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    藏黨參提取物對(duì)酵母膏聯(lián)合氧嗪酸鉀致高尿酸血癥小鼠的保護(hù)作用研究*

    2022-11-11 06:00:02袁瑞瑛王敏竹范成德卓瑪東智王聚樂
    中醫(yī)藥導(dǎo)報(bào) 2022年10期
    關(guān)鍵詞:別嘌醇黨參尿酸

    袁瑞瑛,普 珍,王敏竹,范成德,李 斌,卓瑪東智,王聚樂

    (1.西藏大學(xué),西藏 拉薩 850012;2.武漢大學(xué),湖北 武漢 430072;3.青島科技大學(xué),山東 青島 266042)

    人體嘌呤代謝失調(diào)導(dǎo)致尿酸過量生成,或由于尿酸排泄受到抑制,可引起血清尿酸含量急劇升高。當(dāng)男性血尿酸濃度超過417 μmol/L,女性超過357 μmol/L時(shí),則被認(rèn)定為高尿酸血癥(hyperuricemia,HUA)[1]。流行病學(xué)研究表明,HUA發(fā)病率逐年上升,并伴隨糖尿病、高脂血癥、原發(fā)性高血壓及心血管疾病等慢性疾病的發(fā)生,已成為嚴(yán)重危害社會(huì)居民健康的代謝性疾病之一[2-4]。目前,治療HUA的藥物多為西藥,如別嘌醇、丙磺舒和苯溴馬隆,但長(zhǎng)期服用副作用較大,血尿酸水平易反彈,甚至損傷肝臟、腎臟等器官[5-6]。近年來,傳統(tǒng)藥物因藥效溫和、多成分、多靶點(diǎn)、多途徑作用等特點(diǎn),廣泛受到國(guó)內(nèi)外學(xué)者的重視,已成為開發(fā)治療HUA新藥的主要來源之一[7]。

    藏黨參為桔梗科植物長(zhǎng)花黨參[Codonopsis thalictrifolia Wall.var.mollis(Chipp.)L.T.Shen]的全草,藏藥名為羅堆多吉、魯堆多吉。藏黨參生長(zhǎng)于我國(guó)西藏南部及中部,具有干黃水、消腫之功效,在當(dāng)?shù)爻S糜谥委燂L(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、神經(jīng)痛、神經(jīng)麻痹等病癥[8-11]。孫杰等[12]研究發(fā)現(xiàn),在體外實(shí)驗(yàn)中藏黨參提取物及其單體成分均有抑制黃嘌呤氧化酶(XOD)的作用,并表現(xiàn)出良好的量效關(guān)系,表明藏黨參具有降血尿酸的作用,其機(jī)制可能為抑制嘌呤核苷酸代謝。然而,目前筆者未見有關(guān)于藏黨參體內(nèi)抗高尿酸的研究,因此本實(shí)驗(yàn)通過建立酵母膏聯(lián)合氧嗪酸鉀誘導(dǎo)的高尿酸血癥小鼠模型,進(jìn)一步評(píng)估藏黨參提取物的降尿酸作用。

    1 材料與方法

    1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物4周齡SPF級(jí)雄性昆明種小鼠60只,體質(zhì)量18~20 g,購(gòu)于湖北省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究中心,動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào):SCXK(鄂)2015-0018,飼養(yǎng)于武漢大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心,動(dòng)物使用許可證號(hào):SYXK(鄂)2019-0013。將小鼠飼養(yǎng)于清潔級(jí)動(dòng)物房,室溫控制在(22±2)℃,相對(duì)濕度為50%~70%,12 h/12 h光照晝夜循環(huán),所有小鼠均自由攝食與飲水。適應(yīng)性喂養(yǎng)1周,觀察小鼠身體狀況良好,行為正常。所有動(dòng)物實(shí)驗(yàn)操作均符合國(guó)家《實(shí)驗(yàn)動(dòng)物管理?xiàng)l例》,并經(jīng)武漢大學(xué)醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物管理與使用委員會(huì)批準(zhǔn)。

    1.2 藥物與試劑 藏黨參采集于西藏林芝地區(qū),經(jīng)西藏大學(xué)王聚樂教授鑒定為正品。將干燥的藏黨參地上部分進(jìn)行粉碎,與70%乙醇按質(zhì)量比1∶20混合后加熱至微沸,回流提取2 h,過濾;濾渣與70%乙醇按照相同比例繼續(xù)提取2 h。合并兩次濾液,減壓濃縮至浸膏,置于烘箱中烘干至粉末,得率為19.5%,用蒸餾水溶解,得不同濃度的藏黨參提取物。

    氧嗪酸鉀(批號(hào):20190427,純度≥98%)購(gòu)于合肥博美生物科技有限責(zé)任公司;別嘌醇片(批號(hào):20190101)購(gòu)于廣東彼迪藥業(yè)有限公司;酵母膏(批號(hào):20190318,純度≥98%)購(gòu)于北京奧博星生物技術(shù)責(zé)任有限公司;尿酸檢測(cè)試劑盒(UA)(批號(hào):20191023)、肌酐檢測(cè)試劑盒(Cr)(批號(hào):20191023)、尿素氮檢測(cè)試劑盒(UN)(批號(hào):20191023)、黃嘌呤氧化酶檢測(cè)試劑盒(XOD)(批號(hào):20191117)、谷草轉(zhuǎn)氨酶檢測(cè)試劑盒(AST)(批號(hào):20191117)、谷丙轉(zhuǎn)氨酶檢測(cè)試劑盒(ALT)(批號(hào):20191117)均購(gòu)于南京建成生物工程研究所;Bradford蛋白濃度測(cè)定試劑盒(批號(hào):20210609)、RIPA裂解液(批號(hào):20200917)均購(gòu)于北京索萊寶生物科技有限公司;葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白9兔單克隆抗體(GLUT9)(批號(hào):GR3189763-16)購(gòu)于美國(guó)Abcam公司;有機(jī)陰離子轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白3小鼠單克隆抗體(OAT3)(批號(hào):A0719)購(gòu)于美國(guó)Santa Cruz公司;尿酸鹽轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白1兔單克隆抗體(URAT1)(批號(hào):16i9411)、有機(jī)陰離子轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白1兔單克隆抗體(OAT1)(批號(hào):DF8582)、辣根過氧化物酶標(biāo)記的山羊抗小鼠IgG二抗(批號(hào):4358j982)、山羊抗兔IgG二抗(批號(hào):7573s21)均購(gòu)于美國(guó)Affinity公司;其余試劑均為分析純。

    1.3 主要儀器AS110R2型分析天平(波蘭Radwag公司);ELX800型多功能酶標(biāo)儀(美國(guó)Bio-Tek公司);Mini P-4型小型垂直電泳系統(tǒng)(北京凱元信瑞儀器有限公司);Tanon-4600型化學(xué)發(fā)光成像儀(上海天能科技有限公司);TDZ5-WS型冷凍離心機(jī)(湖南湘儀實(shí)驗(yàn)室儀器開發(fā)有限公司)。

    1.4 造模與分組 將60只小鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后,按隨機(jī)數(shù)字表法隨機(jī)分為空白組、模型組、藏黨參提取物低劑量組、藏黨參提取物中劑量組、藏黨參提取物高劑量組、別嘌醇組,每組10只。除空白組外,其余小鼠每日08∶00∶00灌胃給予酵母膏(30 g/kg),15∶00∶00灌胃給藥,持續(xù)14 d。末次給藥后,取24 h尿液,后禁食12 h,測(cè)量小鼠體質(zhì)量,腹腔注射氧嗪酸鉀(300 mg/kg),間隔1 h后摘眼球取血并脫頸處死。

    1.5 實(shí)驗(yàn)給藥 依據(jù)《部頒藏藥標(biāo)準(zhǔn)》中藏黨參臨床劑量3 g/d為低劑量組,中、高劑量以此加倍,通過人鼠劑量換算公式“小鼠劑量(g/kg)=人體用量(g)/70 kg×9.1”計(jì)算得每天藏黨參提取物低劑量為76 mg/kg(相當(dāng)于生藥量390 mg/kg),中劑量為152 mg/kg,高劑量為304 mg/kg,別嘌醇劑量為5 mg/kg(相當(dāng)于人38.46mg/kg),造模與給藥同時(shí)進(jìn)行,1次/d,持續(xù)14d。

    1.6 觀察指標(biāo)

    1.6.1 臟器指數(shù)、血清與尿液指標(biāo)測(cè)定 將小鼠摘眼球取血,收集的血樣靜置30 min后,在4℃下3 500 r/min離心15 min,分離血清,試劑盒檢測(cè)血清中尿酸含量,模型組大鼠血清尿酸水平明顯高于空白組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),即為造模成功[13]。解剖小鼠,取肝臟、腎臟樣本,生理鹽水洗凈,濾紙吸干稱肝臟與腎臟質(zhì)量,計(jì)算臟器指數(shù)(臟器指數(shù)=臟器質(zhì)量/體質(zhì)量×100%);試劑盒測(cè)定血尿酸(SUA)、血肌酐(SCr)、血尿素氮(BUN)、尿尿酸(UUA)、尿肌酐(UCr)、尿尿素氮(UUN)及血清中AST、ALT、XOD水平,并測(cè)定尿酸排泄分?jǐn)?shù)(FEUA)。FEUA=[(尿尿酸×血肌酐)/(血尿酸×尿肌酐)]×100%。肝臟XOD活性測(cè)定:取小鼠肝臟,在冰水浴中制成10%肝組織勻漿(組織質(zhì)量與生理鹽水體積比為1∶9),離心收集上清液,按試劑盒說明書測(cè)定肝臟XOD活性。

    1.6.2 尿酸轉(zhuǎn)運(yùn)體蛋白表達(dá)測(cè)定 取各組小鼠腎臟部位,并將其剪碎,按每100 mg組織加入1 mL裂解液(RIPA裂解液與PMSF按體積比100∶1配制),研磨成勻漿,于冰上裂解30 min,4℃下15 000 r/min離心20 min,取上清液,用BCA法進(jìn)行蛋白定量,按上樣量計(jì)算,加入4倍上樣緩沖液,混勻,金屬浴95℃加熱5 min。定量后的蛋白樣品上樣40 μg,10% SDS-PAGE分離膠電泳分離,電泳結(jié)束后轉(zhuǎn)膜,將膠上蛋白轉(zhuǎn)至PVDF膜,室溫下封閉于5%脫脂奶粉封閉液中2 h。孵育相關(guān)一抗(1∶1 000)2 h,再以HRP標(biāo)記相應(yīng)二抗(1∶5 000)孵育1 h。ECL顯色后利用成像儀成像,使用軟件Image J_v1.8.0分析URAT1、GLUR9、OAT1、OAT3條帶灰度值。

    1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用統(tǒng)計(jì)軟件SPSS 22.0進(jìn)行數(shù)據(jù)處理,計(jì)量資料以“均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差”(±s)表示,經(jīng)正態(tài)性檢驗(yàn)和方差齊性分析,多組比較采用單因素方差分析,兩兩比較采用LSD-t檢驗(yàn)。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

    2 結(jié) 果

    2.1 各組小鼠肝臟指數(shù)、腎臟指數(shù)比較 與空白組比較,模型組小鼠肝臟指數(shù)明顯升高(P<0.01);與模型組比較,藏黨參提取物高劑量組和別嘌醇組小鼠肝臟指數(shù)均明顯降低(P<0.05),且藏黨參提取物高劑量組小鼠肝臟指數(shù)與別嘌醇組比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05);藏黨參提取物低、中劑量組小鼠肝臟指數(shù)與模型組比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。各組小鼠腎臟指數(shù)比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。(見表1)

    表1 各組小鼠肝臟指數(shù)、腎臟指數(shù)比較 (±s,%)

    表1 各組小鼠肝臟指數(shù)、腎臟指數(shù)比較 (±s,%)

    注:與空白組比較,aP<0.05,bP<0.01;與模型組比較,cP<0.05;與別嘌醇組比較,eP<0.05

    組別 動(dòng)物數(shù)(只)給藥劑量(mg/kg)肝臟指數(shù) 腎臟指數(shù)空白組 10 - 3.41±0.10 0.96±0.06模型組 10 - 3.72±0.22b 1.01±0.07藏黨參提取物低劑量組10 76 3.62±0.21be 1.03±0.07藏黨參提取物中劑量組10 152 3.51±0.19a 1.03±0.09藏黨參提取物高劑量組10 304 3.42±0.21c 1.03±0.09別嘌醇組 10 5 3.40±0.27c 0.98±0.08 F 47.931 0.253 P 0.000 0.895

    2.2 各組小鼠血清ALT、AST水平比較 與空白組比較,模型組小鼠血清中ALT、AST水平均明顯升高(P<0.01);與模型組比較,藏黨參提取物高劑量組和別嘌醇組小鼠血清中ALT、AST水平均明顯降低(P<0.05或P<0.01);與模型組比較,藏黨參提取物中劑量組小鼠血清中AST水平明顯降低(P<0.05),ALT水平與模型組比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05);藏黨參提取物低劑量組小鼠血清中ALT、AST水平與模型組比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05);藏黨參提取物高劑量組小鼠血清中ALT、AST水平與別嘌醇組比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。(見表2)

    表2 各組小鼠血清ALT、AST水平比較 (±s,U/L)

    表2 各組小鼠血清ALT、AST水平比較 (±s,U/L)

    注:與空白組比較,aP<0.05,bP<0.01;與模型組比較,cP<0.05,dP<0.01;與別嘌醇組比較,eP<0.05

    組別 動(dòng)物數(shù)(只)給藥劑量(mg/kg)ALT AST空白組 10 - 26.55±1.59 106.27±2.84模型組 10 - 34.23±1.53b 129.91±7.81b藏黨參提取物低劑量組10 76 34.60±1.76b e 129.96±5.15b e藏黨參提取物中劑量組10 152 32.76±0.99a 123.11±6.55a c藏黨參提取物高劑量組10 304 30.46±1.29a d 115.19±5.65a d別嘌醇組 10 5 31.49±1.76a d 119.45±3.62a c F 232.384 63.206 P 0.000 0.001

    2.3 各組小鼠XOD活性比較 與空白組比較,模型組小鼠血清及肝臟中XOD活性均明顯升高(P<0.01);與模型組比較,藏黨參提取物中、高劑量組和別嘌醇組小鼠血清及肝臟中XOD活性均明顯降低(P<0.01或P<0.05);藏黨參提取物低劑量組小鼠血清及肝臟中XOD活性與模型組比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05);藏黨參提取物高劑量組小鼠血清及肝臟中XOD活性與別嘌醇組比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。(見表3)

    表3 各組小鼠XOD活性比較 (±s)

    表3 各組小鼠XOD活性比較 (±s)

    注:與空白組比較,aP<0.05,bP<0.01;與模型組比較,cP<0.05,dP<0.01;與別嘌醇組比較,eP<0.05,fP<0.01

    組別 動(dòng)物數(shù)(只)給藥劑量(mg/kg)血清中XOD活性(U/L)肝臟中XOD活性(U/g)空白組 10 - 14.47±2.58 83.19±6.18模型組 10 - 29.49±3.03b 133.31±10.49b藏黨參提取物低劑量組 10 76 27.66±2.11b f 150.83±19.21b f藏黨參提取物中劑量組 10 152 24.19±2.41b c e 109.25±9.76b c e藏黨參提取物高劑量組 10 304 17.14±1.65d 100.63±8.62a d別嘌醇組 10 5 17.55±1.43d 94.34±7.27a d F 73.904 55.772 P 0.003 0.000

    2.4 各組小鼠血液和尿液中尿酸、肌酐和尿素氮水平比較 與空白組比較,模型組小鼠SUA、SCr、BUN水平均明顯升高(P<0.01),UUA、UCr、UUN水平均明顯降低(P<0.01);與模型組比較,別嘌醇組、藏黨參提取物高劑量組小鼠SUA、SCr、BUN水平均明顯降低(P<0.01),UUA、UCr、UUN水平均明顯升高(P<0.01);與模型組比較,藏黨參提取物中劑量組小鼠UUA、UCr、UUN水平均明顯升高(P<0.05),SUA水平明顯降低(P<0.05);藏黨參提取物高劑量組小鼠SUA、BUN、UCr和UUN水平與空白組比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);藏黨參提取物低劑量組小鼠SUA、SCr、BUN、UUA、UCr、UUN水平與模型組比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。(見表4)

    表4 各組小鼠血液和尿液中尿酸、肌酐和尿素氮水平比較 (±s)

    表4 各組小鼠血液和尿液中尿酸、肌酐和尿素氮水平比較 (±s)

    注:與空白組比較,aP<0.05,bP<0.01;與模型組比較,cP<0.05,dP<0.01;與別嘌醇組比較,eP<0.05,fP<0.01

    組別 動(dòng)物數(shù)(只) 給藥劑量(mg/kg)SUA(mmol/L)SCr(μmol/L)BUN(mmol/L)UUA(μmol/L) UCr(μmol/L)UUN(mmol/L)空白組 10 - 76.35±4.02 24.33±2.35 5.67±0.76 232.17±22.81 234.41±18.78 1 159.06±102.58模型組 10 - 132.87±10.8b 35.01±2.31b 9.54±1.35b 179.89±14.38b 198.04±19.94b 632.87±21.53b藏黨參提取物低劑量組 10 76 134.30±9.24bf 35.52±2.66bf 9.52±0.88bf 174.63±9.64bf 204.62±22.32bf 645.14±33.41bf藏黨參提取物中劑量組 10 152 115.83±12.7bce 33.69±2.61ae 8.14±0.76b 191.20±13.85ac 223.23±8.45ac 749.61±39.41bce藏黨參提取物高劑量組 10 304 91.40±9.78ad 26.66±3.22d 6.54±0.54ad 211.97±9.43d 251.17±26.78ade 969.83±46.89ade別嘌醇組 10 5 81.46±6.16ad 27.26±3.55ad 7.37±0.79ad 197.61±11.96ad 232.36±20.23d 861.03±77.83ad F 36.368 243.183 117.264 21.782 538.286 446.914 P 0.000 0.000 0.002 0.000 0.001 0.000

    2.5 各組小鼠FEUA比較 與空白組比較,模型組小鼠FEUA值明顯降低(P<0.01);與模型組比較,別嘌醇組和藏黨參提取物高、中劑量組小鼠FEUA值均明顯升高(P<0.05或P<0.01);藏黨參提取物低劑量組小鼠FEUA值與模型組比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。(見表5)

    表5 各組小鼠FEUA比較 (±s,%)

    表5 各組小鼠FEUA比較 (±s,%)

    注:與空白組比較,aP<0.05,bP<0.01;與模型組比較,cP<0.05,dP<0.01;與別嘌醇組比較,eP<0.05,fP<0.01

    組別 動(dòng)物數(shù)(只)給藥劑量(mg/kg)FEUA空白組 10 - 31.56±2.41模型組 10 - 23.93±3.14b藏黨參提取物低劑量組10 76 22.57±2.17bf藏黨參提取物中劑量組10 152 27.25±2.21a c藏黨參提取物高劑量組10 304 32.61±2.06d別嘌醇組 10 5 28.46±2.71a d F 275.194 P 0.000

    2.6 各組小鼠尿酸轉(zhuǎn)運(yùn)體蛋白表達(dá)比較 與空白組比較,模型組小鼠腎臟尿酸轉(zhuǎn)運(yùn)體蛋白表達(dá)異常,其中URAT1和GLUT9蛋白表達(dá)均明顯升高(P<0.01),而OAT1、OAT3蛋白表達(dá)均明顯降低(P<0.01或P<0.05);與模型組比較,藏黨參提取物中劑量組URAT1和GLUT9蛋白表達(dá)水平均明顯降低(P<0.01或P<0.05),OAT1和OAT3蛋白表達(dá)水平均明顯升高(P<0.01或P<0.05);與模型組比較,藏黨參提取物高劑量組與別嘌醇組URAT1、GLUT9、OAT1和OAT蛋白表達(dá)均有明顯改善(P<0.01);藏黨參提取物低劑量組OAT3蛋白表達(dá)高于模型組(P<0.05),URAT1、GLUT9、OAT1蛋白表達(dá)與模型組比較,差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。(見圖1、表6)

    圖1 各組小鼠尿酸轉(zhuǎn)運(yùn)體蛋白表達(dá)的Westem blotting圖

    表6 各組小鼠尿酸轉(zhuǎn)運(yùn)體蛋白相對(duì)表達(dá)量比較 (±s,%)

    表6 各組小鼠尿酸轉(zhuǎn)運(yùn)體蛋白相對(duì)表達(dá)量比較 (±s,%)

    注:與空白組比較,aP<0.05,bP<0.01;與模型組比較,cP<0.05,dP<0.01;與別嘌醇組比較,eP<0.05,fP<0.01

    組別 動(dòng)物數(shù)(只)給藥劑量(mg/kg)URAT1 GLUR9 OAT1 OAT3空白組 10 - 100.00±4.59 100.00±8.71 100.00±6.23 100.00±5.83模型組 10 - 226.81±14.92b 183.28±10.66b 43.81±8.71b 73.44±10.57a藏黨參提取物低劑量組10 76 237.91±10.89bf 197.67±15.24bf 51.27±8.29be 83.22±8.55c藏黨參提取物中劑量組10 152 89.29±6.88d 147.39±8.77bce 119.29±9.44d 94.38±6.63c藏黨參提取物高劑量組10 304 81.48±6.78d 135.75±6.29ade 96.38±6.39d 115.93±7.63d別嘌醇組 10 5 93.29±7.91d 90.19±7.28d 93.88±6.72d 105.29±6.55d F 362.292 16.532 58.394 374.776 P 0.000 0.002 0.000 0.000

    3 討 論

    根據(jù)發(fā)病機(jī)制的不同,高尿酸血癥可分為原發(fā)性高尿酸血癥和繼發(fā)性高尿酸血癥,前者屬于遺傳性疾病,后者可由多種因素引起(如腎功能異常和藥物過度刺激等)[14-15]。目前,越來越多的證據(jù)顯示,飲食結(jié)構(gòu)的改變大大增加了高尿酸血癥的發(fā)病率,并呈現(xiàn)低齡化趨勢(shì)[16-17]。如畜肉類、水產(chǎn)品和豆類等富含嘌呤類食物的高攝入,大大增加了尿酸在體內(nèi)的代謝生成,從而加重腎臟的排泄負(fù)擔(dān)甚至誘發(fā)腎臟損傷[18]。酵母膏作為尿酸前體物質(zhì),可增加體內(nèi)尿酸生成;此方法模擬人們?nèi)粘o嬍持械泥堰矢邤z入,而同時(shí)氧嗪酸鉀作為尿酸酶抑制劑,能有效阻止尿酸的排泄,從而在體內(nèi)建立高尿酸環(huán)境。因此,本實(shí)驗(yàn)采用酵母膏聯(lián)合氧嗪酸鉀誘導(dǎo)小鼠高尿酸血癥模型。此方法操作簡(jiǎn)便,成功率高、穩(wěn)定性好,已廣泛適用于抗高尿酸血癥的藥物篩選評(píng)價(jià)及機(jī)制研究[19]。

    腎臟是機(jī)體排泄的主要器官,體內(nèi)約2/3的游離尿酸由腎臟排泄。而一旦腎臟功能出現(xiàn)異常,則會(huì)引起肌酐清除率和濾過功能下降;尿酸排泄率隨之下降,易導(dǎo)致HUA的發(fā)生[20]。SUA水平是評(píng)估高尿酸血癥最直接的指標(biāo)[21]。本實(shí)驗(yàn)中,與空白組比較,模型組小鼠SUA水平大幅升高,UUA水平明顯降低,這說明酵母膏聯(lián)合氧嗪酸鉀誘導(dǎo)小鼠高尿酸血癥模型建立成功。同時(shí),肌酐及尿素氮水平也是評(píng)價(jià)腎臟濾過功能的主要指標(biāo)。模型組小鼠SCr及BUN水平明顯升高,且UCr和UUN水平明顯降低,這說明酵母膏與氧嗪酸鉀的聯(lián)合誘導(dǎo)致使腎臟功能異常。而實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,藏黨參提取物能以劑量依賴性的方式有效恢復(fù)血液及尿液中尿酸、肌酐及尿素氮含量至正常水平。

    肝臟為嘌呤核苷酸合成反應(yīng)的主要器官。XOD為嘌呤代謝的限速酶,是調(diào)控尿酸必不可少的環(huán)節(jié)之一。黃嘌呤與次黃嘌呤經(jīng)過XOD的二次氧化進(jìn)而生成尿酸,呈現(xiàn)高尿酸血癥的癥狀,其活性檢測(cè)可反映尿酸的生成狀況[22]。與空白組比較,模型組小鼠肝臟XOD活性明顯升高,而藏黨參提取物顯著抑制了XOD活性,這與孫杰等[12]研究一致,即藏黨參提取物成分中可能含有XOD的抑制劑,通過抑制XOD的活性而減少嘌呤的代謝及尿酸的生成,最終改善高尿酸血癥。ALT與AST是評(píng)估肝臟損傷的重要指標(biāo)。肝細(xì)胞受到損傷,胞質(zhì)中的AST與ALT進(jìn)入血液,引起血液中含量增加[23],而藏黨參提取物有效降低了血清中ALT與AST水平;另外,與空白組比較,模型組小鼠肝臟指數(shù)明顯升高,表明其肝臟可能由于代謝大量嘌呤產(chǎn)物而受到損傷,從而引起肝臟水腫,因此肝臟指數(shù)上升。結(jié)合以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,藏黨參對(duì)酵母膏聯(lián)合氧嗪酸鉀引起的肝臟損傷具有一定的保護(hù)作用。

    除了評(píng)價(jià)藏黨參提取物降血尿酸水平和抑制XOD活性的作用,本研究還探討了其對(duì)腎臟尿酸轉(zhuǎn)運(yùn)體的影響。腎臟中的多種尿酸轉(zhuǎn)運(yùn)體共同維持著尿酸水平的動(dòng)態(tài)平衡[24-25]。URAT1作為尿酸鹽轉(zhuǎn)運(yùn)的主要蛋白之一,其功能主要為介導(dǎo)尿酸與近曲小管上皮細(xì)胞內(nèi)無機(jī)陰離子和有機(jī)陰離子的交換,從而將尿酸從管腔內(nèi)重吸收入細(xì)胞[26]。GLUT9是葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白家族的一員,其功能是將吸收到腎小球上皮細(xì)胞的尿酸轉(zhuǎn)運(yùn)到腎間質(zhì),參與近曲小管頂膜尿酸鹽的再吸收[27]。OAT1和OAT3是重要的尿酸轉(zhuǎn)運(yùn)體[28],其表達(dá)主要分布于腎臟。如OAT1和OAT3以α-酮戊二酸作為腎臟的交換底物,將有機(jī)陰離子和藥物泵入細(xì)胞,而OAT1主要介導(dǎo)尿酸的轉(zhuǎn)運(yùn)。OAT3的主要功能是通過基膜將有機(jī)陰離子轉(zhuǎn)運(yùn)到近曲小管上皮細(xì)胞,并排泄到尿液中[29]。URAT1、GLUT9、OAT1和OAT3等轉(zhuǎn)運(yùn)體在腎臟共同介導(dǎo)尿酸鹽的轉(zhuǎn)運(yùn),維持體內(nèi)尿酸水平的穩(wěn)定[30]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,模型組小鼠URAT1和GLUT9蛋白表達(dá)明顯升高,而OAT1和OAT3的蛋白表達(dá)明顯降低。藏黨參提取物能有效恢復(fù)上述轉(zhuǎn)運(yùn)體的表達(dá)水平,進(jìn)而調(diào)節(jié)血液中尿酸的水平,促進(jìn)尿酸排泄。

    綜上所述,藏黨參提取物可有效改善HUA小鼠的高血尿酸水平,而潛在機(jī)制或許不僅僅是通過抑制肝臟XOD的活性,同時(shí)也可能通過恢復(fù)相關(guān)尿酸轉(zhuǎn)運(yùn)體表達(dá)異常而起到保護(hù)作用。因此,藏黨參作為一種預(yù)防和治療高尿酸血癥的傳統(tǒng)藥物,具有進(jìn)一步研究與開發(fā)的價(jià)值。然而,本研究在藥物研究層面與深度上仍然有限,關(guān)于藏黨參的活性成分和具體分子機(jī)制還需要進(jìn)一步的研究與探討。

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