香訶止瀉湯對(duì)功能性消化不良小鼠治療作用的實(shí)驗(yàn)研究

梁 玲，聶 堅(jiān)，李添美，李 瑞，張建英

(云南中醫(yī)藥大學(xué)·云南 昆明 650500)

香訶止瀉湯是云南省兒科名中醫(yī)熊磊教授治療小兒泄瀉的臨床效驗(yàn)方，主要由藿香、訶子、葛根、茯苓、焦山楂等9味中藥組成，具有行氣消食導(dǎo)滯、運(yùn)脾化濕止瀉等功效，臨床治療多種原因引起的小兒腹瀉效果肯定[1]。功能性消化不良(FD)是臨床上常見(jiàn)的消化系統(tǒng)疾病，亦是臨床引起小兒腹瀉的常見(jiàn)原因之一，其發(fā)病與脾失運(yùn)化、飲食失節(jié)、情志不遂密切相關(guān)，中醫(yī)多從運(yùn)脾化濕、消食導(dǎo)滯入手治療。本實(shí)驗(yàn)將通過(guò)建立FD腹瀉小鼠模型，予以香訶止瀉湯干預(yù)治療，與莫沙必利進(jìn)行對(duì)照，觀察其對(duì)小鼠體質(zhì)量、胃腸動(dòng)力及胃腸激素含量的影響，旨在了解香訶止瀉湯對(duì)功能性消化不良小鼠的治療效果，為該方在臨床中更科學(xué)、合理、廣泛的應(yīng)用提供依據(jù)。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 動(dòng)物 清潔級(jí)健康成年昆明種小鼠，雌雄各半，體質(zhì)量18～22 g，由湖南斯萊克景達(dá)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司提供，證號(hào)：SCXK(湘)2019-0004。

1.2 藥物與試劑 香訶止瀉湯主要由藿香、訶子、葛根、茯苓、焦山楂等9味中藥組成，中藥飲片均購(gòu)于云南省昆明市中醫(yī)醫(yī)院中藥房，參照臨床用藥方法及前期實(shí)驗(yàn)結(jié)果制備成浸膏保存?zhèn)溆肹2]，臨用時(shí)按照各組給藥劑量分別用純凈水配用。枸櫞酸莫沙比利片：成都康弘藥業(yè)集團(tuán)股份有限公司，批號(hào)：01024，純凈水配制濃度成9.75%備用。碘乙酰胺：上海瑞永生物科技有限公司；L-精氨酸鹽酸鹽：山東齊魯生物科技有限公司；小鼠胃動(dòng)素(MTL)ELISA檢測(cè)試劑盒：江蘇酶免實(shí)業(yè)有限公司，批號(hào)：21210122；小鼠血管活性腸肽(VIP)ELISA檢測(cè)試劑盒：江蘇酶免實(shí)業(yè)有限公司，批號(hào)：21210122。碳末糊制備：羧甲基纖維素鈉5 g溶于200 mL蒸餾水，攪拌至充分溶解，再加入2 g活性炭，攪拌均勻后紗布過(guò)濾備用。

2 方法

2.1 模型制備 75只小鼠參照文獻(xiàn)[3-5]所述進(jìn)行造模。按照0.2 mL/只灌胃給予0.1%碘乙酰胺蔗糖混合溶液，2 h后在(22±1)℃、深12 cm的水中持續(xù)游泳20 min，2 h后按0.1 mL/10 g灌胃L-精氨酸溶液，持續(xù)6 d。從第7天開(kāi)始將L-精氨酸溶液換成冷大黃水煎液，按2.9 g/kg持續(xù)灌胃4 d。在造模期間打亂小鼠飲食規(guī)律(逢單日進(jìn)食，雙日禁食，不禁水)。小鼠精神狀態(tài)不佳、活動(dòng)減少，扎堆明星，倦怠嗜睡，部分出現(xiàn)拱背、豎毛現(xiàn)象，毛色偏黃無(wú)光澤，糞便顆粒增大、質(zhì)地稀軟，有明顯的糞便不成形；小鼠日進(jìn)食量、體質(zhì)量增長(zhǎng)均值明顯降低，日平均飲水量稍有減少，糞便含水量明顯升高；隨機(jī)選取5只小鼠，頸椎脫臼處死，沿胃大彎剪開(kāi)胃，縱向剪開(kāi)腸管，沖洗凈胃腸內(nèi)容物后，觀察胃腸表面黏膜外觀，小鼠胃腸沒(méi)有明顯的充血、水腫或潰爛。綜合分析小鼠整體特征符合FD模型表現(xiàn)，判斷本次造模成功。

2.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組與給藥 將造模成功的FD腹瀉小鼠隨機(jī)分為模型組，香訶止瀉湯高、中、低劑量組和陽(yáng)性對(duì)照組，每組12只，另設(shè)正常對(duì)照組12只，編號(hào)、稱重記錄備用。香訶止瀉湯高、中、低劑量組按照折算劑量[6]，分別按33.30、16.65、8.33 g/kg給予香訶止瀉湯灌胃；陽(yáng)性對(duì)照組予枸櫞酸莫沙必利 1.95 mg/ kg灌胃(按人與動(dòng)物體質(zhì)量系數(shù)折算劑量)；模型對(duì)照組和正常對(duì)照組灌胃等量生理鹽水；各組小鼠每天灌胃1 次，連續(xù)灌胃3 d。

2.3 觀察指標(biāo)及檢測(cè)方法

2.3.1 小鼠體質(zhì)量增長(zhǎng)值及糞便含水量檢測(cè) 給藥3 d后測(cè)量小鼠體質(zhì)量，計(jì)算各組體質(zhì)量增長(zhǎng)均值。第3天上午給藥后，收集各組小鼠4 h糞便，稱重后放入干燥箱(80 ℃)里烘干，取出再稱重，計(jì)算糞便含水量。糞便含水量(%)=[濕重(g)-干重(g)]/干重(g)×100%[7]。

2.3.2 胃內(nèi)殘留率和小腸推進(jìn)率檢測(cè) 末次給藥后，所有小鼠禁食不禁水12 h，按0.6 mL/只灌胃碳末糊，20 min后，頸椎脫臼法處死小鼠，迅速打開(kāi)腹腔，結(jié)扎賁門和幽門口，剪下整個(gè)胃，濾紙吸干，稱取全胃重量。然后沿胃小彎剪開(kāi)，蒸餾水洗凈胃內(nèi)殘留物，濾紙吸干后再次稱重，計(jì)算胃凈重，計(jì)算胃內(nèi)殘留率。同時(shí)快速剪開(kāi)腸系膜剝離出小腸，平展后測(cè)量從幽門口到黑色碳末糊前沿長(zhǎng)度及小腸全長(zhǎng)，計(jì)算小腸推進(jìn)率。胃內(nèi)殘留率=(胃全重-胃凈重)/小鼠所灌的碳末糊量×100%[8]。小腸推進(jìn)率：幽門口到黑色碳末糊前沿長(zhǎng)度/小腸總長(zhǎng)×100%[8]。

2.3.3 血清胃腸激素檢測(cè) 藥物治療結(jié)束后，小鼠禁食12 h，摘眼球取血，靜置1～2 h，以3 000 r/min離心20 min，離心半徑10 cm，取血清-20 ℃冰箱保存。ELISA法檢測(cè)MTL、VIP含量。

2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS17.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理，計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，多組間比較采用單因素方差分析。以P<0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3.1 香訶止瀉湯對(duì)FD模型小鼠的體質(zhì)量及糞便含水量的影響 結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 各組小鼠體質(zhì)量增長(zhǎng)值及糞便含水量比較

3.2 香訶止瀉湯對(duì)FD模型小鼠胃排空及小腸推動(dòng)作用的影響 結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 各組小鼠胃內(nèi)殘留率、小腸推進(jìn)率比較

3.3 香訶止瀉湯對(duì)FD模型小鼠血清MTL、VIP含量的影響 結(jié)果見(jiàn)表3。

表3 各組小鼠血清MTL、VIP含量比較

4 討論

功能性消化不良(FD)屬于中醫(yī)學(xué)“泄瀉”“胃脘痛”“痞滿”“積滯”等范疇。臨床常以腹脹腹痛、泄利不爽、飲食減少甚至噯腐吞酸等胃腸功能紊亂表現(xiàn)為特征，中醫(yī)認(rèn)為中焦氣機(jī)不利，氣機(jī)壅滯結(jié)于胃脘是其病機(jī)所在。臨床治療多以健脾、行氣、消積、化滯辨證論治。香訶止瀉湯主要由霍香、訶子、石榴皮、茯苓、焦山楂等9 味中藥組成，全方配伍，具有行氣化滯、運(yùn)脾止瀉等的功效，臨床運(yùn)用于多種腹瀉治療，效果顯著穩(wěn)定[1]。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：(1)香訶止瀉湯中、低劑量給藥能增加FD模型小鼠的進(jìn)食量，促進(jìn)其體質(zhì)量增長(zhǎng)，而中、高劑量給藥具有減少糞便含水量的作用。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，低劑量組小鼠體質(zhì)量增值最大，甚至超過(guò)正常對(duì)照組，這可能與方中含有焦山楂等消食化滯藥物，能夠改善進(jìn)食量，從而促進(jìn)小鼠的體質(zhì)量增長(zhǎng)有關(guān)。中、高劑量給藥后，小鼠糞便含水量明顯降低，具有良好的止瀉效果。(2)香訶止瀉湯能調(diào)節(jié)胃腸功能，恢復(fù)胃腸蠕動(dòng)，改善胃腸癥狀，作用緩和而有效。中、低劑量給藥后，能使胃排空和腸推進(jìn)功能更趨近與正常水平，說(shuō)明該方對(duì)于恢復(fù)胃腸功能、改善胃腸癥狀效果顯著而平和。(3)其治療作用機(jī)制與調(diào)節(jié)血清中胃腸激素含量有關(guān)。實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)模型組胃動(dòng)素(MTL)含量低于正常組，血管活性腸肽(VIP)含量高于正常組，與其腸推進(jìn)率、胃排空率降低存在相關(guān)性，這與有關(guān)報(bào)道研究結(jié)果一致[9-10]。給藥組小鼠胃動(dòng)素(MTL)水平升高，血管活性腸肽(VIP)降低，并趨近于正常水平。

綜上所述，香訶止瀉湯對(duì)FD模型小鼠具有良好的綜合治療作用，不僅能減輕FD小鼠的胃腸動(dòng)力紊亂癥狀，還能增加其進(jìn)食量，促進(jìn)其體質(zhì)量增長(zhǎng)，改善其一般狀態(tài)，機(jī)制可能與調(diào)節(jié)血清中MTL和VIP水平有關(guān)。