guò)聯(lián)合軀體束縛、睡眠紊亂、環(huán)境擁擠、跑臺(tái)運(yùn)動(dòng)等多因素應(yīng)激源構(gòu)建大鼠CFS模型。每日上午11點(diǎn)，強(qiáng)制大鼠進(jìn)行炮臺(tái)運(yùn)動(dòng)，速度為20m/min，運(yùn)動(dòng)時(shí)間為1h；下午2點(diǎn)，將大鼠置于自制束縛筒，造成大鼠活動(dòng)受限2h。大鼠進(jìn)行束縛實(shí)驗(yàn)及強(qiáng)制運(yùn)動(dòng)實(shí)驗(yàn)的3h外，其余時(shí)間均飼養(yǎng)在35cm×25cm×15cm的擁擠飼養(yǎng)箱環(huán)境中，并接受定時(shí)噪音刺激。

3.7 束縛+跑臺(tái)+懸吊+游泳

尹喜玲的[14]CFS建模方法造模時(shí)間共12天。束縛聯(lián)合跑臺(tái)組：大鼠上午進(jìn)行束縛刺激實(shí)驗(yàn)，下午進(jìn)行跑臺(tái)刺激訓(xùn)練。為避免大鼠適應(yīng)刺激，每3天增強(qiáng)1次實(shí)驗(yàn)時(shí)間。跑臺(tái)實(shí)驗(yàn)則先進(jìn)行適應(yīng)性訓(xùn)練后，逐漸加入跑臺(tái)力竭性訓(xùn)練，依次遞增跑速，直至大鼠力竭。懸吊游泳組：大鼠上午進(jìn)行懸吊實(shí)驗(yàn)，下午進(jìn)行負(fù)重游泳實(shí)驗(yàn)，連續(xù)12天。懸吊刺激實(shí)驗(yàn)每3天加時(shí)1次，時(shí)間分別為1、1.5、2、2.5h。正式游泳實(shí)驗(yàn)的前3天進(jìn)行適應(yīng)性訓(xùn)練，游泳時(shí)間為30min，負(fù)重小鼠體質(zhì)量的3%。

3.8 多種應(yīng)激隨機(jī)組合

高春風(fēng)[34]采用多刺激源聯(lián)合隨機(jī)組合建立應(yīng)激疲勞模型，首先每天進(jìn)行一次5%的負(fù)重力竭游泳實(shí)驗(yàn)，然后采用隨機(jī)選取的多刺激因素方式進(jìn)行刺激：包括禁食12h，禁水12h，光源干擾，夾尾1min，110dB超聲刺激持續(xù)1h，1mA、30V足底電擊5次，每隔1min刺激1次，30s/次。上述刺激源每天隨機(jī)選取兩種進(jìn)行動(dòng)物造模，防止老鼠適應(yīng)性反應(yīng)。同時(shí)Farhan H等[35]也采用多因素聯(lián)合刺激方法建立模型，使動(dòng)物無(wú)法適應(yīng)未來(lái)的刺激實(shí)驗(yàn)，避免適應(yīng)性反應(yīng)造成的實(shí)驗(yàn)影響，具體實(shí)驗(yàn)方法為：連續(xù)10天給予大鼠不可預(yù)知的慢性溫和性刺激，期間在實(shí)驗(yàn)的第1天、第6天將大鼠置于4℃的房間中50min，第2天、第7天將飼養(yǎng)籠傾斜并顛簸60min，第3天、第8天限制大鼠生存空間并限制其活動(dòng)，第5天、第10天進(jìn)行晝夜節(jié)律干擾3h。

4 模型檢驗(yàn)

慢性應(yīng)激動(dòng)物模型若能夠有效、科學(xué)地代表CFS等疾病，一般應(yīng)具有下列特點(diǎn)[36]：（1）行為表現(xiàn)的高度相似性，即動(dòng)物模型在癥狀上與疾病癥狀的高度相似性；（2）造模方式所依據(jù)的理論與臨床慢性應(yīng)激障礙或慢性疲勞的病因之間具有高度相關(guān)性；（3）動(dòng)物模型的病理生理特征與臨床上接受CFS治療的患者具有高度相似性；（4）模型動(dòng)物的行為學(xué)改變能夠持續(xù)足夠長(zhǎng)的時(shí)間。由于在臨床上，CFS尚無(wú)特異性的檢測(cè)方法及特異性診斷指標(biāo)，因此對(duì)于CFS的相關(guān)研究多采用觀察動(dòng)物情緒及認(rèn)知行為變化的一系列行為學(xué)檢測(cè)方法來(lái)判斷CFS動(dòng)物模型成功與否，主要包括：鼠尾懸掛、十字迷宮及曠場(chǎng)測(cè)試等。當(dāng)機(jī)體受到慢性應(yīng)激刺激時(shí)，機(jī)體內(nèi)環(huán)境穩(wěn)態(tài)處于失衡狀態(tài)，可引起相關(guān)行為學(xué)的改變，也能夠由于應(yīng)激狀態(tài)下引起一系列血生化及神經(jīng)損害，引起大腦的器質(zhì)性損傷，進(jìn)而影響動(dòng)物的情緒及認(rèn)知功能（海馬受損會(huì)引起認(rèn)知障礙），同時(shí)導(dǎo)致機(jī)體免疫力下降，引發(fā)疾病。

在模型檢驗(yàn)方面，國(guó)內(nèi)外研究在造模后多通過(guò)動(dòng)物一般情況觀察和進(jìn)一步的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)了解動(dòng)物體力情況，學(xué)習(xí)記憶情況、探究行為及情緒反應(yīng)、糖水消耗實(shí)驗(yàn)等行為學(xué)指標(biāo)等[37-39]，來(lái)判斷動(dòng)物造模是否成功；也有通過(guò)實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)（白細(xì)胞、紅細(xì)胞、IgG、肝糖原、血清乳酸、血清尿素氮、血清CORT、ACTH）判斷者[36]。國(guó)外針對(duì)疲勞模型的檢測(cè)則更注重于一些行為學(xué)及生化指標(biāo)的改變，比如在強(qiáng)制游泳實(shí)驗(yàn)中動(dòng)物的不動(dòng)時(shí)間、活動(dòng)能力、焦慮樣表現(xiàn)（高架十字迷宮和Mirror水迷宮）等直觀的行為學(xué)改變，同時(shí)也包括血脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)、過(guò)氧化氫酶、亞硝酸酯等生化指標(biāo)變化來(lái)判斷是否成功建立了慢性應(yīng)激性疲勞模型[40]。

5 總結(jié)

應(yīng)激主要分為軀體和心理應(yīng)激兩種類型，但在真實(shí)的應(yīng)激狀態(tài)下，通常是兩種應(yīng)激類型共同作用的結(jié)果，只能將其描述為以哪一種類型的應(yīng)激為主要影響因素[41]。研究發(fā)現(xiàn)，大部分CFS單因素造模只能通過(guò)某一方面模擬慢性疲勞的狀態(tài)進(jìn)行模型的構(gòu)建。例如，單一的強(qiáng)制游泳法只能通過(guò)影響動(dòng)物體力因素達(dá)到刺激效果而建立疲勞模型；慢性束縛模型則只能通過(guò)產(chǎn)生心理應(yīng)激達(dá)到建模效果，均只能從某一方面模擬人類的疾病狀態(tài)。過(guò)度的運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練建立的疲勞模型只能從刺激軀體體力因素反映CFS的狀態(tài)，心理應(yīng)激模型則主要通過(guò)免疫體液系統(tǒng)來(lái)揭示應(yīng)激產(chǎn)生的機(jī)制[42]。

同樣地，CFS模型從刺激因素?cái)?shù)量上又可分為單因素模型和復(fù)雜因素模型兩種類型：?jiǎn)我蛩啬Ｐ秃w了強(qiáng)迫游泳、跑臺(tái)等刺激源建立軀體應(yīng)激模型，束縛、電刺激、夾尾等應(yīng)激源構(gòu)建心理應(yīng)激模型；復(fù)雜因素模型主要建立的是不規(guī)定時(shí)間、頻率的禁食、禁水、晝夜顛倒、夾尾、冰水游泳、束縛等慢性輕度不可預(yù)見(jiàn)性應(yīng)激模型。各種建模方法各有優(yōu)缺點(diǎn)，由于目前對(duì)于CFS的研究較少，且其發(fā)病機(jī)制及病理改變?nèi)晕疵鞔_，因此單一因素的動(dòng)物模型很難模擬并完美地模擬慢性應(yīng)激性疲勞的全部癥狀。近期的疲勞相關(guān)研究多采用多因素造模，通過(guò)構(gòu)建兩種或多種復(fù)雜應(yīng)激源刺激聯(lián)合對(duì)動(dòng)物進(jìn)行造模，同時(shí)兼顧了軀體應(yīng)激和心理應(yīng)激兩個(gè)因素。近年來(lái)，針對(duì)CFS的動(dòng)物模型建立方法一直在不停地靠近疾病生理病理改變機(jī)制，為對(duì)于CFS的機(jī)制研究方向及抗疲勞治療方向均提供了可靠的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。但在未來(lái)的研究中，仍需要考慮動(dòng)物模型的建立方法與疾病相關(guān)性、疾病臨床癥狀的模擬，從實(shí)驗(yàn)方法手段技術(shù)的統(tǒng)一性、規(guī)范性方面進(jìn)行深入探究。