臨床待輸血患者RhE抗原和不規(guī)則抗體的檢測及其臨床意義

呂彬

（大連市血液中心 遼寧大連 116000）

1 前言

人體的紅細胞血型在民族、地域等方面的分布方面具有顯著差異，研究、分析不同人群的血型分布，對于科學(xué)地解釋某類疾病高發(fā)的原因具有重要意義，有助于對疾病的治療和預(yù)防。當前人類的血型系統(tǒng)已達36個，而Rh系統(tǒng)是其中最為復(fù)雜的一種，其含有54種Rh血型抗原，其中，D抗原、C抗原、E抗原、c抗原、e抗原與臨床輸血之間有密切聯(lián)系，抗原陰性的患者而言，一旦接受抗原陽性人員的血液后，會出現(xiàn)一種超出ABO系統(tǒng)之外的抗體，即紅細胞不規(guī)則抗體，一旦這種抗原抗體不匹配，會導(dǎo)致患者出現(xiàn)溶血性輸血反應(yīng)[1]。另外，由于Rh系統(tǒng)存在著遺傳多態(tài)性，故不同種族和地域的人群，其Rh血型抗原的分布頻率也不同，所產(chǎn)生的不規(guī)則抗體也存在較大差異，因此為患者輸血前，必須進行相關(guān)檢測。鑒于此，本文對RhE抗原和不規(guī)則抗體的檢測的有效性進行研究，以期為相關(guān)人員提供參考。

2 資料與方法

2.1 一般資料

選取2019年2月—2020年2月，本血液中心督導(dǎo)的多家用血醫(yī)院患者血液標本共200例，采用微柱凝膠法對所有患者的RhE抗原進行檢測。其中，男性患者132例，女性患者68例；患者的年齡范圍為22～68歲，年齡均值為（44.6±3.5）歲；具有臨床免疫史患者103例，無臨床免疫史患者97例。本研究已獲我中心倫理委員會授權(quán)，所有患者的性別、年齡和免疫史等病歷資料無特異性差異（P＞0.05）。

入組標準：經(jīng)血常規(guī)、肝腎功能等檢測，均無明顯異常者；患者及其家屬均自愿參與研究，并簽署知情同意書。排除標準：并發(fā)重度認知障礙、慢性疼痛病史、嚴重的精神疾病者；入組前已存在高血壓的患者；對此次研究涉及藥物過敏者；有長期服用鎮(zhèn)痛藥物史者；并發(fā)腎、心、肝等功能嚴重異常者；并發(fā)惡性腫瘤者；尚處于妊娠期與哺乳期中的女性患者。

2.2 儀器與方法

FYQ免疫微柱孵育器；TD-A型血型血清學(xué)離心機；血型檢測卡；抗人球蛋白檢測卡；血型反定型試劑盒；不規(guī)則抗體試劑；低離子強度鹽溶液；紅細胞血型抗體鑒定細胞。所有試劑均需要在有效期內(nèi)使用。

對標本ABO、RhD、RhE血型進行檢測：對患者的靜脈血液進行采集，將血樣添加至含EDTA抗凝劑的試管；將采集得到的標本配制成0.8%的紅細胞生理鹽水懸液；參照ABODE血型檢測卡（即微柱凝膠）的說明書進行操作；應(yīng)用專用型離心機，以900 r/min離心2 min，再以1 500 r/min離心3 min，肉眼判定其結(jié)果。

若紅細胞與抗體間相結(jié)合在微柱凝膠中生成的特異性抗原抗體復(fù)合物，其浮于凝膠的表面或是其中即為陽性反應(yīng)，由此說明了，在受檢者的紅細胞表面具有相應(yīng)的抗原；對于受檢者的紅細胞沒有與抗體間相結(jié)合，不具有特異性抗原抗體復(fù)合物生成，游離的紅細胞逐步沉至微柱凝膠的底部即為陰性反應(yīng)，由此說明了，在受檢者的紅細胞表面不具有相應(yīng)的抗原。

對標本進行不規(guī)則抗體篩查：采集患者的靜脈血，并將其置于不具有抗凝劑的試管中；37℃條件下靜置2 h，以2 000 r/min離心10 min，獲得上清液；用低離子強度鹽溶液（LISS），將1～3號的O型篩選出紅細胞，并配制成0.8%的懸液；對抗人球蛋白檢測卡（即不規(guī)則抗體篩檢）的微管進行標記，參照試劑卡相關(guān)的說明書進行操作；將試劑卡置于37℃條件下，進行15 min的孵育；立即應(yīng)用專用型離心機，以900 r/min離心2 min，再以1 500 r/min離心3 min，肉眼判定其結(jié)果，結(jié)果判定方法同上。若1～3號管都呈現(xiàn)出陰性，表明在受檢者的血清中不具有該標準O型篩選紅細胞抗原特異性的免疫球蛋白G（IgG）類不完全抗體；若1～3號管，具有1管或超出1管呈現(xiàn)出陽性，表明在受檢者的血清中具有該標準O型篩選紅細胞抗原特異性的IgG類不完全抗體。

對不規(guī)則抗體進行鑒定：在檢出不規(guī)則抗體呈現(xiàn)出陽性的標本后，需要應(yīng)用1～10號譜細胞進行微柱凝膠法抗體特異性鑒定。應(yīng)用微柱凝膠抗球蛋白技術(shù)，將其依次與由10人份的O型紅細胞所構(gòu)成的譜紅細胞與自身紅細胞（均為0.8%的低離子懸液）間進行反應(yīng)。與譜紅細胞中的1份或多份進行凝集，與自身紅細胞中的不凝集即為抗體陽性，并參照與譜紅細胞的反應(yīng)格局，判定抗體的特異性。對于與自身紅細胞凝集的，需要應(yīng)用巰基試劑（2-ME）以排除自身的冷凝集素。

2.3 觀察指標

RhE抗原檢測結(jié)果：觀察所有患者的RhE抗原檢測情況，判斷其陰性率和陽性率；不規(guī)則抗體篩查結(jié)果：觀察所有患者的不規(guī)則抗體篩查情況，觀察其具體的抗體類型。

2.4 統(tǒng)計學(xué)處理

采用SPSS22.0軟件對所有數(shù)據(jù)進行分析，計數(shù)數(shù)據(jù)表示為“[例（%）]”表示，以χ2對數(shù)據(jù)差異實施檢驗；計量數(shù)據(jù)表示為（±s），對數(shù)據(jù)差異實施t檢驗，P＜0.05，表明數(shù)據(jù)具有統(tǒng)計意義。

3 結(jié)果

3.1 RhE抗原檢測結(jié)果

RhE抗原檢測的結(jié)果表明，RhE抗原的陽性率為51.0%、RhE抗原的陰性率為49.0%，數(shù)據(jù)對比不存在特異性差異（P>0.05），詳見表1。

表1 RhE抗原檢測結(jié)果（%，n）

3.2 不規(guī)則抗體篩查結(jié)果

不規(guī)則抗體篩查的結(jié)果表明，不規(guī)則抗體共8例，占比4.0%。其中，抗-E體占3.5%，其余抗體占0.5%，數(shù)據(jù)對比存在明顯差異（P<0.05），詳見表2。

表2 不規(guī)則抗體篩查結(jié)果（%，n）

4 討論

紅細胞血型不規(guī)則抗體一般都是由人類紅細胞作為抗原對刺激同族免疫而產(chǎn)生作用的[2]，一旦輸入血型不合的血液，就會進一步對機體造成刺激而出現(xiàn)抗體，特別是對于存在輸血史的患者而言，能夠?qū)χ盁o法檢出的抗體來進行激活。近年來的研究表明[3]，紅細胞異源免疫是臨床輸血患者的一種常見并發(fā)癥，是臨床上紅細胞不規(guī)則抗體所導(dǎo)致的一種溶血性輸血反應(yīng)，同時也是輸血死亡的一大重要因素[4]。在非傳染輸血性反應(yīng)中，遲發(fā)型的血清反應(yīng)是3種溶血性輸血反應(yīng)中最為重要的一種。在紅細胞規(guī)則抗體中，Rh系統(tǒng)抗體是由免疫系統(tǒng)刺激產(chǎn)生的，其中抗-E抗體是近年來最為常見的一種抗體。

我國臨床輸血技術(shù)規(guī)范只要求對患者的ABO血型和RhD抗原進行檢測，而對于RhE抗原并沒有特殊性的要求[5]。由于我國人群的RhE陰性率比較高，且明顯高于RhD陰性率，若在輸血前沒有做好相應(yīng)的預(yù)防措施，易出現(xiàn)同種免疫，一旦產(chǎn)生不規(guī)則抗體，會導(dǎo)致臨床上難以配血，甚至造成十分嚴重的后果[6]。對具有輸血史、妊娠史的患者而言，需要對其就同種抗體進行篩查、鑒定，在具備相應(yīng)條件后，才能夠?qū)υ擃惢颊邞?yīng)用RhE等Rh系統(tǒng)進行抗原同型輸注，以減少機體生成Rh系統(tǒng)同種抗體的機率[7]。

產(chǎn)生不規(guī)則抗體的原因多是輸血、妊娠所生成的紅細胞同種免疫[8]。由于妊娠會生成免疫應(yīng)答，故女性生成不規(guī)則抗體、發(fā)生溶血反應(yīng)的機率相較于男性更高[9]。在臨床中，需要尤其關(guān)注待輸血的女性患者，對非RhD抗原引發(fā)的同種免疫反應(yīng)，需要給予更多的關(guān)注。在法國，需要對獻血者、受血者均進行ABO、Rh、Kell系統(tǒng)表現(xiàn)型常規(guī)鑒定，并規(guī)定對年齡低于50周歲的女性輸血患者需要實現(xiàn)Rh、Kell系統(tǒng)間的相匹配（其中，包括RhC、RhE、Rhc、Rhe、K抗原），以防止生成不規(guī)則抗體[10]。近幾年，紅細胞同種異源免疫問題已在發(fā)達國家獲得較高的關(guān)注，部分研究人員提出，在進行輸血以前表現(xiàn)型的擴展性匹配（EM），即把僅ABO、RhD同型匹配擴展至RhC、RhE、Rhc、Rhe、K、Fya、Jka、S等相關(guān)抗原的匹配，可以避免不規(guī)則抗體的生成及其負面作用，但是，該類十分精準地匹配需要以較大規(guī)模的血清學(xué)篩查基因分型為前提，使找出最為合適供血者的工作更加復(fù)雜，故現(xiàn)階段，該類表現(xiàn)型匹配在國外只被應(yīng)用于特定的患者群體，例如，鐮狀細胞性貧血患者、β-地中海貧血的患者等[11]。

在我國，給予不規(guī)則抗-E抗體具有的多發(fā)性，與白種人群預(yù)防抗-D抗體間相似，應(yīng)做到在輸血前對患者、獻血者進行RhE抗原檢測，以對兩者的RhE抗原進行更為準確地分型，并促進ABO、RhD、RhE之間的匹配性輸血得以實現(xiàn)[12]。唯有如此，才能夠在源頭上降低不規(guī)則抗-E抗體的總陽性率，以防生成抗-E抗體對患者再次輸血造成困難，保障臨床輸血的安全性[13]。

本文采用微柱凝膠法對RhE抗原進行檢測，并予以不規(guī)則抗體檢測，結(jié)果顯示，，RhE抗原的陽性率為51.0%（102/200），RhE抗原的陰性率為49.0%（98/200）；不規(guī)則抗體共8例，占比4.0%，中抗-E體7例，占比3.5%，其余抗體1例，占比0.5%，數(shù)據(jù)對比存在明顯差異（P<0.05）。

綜上所述，在臨床待輸血患者中，最常出現(xiàn)的不規(guī)則抗體為抗-E體，而對其予以RhE抗原檢測，并做好血型同型匹配輸血，能夠有效避免患者出現(xiàn)抗-E體，有助于保證臨床輸血的安全性。